本發(fā)明涉及藥劑學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物及其制備方法。

背景技術(shù)：

阿托伐他汀鈣(Atorvastatin calcium，ATC)系一種臨床廣泛應(yīng)用的他汀類藥物，是HMG-CoA還原酶的選擇性和競爭性抑制劑，通過抑制肝臟內(nèi)HMG-CoA還原酶及膽固醇的生物合成從而降低血漿中膽固醇和血清中脂蛋白濃度，并通過增加肝臟細(xì)胞表面的低密度脂蛋白(LDL)受體以增強LDL的攝取和分解代謝，減少LDL的生成。阿托伐他汀鈣市售制劑是由美國輝瑞制藥公司生產(chǎn)銷售的，劑型為普通片劑。

阿托伐他汀鈣為難溶性藥物，其溶解度具有典型的pH依賴性，可溶解于偏酸性水溶液中，當(dāng)pH值超過4.0后其溶解度迅速下降，同時，阿托伐他汀鈣對酸極不穩(wěn)定，容易降解形成內(nèi)酯結(jié)構(gòu)進而影響藥效。傳統(tǒng)的阿托伐他汀鈣劑型為普通片劑，其絕對生物利用度僅為12％，這也使得其HMG-CoA還原酶抑制劑活性的生物利用度只有30％，臨床使用容易造成個體給藥差異性。研究人員為了解決這一難題，也采用了其他的給藥形式以便提高阿托伐他汀鈣的口服生物利用度。專利CN102309462A和CN104688708A公開了一種阿托伐他汀鈣的片劑及其制備方法，結(jié)果表明自制產(chǎn)品與市售制劑相比，二者體內(nèi)生物利用度并無明顯提高。專利CN105434391A公開了一種含有阿托伐他汀鈣的腸溶片劑，旨在降低胃液中藥物的降解，根據(jù)其結(jié)果，該制劑雖然提高了生物利用度，但不可避免存在制備工藝復(fù)雜(包括制備片芯過程、隔離衣包衣過程，粘附包衣過程、激光打孔過程和腸溶衣包衣過程等)，能耗高等缺陷。其他涉及阿托伐他汀鈣口服制劑的發(fā)明均從改善藥物分散性的角度出發(fā)，制備成了軟膠囊(CN100450471C)，滴丸(CN1939286A)，干混懸劑(CN101637452B)，以及速崩片(CN100411612C)等，但沒有相關(guān)發(fā)明涉及從藥物分子水平改善阿托伐他汀鈣溶解度和滲透性的報道。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供了一種阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物及其制備方法，旨在從分子水平改善難溶性藥物的結(jié)構(gòu)特征，以達到提高滲透性，增加口服生物利用度的目的。

為了解決上述問題，本發(fā)明公開了一種阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物，包括阿托伐他汀鈣和磷脂，二者的摩爾比為1～4︰4～1，反應(yīng)物濃度為0.1mg/ml～8mg/ml。

優(yōu)選的，所述磷脂選自天然大豆磷脂、天然卵磷脂或人工合成的磷脂酰膽堿、磷脂酰甘油、磷脂酰乙醇胺、磷酯酰絲氨酸、磷脂酸中至少一種。

優(yōu)選的，阿托伐他汀鈣與磷脂的摩爾比為1～2︰2～1，反應(yīng)物濃度為1mg/ml～5mg/ml。

優(yōu)選的，阿托伐他汀鈣與磷脂的摩爾比為1︰1，反應(yīng)物濃度為5mg/ml。

優(yōu)選的，復(fù)合物的油水分配系數(shù)為1～4。

本發(fā)明還公開了一種阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物的制備方法，包括如下步驟：

(1)稱取處方量的阿托伐他汀鈣和磷脂，在非質(zhì)子溶劑中于20℃～90℃條件下混合攪拌0.1～8小時；

(2)30℃～50℃條件下進行旋蒸至沒有有機溶劑氣味，之后于30℃～50℃條件下真空干燥20～24小時，去除非質(zhì)子溶劑，得到阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物。

優(yōu)選的，所述非質(zhì)子溶劑選自甲醇、乙醇、二氧六環(huán)、氯仿、二氯甲烷、四氯化碳、二甲基乙酰胺、乙酸乙酯、丙酮中至少一種。

優(yōu)選的，本發(fā)明制備方法，包括如下步驟：

(1)阿托伐他汀鈣和磷脂，在非質(zhì)子溶劑中于30℃～50℃條件下混合攪拌1～3小時；

(2)40℃條件下進行旋蒸至沒有有機溶劑氣味，之后于40℃條件下真空干燥24小時，去除非質(zhì)子溶劑，得到阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物。

