技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥物提取和制備
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體的，涉及清濁益腎膠囊的制備及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法。
背景技術(shù)：
：腎病目前已經(jīng)成為危害公共健康主要疾病之一。且由于不規(guī)范治療、濫用藥物以及不良的生活方式導(dǎo)致我國的腎病發(fā)病率也連年上升。腎病綜合征(nephroticsyndrome，NS)簡稱腎綜，是指由多種病因引起的，以腎小球基膜通透性增加伴腎小球?yàn)V過率降低等腎小球病變?yōu)橹鞯囊唤M綜合征。腎病綜合征不是一種獨(dú)立性疾病，而是腎小球疾病中的一組癥候群。其典型的癥狀表現(xiàn)為大量蛋白尿、低白蛋白血癥、高度水腫、高脂血癥。會(huì)由很多種腎臟病變導(dǎo)致引發(fā)，現(xiàn)在醫(yī)學(xué)界普遍認(rèn)為屬于細(xì)胞免疫性疾病。目前，臨床常規(guī)的治療方案為進(jìn)行激素治療、抗血小板積聚治療和應(yīng)用免疫性抑制劑。清濁益腎膠囊是一種有效治療腎病綜合征的藥物，其原料成分相對簡單，而且效果好，毒副作用小，備受患者青睞。申請人在制藥過程中發(fā)現(xiàn)，該藥物原料提取方法相對單一，對多種原料采用相同提取工藝，存在有效成分流失的缺陷，而且腎病綜合征每次需要服用4粒，每天三次，服藥量過大，部分病人很難接受，容易出現(xiàn)排斥情緒。而且對已知藥物進(jìn)行改進(jìn)，可以節(jié)省企業(yè)前期的研發(fā)成本，是近年來企業(yè)研究的熱點(diǎn)。同時(shí)，清濁益腎膠囊的質(zhì)量控制也是GMP工作車間需要重視的問題。如何通過改進(jìn)工藝，來最大限度的利用原料，提高藥效，是我們需要研究的問題。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：為了克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，本發(fā)明提出清濁益腎膠囊的制備方法，該方法簡單可行、最大限度提取了原料的有效成分，提高了藥效，減少了藥物服用量。本發(fā)明還提供了清濁益腎膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法。本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的：清濁益腎膠囊的制備方法，其包括如下步驟：步驟1）稱取原料，步驟2）制備冬春夏草細(xì)粉，步驟3）制備黃芪提取物，步驟4）制備丹參提取物，步驟5）制備紅花提取物，步驟6）制備酸棗仁菟絲子大黃提取物，步驟7）制粒。具體地，所述制備方法包括如下步驟：步驟1）稱取原料：稱取各原料備用：冬蟲夏草100g、黃芪1400g、丹參280g、紅花280g、酸棗仁280g、菟絲子500g、大黃100g；步驟2）制備冬春夏草細(xì)粉：取冬蟲夏草，粉碎成細(xì)粉；步驟3）制備黃芪提取物：將黃芪粉碎，過200目篩，置于容器中，添加兩倍重量的85%（v/v）的乙醇，300rpm攪拌提取，提取過程中控制微波功率為500W，提取時(shí)間為60min；然后置于4℃放置12h，過濾，濾渣備用；濾液減壓蒸發(fā)回收乙醇，并濃縮濾液至密度為1.3g/ml的浸膏A；將上述濾渣加兩倍重量的水，攪拌均勻，然后加入0.5wt%的中性蛋白酶(20萬U/g)，在37℃酶解120min，然后煮沸5min，然后加入占濾渣兩倍重量的無水乙醇，300rpm攪拌5min，然后靜置12h，去除上清液，收集沉淀，加水溶解，-20℃放置12h，然后3000rpm離心3min，過濾去除沉淀，將濾液減壓濃縮至密度為1.3g/ml的浸膏B；合并浸膏A和浸膏B得到黃芪提取物；步驟4）制備丹參提取物：將丹參粉碎，過200目篩，然后鋪成3mm厚度的平層，置于紫外線下照射15min，收集粉末置于容器中，添加兩倍重量的水，300rpm攪拌提取，提取過程中控制微波功率為700W，提取時(shí)間為20min；過濾，收集濾液，濃縮成1.3g/ml的浸膏，即得丹參提取物；步驟5）制備紅花提取物：將紅花投入超聲提取罐，加入三倍重量的75%的乙醇，控制提取溫度為50℃，以頻率50KHz超聲提取30min，過濾，收集濾液，濃縮成1.3g/ml的浸膏，即得紅花提取物；步驟6）制備酸棗仁菟絲子大黃提取物：取酸棗仁和菟絲子