本發(fā)明屬于多酚提取技術(shù)領(lǐng)域。更具體地，本發(fā)明涉及一種提高木瓜皮多酚抗氧化活性的HPEF提取方法。

背景技術(shù)：

木瓜(學(xué)名：Chaenomeles sinensis(Thouin)Koehne)，有“百益果王”的稱號(hào)，它不僅食味鮮美，而且也是營養(yǎng)價(jià)值和藥用價(jià)值很高的中藥。中醫(yī)認(rèn)為，木瓜具有舒經(jīng)活絡(luò)、健脾開胃、祛風(fēng)濕的功效。我國的木瓜多產(chǎn)于山東、陜西、湖北、江西、安徽、江蘇、浙江、廣東、廣西等地。

由于習(xí)慣以及加工條件的限制，木瓜皮在加工中一般被遺棄，造成極大的資源浪費(fèi)。從以往的研究可以發(fā)現(xiàn)，木瓜皮中含有多酚類化合物、生物堿、維生素等多種生理活性物質(zhì)，但對(duì)這些物質(zhì)進(jìn)行提取、成分分析的研究報(bào)道很少，尤其是對(duì)木瓜皮多酚的研究就更少了。多酚在增強(qiáng)免疫力、降血糖、抗腫瘤、抗炎、抗病毒、抗衰老、抗凝血等方面發(fā)揮著生物活性作用。隨著技術(shù)發(fā)展和人類認(rèn)識(shí)不斷加深，人們發(fā)現(xiàn)多酚類在生物體中除作結(jié)構(gòu)材料和能源性材料外，更重要地，還參與了生命現(xiàn)象中細(xì)胞的各種活動(dòng)。多酚廣泛應(yīng)用于食品、紡織、化妝品和醫(yī)藥領(lǐng)域等領(lǐng)域，其在生物學(xué)上的重要意義決定了它在食品及醫(yī)藥領(lǐng)域有廣闊的前景。

多酚是多羥基化合物，它的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)決定多酚易溶或可溶于水、醇類、醚類、酮類、酯類等，因此，溶劑提取法主要有水溶劑提取和有機(jī)溶劑提取兩種。除此之外，還有微波輔助提取、超聲波輔助提取、生物酶解提取、超臨界流體萃取和膜技術(shù)提取等。CN 200610095283.8、“木瓜多酚類物質(zhì)的酶解提取方法”公開了一種木瓜多酚類物質(zhì)的酶解提取方法，它主要是經(jīng)過制漿、酶解、固液分離、回流浸提、合并、濃縮和干燥的步驟，在纖維素酶的作用下，從木瓜中分別得到木瓜水提物和木瓜醇提物，然后彼此混合，加入高倍醇，經(jīng)沉淀后除去蛋白多糖等雜質(zhì)，再經(jīng)減壓濃縮、噴霧干燥后即得木瓜粗多酚固體物。

高壓脈沖電場法(HPEF)是近年發(fā)展起來的一種新技術(shù)，其機(jī)理是利用細(xì)胞膜電穿孔原理在瞬間使細(xì)胞破壁，造成細(xì)胞膜電位混亂，細(xì)胞壁和細(xì)胞膜受到可逆或小可逆的破壞，從而令細(xì)胞組分流出，具有處理時(shí)間短、能耗低、較不易引起目的產(chǎn)物變性等優(yōu)點(diǎn)。以提高木瓜皮多酚抗氧化活性為目的的HPEF提取方法，能夠克服常規(guī)乙醇水提取對(duì)活性物質(zhì)帶來的不利影響；利用HPEF提取方法能夠加強(qiáng)與樣品相接觸的溶劑，并破壞其中木瓜中的細(xì)胞組分，將所需化合物從樣品基體中分離，從而進(jìn)入溶劑中。CN 201010278239.7、“一種減少蘋果多酚在貯藏過程中損失量的高壓脈沖處理方法”公開了一種減少蘋果多酚在貯藏過程中損失量的高壓脈沖處理方法，其處理步驟包括：稱取蘋果多酚粉末0.5g溶于1000mL pH值5.0～7.0的磷酸緩沖溶液中，得到36.3mg/100mL電導(dǎo)率為2.11～4.90的蘋果多酚溶液，將配制完成的蘋果多酚溶液泵入高壓脈沖處理室，設(shè)置場強(qiáng)30～35KV/cm，脈寬4～6μs，頻率80～100Hz，循環(huán)處理1000～1500μs，收集處理完成的蘋果多酚溶液，蘋果多酚含量37.1～39.5mg/100mL。

