本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種含熊果酸的抗菌組合物及其用途。
背景技術(shù)：
：金黃色葡萄球菌是人體皮膚和鼻腔的常見定植菌，同時也是引起臨床感染的常見致病菌，既可引起局部化膿性感染，如癰、癤、毛囊炎、甲溝炎和外科切口等局部膿性感染，也可引起肺炎、骨髓炎、腦膜炎、化膿性關(guān)節(jié)炎、心內(nèi)膜炎及膿毒癥、敗血癥等全身性感染。隨著抗生素廣泛應(yīng)用于臨床，金黃色葡萄球菌耐藥菌株不斷出現(xiàn)。金黃色葡萄球菌耐藥性的獲得，一方面可以通過細菌自身表型的改變、代謝通路的調(diào)整等，對抗生素產(chǎn)生適應(yīng)性耐藥，如金黃色葡萄球菌生物被膜的產(chǎn)生、形成小菌落、細胞壁增厚以及持留菌的產(chǎn)生都可以對抗生素產(chǎn)生較高的耐藥性；另一方面，金黃色葡萄球菌可以通過水平轉(zhuǎn)移等方式獲得耐藥基因，如金黃色葡萄球菌獲得產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶基因后即可呈現(xiàn)對β-內(nèi)酰胺酶類抗生素的耐藥性。因此，如何保持抗生素的有效性成為近年來被廣泛關(guān)注的研究熱點。針對上述問題，在中國專利申請CN104644755A中，發(fā)明人用野菊花提取物10g，五倍子提取物8g，金銀花提取物5g，黃芩提取物5g，連翹提取物10g以及0.1-1.0g抗生素制備得到了一種能夠有效防治養(yǎng)雞場的多種葡萄球菌且長期使用不易產(chǎn)生抗藥性的藥物。但是該藥物中抗生素的用量過大，其與中藥組合物的總用量的比值高達1:(43～430)。熊果酸，在自然界分布很廣，可來源于金銀花、烏梅、山楂、山茱萸、刺玫果等天然植物中，有研究表明熊果酸具有鎮(zhèn)靜、抗炎抗菌、抗糖尿病、抗癌等多種藥理活性。目前，有關(guān)熊果酸活性的報道主要為抗腫瘤方面，也有抗菌方面的報道，但這些抗菌報道，只是涉及其在抗菌活性方面的普通篩選，并未涉及到其與抗生素能否在體外聯(lián)合抗菌。因此，有必要提供一種組合物，其與抗生素聯(lián)用具有協(xié)同增效的作用，同時能有效降低抗生素的用量和不良反應(yīng)的產(chǎn)生。技術(shù)實現(xiàn)要素：為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)問題，本發(fā)明的目的在于提供一種含熊果酸的組合物及其用途，以解決以上缺陷。本發(fā)明提供了一種含熊果酸的抗菌組合物，包括熊果酸和抗生素，所述抗生素選自羅紅霉素、左氧氟沙星、阿莫西林、頭孢拉定和慶大霉素中的一種。進一步地，所述抗生素為羅紅霉素，所述組合物中熊果酸的含量為15.41～30.82μg/ml，所述羅紅霉素的含量為0.009～0.762μg/ml。進一步地，所述組合物中熊果酸的含量為30.82μg/ml，所述羅紅霉素的含量為0.18μg/ml。進一步地，所述抗生素為左氧氟沙星，所述組合物中熊果酸的含量為15.41～30.82μg/ml，所述左氧氟沙星的含量為0.0076～0.061μg/ml。進一步地，所述組合物中熊果酸的含量為15.41μg/ml，所述左氧氟沙星的含量為0.03μg/ml。進一步地，所述抗生素為阿莫西林，所述組合物中熊果酸的含量為15.41～30.82μg/ml，所述阿莫西林的含量為0.038～0.305μg/ml。進一步地，所述組合物中熊果酸的含量為30.82μg/ml，所述阿莫西林的含量為0.038μg/ml。進一步地，所述抗生素為頭孢拉定，所述組合物中熊果酸的含量為7.706μg/ml～30.82μg/ml，所述頭孢拉定的含量為0.038～0.305μg/ml。