本發(fā)明具有如下有益效果：

以磷脂材料與難溶性藥物制備藥脂復(fù)合體系已經(jīng)成為了一種提高難溶性藥物生物利用度的有效方法。相關(guān)研究表明，藥物和磷脂材料在非質(zhì)子傳遞溶劑中通過范德華力、電荷遷移等作用形式可以形成穩(wěn)定的復(fù)合結(jié)構(gòu)，該復(fù)合物能夠顯著改變藥物的溶解度、脂溶性、滲透性等，從而改善藥物口服過程的吸收行為，組織富集特征和體內(nèi)生物利用度。

本發(fā)明使得磷脂材料與難溶性藥物阿托伐他汀鈣通過分子間作用形成磷脂復(fù)合物體系，進而改善藥物理化性質(zhì)及提高生物利用度。本發(fā)明中采用摩爾系數(shù)法確定最佳藥-脂比，以復(fù)合率為指標(biāo)運用正交試驗優(yōu)化制備工藝，通過紅外光譜、差示熱量掃描和X射線衍射分析對本發(fā)明阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物進行表征并與市售制劑對比評價其體內(nèi)生物利用度。與傳統(tǒng)的阿托伐他汀鈣相比，本發(fā)明所提供的阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物具有以下優(yōu)點：

①將阿托伐他汀鈣制備成磷脂復(fù)合物之后，明顯改變了原料藥在不同介質(zhì)的溶解性能，提高其在水相和油相中的溶解能力。

②制備成磷脂復(fù)合物之后較阿托伐他汀鈣相比，磷脂復(fù)合物的脂溶性在不同pH體系中均大幅提高，在pH6.8緩沖液中，LogP由0.349增加至1.761。表明其具有更優(yōu)異的跨膜轉(zhuǎn)運特性。

③磷脂復(fù)合物跟市售制劑的生物利用度相比，復(fù)合物組比市售制劑組提高177％。磷脂復(fù)合物組的藥時曲線下面積較市售組提高了214％，半衰期顯著延長，說明將阿托伐他汀鈣制備成磷脂復(fù)合物后可以有效促進藥物的體內(nèi)吸收，改善體循環(huán)時間并顯著提高生物利用度。

④本發(fā)明所述的制備工藝簡單可行，重現(xiàn)性好，質(zhì)量可控，穩(wěn)定性4個月結(jié)果良好。

附圖說明

通過閱讀下文優(yōu)選實施方式的詳細(xì)描述，各種其他的優(yōu)點和益處對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將變得清楚明了。附圖僅用于示出優(yōu)選實施方式的目的，而并不認(rèn)為是對本發(fā)明的限制。而且在整個附圖中，用相同的參考符號表示相同的部件。在附圖中：

圖1為本發(fā)明阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物的藥脂比摩爾系數(shù)檢測結(jié)果；

圖2為本發(fā)明阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物的紫外全波長掃面圖譜；

圖3為本發(fā)明阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物的FT-IR掃描圖譜；

圖4為本發(fā)明阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物的X-射線衍射圖譜；

圖5為本發(fā)明阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物的DSC掃描圖譜；

圖6為本發(fā)明阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物與現(xiàn)有阿托伐他汀鈣制劑的血藥濃度-時間對比曲線圖。

具體實施方式

下文中將參考附圖并結(jié)合實施例來詳細(xì)說明本發(fā)明。需要說明的是，在不沖突的情況下，本發(fā)明中的實施例及實施例中的特征可以相互組合。

本發(fā)明中的術(shù)語：

本發(fā)明中“藥脂比”指藥物與脂質(zhì)材料的比；

“藥脂復(fù)合比”指本發(fā)明阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物中阿托伐他汀鈣與磷脂的最佳比例；

