本申請(qǐng)要求于2015年8月24日提出的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)?zhí)?2/209,197，及于2015年8月25日提出的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)?zhí)?2/209,645的權(quán)益。將它們二者的內(nèi)容以其整體其通過(guò)引用結(jié)合于此。背景尤因家族腫瘤(Ewingfamilytumor)是一組癌癥，其包括骨頭的尤因腫瘤(Ewingtumor)(”尤因肉瘤”)、骨外尤因腫瘤、原發(fā)性神經(jīng)外胚層腫瘤(PNET)及阿斯金腫瘤(Askintumor)(胸壁的PNET)。這些腫瘤是侵襲性惡性腫瘤，其主要發(fā)生在幼年至青少年/青壯年數(shù)年。超過(guò)85％的尤因家族腫瘤情況產(chǎn)生自染色體易位，其將在染色體22上的EWS基因融合至在染色體11上的FLI1基因。在尤因家族腫瘤的發(fā)病機(jī)制中，該EWS/FLI融合蛋白質(zhì)通過(guò)調(diào)節(jié)標(biāo)靶基因的表達(dá)起作用。在尤因家族腫瘤當(dāng)中，尤因肉瘤是第二種最常見(jiàn)影響小孩及青壯年的原發(fā)性骨癌并且也是此年齡群最常見(jiàn)的軟組織惡性腫瘤之一。雖然局部化尤因肉瘤治療在進(jìn)步，但幾乎全部患者在診斷那時(shí)都具有無(wú)癥狀轉(zhuǎn)移性疾病。轉(zhuǎn)移性尤因肉瘤的長(zhǎng)期存活率少于10％。阿霉素(多柔比星，doxorubicin)是現(xiàn)在用于這些腫瘤的標(biāo)準(zhǔn)全身性治療。但是，僅有20％肉瘤對(duì)此藥物反應(yīng)。此外，阿霉素的臨床使用受明顯的副作用限制，特別是不可逆的心臟毒性。對(duì)有效治療尤因家族腫瘤及缺乏不適宜的心臟細(xì)胞毒性的新型治療藥物存在明顯未滿足的醫(yī)療需求。概述為了滿足上述提出的未滿足的需求，本發(fā)明提供一種用于治療肉瘤的方法。該方法通過(guò)將有效量的酪氨酸激酶抑制劑及有效量的雙胍化合物給藥(施用，administer)至具有肉瘤的對(duì)象(受試者，subject)而進(jìn)行。本文中還公開(kāi)了一種用于治療尤因家族腫瘤的方法。該方法包括(i)獲得腫瘤樣品；(ii)確定在該樣品中的ACTB、B2M、MLH1、PRKDC、XPC、APEX1、ERCC5、MMS19或RAD23的基因表達(dá)的升高水平(與該基因的表達(dá)的預(yù)定水平相比)；及(iii)將有效量的酪氨酸激酶抑制劑及有效量的雙胍化合物給藥至該對(duì)象。此外，本發(fā)明公開(kāi)了一種用于治療尤因家族腫瘤的藥物組合物。該組合物包括酪氨酸激酶抑制劑、雙胍化合物及藥用賦形劑。在下列附圖及描述二者中提出本發(fā)明的一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案的細(xì)節(jié)。將從該說(shuō)明書(shū)及從權(quán)利要求書(shū)明了本發(fā)明的其它特征、目的及優(yōu)點(diǎn)。重要的是，將本文中所引用的全部參考文獻(xiàn)以其全文以引用方式并入本文。附圖簡(jiǎn)述本發(fā)明以下描述參考所附附圖，其中：圖1A是直方圖，其顯示出在以媒介物(c)、10mM甲福明(metformin)(met)、5μM伊馬替尼(imatinib)(ima)、或二種藥物一起(ima+met)處理的TC-32尤因肉瘤細(xì)胞中，通過(guò)免疫熒光染色定量出的γ組織蛋白H2AX(γ-H2AX)水平。