進一步地，所述組合物中熊果酸的含量為15.41μg/ml，所述頭孢拉定的含量為0.076μg/ml。進一步地，所述抗生素為慶大霉素，所述組合物中熊果酸的含量為3.853～30.82μg/ml，所述慶大霉素的含量為0.030～0.245μg/ml。進一步地，所述組合物中熊果酸的含量為7.706μg/ml，所述慶大霉素的含量為0.061μg/ml。進一步地，所述組合物中熊果酸的含量為15.41μg/ml，所述慶大霉素的含量為0.030μg/ml。進一步地，所述組合物中熊果酸的含量為7.706μg/ml，所述慶大霉素的含量為0.122μg/ml。進一步地，所述組合物中熊果酸的含量為3.85μg/ml，所述慶大霉素的含量為0.245μg/ml。進一步地，所述組合物中熊果酸的含量為15.41μg/ml，所述慶大霉素的含量為0.245μg/ml。進一步地，所述組合物為口服制劑或外用制劑。進一步地，所述口服制劑包括片劑、膠囊、散劑、滴丸、丸劑、顆粒劑、混懸劑、噴霧劑、栓劑或酏劑；所述外用制劑包括霜劑或膏劑。其中，片劑含有兩種以上如下輔料：淀粉、糊精、低取代羥丙基纖維素、硬脂酸鎂、微晶纖維素、羥丙基纖維素、淀粉漿乳糖、甘露醇、微粉硅膠、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉和交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮；所述膠囊劑含有兩種以上如下輔料：可壓性淀粉、乳糖、低取代羥丙基纖維素、微晶纖維素和微粉硅膠。相應(yīng)地，本發(fā)明還提供了上述的組合物在制備抗金黃色葡萄球菌藥物中的用途。除外，本發(fā)明還提供了上述的組合物在制備抗菌用品中的用途。本發(fā)明提供的熊果酸的分子式為：C30H48O3，CAS號為：77-52-1。經(jīng)試驗證明，熊果酸與抗生素聯(lián)用聯(lián)用能有效降低抗生素的用量。具體地說，當熊果酸與羅紅霉素聯(lián)用時，其能使羅紅霉素的最小抑菌濃度(MIC)降至1/2～1/32，最小FIC為0.312，兩者聯(lián)用為協(xié)同作用。當熊果酸與左氧氟沙星聯(lián)用時，其能使左氧氟沙星的最小抑菌濃度(MIC)降至1/2～1/32，最小FIC為0.25，兩者聯(lián)用為協(xié)同作用；當熊果酸與阿莫西林聯(lián)用時，其能使阿莫西林的最小抑菌濃度(MIC)降至1/2～1/32，最小FIC為0.281，兩者聯(lián)用為協(xié)同作用；當熊果酸與頭孢拉定聯(lián)用時，其能使頭孢拉定的最小抑菌濃度(MIC)降至1/2～1/32，最小FIC為0.187，兩者聯(lián)用為協(xié)同作用；當熊果酸與慶大霉素聯(lián)用時，其能使慶大霉素的最小抑菌濃度(MIC)降至1/2～1/32，最小FIC為0.125，兩者聯(lián)用為協(xié)同作用。其中，以熊果酸與慶大霉素聯(lián)用效果最佳。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明組合物具有以下優(yōu)勢：本發(fā)明將熊果酸和抗生素聯(lián)用，可提高金黃色葡萄球菌對抗生素的敏感性，同時可有效降低抗生素的用量，降低藥物性不良反應(yīng)的產(chǎn)生，兩者具有協(xié)同增效的作用，具有良好的應(yīng)用前景，適于大范圍推廣應(yīng)用。