“物理混合物”是指將藥物跟磷脂進行直接混合，沒有經(jīng)過復(fù)合物制備過程，僅簡單的進行物理混合；

“藥物濃度”是指固定藥物質(zhì)量后所用的非質(zhì)子溶劑的體積；

“原料藥”指市售阿托伐他汀鈣，本發(fā)明采用直接購買的原料藥粉末，在進行理化性質(zhì)考察時用來跟制備成的復(fù)合物作對比；

“復(fù)合率”是用于評價藥物跟磷脂復(fù)合反應(yīng)情況的指標(biāo)，藥物在跟磷脂進行復(fù)合的過程存在三種情況，一是藥物跟磷脂形成復(fù)合物但是藥物有剩余，二是藥物跟磷脂正好完全復(fù)合，三是藥物跟磷脂形成復(fù)合物后磷脂有剩余；假設(shè)固定藥物的質(zhì)量，在可形成復(fù)合物的條件下，其復(fù)合率是隨著磷脂的用量增加而增加的，會存在一個飽和的過程，在達到平臺期的那個點對應(yīng)的藥物和磷脂的質(zhì)量就是最佳的反應(yīng)比例，即復(fù)合率為100％。

本發(fā)明中所用阿托伐他汀鈣為市售產(chǎn)品。

本發(fā)明中阿托伐他汀鈣藥物分子量為1155.34，以此計算；磷脂平均分子量為752，以此計算。

為了更近一步的對比本發(fā)明阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物和現(xiàn)有原料藥阿托伐他汀鈣的區(qū)別，前期首先對本發(fā)明阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物和阿托伐他汀鈣進行了紫外和高效液相的方法學(xué)檢測。紫外掃描結(jié)果表明阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物和阿托伐他汀鈣均在244nm波長處有最大紫外吸收，高效液相結(jié)果表明，磷脂不干擾其含量測定，且高效液相方法學(xué)結(jié)果如下：二者在10～300ug/mL濃度范圍內(nèi)線性結(jié)果良好，線性方程為A＝38053C+1852.9(R2＝0.9999)。其日內(nèi)精密度和日間精密度的RSD值分別為0.5％和0.8％，精密度良好。低中高三個濃度的回收率良好，平均回收率為99.83。

本發(fā)明阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物的制備方法和表征，包括以下步驟：

(1)分別配制阿托伐他汀鈣與磷脂的摩爾比分別為0/5、1/4、2/3、2.5/2.5、3/2、4/1、5/0的阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物和物理混合物并使藥物濃度恒定為0.005mol/L。在244nm波長處測定阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物和阿托伐他汀鈣的吸光度值A(chǔ)，并計算二者的差值△A，以△A對摩爾比作圖，其中△A變化最大的對應(yīng)的摩爾比即為阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物的藥脂復(fù)合比。

(2)稱取適量阿托伐他汀鈣和對應(yīng)摩爾比的磷脂，在系列非質(zhì)子溶劑中，于20℃～90℃下攪拌0.1～8小時后，在30℃～50℃下進行旋蒸至沒有有機溶劑氣味，并于30℃～50℃下真空干燥20～24小時，得到阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物。阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物的反應(yīng)液濃度優(yōu)選：1mg/mL、3mg/mL和5mg/mL。阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物的反應(yīng)溫度優(yōu)選包括：30℃、40℃和50℃。阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物反應(yīng)時間優(yōu)選包括：1h、2h和3h。

(3)利用阿托伐他汀鈣溶于丙酮，而磷脂和磷脂復(fù)合物不溶于丙酮的特點，進行不同條件下的藥物和磷脂的復(fù)合率的考察，并設(shè)計正交實驗表進行考察對于阿托伐他汀鈣和磷脂復(fù)合影響最大的因素。

(4)將制備的阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物儲存于4℃條件下，檢測其1、2、3、4個月的穩(wěn)定性，穩(wěn)定性考察包括外觀和化學(xué)穩(wěn)定性。

(5)對制備的阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物進行理化性質(zhì)的檢測，主要包括紫外吸收變化，并檢測其在不同介質(zhì)中的溶解性能，以及油水分配系數(shù)否改變。并采取FT-IR，XRD，DSC的方法證實其理化性質(zhì)跟游離藥來說發(fā)生明顯改變。

(6)對阿托伐他汀鈣和其磷脂復(fù)合物進行體外溶出實驗檢測，確定阿托伐他汀鈣在制成磷脂復(fù)合物之后較原料藥在體外釋藥行為發(fā)生改變。

(7)制備的阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物跟市售阿托伐他汀鈣進行生物利用度比較。采用大鼠灌胃方法比較市售阿托伐他汀鈣和阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物的口服生物利用度，于不同時間段眼眶取血，高效液相方法測定不同時間段血藥濃度變化，用DAS軟件對其不同時間下血藥濃度進行分析擬合并分析結(jié)果。