該值是由γ-H2AX-陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目/高倍視野(highpowerfield)表示。誤差棒代表標(biāo)準(zhǔn)偏差；圖1B是直方圖，其顯示出在TC-71尤因肉瘤細(xì)胞中通過(guò)免疫熒光染色定量出的γ-H2AX水平。該處理及值是如在上述圖1A的圖例中所描述的。誤差棒代表標(biāo)準(zhǔn)偏差；圖2A是直方圖，其顯示出在未經(jīng)處理(c)或經(jīng)甲福明(met)、伊馬替尼(ima)或二者(ima+met)處理達(dá)所指示出的時(shí)間的TC-32細(xì)胞中的γ-H2AX的相對(duì)表達(dá)。該值是通過(guò)蛋白質(zhì)印跡(Westernblot)確定的相對(duì)γ-H2AX表達(dá)。該藥物處理是如在上述圖1A的圖例中所描述的。誤差棒代表標(biāo)準(zhǔn)偏差；圖2B是直方圖，其顯示出在以甲福明、伊馬替尼或二者處理達(dá)所指示出的時(shí)間的TC-71細(xì)胞中的γ-H2AX的相對(duì)表達(dá)。該值及藥物處理是如在上述圖2A的圖例中所描述的。誤差棒代表標(biāo)準(zhǔn)偏差；圖3A是帶有TC-32細(xì)胞腫瘤的小鼠的生物發(fā)光對(duì)處理(治療，treatment)天數(shù)的圖示。這些小鼠如下處理：媒介物(vehicle)、150mg/kg甲福明(met)、50mg/kg伊馬替尼(ima)及相同劑量的甲福明加伊馬替尼(ima+met)。值為光子/秒/小鼠。誤差棒代表標(biāo)準(zhǔn)偏差；圖3B是帶有TC-71細(xì)胞腫瘤的小鼠的生物發(fā)光對(duì)處理天數(shù)的圖示。處理是如在上述圖3A的圖例中所描述的。誤差棒代表標(biāo)準(zhǔn)偏差；圖4A是顯示出細(xì)胞凋亡水平的直方圖，其是由在從帶有TC-32細(xì)胞腫瘤的小鼠獲得的腫瘤組織中的末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(terminaldeoxynucleotidyltransferase)dUTP缺口末端標(biāo)記(dUTPnickendlabeling)(TUNEL)-陽(yáng)性細(xì)胞的數(shù)目表示。該小鼠是如在上述圖3A的圖例中所描述那樣處理。值是由TUNEL-陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目/高倍視野表示。誤差棒代表標(biāo)準(zhǔn)偏差；及圖4B是直方圖，其顯示出在從帶有TC-71細(xì)胞腫瘤的小鼠獲得的腫瘤組織中的細(xì)胞凋亡水平。該小鼠是如在上述圖3A的圖例中所描述那樣處理。值是由TUNEL-陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目/高倍視野表示。誤差棒代表標(biāo)準(zhǔn)偏差。詳述如上述提及，本發(fā)明包括一種用于治療癌的方法。該方法包括將有效量的酪氨酸激酶抑制劑及有效量的雙胍化合物給藥至具有肉瘤的對(duì)象。該酪氨酸激酶抑制劑可以是伊馬替尼、達(dá)沙替尼(dasatinib)、尼羅替尼(nilotinib)、舒尼替尼(sunitinib)、帕唑帕尼(pazopanib)、奎扎替尼(quizartinib)、喹諾蘭尼(crenolanib)或索拉非尼(sorafenib)。在特別的實(shí)施方案中，該酪氨酸激酶抑制劑是伊馬替尼。該雙胍化合物可以是但是不限于白樂(lè)君(proguanil)、氯丙胍(chlorproguanil)或甲福明。