具體實施方式：以下通過具體實施方式的描述對本發(fā)明作進一步說明，但這并非是對本發(fā)明的限制，本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明的基本思想，可以做出各種修改或改進，但是只要不脫離本發(fā)明的基本思想，均在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。實施例1、本發(fā)明抗菌藥物干混懸劑的制備熊果酸770.6μg慶大霉素6.1μgβ環(huán)糊精35g羧甲基纖維素鈉5g甘油20ml制備方法：a)取熊果酸、慶大霉素、β環(huán)糊精和羧甲基纖維素鈉分別過80目篩后混勻，得混合粉料；b)將混合粉料加入甘油制軟材，過30目篩后80℃烘干，過30目篩整粒，包裝，得干混懸劑。服用時，加入100ml水，搖勻，即得液體懸浮劑。實施例2、本發(fā)明抗菌藥物干混懸劑的制備熊果酸1541μg慶大霉素30μgβ環(huán)糊精35g羧甲基纖維素鈉5g甘油20ml制備方法參考實施例1。實施例3、本發(fā)明抗菌藥物干混懸劑的制備熊果酸770.6μg慶大霉素12.2μgβ環(huán)糊精35g羧甲基纖維素鈉5g甘油20ml制備方法參考實施例1。實施例4、本發(fā)明抗菌藥物干混懸劑制備熊果酸3082μg羅紅霉素18μgβ環(huán)糊精35g羧甲基纖維素鈉5g甘油20ml制備方法參考實施例1。實施例5、本發(fā)明抗菌藥物干混懸劑制備熊果酸1541μg左氧氟沙星3μgβ環(huán)糊精35g羧甲基纖維素鈉5g甘油20ml制備方法參考實施例1。實施例6、本發(fā)明抗菌藥物干混懸劑制備熊果酸3082g阿莫西林30.5μgβ環(huán)糊精35g羧甲基纖維素鈉5g甘油20ml制備方法參考實施例1。實施例7、本發(fā)明抗菌藥物干混懸劑制備熊果酸1541μg頭孢拉定7.6μgβ環(huán)糊精32g羧甲基纖維素鈉5g甘油20ml制備方法參考實施例1。試驗例一、不同抗生素與熊果酸聯(lián)用抗金黃色葡萄球菌的效果試驗1.材料1.1藥物熊果酸(上海晶純生化科技股份有限公司的，分析純，批號U107243)、頭孢拉定(廣州白云山醫(yī)藥集團股份有限公司，批號：2160005)、左氧氟沙星(第一三共和制藥有限公司，產(chǎn)品批號BP009A1)、阿莫西林(廣州白云山醫(yī)藥集團股份有限公司,產(chǎn)品批號：4150095)、慶大霉素(廣州白云山天心制藥股份有限公司，產(chǎn)品批號：1640401)、羅紅霉素膠囊(揚子江藥業(yè)集團有限公司，批號15112041)、氯化鈉(天津百世化工有限公司，分析純，批號20130322)、營養(yǎng)瓊脂(廣東環(huán)凱微生物科技有限公司，生化純，批號3103128)、營養(yǎng)肉湯(廣東環(huán)凱微生物科技有限公司，生化純，批號3104063)、結(jié)晶紫(天津市大茂化學試劑廠，批號20160103)、二甲基亞砜(DMSO，IGMA-ALDDICH，批號WXBB3106V)、水為純化水。1.2儀器紫外可見分光光度計(日本島津UV-2450型)、手提式壓力蒸汽滅菌鍋(北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司GMSX-280)、生化培養(yǎng)箱(上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠SPX-150B-Z系列)、潔凈工作臺(上海蘇凈實業(yè)有限公司型號SW-CJ-1D)、電子天平(常熟市雙杰測試儀器廠型號JJ323BC)、電熱恒溫鼓風干燥箱(上海深信實驗儀器有限公司，型號DGG-9203A)、超低溫冰箱(中科美菱低溫科技有限責任公司，型號DW-HI388)、酶標儀(上海永創(chuàng)醫(yī)療器械有限公司，型號M-600)、倒置顯微鏡(重慶奧特光學儀器有限公司，型號MIT100)。