目前尚無利用HPEF提取方法提取木瓜多酚的研究和應(yīng)用。本發(fā)明人在已有研究的基礎(chǔ)上做了大量試驗(yàn)，對(duì)于不同原料中的多酚，由于其溶出速率及干擾組分存在差異，在選擇處理?xiàng)l件上綜合考慮了得率、純度及抗氧化性能的差異，終于研制出本發(fā)明方法。本發(fā)明方法具有快速、成本低等特點(diǎn)，并且可以減少溶劑的用量，提高提取得率以及產(chǎn)品純度。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

[要解決的技術(shù)問題]

本發(fā)明的目的是提供一種提高木瓜皮多酚抗氧化活性的HPEF提取方法。

[技術(shù)方案]

本發(fā)明是通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。

本發(fā)明涉及一種提高木瓜皮多酚抗氧化活性的HPEF提取方法，所述方法包括以下步驟：

(1)原料處理

將木瓜皮清洗干凈后置于烘箱中烘至近干，然后在恒溫恒濕干燥器內(nèi)烘至恒重，使得木瓜皮的含水率低于0.01％，然后粉碎并過80目篩后，得到木瓜皮粉末，備用；

(2)HPEF提取

步驟(1)得到的木瓜皮粉末與乙醇水溶液混合，得到的混合物利用HPEF進(jìn)行處理，再在0.01MPa條件下減壓過濾1.0h，得到的濾渣用提取溶劑洗滌3次，洗滌后的濾渣合并，得到木瓜皮多酚粗產(chǎn)品；

(3)樹脂吸附

將步驟(2)得到的木瓜皮多酚粗產(chǎn)品加水配制成10.0mg/mL的溶液，用大孔樹脂進(jìn)行吸附，然后在30℃恒溫水浴中振蕩12h，振蕩頻率為1000r/min；

(4)成品制備

將步驟(3)的吸附后的大孔樹脂過濾，過濾后的樹脂用蒸餾水洗滌兩次，待樹脂濾干后用體積濃度50％的乙醇進(jìn)行動(dòng)態(tài)洗脫，洗脫液濃縮后真空冷凍干燥，得到木瓜皮多酚提取物固體。

根據(jù)本發(fā)明的一種具體實(shí)施方案，步驟(1)中所述烘箱的溫度為55～65℃，所述的恒溫恒濕干燥器的溫度為100～110℃。

根據(jù)本發(fā)明的另一種具體實(shí)施方案，在步驟(2)中，按照以mg計(jì)木瓜皮粉末的質(zhì)量與以mL計(jì)乙醇水溶液的體積比1:20～1:60的比例，將木瓜皮粉末置于乙醇水溶液中。

根據(jù)本發(fā)明的另一種具體實(shí)施方案，在步驟(2)中，HPEF的處理?xiàng)l件為功率400～600W、電場強(qiáng)度20～30KV/cm、脈寬4～8μs、頻率60～80Hz，處理時(shí)間為3～5h。

根據(jù)本發(fā)明的另一種具體實(shí)施方案，在步驟(2)中，所述乙醇水溶液的體積濃度是50～80％。

根據(jù)本發(fā)明的另一種具體實(shí)施方案，在步驟(2)中，提取溶劑是丙酮或乙醇，其體積濃度是60％～90％，以mg計(jì)濾渣的質(zhì)量與以mL計(jì)提取溶劑的體積之比為1:30～50。

根據(jù)本發(fā)明的另一種具體實(shí)施方案，在步驟(3)中，大孔樹脂吸附的流速為1.0～3.0BV/h，吸附時(shí)間為1.0～3.0h。

根據(jù)本發(fā)明的另一種具體實(shí)施方案，在步驟(4)中，動(dòng)態(tài)洗脫的速率為2.0～4.0BV/h。

根據(jù)本發(fā)明的另一種具體實(shí)施方案，在步驟(4)中，洗脫液在60℃條件下濃縮到原有體積的10～15％，然后在-20～-10℃溫度和0.1～0.2MPa壓力條件下進(jìn)行真空冷凍干燥。