實施例1

本實施例提供了一種阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物，包括阿托伐他汀鈣和天然大豆磷脂的摩爾比為1︰1，阿托伐他汀鈣和天然大豆磷脂的總摩爾數(shù)為0.005mol/L，即將0.0025mol的阿托伐他汀鈣和0.0025mol的天然大豆磷脂于1L的丙酮溶液里，于50℃下攪拌3小時后，在40℃下進行旋蒸至沒有有機溶劑氣味，并于40℃下真空干燥24小時，得到阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物。密封后4℃條件下保存。本實施例中，阿托伐他汀鈣的濃度為2.89mg/ml，磷脂的濃度為1.88mg/ml，反應(yīng)物濃度為4.77mg/ml。

實施例2

本實施例提供了一種阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物，包括阿托伐他汀鈣和磷脂酰乙醇胺的摩爾比為1︰1，阿托伐他汀鈣和磷脂酰乙醇胺的總摩爾數(shù)為0.005mol/L，即將0.0025mol的阿托伐他汀鈣和0.0025mol的磷脂酰乙醇胺于1L的丙酮溶液里，于30℃下攪拌3小時后，在40℃下進行旋蒸至沒有有機溶劑氣味，并于40℃下真空干燥20小時，得到阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物。密封后4℃條件下保存。本實施例中，阿托伐他汀鈣的濃度為2.89mg/ml，磷脂的濃度為1.88mg/ml，反應(yīng)物濃度為4.77mg/ml。

實施例3

本實施例提供了一種阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物，包括阿托伐他汀鈣和天然卵磷脂的摩爾比為1︰1，阿托伐他汀鈣和天然卵磷脂的總摩爾數(shù)為0.005mol/L，即將0.0025mol的阿托伐他汀鈣和0.0025mol的天然卵磷脂于1L的四氯化碳溶液里，于50℃下攪拌2小時后，在40℃下進行旋蒸至沒有有機溶劑氣味，并于40℃下真空干燥24小時，得到阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物。密封后4℃條件下保存。本實施例中，阿托伐他汀鈣的濃度為2.89mg/ml，磷脂的濃度為1.88mg/ml，反應(yīng)物濃度為4.77mg/ml。

實施例4

本實施例提供了一種阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物，包括阿托伐他汀鈣和磷脂酰膽堿的摩爾比為1︰1，阿托伐他汀鈣和磷脂酰膽堿的總摩爾數(shù)為0.005mol/L，即將0.0025mol的阿托伐他汀鈣和0.0025mol的磷脂酰膽堿于1L的二甲基乙酰胺溶液里，于50℃下攪拌1小時后，在40℃下進行旋蒸至沒有有機溶劑氣味，并于40℃下真空干燥24小時，得到阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物。密封后4℃條件下保存。本實施例中，阿托伐他汀鈣的濃度為2.89mg/ml，磷脂的濃度為1.88mg/ml，反應(yīng)物濃度為4.77mg/ml。

實施例5

本實施例提供了一種阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物，包括阿托伐他汀鈣和天然大豆磷脂的摩爾比為1︰1，阿托伐他汀鈣和天然卵磷脂的總摩爾數(shù)為0.005mol/L，即將0.0025mol的阿托伐他汀鈣和0.0025mol的天然卵磷脂于1L的四氯化碳溶液里，于40℃下攪拌3小時后，在40℃下進行旋蒸至沒有有機溶劑氣味，并于40℃下真空干燥24小時，得到阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物。密封后4℃條件下保存。本實施例中，阿托伐他汀鈣的濃度為2.89mg/ml，磷脂的濃度為1.88mg/ml，反應(yīng)物濃度為4.77mg/ml。

實例6

本實施例提供了一種阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物，包括阿托伐他汀鈣和天然大豆磷脂的摩爾比為1︰1，阿托伐他汀鈣和天然卵磷脂的總摩爾數(shù)為0.005mol/L，即將0.0025mol的阿托伐他汀鈣和0.0025mol的天然卵磷脂于500mL的無水乙醇溶液里，阿托伐他汀鈣的濃度為5.78mg/ml，磷脂的濃度為3.76mg/ml，于40℃下攪拌2小時后，在40℃下進行旋蒸至沒有有機溶劑氣味，并于40℃下真空干燥24小時，得到阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物。密封后4℃條件下保存。本實施例中，阿托伐他汀鈣的濃度為5.78mg/ml，磷脂的濃度為3.76mg/ml，反應(yīng)物濃度為9.54mg/ml。

