本發(fā)明涉及中藥黃連堿的新的藥理作用，以及黃連堿在預(yù)防和/或治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡及其并發(fā)癥的應(yīng)用，屬醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。

技術(shù)背景

系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemiclupuserythematosus,sle)是一種慢性多系統(tǒng)復(fù)發(fā)性自身免疫性疾病，其主要病理特征為自身抗體的產(chǎn)生和免疫復(fù)合物的沉積，臨床表現(xiàn)復(fù)雜多樣，病情遷延反復(fù)，幾乎影響著所有重要的器官(如心、腎和肺)和組織(如皮膚、關(guān)節(jié)和漿膜)。此外，血液系統(tǒng)和中樞神經(jīng)系統(tǒng)往往也是系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者機(jī)體的主要受累部分。據(jù)美國(guó)狼瘡基金會(huì)統(tǒng)計(jì)，全美患有系統(tǒng)性紅斑狼瘡的病人不低于150萬(wàn)，且每年新增病例多達(dá)1.6萬(wàn)。在世界范圍內(nèi)，也約有500萬(wàn)人飽受著系統(tǒng)性紅斑狼瘡的折磨。系統(tǒng)性紅斑狼瘡的發(fā)病主要集中在15～45歲，并呈現(xiàn)一定的偏好性——約80％的患者為女性。

近年來(lái)，隨著研究的深入以及新的治療手段的應(yīng)用，系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者的預(yù)后明顯改善，但是依然表現(xiàn)出高死亡率和致殘率。究其原因，系統(tǒng)性紅斑狼瘡是一種復(fù)雜的慢性疾病，由多種因素共同作用引起，涉及免疫紊亂、遺傳學(xué)、荷爾蒙水平以及環(huán)境因素等。系統(tǒng)性紅斑狼瘡主要并發(fā)癥有狼瘡性腎炎和冠狀動(dòng)脈硬化，針對(duì)系統(tǒng)性紅斑狼瘡目前并沒(méi)有根治的藥物或其他干預(yù)手段。

黃連(coptischinensis)為毛茛科植物黃連(coptischinensisfranch)、三角葉黃連(coptisdeltoideac.y.chengpalmatineethsiao)或云連(coptisteetawall)的干燥根莖。現(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，黃連具有抗菌、抗病毒、抗炎、抗氧化、降血糖、降血脂以及心血管作用。黃連主要含小檗堿(berberine)、黃連堿(coptisine)、甲基黃連堿(worenine)、巴馬汀(等生物堿)、藥根堿(jatrorrhizine)和表小檗堿(epiberberine)，并含黃柏酮、黃柏內(nèi)酯等。小檗堿在臨床上已獲得了廣泛的應(yīng)用，且目前國(guó)內(nèi)外在小檗堿的結(jié)構(gòu)修飾及藥理活性研究方面均有大量的文獻(xiàn)報(bào)道。黃連堿與小檗堿均為天然的原小檗堿型生物堿季銨鹽，其結(jié)構(gòu)非常類(lèi)似。近年來(lái)的研究表明，黃連堿具有誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞分化的作用；對(duì)胃粘膜有保護(hù)作用；抗癌作用；免疫系統(tǒng)的作用；平滑肌松弛作用；抗腎炎作用等。迄今為止，我們沒(méi)有查到黃連堿對(duì)系統(tǒng)性紅斑狼瘡及其并發(fā)癥相關(guān)的報(bào)道及制備相關(guān)產(chǎn)品中的用途。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供黃連堿及其藥學(xué)上可接受的鹽在制備預(yù)防和/或治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡及其并發(fā)癥產(chǎn)品中的新用途。

為解決以上技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供了如下技術(shù)方案：

本發(fā)明技術(shù)方案第一方面是提供了如通式(i)所示的黃連堿及其藥學(xué)上可接受的鹽在制備預(yù)防和/或治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡及其并發(fā)癥產(chǎn)品中的應(yīng)用；

其中，hx選自hcl、h2so4、枸櫞酸、酒石酸。其中，所述的預(yù)防和/或治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡及其并發(fā)癥選自免疫功能失調(diào)、狼瘡性腎炎、狼瘡性脾臟損傷、狼瘡性動(dòng)脈粥樣硬化和高血壓；其中，所述的產(chǎn)品包括藥品、食品、保健品。

本發(fā)明技術(shù)方案第二方面是提供了一種藥物組合物在制備預(yù)防和/或治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡及其并發(fā)癥產(chǎn)品中的應(yīng)用，其特征在于，含有治療有效劑量的通式(i)所示的化合物和藥學(xué)上可接受的載體或輔料，