下面將更詳細(xì)地描述本發(fā)明。

本發(fā)明涉及一種提高木瓜皮多酚抗氧化活性的HPEF提取方法，所述方法包括以下步驟：

(1)原料處理

將木瓜皮清洗干凈后置于55～65℃烘箱中烘至近干，然后在100～110℃恒溫恒濕干燥器內(nèi)烘至恒重，使得木瓜皮的含水率低于0.01％，然后粉碎并過80目篩后，得到木瓜皮粉末，備用。

在該原料處理步驟中，烘干木瓜皮的烘箱溫度范圍為55～65℃是適宜的，如果溫度高于65℃，會(huì)導(dǎo)致組織水分散失過快帶來組織體的萎縮，如果溫度低于55℃則會(huì)導(dǎo)致原料預(yù)處理時(shí)間過長。

恒溫恒濕干燥器的溫度100～110℃是適宜的，如果溫度高于110℃，會(huì)造成原料組織內(nèi)活性物質(zhì)的降解，如果低于100℃則會(huì)導(dǎo)致水分清除不徹底。使用的恒溫恒濕干燥器是本技術(shù)領(lǐng)域常用的可在市場上購買得到的產(chǎn)品，例如上海一恒儀器公司生產(chǎn)銷售的DHG-9031A型產(chǎn)品。

用恒溫恒濕干燥器處理木瓜皮使其含水率低于0.01％，是為了提高樣品的貯藏性及提高后期處理效率。

接下來木瓜皮進(jìn)行粉碎并過80目篩，這是為了利于下一步HPEF提取，提高萃取效率，降低活性成分的破壞率。

(2)HPEF提取

按照以mg計(jì)木瓜皮粉末的質(zhì)量與以mL計(jì)乙醇水溶液的體積比1:20～1:60的比例，將步驟(1)得到的木瓜皮粉末置于體積濃度50～80％的乙醇水溶液中，得到的混合物利用HPEF進(jìn)行處理，HPEF的處理?xiàng)l件為功率400～600W、電場強(qiáng)度20～30KV/cm、脈寬4～8μs、頻率60～80Hz，處理時(shí)間為3～5h，再在0.01MPa條件下減壓過濾1.0h，得到的濾渣用提取溶劑洗滌3次，提取溶劑是丙酮或乙醇，其體積濃度是60～90％，以mg計(jì)濾渣的質(zhì)量與以mL計(jì)提取溶劑的體積之比為1:30～50，洗滌后的濾渣合并，得到木瓜皮多酚粗產(chǎn)品。

本發(fā)明方法中使用的HPEF設(shè)備是本技術(shù)領(lǐng)域常用的設(shè)備，可在市場中購買得到，例如是中國農(nóng)業(yè)大學(xué)生產(chǎn)的OSU-4L型實(shí)驗(yàn)室規(guī)模高壓脈沖電場連續(xù)處理設(shè)備。

對(duì)于HPEF提取方法來說，高壓脈沖功率、電場強(qiáng)度、料液比、脈寬、脈沖頻率等都是影響提取效率的關(guān)鍵因素。

在高壓脈沖功率方面，400～600W是合適的，在該功率條件下，原料組織內(nèi)活性物質(zhì)的溶出速率最為合適。

在電場強(qiáng)度上，當(dāng)電場強(qiáng)度大于20KV/cm時(shí)，多酚的提取率逐漸提高，當(dāng)電場強(qiáng)度超過30KV/cm，多酚的提取率下降。這是由于隨著電場強(qiáng)度增加，運(yùn)動(dòng)加快的極性溶劑能夠更多地進(jìn)入到細(xì)胞內(nèi)，使多酚更容易滲透出來，同時(shí)細(xì)胞內(nèi)外的電場強(qiáng)度差異使細(xì)胞電極化，從而破壞細(xì)胞膜，使多酚更容易被提取。但過大的電場強(qiáng)度對(duì)多酚有降解作用。因此電場強(qiáng)度20～30KV/cm是適宜的。