1.3菌株金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus，S.a，菌株號:ATCC25923)。2.方法2.1菌液制備將金黃色葡萄球菌接種于MH肉湯培養(yǎng)基，制備單菌落。擴大培養(yǎng)后，用無菌生理鹽水洗脫并稀釋至2×107CFU/ml，備用。2.2抗生素供試藥液制備用無菌水將5種抗生素分別配制成7.16mmol/L的溶液，備用。2.3最小抑菌濃度的測定采用微孔法測定熊果酸對金黃色葡萄球菌的最低抑菌濃度(MIC)。取凍存菌接種于營養(yǎng)瓊脂固體培養(yǎng)板，培養(yǎng)24h后，挑取單菌落于固體斜面培養(yǎng)基，生化培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)24h，用營養(yǎng)肉湯洗脫下來，稀釋至1×107CFU/ml(OD＝0.05)菌懸液備用。無菌96孔板上，在1～8列各孔中加100μl肉湯。第1列孔中各加入濃度為8.77μmol/ml熊果酸溶液100μl，采用倍比稀釋法，依次稀釋至第2～8列孔內(nèi)。然后將配好的菌液依次加入各孔，每孔100μl。第9列孔內(nèi)加入菌液100μl和培養(yǎng)液100μl，不加藥液，作為陰性對照組；各孔的終濃度為2.19μmol/ml、1.09μmol/ml、0.54μmol/ml、0.27μmol/ml、0.13μmol/ml、0.068μmol/ml和0.034μmol/ml、0.017μmol/ml。生化培養(yǎng)箱37℃恒溫靜置培養(yǎng)24h，取出以肉眼觀察，無細菌生長的最低濃度，即藥物對受試菌的最低抑菌濃度MIC。2.4FIC的測定采用棋盤法測定抑菌濃度指數(shù)(fractionalinhibitoryconcentrationindex，F(xiàn)IC)。依據(jù)上述測定的不同藥物單用時對供試菌株的MIC，將不同藥各自以不同的MIC濃度分別組合，將藥物按照對應(yīng)濃度加入相應(yīng)的孔內(nèi)，每孔為50μl。所以，每孔中可得到不同濃度組合的兩種抗菌藥物混合液。菌液以每孔100μl加入孔內(nèi)(最終藥液的濃度縮小4倍)，最終每孔接種量為1×105CFU/ml。置37℃培養(yǎng)18h后觀察結(jié)果。聯(lián)合用藥效果判定方法：計算抑菌濃度指數(shù)判斷標準為FIC≤0.5為協(xié)同作用；0.5＜FIC≤1時為相加作用；1＜FIC≤2時，藥物的相互作用結(jié)果為無關(guān)；FIC＞2時，聯(lián)合用藥相互作用結(jié)果為拮抗。3.結(jié)果3.1最小抑菌濃度(MIC)確定通過微孔法測定熊果酸對金黃色葡萄球菌抑菌活性，結(jié)果顯示熊果酸對金黃色葡萄球菌生長有明顯的抑制作用，在熊果酸濃度低于0.27μmol/ml時，孔內(nèi)都呈混濁狀態(tài),表明有細菌生長。因此，判斷熊果酸對金黃色葡萄球菌的最低抑菌濃度為123.30μg/ml。羅紅霉素對金黃色葡萄球菌ATCC25923的MIC為0.305μg/mL，頭孢拉定對金黃色葡萄球菌ATCC25923的MIC為1.22μg/mL，左氧氟沙星對金黃色葡萄球菌ATCC25923的MIC為0.244μg/mL，阿莫西林對金黃色葡萄球菌的MIC為1.22μg/mL，慶大霉素對金黃色葡萄球菌ATCC25923的MIC為0.98μg/mL。3.2FIC指數(shù)的測定測定結(jié)果見表1～5。