其中hx選自hcl、h2so4、枸櫞酸、酒石酸；其中，所述的預(yù)防和/或治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡及其并發(fā)癥選自免疫功能失調(diào)、狼瘡性腎炎、狼瘡性脾臟損傷、狼瘡性動(dòng)脈粥樣硬化和高血壓；所述的產(chǎn)品包括藥品、食品、保健品。

進(jìn)一步的，本發(fā)明技術(shù)方案第二方面所述的藥物組合物還包括與其他活性物質(zhì)以任何比例合用制成的藥物組合物。

更進(jìn)一步的，以上所述的藥物組合物選自如下的劑型：溶液、混懸液、凍干粉針、乳劑、丸劑、膠囊、粉末、緩釋制劑、控制釋放制劑、持續(xù)釋放制劑及微粒體給藥系統(tǒng)。

本發(fā)明第二方面所述的藥物組合物，以用已知的方法配制，使用幾種途徑對(duì)受試者施用，包括但不限于腸胃外、經(jīng)口、局部、皮內(nèi)、肌肉內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下、靜脈、鼻內(nèi)途徑。

本發(fā)明中黃連堿及其藥學(xué)上可接受的鹽可通過(guò)已知方法制備得到。

本發(fā)明的黃連堿及其藥學(xué)上可接受的鹽的藥物組合物任選的可以通過(guò)任何常規(guī)方法用一種或多種藥學(xué)可接受的載體和/或賦形劑來(lái)配制。因此，黃連堿及其藥學(xué)上可接受的鹽可特別配制為例如吸入或吹入(通過(guò)口或鼻)或經(jīng)口、含化、腸胃外或直腸給藥。

黃連堿及其藥學(xué)上可接受的鹽的藥物組合物也可以采用溶液、混懸液、乳劑、丸劑、膠囊、粉末、控制釋放或持續(xù)釋放制劑。這些制劑將含有治療有效量的黃連堿及其衍生物，優(yōu)選為純化形式，以及適量的載體，以提供對(duì)患者適當(dāng)給藥的形式。

有益技術(shù)效果：本發(fā)明從常用中藥黃連中提取、分離獲得黃連堿單體化合物；通過(guò)腹腔注射降植烷(pristane)建立小鼠系統(tǒng)性紅斑狼瘡模型，在制備模型后的第1個(gè)月對(duì)小鼠進(jìn)行篩查，剔除模型未成功小鼠，并將模型成功小鼠進(jìn)行隨機(jī)分組，在制備模型后的第45天開(kāi)始進(jìn)行藥物干預(yù)。整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間，每隔一個(gè)月均對(duì)狼瘡小鼠血清中dna等自身抗體的表達(dá)水平進(jìn)行動(dòng)態(tài)測(cè)定。在制備模型后的第6個(gè)月，收集小鼠血清和主要的內(nèi)臟器官，從腎功能及腎臟組織形態(tài)變化、脾臟組織形態(tài)變化、血壓及血管功能等層面，判定黃連堿對(duì)小鼠系統(tǒng)性紅斑狼瘡及其免疫功能失調(diào)、狼瘡性腎炎、狼瘡性脾臟損傷、狼瘡性動(dòng)脈硬化及狼瘡性高血壓等并發(fā)癥的緩解和治療作用。通過(guò)以上實(shí)驗(yàn)，本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)黃連堿及其藥學(xué)上可接受的鹽具有預(yù)防和治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡、緩解其病理進(jìn)程的藥理作用，具有降低狼瘡小鼠體內(nèi)自身抗體的表達(dá)水平、改善免疫功能的作用；具有降低狼瘡小鼠腎臟組織中免疫復(fù)合物沉積、改善狼瘡小鼠腎功能的作用；具有保護(hù)狼瘡小鼠脾臟功能的作用；具有保護(hù)狼瘡小鼠血管內(nèi)皮功能、降低其血壓、改善其血管活性的作用，可應(yīng)用于制備預(yù)防、緩解和/或治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡及其免疫功能失調(diào)、狼瘡性腎炎、狼瘡性脾臟損傷、狼瘡性動(dòng)脈硬化及狼瘡性高血壓等并發(fā)癥的產(chǎn)品。

而且本發(fā)明的藥物黃連堿是常用中藥黃連中提取的單體成分，具有毒性低、提取工藝簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)；其原材料資源廣闊，具有很好的應(yīng)用和開(kāi)發(fā)前景。