在料液比方面，以mg計(jì)木瓜皮粉末的質(zhì)量與以mL計(jì)乙醇水溶液的體積之比是1:20～1:60。當(dāng)木瓜皮的粉末質(zhì)量一定而溶劑量過少時(shí)，萃取體系的滲透壓過高，會(huì)阻礙木瓜皮多酚的溶出。當(dāng)料液比在1:20～1:60這一范圍內(nèi)時(shí)，提取率隨著溶劑量增加而提高，當(dāng)料液比超過1:60時(shí)，提取率下降。

在脈寬方面，由于兼顧儀器運(yùn)行成本及提取效率，因而脈寬4～8μs是合適的。

脈沖頻率的適宜范圍是60～80Hz，這是由于高壓脈沖電場對(duì)植物細(xì)胞破壞的程度會(huì)影響提取率，當(dāng)脈沖頻率小于60Hz時(shí)，會(huì)造成破壁作用不明顯、提取效率無明顯變化；當(dāng)脈沖頻率大于80Hz時(shí)，由于電場頻率過大，會(huì)造成多酚降解。

該步驟中使用的提取溶劑是丙酮或乙醇，之所以選擇這些溶劑作為提取溶劑，是因?yàn)檫@些溶劑可改善原料和提取溶劑分子間的作用力，從而改善原料與提取溶劑的溶解度和選擇性。

提取溶劑的濃度對(duì)于多酚的提取效率有重要影響。如果提取溶劑的濃度高于90％，會(huì)造成原料與提取溶劑的溶解度降低；如果濃度低于60％，則會(huì)造成原料中活性物質(zhì)與提取溶劑的選擇性降低。

(3)樹脂吸附

將步驟(2)得到的木瓜皮多酚粗產(chǎn)品加水配制成10.0mg/mL的溶液，用大孔樹脂進(jìn)行吸附，大孔樹脂吸附的流速為1.0～3.0BV/h，吸附時(shí)間為1.0～3.0h，然后在30℃恒溫水浴中振蕩12h，振蕩頻率為1000r/min。

在本發(fā)明方法中使用的大孔樹脂是本技術(shù)領(lǐng)域常用的大孔樹脂，例如是Daion HP-20或Amberlite XAD-4大孔樹脂，它們的特點(diǎn)是成本低且適用性好。

本發(fā)明方法使用例如由上海一恒生產(chǎn)的WSZ-10A恒溫振蕩器進(jìn)行恒溫水浴振蕩，這些設(shè)備也都是本技術(shù)領(lǐng)域常用的設(shè)備。

(4)成品制備

將步驟(3)的吸附后的大孔樹脂過濾，過濾后的樹脂用蒸餾水洗滌兩次，待樹脂濾干后用體積濃度50％的乙醇進(jìn)行動(dòng)態(tài)洗脫，其洗脫速率為2.0～4.0BV/h，洗脫液在60℃條件下濃縮到原有體積的10～15％，然后在-20～-10℃溫度和0.1～0.2MPa壓力條件下進(jìn)行真空冷凍干燥，得到木瓜皮多酚提取物固體。

之所以用濃度50％乙醇進(jìn)行動(dòng)態(tài)洗脫，是由于此濃度下解吸率最高。

采用以下方法和條件測定根據(jù)上述方法制備得到的木瓜皮多酚的得率、純度以及DPPH自由基清除能力。

采用Folin-酚法測定多酚產(chǎn)品中多酚的純度，測定的條件為：準(zhǔn)確稱取一定質(zhì)量的多酚產(chǎn)品，加水溶解后定容成一定體積，吸取樣品溶液1mL，加入1mL蒸餾水、1mL Folin-酚試劑、3mL 10％的Na₂CO₃，測其750nm處的吸光值，代入回歸方程計(jì)算多酚含量，并計(jì)算多酚得率。

多酚得率的計(jì)算公式為：

多酚得率(mg/g)＝提取產(chǎn)品多酚量(mg)/原料總量(g)。

采用van der Toorn等使用的DTNB間接測定卷煙煙氣中自由基，結(jié)果以自由基清除率(％)表示，不同提取物清除自由基能力采用清除的IC₅₀值表示；計(jì)算出自由基清除率為50％時(shí)所需提取物濃度(EC₅₀)，按式計(jì)算IC₅₀＝50％×加入的DPPH質(zhì)量/加入的試樣溶液中溶質(zhì)質(zhì)量。