在特定方法中，該雙胍化合物是甲福明。在特別的實(shí)施例中，前述描述的方法還包括給藥二種不同的酪氨酸激酶抑制劑。該二種不同的酪氨酸激酶抑制劑可選自例如伊馬替尼、達(dá)沙替尼、尼羅替尼、舒尼替尼、帕唑帕尼、奎扎替尼、crenolanib及索拉非尼。在不同實(shí)施例中，該方法包括給藥二種不同的雙胍化合物。示例性方法包括給藥二種不同選自白樂(lè)君、氯丙胍及甲福明的雙胍化合物。該方法可進(jìn)一步包括給藥與上述討論的酪氨酸激酶抑制劑不同的化療劑?？梢耘c該酪氨酸激酶抑制劑及雙胍化合物一起給藥的示例性化療劑有環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide)、阿霉素(doxorubicin)、5-氟尿嘧啶、多西他賽(docetaxel)、紫杉醇(paclitaxel)、曲妥珠單抗(trastuzumab)、甲氨蝶呤(methotrexate)、表柔比星(epirubicin)、順鉑(cisplatin)、卡鉑(carboplatin)、長(zhǎng)春瑞濱(vinorelbine)、卡培他濱(capecitabine)、吉西他濱(gemcitabine)、米托蒽醌(mitoxantrone)、伊沙匹隆(isabepilone)、艾瑞布林(eribulin)、拉帕替尼(lapatinib)、卡莫司汀(carmustine)、氮芥(nitrogenmustard)、硫芥(sulfurmustard)、四硝酸鉑(platintetranitrate)、長(zhǎng)春堿、依托泊苷(etoposide)、喜樹(shù)堿及拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑。也可以給藥這些化療劑的組合。在所述方法的范圍內(nèi)還包括與給藥該酪氨酸激酶抑制劑及雙胍化合物一起，將該腫瘤組織曝露至電離輻射。所述方法對(duì)治療尤因家族腫瘤特別有效。這樣的腫瘤的實(shí)例有骨頭的尤因腫瘤(Ewingtumorofbone)、骨外尤因腫瘤(extraosseousEwingtumor)、原發(fā)性神經(jīng)外胚層腫瘤(primitiveneuroectodermaltumor)及阿斯金腫瘤(Askintumor)。本發(fā)明公開(kāi)了第二種有效治療尤因家族腫瘤的方法。該方法包括從尤因家族腫瘤獲得組織樣品?？山?jīng)由本領(lǐng)域已知的技術(shù)例如經(jīng)由針刺活組織檢查法(needlebiopsy)獲得組織樣品。確定在樣品中要升高的基因表達(dá)水平(當(dāng)與基因表達(dá)的預(yù)定水平相比時(shí))。不受理論限制，據(jù)信當(dāng)在尤因家族腫瘤中的特定基因的表達(dá)升高時(shí)(與在具有好的臨床結(jié)果的其它尤因家族腫瘤患者中的相同基因的表達(dá)水平比較)，患者具有差的臨床結(jié)果。參見(jiàn)以下的實(shí)施例6。差的臨床結(jié)果為死亡、轉(zhuǎn)移、3年復(fù)發(fā)及5年復(fù)發(fā)。確定以下中的一種或多種的升高的基因表達(dá)水平：β細(xì)胞骨架肌動(dòng)蛋白(ACTB)、β-2-微球蛋白(B2M)、DNA錯(cuò)配修復(fù)蛋白質(zhì)(MLH1)、DNA-依賴性蛋白質(zhì)激酶催化亞單位(PRKDC)、著色性干皮病互補(bǔ)C組(XPC)、APEX核酸酶多功能DNA修復(fù)酶(APEX1)、DNA切除修復(fù)蛋白質(zhì)ERCC-5(ERCC5)、核苷酸切除修復(fù)同系物MMS19(MMS19)及UV切除修復(fù)蛋白質(zhì)RAD23同系物A(RAD23A)。