表1熊果酸與羅紅霉素聯(lián)用抑菌效果結(jié)果顯示，熊果酸與羅紅霉素聯(lián)用能顯著降低羅紅霉素的用量，其可使羅紅霉素的最小抑菌濃度(MIC)降至1/2～1/32，最小FIC為0.312，當熊果酸濃度在15.41～30.82μg/ml之間，羅紅霉素的濃度為0.009～0.762μg/ml，兩者聯(lián)用為協(xié)同增效作用。表2熊果酸與左氧氟沙星聯(lián)用抑菌效果結(jié)果顯示，當熊果酸與左氧氟沙星聯(lián)用時能顯著降低左氧氟沙星的有效用量，其能使左氧氟沙星的最小抑菌濃度(MIC)降至1/2～1/32，最小FIC為0.25，當熊果酸濃度在15.41～30.82μg/ml之間，左氧氟沙星的濃度為0.0076～0.061μg/ml，兩者聯(lián)用為協(xié)同增效作用。表3熊果酸與阿莫西林聯(lián)用抑菌效果結(jié)果顯示：當熊果酸與阿莫西林聯(lián)用時，其能使阿莫西林的最小抑菌濃度(MIC)降至1/2～1/32，最小FIC為0.281，當熊果酸濃度在15.41～30.82μg/ml之間，阿莫西林的濃度為0.038～0.305μg/ml，兩者聯(lián)用為協(xié)同增效作用。表4熊果酸與頭孢拉定聯(lián)用抑菌效果結(jié)果顯示：當熊果酸與頭孢拉定聯(lián)用時，其能使頭孢拉定的最小抑菌濃度(MIC)降至1/2～1/32，最小FIC為0.187，當熊果酸濃度在7.706～30.82μg/ml之間，頭孢拉定的濃度為0.038～0.305μg/ml，兩者聯(lián)用為協(xié)同增效作用。表5熊果酸與慶大霉素聯(lián)用抑菌效果結(jié)果顯示：當熊果酸與慶大霉素聯(lián)用時，其能使慶大霉素的最小抑菌濃度(MIC)降至1/2～1/32，最小FIC為0.125，當熊果酸濃度在3.85～30.82μg/ml之間，慶大霉素的濃度為0.030～0.245μg/ml，兩者聯(lián)用為協(xié)同增效作用。試驗例二、臨床應(yīng)用1.病例選擇選擇250例因金黃色葡萄球菌引起的呼吸系感染患者志愿者，男150例，女100例，年齡22～48歲，平均年齡27±2.1歲，隨機分成5組，分別是實施例1組、實施例4組、實施例5組、實施例6組、實施例7組。1.2治療方法實施例1組：取本發(fā)明實施例1所述混懸劑，加100ml水，搖勻，服用3d，1次/d；實施例4組：取本發(fā)明實施例4所述混懸劑，加100ml水，搖勻，服用3d，1次/d；實施例5組：取本發(fā)明實施例5所述混懸劑，加100ml水，搖勻，服用3d，1次/d；實施例6組：取本發(fā)明實施例6所述混懸劑，加100ml水，搖勻，服用3d，1次/d；實施例7組：取本發(fā)明實施例6所述混懸劑，加100ml水，搖勻，服用3d，1次/d。1.3療效評定標準顯效：用藥后24～38小時，體溫恢復(fù)正常，并且不再回升，其他癥狀好轉(zhuǎn)或消失；有效：用藥后48～72小時，體溫恢復(fù)正常，其他癥狀好轉(zhuǎn)；無效：用藥后72小時以上體溫仍未恢復(fù)正常，其他癥狀為減輕或減輕后又很快復(fù)發(fā)者。2.結(jié)果如表6所示。表6臨床療效結(jié)果由上表可知，250例呼吸系感染患者中，有96.0％以上的患者服用本發(fā)明藥物后24～38小時，體溫恢復(fù)正常，并且不再回升，其他癥狀好轉(zhuǎn)或消失，其中，以慶大霉素和熊果酸聯(lián)用效果最佳，總有效率達到100.0％，服用后，各患者均無不良反應(yīng)產(chǎn)生。這說明，本發(fā)明熊果酸與慶大霉素聯(lián)用不僅能明顯降低慶大霉素的有效用量，并且能降低不良反應(yīng)的產(chǎn)生。當前第1頁1 2 3