測定結(jié)果表明，根據(jù)本發(fā)明方法制備得到的木瓜皮多酚的DPPH自由基清除能力比傳統(tǒng)70％乙醇水提法提高1.31～1.83倍，具有明顯提高的DPPH自由基清除能力。如附圖1所示，在DPPH自由基體系中，木瓜皮多酚的IC₅₀為30.21～42.36μg/mL。

根據(jù)本發(fā)明方法制備得到的木瓜皮多酚具有抗氧化、增強(qiáng)機(jī)體免疫功能及抗腫瘤等活性，可在食品、醫(yī)藥及煙草領(lǐng)域中應(yīng)用。

[有益效果]

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果：

(1)本發(fā)明的提取方法適宜工業(yè)化生產(chǎn)，提取率高、純度高；

(2)根據(jù)本發(fā)明方法得到的木瓜皮多酚具有明顯提高的DPPH自由基清除能力；

(3)所使用的溶劑等具有無毒、無害、用量少、成本低的特點(diǎn)，工藝簡單、無環(huán)境污染，具有高效、省時(shí)和成本低等優(yōu)點(diǎn)，是一種綠色環(huán)保、前景廣闊的木瓜皮多酚提取技術(shù)。

【附圖說明】

附圖1是本發(fā)明的提取方法的木瓜皮多酚的得率、純度以及清除DPPH自由基活性的IC50值與傳統(tǒng)的乙醇水提法的對(duì)比圖。

【具體實(shí)施方式】

通過下述實(shí)施例將能夠更好地理解本發(fā)明。

實(shí)施例1：本發(fā)明的木瓜皮多酚的提取

(1)原料處理

稱取木瓜皮置于60℃烘箱中烘至近干，然后置于105℃的恒溫恒濕干燥器內(nèi)烘至恒重，過80目篩后，備用；

(2)HPEF提取

按照以mg計(jì)木瓜皮粉末的質(zhì)量與以mL計(jì)乙醇水溶液的體積比1:40的比例，取步驟(1)得到的木瓜皮粉末樣品，置于體積濃度70％的乙醇水溶液中，在功率500W、電場強(qiáng)度25KV/cm、脈寬6μs、頻率70Hz的處理?xiàng)l件下，用HPEF設(shè)備(OSU-4L型實(shí)驗(yàn)室規(guī)模高壓脈沖電場連續(xù)處理設(shè)備，中國農(nóng)業(yè)大學(xué)生產(chǎn))處理3h，在SHZ-D(III)循環(huán)水真空泵0.01MPa條件下減壓過濾1.0h，濾渣用體積濃度為80％的乙醇提取溶劑洗滌3次，以mg計(jì)濾渣的質(zhì)量與以mL計(jì)提取溶劑的體積之比為1:40，洗滌后的濾渣合并，得到木瓜皮多酚粗產(chǎn)品；

(3)樹脂吸附

將步驟(2)得到的木瓜皮多酚粗產(chǎn)品加水配制成10.0mg/mL的溶液，用Daion HP-20大孔樹脂進(jìn)行吸附，流速為2.0BV/h，吸附時(shí)間為2.0h，然后在WSZ-10A恒溫振蕩器水浴中振蕩12h，保持水浴溫度恒定為30℃，振蕩頻率為1000r/min；

(4)成品制備

將步驟(3)的吸附后的大孔樹脂過濾，過濾后的樹脂用蒸餾水洗滌兩次，待樹脂濾干后用體積濃度50％的乙醇進(jìn)行動(dòng)態(tài)洗脫，其洗脫速率為2.0BV/h，洗脫液在60℃條件下濃縮到原有體積的10～15％，然后在-15℃溫度和0.15MPa壓力條件下進(jìn)行真空冷凍干燥，得到木瓜皮多酚提取物固體。