附圖說(shuō)明

圖1.黃連堿對(duì)pristane誘導(dǎo)的狼瘡小鼠體內(nèi)自身抗體表達(dá)的影響及對(duì)系統(tǒng)性紅斑狼瘡的改善作用(a-抗dnaigg抗體；b-抗dnaigm抗體；c-抗sm蛋白igg抗體；d-抗sm蛋白igm抗體；e-抗histone蛋白igg抗體；f-抗histone蛋白igm抗體；g-總igg)。

圖2黃連堿對(duì)pristane誘導(dǎo)的狼瘡小鼠腎功能的改善作用(尿液樣本中尿中肌酐/總蛋白含量的比值)。

圖3腎臟組織病理學(xué)檢測(cè)及黃連堿對(duì)pristane誘導(dǎo)的狼瘡小鼠腎炎的改善作用。

圖3-1.he染色(a-正常對(duì)照組；b-系統(tǒng)系紅斑狼瘡模型對(duì)照組；c-潑尼松；d-黃連堿低劑量組；e-黃連堿中劑量組；f-黃連堿高劑量組)。

圖3-2.pas染色(a-正常對(duì)照組；b-系統(tǒng)系紅斑狼瘡模型對(duì)照組；c-潑尼松；d-黃連堿低劑量組；e-黃連堿中劑量組；f-黃連堿高劑量組)。

圖3-3.igg沉積(a-正常對(duì)照組；b-系統(tǒng)系紅斑狼瘡模型對(duì)照組；c-潑尼松；d-黃連堿低劑量組；e-黃連堿中劑量組；f-黃連堿高劑量組)。

圖3-4.c3沉積(a-正常對(duì)照組；b-系統(tǒng)系紅斑狼瘡模型對(duì)照組；c-潑尼松；d-黃連堿低劑量組；e-黃連堿中劑量組；f-黃連堿高劑量組)。

圖4-1黃連堿對(duì)pristane誘導(dǎo)的狼瘡小鼠脾臟指數(shù)的影響。

圖4-2黃連堿對(duì)pristane誘導(dǎo)的狼瘡小鼠脾臟病理?yè)p傷的改善作用(he染色：a-正常對(duì)照組；b-系統(tǒng)系紅斑狼瘡模型對(duì)照組；c-潑尼松；d-黃連堿低劑量組；e-黃連堿中劑量組；f-黃連堿高劑量組)。

圖5黃連堿對(duì)pristane誘導(dǎo)的狼瘡小鼠收縮壓、平均血壓及舒張壓的影響。

圖6黃連堿對(duì)pristane誘導(dǎo)的狼瘡小鼠血管活性的影響(a-血管收縮活性、b-血管內(nèi)皮依賴(lài)的舒張活性、c-血管非內(nèi)皮依賴(lài)的舒張活性)。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合本發(fā)明進(jìn)一步說(shuō)明黃連堿及其藥學(xué)上可接受的鹽在體內(nèi)預(yù)防、緩解和/或治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡及其并發(fā)癥的藥理作用與藥物用途。

下述實(shí)施例更詳細(xì)地舉例說(shuō)明本發(fā)明，并不是對(duì)本發(fā)明的任何限制。

實(shí)施例1：系統(tǒng)性紅斑狼瘡小鼠模型的建立。

降植烷(pristane)是從礦物油中提取的一種有機(jī)烷類(lèi)物質(zhì)，可造成免疫失調(diào)，從而誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生狼瘡樣癥狀。本實(shí)施例通過(guò)腹腔注射pristane造成小鼠系統(tǒng)性紅斑狼瘡模型，測(cè)定動(dòng)物自身抗體、血清細(xì)胞炎癥因子、腎功能及腎臟組織形態(tài)變化、脾臟組織形態(tài)變化、血壓及血管活性，判定黃連堿對(duì)小鼠系統(tǒng)性紅斑狼瘡及其心血管病變預(yù)防和治療作用。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選用四周齡雌性balb/c小鼠100只，隨機(jī)分為2組，模型組小鼠(共計(jì)85只)一次性腹腔注射0.5mlpristane，對(duì)照組小鼠(15只)一次性腹腔注射0.5ml生理鹽水，此時(shí)記為d0。于d30小鼠尾部取血，測(cè)定血清中自身抗體的表達(dá)水平，il-6的表達(dá)量，對(duì)造模組小鼠進(jìn)行評(píng)分和篩查，剔除未成?；蛑笜?biāo)未見(jiàn)明顯升高的小鼠。將造模成功的小鼠隨機(jī)分為sle模型對(duì)照組、潑尼松組(5mg/kg，灌胃給藥)、黃連堿低、中、高劑量組(3、10、30mg/kg，灌胃給藥)。自d60開(kāi)始連續(xù)給藥四個(gè)半月，每天一次。處理前1d，單次收集小鼠尿液，檢測(cè)尿中肌酐、總蛋白含量。處理當(dāng)天，小鼠摘眼球取血，用于測(cè)定自身抗體、血清細(xì)胞炎癥因子。立即剝離胸主動(dòng)脈，用于測(cè)定血管活性。取脾臟、腎臟，鈍性分離粘連在脾臟上的脂肪組織，稱(chēng)重，用于觀察組織病理變化。