在一個(gè)實(shí)施例中，通過(guò)測(cè)量mRNA水平，通過(guò)定量的聚合酶鏈反應(yīng)確定基因表達(dá)的升高水平。在另一個(gè)實(shí)施例中，通過(guò)將mRNA雜交至基因表達(dá)微陣列確定基因表達(dá)水平。在另一個(gè)實(shí)施例中，通過(guò)免疫測(cè)定測(cè)量蛋白質(zhì)水平來(lái)測(cè)量基因表達(dá)水平。所述方法包括給藥酪氨酸激酶抑制劑及雙胍化合物。上述描述了適當(dāng)?shù)睦野彼峒っ敢种苿┘半p胍化合物。在特別的方法中，該酪氨酸激酶抑制劑是伊馬替尼(imitanib)及該雙胍化合物是甲福明。此外，在此方法的范圍內(nèi)，給藥二種不同的酪氨酸激酶抑制劑或二種不同的雙胍化合物。所述方法還可包括給藥一種或多種選自下列各項(xiàng)的化療劑：環(huán)磷酰胺、阿霉素、5-氟尿嘧啶、多西他賽、紫杉醇、曲妥珠單抗、甲氨蝶呤、表柔比星、順鉑、卡鉑、長(zhǎng)春瑞濱、卡培他濱、吉西他濱、米托蒽醌、伊沙匹隆、艾瑞布林、拉帕替尼、卡莫司汀、氮芥、硫芥、四硝酸鉑、長(zhǎng)春堿、依托泊苷、喜樹(shù)堿及拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑。本發(fā)明提供一種用于治療尤因家族腫瘤的藥物組合物。該組合物包括酪氨酸激酶抑制劑、雙胍化合物及藥用賦形劑。示例性酪氨酸激酶抑制劑有伊馬替尼、達(dá)沙替尼、尼羅替尼、舒尼替尼、帕唑帕尼、奎扎替尼、crenolanib及索拉非尼。甲福明是一種可包含在該組合物中的雙胍化合物。該雙胍化合物也可是白樂(lè)君或氯丙胍。在特別的實(shí)施方案中，該藥物組合物包括二種不同的酪氨酸激酶抑制劑或二種不同的雙胍化合物。為了使得藥物遞送容易，該藥物組合物可進(jìn)一步包括遞送劑，諸如脂質(zhì)體、表面活性劑、囊泡(niosome)、醇質(zhì)體(ethosome)、傳遞體(transferosome)、磷脂、鞘磷囊體(sphingosome)、納米粒子(nanoparticle)、微粒子(microparticle)或這些試劑的組合。在另一個(gè)實(shí)施例中，該藥物組合物還包括下列的一種或多種：免疫調(diào)節(jié)劑、神經(jīng)活性劑(neuroactiveagent)、抗炎劑、抗脂血癥劑(anti-lipidemicagent)、激素、受體激動(dòng)劑、受體拮抗劑、抗感染劑、蛋白質(zhì)、肽、抗體、抗原結(jié)合片段、酶、RNA、DNA、siRNA、mRNA、核糖核酸酶、激素、輔因子、類固醇、反義分子(antisensemolecule)、抗高血壓劑及與該酪氨酸激酶抑制劑不同的化療劑。沒(méi)有進(jìn)一步詳細(xì)闡述，據(jù)信本領(lǐng)域技術(shù)人員可將本公開(kāi)使用至其最大水平。因此，下列具體實(shí)施例僅解釋為描述性，并且無(wú)論如何不以任何方式限制本公開(kāi)的剩余部分。實(shí)施例1：甲福明及伊馬替尼在腫瘤細(xì)胞生存能力上的作用在兩種尤因家族腫瘤細(xì)胞系，即TC-32及TC-71上檢驗(yàn)甲福明與伊馬替尼于腫瘤細(xì)胞生存能力上的組合作用。該TC-32細(xì)胞系是來(lái)自新近診斷出的17歲大的PNET患者并且該TC-71細(xì)胞系是來(lái)自22歲大的尤因肉瘤患者在化學(xué)療法后復(fù)發(fā)的腫瘤。參見(jiàn)May等人的2013，PloSOne，8(12)：e80060。