實(shí)施例2：本發(fā)明的木瓜皮多酚的提取

(1)原料處理

稱取木瓜皮置于65℃烘箱中烘至近干，然后置于100℃的恒溫恒濕干燥器內(nèi)烘至恒重，過80目篩后，備用；

(2)HPEF提取

按照以mg計(jì)木瓜皮粉末的質(zhì)量與以mL計(jì)乙醇水溶液的體積比1:60的比例，取步驟(1)得到的木瓜皮粉末樣品，置于體積濃度60％的乙醇水溶液中，在功率600W、電場強(qiáng)度25KV/cm、脈寬8μs、頻率60Hz的處理?xiàng)l件下，用HPEF設(shè)備(OSU-4L型實(shí)驗(yàn)室規(guī)模高壓脈沖電場連續(xù)處理設(shè)備，中國農(nóng)業(yè)大學(xué)生產(chǎn))處理4h，在SHZ-D(III)循環(huán)水真空泵0.01MPa條件下減壓過濾1.0h，濾渣用體積濃度為90％的乙醇提取溶劑洗滌3次，以mg計(jì)濾渣的質(zhì)量與以mL計(jì)提取溶劑的體積之比為1:40，洗滌后的濾渣合并，得到木瓜皮多酚粗產(chǎn)品；

(3)樹脂吸附

將步驟(2)得到的木瓜皮多酚粗產(chǎn)品加水配制成10.0mg/mL的溶液，用Amberlite XAD-4大孔樹脂進(jìn)行吸附，流速為1.0BV/h，吸附時(shí)間為3.0h，然后在WSZ-10A恒溫振蕩器水浴中振蕩12h，保持水浴溫度恒定為30℃，振蕩頻率為1000r/min；

(4)成品制備

將步驟(3)的吸附后的大孔樹脂過濾，過濾后的樹脂用蒸餾水洗滌兩次，待樹脂濾干后用體積濃度50％的乙醇進(jìn)行動(dòng)態(tài)洗脫，其洗脫速率為4.0BV/h，洗脫液在60℃條件下濃縮到原有體積的10～15％，然后在-20℃溫度和0.1MPa壓力條件下進(jìn)行真空冷凍干燥，得到木瓜皮多酚提取物固體。

實(shí)施例3：本發(fā)明的木瓜皮多酚的提取

(1)原料處理

稱取木瓜皮置于55℃烘箱中烘至近干，然后置于110℃的恒溫恒濕干燥器內(nèi)烘至恒重，過80目篩后，備用；

(2)HPEF提取

按照以mg計(jì)木瓜皮粉末的質(zhì)量與以mL計(jì)乙醇水溶液的體積比1:20的比例，取步驟(1)得到的木瓜皮粉末樣品，置于體積濃度80％的乙醇水溶液中，在功率600W、電場強(qiáng)度25KV/cm、脈寬7μs、頻率80Hz的處理?xiàng)l件下，用HPEF設(shè)備(OSU-4L型實(shí)驗(yàn)室規(guī)模高壓脈沖電場連續(xù)處理設(shè)備，中國農(nóng)業(yè)大學(xué)生產(chǎn))處理5h，在SHZ-D(III)循環(huán)水真空泵0.01MPa條件下減壓過濾1.0h，濾渣用濃度為70％的乙醇提取溶劑洗滌3次，以mg計(jì)濾渣的質(zhì)量與以mL計(jì)提取溶劑的體積之比為1:30，洗滌后的濾渣合并，得到木瓜皮多酚粗產(chǎn)品；

(3)樹脂吸附

將步驟(2)得到的木瓜皮多酚粗產(chǎn)品加水配制成10.0mg/mL的溶液，用Daion HP-20大孔樹脂進(jìn)行吸附，流速為3.0BV/h，吸附時(shí)間為1.0h，然后在WSZ-10A恒溫振蕩器水浴中振蕩12h，保持水浴溫度恒定為30℃，振蕩頻率為1000r/min；

(4)成品制備

將步驟(3)的吸附后的大孔樹脂過濾，過濾后的樹脂用蒸餾水洗滌兩次，待樹脂濾干后用體積濃度50％的乙醇進(jìn)行動(dòng)態(tài)洗脫，其洗脫速率為3.0BV/h，洗脫液在60℃條件下濃縮到原有體積的10～15％，然后在-20℃溫度和0.2MPa壓力條件下進(jìn)行真空冷凍干燥，得到木瓜皮多酚提取物固體。