實例7

照實例6下操作，在固定反應(yīng)溫度和反應(yīng)時間后，改變無水乙醇體積為250mL進行復(fù)合物制備。

實例8

本實施例提供了一種阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物，包括阿托伐他汀鈣和天然大豆磷脂的摩爾比為2︰1，阿托伐他汀鈣和天然卵磷脂的總摩爾數(shù)為0.006mol/L，即將0.004mol的阿托伐他汀鈣和0.002mol的天然卵磷脂于1L的無水乙醇溶液里，于40℃下攪拌3小時后，在40℃下進行旋蒸至沒有有機溶劑氣味，并于40℃下真空干燥24小時，得到阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物。密封后4℃條件下保存。本實施例中，阿托伐他汀鈣的濃度為4.62mg/ml，磷脂的濃度為1.50mg/ml，反應(yīng)物濃度為6.12mg/ml。

實例9

本實施例提供了一種阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物，包括阿托伐他汀鈣和天然大豆磷脂的摩爾比為1︰2，阿托伐他汀鈣和天然卵磷脂的總摩爾數(shù)為0.006mol/L，即將0.002mol的阿托伐他汀鈣和0.004mol的天然卵磷脂于1L的無水乙醇溶液里，于40℃下攪拌3小時后，在40℃下進行旋蒸至沒有有機溶劑氣味，并于40℃下真空干燥24小時，得到阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物。密封后4℃條件下保存。本實施例中，阿托伐他汀鈣的濃度為2.31mg/ml，磷脂的濃度為3.01mg/ml，反應(yīng)物濃度為5.32mg/ml。

對本發(fā)明阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物的檢測

一、摩爾系數(shù)法確定藥脂比

將制備好的阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物和對應(yīng)同等摩爾比的物理混合溶液于244nm波長處測定其吸光度值，并做差值求得△A，其他摩爾比同樣操作，最后得到不同摩爾比對應(yīng)的△A，如圖1所示，以△A對摩爾比作圖，最高峰的△A所對應(yīng)的摩爾比即為最佳的藥脂比；如圖2所示。本發(fā)明研究表明，最佳的藥脂比為1:1。不同摩爾比的阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物和阿托伐他汀鈣吸光度結(jié)果如表1所示。

表1吸光度結(jié)果

二、正交試驗

以復(fù)合率作為指標(biāo)來篩選制備阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物的方法，主要運用正交實驗，對于能夠影響以復(fù)合物質(zhì)量的因素及因素的水平通過SPSS等統(tǒng)計學(xué)軟件生成相應(yīng)的正交實驗表，來確定各個因素的影響能力，優(yōu)化出最佳的制備工藝，也可以通過其他的方法進行工藝條件優(yōu)化，包括，單因素考察，星點設(shè)計和響應(yīng)面法等等比較主流的統(tǒng)計學(xué)分析方法。以正交實驗法為例進行說明。

設(shè)計正交實驗表，確定的四個影響因素為反應(yīng)溶劑種類(A)，反應(yīng)時間(B)，反應(yīng)溫度(C)和反應(yīng)物濃度(D)，每個影響因素下設(shè)置3個水平，利用SPSS生成正交實驗表，以本例子說明，生成4因素3水平的正交實驗，通過復(fù)合率來考察最佳的制備條件。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，對于阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物形成的影響因素主次順序依次為A>B>D>C。出于安全和盡可能減少溶劑毒性角度考慮，在甲醇和無水乙醇反應(yīng)效果相似時，選擇毒性較小的無水乙醇來作為最佳的反應(yīng)溶劑。其次影響最大的是反應(yīng)時間，隨著反應(yīng)時間的延長，二者反應(yīng)越完全，然而3h和2h相比復(fù)合率基本沒有明顯變化，反應(yīng)時間定為2h。根據(jù)正交試驗結(jié)果，確定最終的反應(yīng)條件為：A1B2C2D2，即無水乙醇為反應(yīng)溶劑，反應(yīng)溫度40℃，反應(yīng)時間2h，反應(yīng)物濃度3mg/ml。正交試驗設(shè)計如表2所示，結(jié)果如表3所示。