(一)檢測(cè)黃連堿對(duì)pristane誘導(dǎo)的狼瘡小鼠體內(nèi)自身抗體及總igg表達(dá)的影響，判斷黃連堿對(duì)小鼠系統(tǒng)性紅斑狼瘡的改善作用。

造模后每隔1個(gè)月均從小鼠尾部采血，于冰上靜置4h后5000r/min，4℃離心5min分離血清，測(cè)定抗dnaigg、igm抗體、抗sm蛋白igg、igm抗體、抗histone蛋白igg、igm抗體等自身抗體及總igg，并繪制自身抗體以及總igg表達(dá)量隨時(shí)間的動(dòng)態(tài)變化曲線。結(jié)果顯示(附圖1)，造模1個(gè)月后，各自身抗體水平均顯著升高，在給藥1個(gè)月后，各給藥組均有不同程度的改善。說(shuō)明黃連堿對(duì)pristane誘導(dǎo)的小鼠系統(tǒng)性紅斑狼瘡具有良好的改善作用。

(二)檢測(cè)黃連堿對(duì)pristane誘導(dǎo)的狼瘡小鼠尿中肌酐/總蛋白含量的影響，判斷黃連堿對(duì)狼瘡小鼠腎功能的改善作用。

處理前1d，單次收集小鼠尿液，肌酐檢測(cè)試劑盒檢測(cè)尿中肌酐，bca法檢測(cè)總蛋白含量。結(jié)果顯示(附圖2)，模型組尿中肌酐/總蛋白含量顯著升高，各給藥組均有不同程度的改善。表明黃連堿對(duì)pristane誘導(dǎo)的小鼠系統(tǒng)性紅斑狼瘡性腎炎具有改善作用。

(三)檢測(cè)黃連堿對(duì)pristane誘導(dǎo)的狼瘡小鼠腎臟病理變化的影響，判斷黃連堿對(duì)狼瘡小鼠腎臟病變的改善作用。

小鼠處死后立即剝離脾臟，在預(yù)冷生理鹽水中將外膜小心剝除。左腎用4％的多聚甲醛固定，石蠟包埋后連續(xù)切片，he、pas染色，光鏡下觀察病理改變，ccd記錄圖像。右腎迅速在液氮中冷凍，冷凍連續(xù)切片，分別與識(shí)別總igg復(fù)合物、c3補(bǔ)體復(fù)合物熒光抗體作用，熒光顯微鏡下觀察病理改變，ccd記錄圖像。

組織病理學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)(附圖3)，he染色顯示，模型組小鼠腎臟腫脹明顯，且出現(xiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，中高劑量黃連堿組均有明顯的改善。pas染色顯示，正常組小鼠腎小球血管袢薄而清晰，周?chē)哪I小管也正常，而模型組小鼠腎小球血管袢增厚，上皮新月體形成，新月體從四周擠壓毛細(xì)血管叢，中高劑量黃連堿組均有明顯的改善。模型組小鼠腎臟igg和補(bǔ)體c3沉積明顯增多，中高劑量組黃連堿可顯著減少igg和c3沉積。研究結(jié)果顯示，應(yīng)用黃連堿能夠呈劑量依賴(lài)性的改善pristane誘導(dǎo)的小鼠系統(tǒng)性紅斑狼瘡性腎炎。