實(shí)施例4：本發(fā)明的木瓜皮多酚的提取

(1)原料處理

稱取木瓜皮置于60℃烘箱中烘至近干，然后置于105℃的恒溫恒濕干燥器內(nèi)烘至恒重，過80目篩后，備用；

(2)HPEF提取

按照以mg計(jì)木瓜皮粉末的質(zhì)量與以mL計(jì)乙醇水溶液的體積比1:40的比例，取步驟(1)得到的木瓜皮粉末樣品，置于體積濃度60％的乙醇水溶液中，在功率600W、電場強(qiáng)度30KV/cm、脈寬8μs、頻率60Hz的處理?xiàng)l件下，用HPEF設(shè)備(OSU-4L型實(shí)驗(yàn)室規(guī)模高壓脈沖電場連續(xù)處理設(shè)備，中國農(nóng)業(yè)大學(xué)生產(chǎn))處理4h，在SHZ-D(III)循環(huán)水真空泵0.01MPa條件下減壓過濾1.0h，濾渣用體積濃度為60％的乙醇提取溶劑洗滌3次，以mg計(jì)濾渣的質(zhì)量與以mL計(jì)提取溶劑的體積之比為1:30g/mL，洗滌后的濾渣合并，得到木瓜皮多酚粗產(chǎn)品；

(3)樹脂吸附

將步驟(2)得到的木瓜皮多酚粗產(chǎn)品加水配制成10.0mg/mL的溶液，用Amberlite XAD-4大孔樹脂進(jìn)行吸附，流速為2.0BV/h，吸附時(shí)間為1.0h，然后在WSZ-10A恒溫振蕩器水浴中振蕩12h，保持水浴溫度恒定為30℃，振蕩頻率為1000r/min；

(4)成品制備

將步驟(3)的吸附后的大孔樹脂過濾，過濾后的樹脂用蒸餾水洗滌兩次，待樹脂濾干后用體積濃度50％的乙醇進(jìn)行動(dòng)態(tài)洗脫，其洗脫速率為2.0BV/h，洗脫液在60℃條件下濃縮到原有體積的10～15％，然后在-10℃溫度和0.1MPa壓力條件下進(jìn)行真空冷凍干燥，得到木瓜皮多酚提取物固體。

實(shí)施例5：本發(fā)明的木瓜皮多酚的提取

(1)原料處理

稱取木瓜皮置于55℃烘箱中烘至近干，然后置于100℃的恒溫恒濕干燥器內(nèi)烘至恒重，過80目篩后，備用；

(2)HPEF提取

按照以mg計(jì)木瓜皮粉末的質(zhì)量與以mL計(jì)乙醇水溶液的體積比1:20的比例，取步驟(1)得到的木瓜皮粉末樣品，置于體積濃度50％的乙醇水溶液中，在功率400W、電場強(qiáng)度20KV/cm、脈寬5μs、頻率80Hz的處理?xiàng)l件下，用HPEF設(shè)備(OSU-4L型實(shí)驗(yàn)室規(guī)模高壓脈沖電場連續(xù)處理設(shè)備，中國農(nóng)業(yè)大學(xué)生產(chǎn))處理5h，在SHZ-D(III)循環(huán)水真空泵0.01MPa條件下減壓過濾1.0h，濾渣用體積濃度為80％的丙酮提取溶劑洗滌3次，以mg計(jì)濾渣的質(zhì)量與以mL計(jì)提取溶劑的體積之比為1:50，洗滌后的濾渣合并，得到木瓜皮多酚粗產(chǎn)品；

(3)樹脂吸附

將步驟(2)得到的木瓜皮多酚粗產(chǎn)品加水配制成10.0mg/mL的溶液，用Amberlite XAD-4大孔樹脂進(jìn)行吸附，流速為3.0BV/h，吸附時(shí)間為3.0h，然后在WSZ-10A恒溫振蕩器水浴中振蕩12h，保持水浴溫度恒定為30℃，振蕩頻率為1000r/min；

(4)成品制備

將步驟(3)的吸附后的大孔樹脂過濾，過濾后的樹脂用蒸餾水洗滌兩次，待樹脂濾干后用體積濃度50％的乙醇進(jìn)行動(dòng)態(tài)洗脫，其洗脫速率為4.0BV/h，洗脫液在60℃條件下濃縮到原有體積的10～15％，然后在-10℃溫度和0.2MPa壓力條件下進(jìn)行真空冷凍干燥，得到木瓜皮多酚提取物固體。