混合得到酸棗仁菟絲子混合物，加水煎煮兩次，第一次加酸棗仁菟絲子混合物10倍重量的水，煎煮2小時(shí)，過濾后得到濾液和藥渣；往藥渣中添加大黃，然后再添加占酸棗仁菟絲子混合物5倍重量的水，煎煮1.5小時(shí)，過濾得濾液；合并上述兩次的濾液，濃縮成密度為1.1g/ml的清膏，冷卻，添加乙醇使含醇量達(dá)70％，靜置24小時(shí)，濾過，取上清液，減壓回收乙醇，濃縮至密度為1.3g/ml的浸膏，即得酸棗仁菟絲子大黃提取物；步驟7）制粒：將步驟3）所得黃芪提取物，步驟4）所得丹參提取物，步驟5）所得紅花提取物，步驟6）所得酸棗仁菟絲子大黃提取物以及步驟2）所得冬蟲夏草細(xì)粉混勻，干燥，粉碎，加入淀粉適量，混勻，裝入膠囊，即得。優(yōu)選地，所述紫外線強(qiáng)度為3000uW/cm2。上述制備方法制備的膠囊制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法。所述方法應(yīng)檢出冬蟲夏草，應(yīng)檢出原兒茶醛，應(yīng)檢出大黃，每粒含黃芪甲苷應(yīng)不少于0.30mg。本發(fā)明相對于現(xiàn)有技術(shù)具有如下的優(yōu)點(diǎn)及效果：本發(fā)明制備的清濁益腎膠囊制劑效果優(yōu)于現(xiàn)有的制劑，而且服藥量也相應(yīng)降低；本發(fā)明制備方法簡單可行，對不同的中藥成分采用不同技術(shù)進(jìn)行處理，提高了各原料的有效成分，增加了藥效，減少了原料浪費(fèi)；本發(fā)明制備方法采用較小的粒徑能夠提高黃芪有效組分的浸出率，配合微波醇提的方式可獲得苷類化合物以及多糖類，避免了成分的流失；丹參提取時(shí)，采用煎煮的方式，容易導(dǎo)致酚酸以及酮類物質(zhì)的分解，本發(fā)明丹參提取工藝采用合適強(qiáng)度的紫外線，提高了有效成分的溶出度，同時(shí)采用微波輔助水提，時(shí)間短，提高了提取效率，降低了能耗；紅花中的綠原酸等酸類物質(zhì)、酚類有效物質(zhì)不易采用煎煮的方式，本發(fā)明采用醇提，保留了有效成分。具體實(shí)施方式為了使本
技術(shù)領(lǐng)域：
的人員更好地理解本申請中的技術(shù)方案，下面將結(jié)合本申請具體實(shí)施例，對本發(fā)明進(jìn)行更加清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本申請一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例。基于本申請中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有作出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都應(yīng)當(dāng)屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。實(shí)施例1清濁益腎膠囊的制備方法，其包括如下步驟：1）稱取各原料備用：冬蟲夏草100g、黃芪1400g、丹參280g、紅花280g、酸棗仁280g、菟絲子500g、大黃100g；2）取冬蟲夏草，粉碎成細(xì)粉；3）將黃芪粉碎，過200目篩，置于容器中，添加兩倍重量的85%（v/v）的乙醇，300rpm攪拌提取，提取過程中控制微波功率為500W，提取時(shí)間為60min；然后置于4℃放置12h，過濾，濾渣備用；濾液減壓蒸發(fā)回收乙醇，并濃縮濾液至密度為1.3g/ml的浸膏A；采用高效液相色譜法測試浸膏A中黃芪甲苷含量大于1.2mg/ml；將上述濾渣加兩倍重量的水，攪拌均勻，然后加入0.5wt%的中性蛋白酶(20萬U/g)，在37℃酶解120min，然后煮沸5min，然后加入占濾渣兩倍重量的無水乙醇，300rpm攪拌5min，然后靜置12h，去除上清液，收集沉淀，加水溶解，-20℃放置12h，然后3000rpm離心3min，過濾去除沉淀，將濾液減壓濃縮至密度為1.3g/ml的浸膏B；合并浸膏A和浸膏B得到黃芪提取物；采用凝膠色譜法測得浸膏B中黃芪多糖分子量多分布于20000-40000，占總糖的70％以上；4）將丹參粉碎，過200目篩，然后鋪成3mm厚度的平層，置于紫外線下照射15min，收集粉末置于容器中，添加兩倍重量的水，300rpm攪拌提取，提取過程中控制微波功率為700W，提取時(shí)間為20min；過濾，收集濾液，濃縮成1.3g/ml的浸膏，即得丹參提取物；所述紫外線強(qiáng)度為3000uW/cm2；5）將紅花投入超聲提取罐