(四)檢測(cè)黃連堿對(duì)pristane誘導(dǎo)的狼瘡小鼠脾臟病理變化的影響，判斷黃連堿對(duì)狼瘡小鼠脾臟病變的改善作用。

小鼠處死后立即剝離脾臟，在預(yù)冷生理鹽水中將外膜小心剝除，吸去表面生理鹽水后，稱(chēng)重。用4％的多聚甲醛固定，石蠟包埋后連續(xù)切片，he染色，光鏡下觀察病理改變，ccd記錄圖像。結(jié)果顯示(附圖4)，模型組小鼠出現(xiàn)明顯的脾腫大，同時(shí)病理組織觀察結(jié)果顯示模型組小鼠的脾臟白髓增生，邊界模糊，高劑量組黃連堿可顯著改善小鼠的脾腫大，各劑量組黃連堿可顯著保護(hù)系統(tǒng)性紅斑狼瘡小鼠的損傷的脾臟。

(五)檢測(cè)黃連堿對(duì)pristane誘導(dǎo)的狼瘡小鼠血壓的影響。

在造模后2，4和6月，在嚴(yán)格靜音條件下，測(cè)小鼠收縮壓(systolicbloodpressure，sbp)、平均血壓(meanbloodpressure，mbp)和舒張壓(diastolicbloodpressure，dbp)。結(jié)果顯示(附圖5)，第二個(gè)月起，模型組小鼠sbp、dbp和平均血壓mbp顯著升高，黃連堿可劑量依賴(lài)性的降低狼瘡小鼠的血壓。

(六)檢測(cè)黃連堿對(duì)pristane誘導(dǎo)的狼瘡小鼠血管功能的影響。

小鼠處死后立即剝離胸主動(dòng)脈，累積加入苯腎上腺素(epinephrine，pe，10^-7、10^-6、10^-5、10^-4、10^-3、10^-2、10^-1mol/l)，每次血管達(dá)最大收縮后加下一濃度pe，測(cè)定血管收縮活性。加入10^-6mol/lpe預(yù)收縮血管達(dá)最大收縮，累積加入ach(10^-7、10^-6、10^-5、10^-4、10^-3、10^-2、10^-1mol/l)，血管達(dá)最大舒張后迅速加入下一濃度，以每次加入ach后血管最大舒展時(shí)的張力與pe誘發(fā)的血管環(huán)的最大收縮張力之間的比值反映血管內(nèi)皮依賴(lài)的舒展活性。加入10^-6mol/lpe預(yù)收縮血管達(dá)最大收縮，累積加入硝普鈉(10^-7、10^-6、10^-5、10^-4、10^-3mol/l)，血管達(dá)最大舒張后迅速加入下一濃度。以每次加入硝普鈉后血管最大舒展時(shí)的張力與pe誘發(fā)的血管環(huán)的最大收縮張力之間的比值反映血管非內(nèi)皮依賴(lài)的舒展活性。結(jié)果顯示(附圖6)，模型組小鼠與對(duì)照組血管收縮活性無(wú)顯著差異，而高劑量黃連堿明顯抑制小鼠血管收縮活性。模型組小鼠內(nèi)皮依賴(lài)的胸主動(dòng)脈血管舒張活性顯著降低，黃連堿可劑量依賴(lài)性的改善小鼠血管內(nèi)皮活性。各組小鼠內(nèi)皮依賴(lài)的胸主動(dòng)脈血管舒張活性無(wú)顯著差異。說(shuō)明黃連堿可顯著改善系統(tǒng)性紅斑狼瘡性小鼠的血管活性。

整體動(dòng)物藥效評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與系統(tǒng)性紅斑狼瘡模型組比較，黃連堿能夠降低狼瘡小鼠血清中抗dnaigg、igm抗體、抗sm蛋白igg、igm抗體、抗histone蛋白igg、igm抗體等自身抗體及總igg的升高。改善狼瘡小鼠的腎功能，減輕腎臟損傷；減少igg和補(bǔ)體c3的沉積，減輕小鼠的脾腫大，改善脾臟病理?yè)p傷；保護(hù)血管內(nèi)皮功能、降低血壓、改善血管活性。

綜上所述，黃連堿具有緩解系統(tǒng)新紅斑狼瘡病理進(jìn)程的作用；改善狼瘡小鼠的腎功能，減輕腎臟炎癥；減輕脾腫大、脾臟損傷并改善脾臟功能；保護(hù)狼瘡小鼠血管內(nèi)皮功能、降低其血壓、改善其血管活性。黃連堿為常用中藥中提取的單體化合物，具有毒性低、提取工藝簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)；其原材料資源廣闊，具有很好的應(yīng)用與開(kāi)發(fā)前景，是一種比較理想的新型的治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡及其免疫功能失調(diào)、狼瘡性腎炎、狼瘡性脾臟損傷、狼瘡性動(dòng)脈粥樣硬化及狼瘡性高血壓等并發(fā)癥的中藥。