表2正交試驗設(shè)計表

表3正交試驗結(jié)果表

三、紫外吸收檢測

本發(fā)明制得的阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物在244nm處的紫外吸收較市售阿托伐他汀鈣有一定程度增強。

配制阿托伐他汀鈣和磷脂摩爾比分別為1:0.1、1:0.5、1:1、1:2、1:3和1:10的系列物理混合溶液，分別于200-400nm波長范圍進行光譜掃描，記錄不同摩爾比下的掃描光譜和244nm處對應(yīng)的吸光度值，見表4。同時對摩爾比1:1的阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物相同條件下進行光譜掃描。如圖2所示，標(biāo)記曲線b(摩爾比1:0.1)、c(摩爾比1:0.5)、d(摩爾比1:1)、e(摩爾比1:2)、f(摩爾比1:3)、g(摩爾比1:10)結(jié)果表明物理混合液中隨著磷脂的比例不斷增加，阿托伐他汀鈣的紫外吸收曲線和最大吸收波長并無明顯差異或偏移，但是當(dāng)阿托伐他汀鈣形成磷脂復(fù)合物后，標(biāo)記曲線a結(jié)果表明，其吸收曲線產(chǎn)生較大變化，在200～300nm之間，藥物的紫外吸收顯著增強。以阿托伐他汀鈣和磷脂摩爾比1:1制備得的磷脂復(fù)合物在244nm波長處的吸光度是相同濃度阿托伐他汀鈣溶液的1.8倍。

表4不同摩爾比例的阿托伐他汀鈣和磷脂的物理混合物及阿托伐他汀鈣復(fù)合物的吸光度結(jié)果

四、阿托伐他汀鈣復(fù)合物溶解能力檢測

本發(fā)明制得的阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物，測定其在不同介質(zhì)中溶解度，以此檢測本發(fā)明制得的阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物的溶解能力。

分別配制阿托伐他汀鈣和阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物在pH1.2、pH4.5、pH6.8、去離子水、大豆油、MCT、ATO9和GTCC中的飽和溶液，于37℃恒溫振蕩24h后，測定阿托伐他汀鈣和阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物在不同介質(zhì)中的溶解度。結(jié)果表明在制備成磷脂復(fù)合物之后其無論是在水相介質(zhì)中還是在油相介質(zhì)中溶解能力均有明顯提升，其中，在水中的溶解度提高了約16倍，在大豆油中的溶解度提高了近1000多倍，表明將阿托伐他汀鈣制備磷脂復(fù)合物后具有促進藥物體內(nèi)吸收的可能性。結(jié)果如表5所示。

表5不同介質(zhì)溶解度測定結(jié)果

五、油水分配系數(shù)(LogP)檢測

本發(fā)明制得的阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物，其脂溶性得到改善，通過測定其形成復(fù)合物前后油水分配系數(shù)的改變來初步判斷。

取阿托伐他汀鈣和阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物適量，置于10ml等體積比的正辛醇-水溶液中，于恒溫振蕩儀中振蕩48h至溶解平衡后，取下層水溶液置于離心機，4000rpm，離心10min，HPLC法測定水相中的藥物濃度并計算表觀油水分配系數(shù)，見表6。結(jié)果表明阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物的油水分配系數(shù)顯著提高，表明其具有較好的跨膜轉(zhuǎn)運能力。

表6油水分配系數(shù)測定結(jié)果

六、FT-IR分析

FT-IR分析：采用KBr壓片法，制備4份樣品：阿托伐他汀鈣(ATC)，阿托伐他汀鈣和磷脂物理混合物(ATC+PC)，阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物(ATCPC)，磷脂(PC)，如圖3所示，在400～4000cm^-1范圍內(nèi)進行光譜掃描。

從圖3所示的紅外光譜的結(jié)果可看出，磷脂的紅外光譜圖中2920cm和2850cm^-1為典型的C-H伸縮振動峰，1720cm^-1處為C＝O伸縮振動峰。物理混合物光譜圖可以看成是阿托伐他汀鈣和磷脂的疊加，而磷脂復(fù)合物光譜圖中未見新化學(xué)鍵形成的振動峰，說明二者并未形成新化合物，僅為分子間的相互作用。