，加入三倍重量的75%（體積份數(shù)）的乙醇，控制提取溫度為50℃，以頻率50KHz超聲提取30min，過濾，收集濾液，濃縮成1.3g/ml的浸膏，即得紅花提取物；6）取酸棗仁和菟絲子混合得到酸棗仁菟絲子混合物，加水煎煮兩次，第一次加酸棗仁菟絲子混合物10倍重量的水，煎煮2小時(shí)，過濾后得到濾液和藥渣；往藥渣中添加大黃，然后再添加占酸棗仁菟絲子混合物5倍重量的水，煎煮1.5小時(shí)，過濾得濾液；合并上述兩次的濾液，濃縮成密度為1.1g/ml的清膏，冷卻，添加乙醇使含醇量達(dá)70％（體積分?jǐn)?shù)），靜置24小時(shí)，濾過，取上清液，減壓回收乙醇，濃縮至密度為1.3g/ml的浸膏，即得酸棗仁菟絲子大黃提取物；7）將步驟3）所得黃芪提取物，步驟4）所得丹參提取物，步驟5）所得紅花提取物，步驟6）所得酸棗仁菟絲子大黃提取物以及步驟2）所得冬蟲夏草細(xì)粉混勻，干燥，粉碎，加入淀粉適量，混勻，裝入膠囊，制成1000粒，即得。用法用量：口服，一次3粒，0.45g/粒，一日3次。對比例1一種用于治療腎病綜合征的清濁益腎膠囊，其由下述重量的原料制備而得：冬蟲夏草100g、黃芪1400g、丹參280g、紅花280g、酸棗仁280g、菟絲子500g、大黃100g。所述清濁益腎膠囊的制備方法為：按照重量稱取原料藥備用（1）取冬蟲夏草粉碎成細(xì)粉；（2）取黃芪、丹參、紅花、酸棗仁加水煎煮兩次，第一次加10倍量水，煎煮1.5小時(shí)，過濾后得到濾液和藥渣；（3）在步驟（2）中所得到的藥渣添加大黃并加水8倍量水，煎煮1小時(shí)，過濾得濾液（4）合并步驟（2）和步驟（3）的濾液，濃縮成相對密度為1.14-1.16（80-85℃）的清膏，冷卻，添加乙醇使含醇量達(dá)70％（體積分?jǐn)?shù)），靜置24小時(shí)，濾過，取上清液，回收乙醇。（5）菟絲子加水煎煮兩次，第一次加10倍量水，煎煮1.5小時(shí)，過濾獲得濾液和藥渣，取藥渣加8倍量水煎煮1小時(shí)，合并兩次濾液。（6）將步驟（5）獲得的濾液和步驟（4）獲得的上清液合并，濃縮至相對密度為1.30-1.35(80-85℃)的稠膏，加入步驟（1）制備的細(xì)粉混勻，干燥，粉碎，加入淀粉適量，混勻，裝入膠囊，制成1000粒，即得。用法用量：口服，一次4粒，0.45g/粒，一日3次。實(shí)施例2實(shí)施例1制備的成品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和檢查方法：實(shí)施例3動(dòng)物安全性試驗(yàn)健康昆明品系小鼠40只，雌雄各半，體重為18.9±2.3g，將40只小鼠隨機(jī)分為兩組，每組雌雄各半，其中20只為對照組，灌以常水；另外20只小鼠給予實(shí)施例1制備方法制備的藥物，劑量為2mg/只，每天三次，應(yīng)用小鼠進(jìn)行急性毒性實(shí)驗(yàn)表明：與對照組比較，給藥后小鼠未見明顯差異，實(shí)驗(yàn)連續(xù)觀察兩周，小鼠全身狀況、攝食、飲水、體重增長均正常。給藥后兩周內(nèi)，未見動(dòng)物死亡，提示該藥急性毒性低，臨床用藥安全。實(shí)施例4臨床資料選擇2015年3月-2016年9月市中醫(yī)院收治的108例患者，其中男性61例，女性47例，年齡32-73歲，平均年齡43.1歲；病程2個(gè)月至28個(gè)月，將患者隨機(jī)分成2組，實(shí)施例1組54人，對照例1組54人。納入標(biāo)準(zhǔn)和療效標(biāo)準(zhǔn)參考CN103638135A：治療方法：實(shí)施例1組：服用實(shí)施例1制備的藥物，一次3粒，一日3次，4周為一個(gè)療程，治療2個(gè)療程。對照例1組：服用對照例1組制備的藥物，一次4粒，一日3次，4周為一個(gè)療程，治療2個(gè)療程。治療效果如下表2：表2組別治愈好轉(zhuǎn)未愈治愈率實(shí)施例1組4111275.92%對照例1組3018655.56%結(jié)論：實(shí)施例1的治愈率明顯高于對照例1組，而且服藥量減少四分之一。最后，還需要注意的是，以上列舉的僅是本發(fā)明的若干個(gè)具體實(shí)施例。顯然，本發(fā)明不限于以上實(shí)施例，還可以有許多變形。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員能從本發(fā)明公開的內(nèi)容直接導(dǎo)出或聯(lián)想到的所有變形，均應(yīng)認(rèn)為是本發(fā)明的保護(hù)范圍。當(dāng)前第1頁1 2 3