實(shí)施例6：本發(fā)明的木瓜皮多酚的提取

(1)原料處理

稱取木瓜皮置于65℃烘箱中烘至近干，然后置于100℃的恒溫恒濕干燥器內(nèi)烘至恒重，過80目篩后，備用；

(2)HPEF提取

按照以mg計(jì)木瓜皮粉末的質(zhì)量與以mL計(jì)乙醇水溶液的體積比1:60的比例，取步驟(1)得到的木瓜皮粉末樣品，置于體積濃度70％的乙醇水溶液中，在功率500W、電場強(qiáng)度20KV/cm、脈寬4μs、頻率70Hz的處理?xiàng)l件下，用HPEF設(shè)備(OSU-4L型實(shí)驗(yàn)室規(guī)模高壓脈沖電場連續(xù)處理設(shè)備，中國農(nóng)業(yè)大學(xué)生產(chǎn))處理3h，在SHZ-D(III)循環(huán)水真空泵0.01MPa條件下減壓過濾1.0h，濾渣用體積濃度為70％的丙酮提取溶劑洗滌3次，以mg計(jì)濾渣的質(zhì)量與以mL計(jì)提取溶劑的體積之比為1:40，洗滌后的濾渣合并，得到木瓜皮多酚粗產(chǎn)品；

(3)樹脂吸附

將步驟(2)得到的木瓜皮多酚粗產(chǎn)品加水配制成10.0mg/mL的溶液，用Amberlite XAD-4大孔樹脂進(jìn)行吸附，流速為1.0BV/h，吸附時(shí)間為2.0h，然后在WSZ-10A恒溫振蕩器水浴中振蕩12h，保持水浴溫度恒定為30℃，振蕩頻率為1000r/min；

(4)成品制備

將步驟(3)的吸附后的大孔樹脂過濾，過濾后的樹脂用蒸餾水洗滌兩次，待樹脂濾干后用體積濃度50％的乙醇進(jìn)行動(dòng)態(tài)洗脫，其洗脫速率為3.0BV/h，洗脫液在60℃條件下濃縮到原有體積的10～15％，然后在-15℃溫度和0.1MPa壓力條件下進(jìn)行真空冷凍干燥，得到木瓜皮多酚提取物固體。

實(shí)施例7：本發(fā)明的木瓜皮多酚的提取

(1)原料處理

稱取木瓜皮置于60℃烘箱中烘至近干，然后置于105℃的恒溫恒濕干燥器內(nèi)烘至恒重，過80目篩后，備用；

(2)HPEF提取

按照以mg計(jì)木瓜皮粉末的質(zhì)量與以mL計(jì)乙醇水溶液的體積比1:20的比例，取步驟(1)得到的木瓜皮粉末樣品，置于體積濃度60％的乙醇水溶液中，在功率400W、電場強(qiáng)度30KV/cm、脈寬7μs、頻率60Hz的處理?xiàng)l件下，用HPEF設(shè)備(OSU-4L型實(shí)驗(yàn)室規(guī)模高壓脈沖電場連續(xù)處理設(shè)備，中國農(nóng)業(yè)大學(xué)生產(chǎn))處理4h，在SHZ-D(III)循環(huán)水真空泵0.01MPa條件下減壓過濾1.0h，濾渣用體積濃度為90％的丙酮提取溶劑洗滌3次，以mg計(jì)濾渣的質(zhì)量與以mL計(jì)提取溶劑的體積之比為1:50，洗滌后的濾渣合并，得到木瓜皮多酚粗產(chǎn)品；

(3)樹脂吸附

將步驟(2)得到的木瓜皮多酚粗產(chǎn)品加水配制成10.0mg/mL的溶液，用Daion HP-20大孔樹脂進(jìn)行吸附，流速為2.0BV/h，吸附時(shí)間為2.0h，然后在WSZ-10A恒溫振蕩器水浴中振蕩12h，保持水浴溫度恒定為30℃，振蕩頻率為1000r/min；

(4)成品制備

將步驟(3)的吸附后的大孔樹脂過濾，過濾后的樹脂用蒸餾水洗滌兩次，待樹脂濾干后用體積濃度50％的乙醇進(jìn)行動(dòng)態(tài)洗脫，其洗脫速率為3.0BV/h，洗脫液在60℃條件下濃縮到原有體積的10～15％，然后在-20℃溫度和0.2MPa壓力條件下進(jìn)行真空冷凍干燥，得到木瓜皮多酚提取物固體。