七、X-射線衍射分析

X-射線衍射分析：測試樣品分別為阿托伐他汀鈣(ATC)，阿托伐他汀鈣和磷脂物理混合物(ATC+PC)，阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物(ATCPC)，磷脂(PC)，檢測條件為Cu靶(40kV，40mV)，掃描范圍10°～45°，掃描速度4°/min，如圖4所示。由阿托伐他汀鈣的XRD圖譜可以看出明顯的晶體特征衍射峰，包括16.8°、19.2°、21.4°衍射峰，磷脂在15°～25°間表現(xiàn)出寬峰，物理混合物是阿托伐他汀鈣的衍射峰和磷脂衍射峰的疊加，而在磷脂復(fù)合物的衍射譜圖中阿托伐他汀鈣的特征峰已經(jīng)消失，取而代之的是一個較寬的衍射峰，表明在復(fù)合物中阿托伐他汀鈣的存在形式發(fā)生改變。

八、DSC分析：

DSC分析：檢測條件，以AI₂O₃為空白對照，在2ml/min的N₂氣流保護作用下對阿托伐他汀鈣(ATC)，阿托伐他汀鈣和磷脂物理混合物(ATC+PC)，阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物(ATCPC)，磷脂(PC)四份樣品進行分析，溫度范圍30～300℃，升溫速率10℃/min，如圖5所示。由DSC結(jié)果中可以看出，阿托伐他汀鈣存在明顯特征吸熱峰，物理混合物的DSC圖譜同樣能夠看出藥物的特征吸熱峰，當(dāng)形成磷脂復(fù)合物后，藥物的吸熱溫度下降，吸收峰發(fā)生了偏移，表明藥物與磷脂產(chǎn)生相互作用導(dǎo)致吸熱溫度降。

九、生物利用度檢測

本發(fā)明制得的阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物，理化性質(zhì)明顯改善，特別是溶解能力的提高對促進其體內(nèi)吸收、增加生物利用度提供前提。將阿托伐他汀鈣磷脂復(fù)合物和市售制劑立普妥進行SD大鼠灌胃實驗，于不同時間眼眶取血，運用高效液相色譜法進行分析，繪制血藥濃度-時間曲線，如圖6所示，比較本發(fā)明復(fù)合物和市售制劑的生物利用度。

取體重為190g～210g的雄性SD大鼠12只，隨機分成兩組，每組6只，分別記為市售組和復(fù)合物組，實驗前禁食12h，自由飲水。SD大鼠的給藥劑量為8mg/kg，將市售阿托伐他汀鈣研磨成粉，用5％CMC-Na配成濃度為0.8mg/mL的混懸液，復(fù)合物組進行相同處理，灌胃體積為2mL。給藥后分別于0.25、0.5、0.75、1、2、4、6、8、12、20h眼眶取血0.5ml，4000rpm離心10min，取上清血漿180uL,血漿樣品經(jīng)處理后，進行高效液相分析。用DAS軟件對其不同時間下血藥濃度進行分析擬合。

根據(jù)DAS3.0軟件擬合的結(jié)果看出，市售制劑達峰時間為0.5h，磷脂復(fù)合物的達峰時間略有延長至0.75h。二者最高血藥濃度分別為0.531mg/l和0.94mg/l，表明復(fù)合物組比市售制劑組提高1.77倍。磷脂復(fù)合物組的藥時曲線下面積(AUC)為3.56mg/l·h，較市售組(1.72mg/l·h)提高了2.1倍，半衰期顯著延長，見表7，說明將阿托伐他汀鈣制備成磷脂復(fù)合物后可以有效促進藥物的體內(nèi)吸收，改善體循環(huán)時間并顯著提高生物利用度。

表7藥動學(xué)參數(shù)結(jié)果

需要說明的是，對于前述的方法實施例，為了簡單描述，故將其都表述為一系列的動作組合，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該知悉，本發(fā)明并不受所描述的動作順序的限制，因為依據(jù)本發(fā)明，某些步驟可以采用其他順序或者同時進行。其次，本領(lǐng)域技術(shù)人員也應(yīng)該知悉，說明書中所描述的實施例均屬于優(yōu)選實施例，所涉及的動作并不一定是本發(fā)明所必需的。

最后應(yīng)說明的是：以上實施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案，而非對其限制；盡管參照前述實施例對本發(fā)明進行了詳細(xì)的說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解：其依然可以對前述各實施例所記載的技術(shù)方案進行修改，或者對其中部分技術(shù)特征進行等同替換；而這些修改或者替換，并不使相應(yīng)技術(shù)方案的本質(zhì)脫離本發(fā)明各實施例技術(shù)方案的精神和范圍。