兩種細(xì)胞系攜帶上述提及的EWS/FLI基因融合。使用不具有EWS/FLI基因融合的乳房癌骨頭轉(zhuǎn)移細(xì)胞系MDA-MB231-Bo及NIH3T3細(xì)胞作為對(duì)照。這些細(xì)胞是在37℃及5％CO2的增濕環(huán)境中，于DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)，所述培養(yǎng)基補(bǔ)充有10％FBS、1％L-谷氨酸、1％丙酮酸鈉、1％盤尼西林/鏈霉素及1％非必需氨基酸。在全部實(shí)驗(yàn)中，細(xì)胞對(duì)孔表面及培養(yǎng)基體積的比率都保持固定。從SigmaAldrich購(gòu)買甲福明鹽酸鹽及伊馬替尼甲磺酸鹽，并在使用前溶解于0.1％DMSO中。在96孔板中，以每孔1.5x104細(xì)胞的密度分別將TC-32、TC-71、MB231-Bo及NIH3T3細(xì)胞鋪板。這些細(xì)胞用甲福明、伊馬替尼或0.1％DMSO處理24小時(shí)，接著加入熒光細(xì)胞生存能力檢測(cè)試劑(Promega)。使用IVIS200系統(tǒng)(XenogenCorporation，Alameda，CA)的生物熒光成像功能對(duì)經(jīng)處理的細(xì)胞進(jìn)行成像。在5分鐘內(nèi)獲得的三個(gè)動(dòng)力學(xué)生物發(fā)光采集的平均值。在孔上方自動(dòng)汲取有興趣的區(qū)域并用LivingImage軟件版本2.50.1定量?；诳偘l(fā)射光子通量減掉空白孔的背景光子通量來(lái)分析數(shù)據(jù)。進(jìn)行三個(gè)單獨(dú)的實(shí)驗(yàn)，每個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)有六個(gè)復(fù)制孔。結(jié)果顯示在下列表1中。表1甲福明及伊馬替尼的EC50aaEC50是抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)50％的藥物濃度(當(dāng)與經(jīng)媒介物處理的對(duì)照比較時(shí))。實(shí)施例2：甲福明與伊馬替尼在腫瘤細(xì)胞生存能力上的組合作用使用在實(shí)施例1中所描述的細(xì)胞生存能力檢測(cè)來(lái)測(cè)試不同比率的甲福明與伊馬替尼混合物的作用。組合指數(shù)(CI)說(shuō)明確定該組合作用的單一藥物的劑量反應(yīng)。參見(jiàn)Chou及Talalay的1984，Adv.EnzymeRegul.22：27-55。用于計(jì)算CI的方程式如下：在此方程式中，D1及D2表示化合物1及化合物2單獨(dú)具有x％作用所需要的劑量，同時(shí)Dx1及Dx2是以組合具有x％效應(yīng)時(shí)每種化合物各自所需要的劑量。該CI從在上述提出的細(xì)胞生存能力檢測(cè)中，通過(guò)甲福明與伊馬替尼于不同濃度比率下的測(cè)試組合所獲得的數(shù)據(jù)來(lái)計(jì)算。這二種藥物的相互作用表征為：拮抗的，定義為CI＞1.1；加合的，定義為0.9＜CI＜1.1；協(xié)同的，定義為CI＜0.9；及強(qiáng)協(xié)同的，定義為CI＜0.3。結(jié)果顯示在下列表2中。表2甲福明/伊馬替尼抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的組合指數(shù)值。aED50＝減低細(xì)胞生存能力50％的有效劑量，ED75＝減低細(xì)胞生存能力為細(xì)胞生存能力的75％的有效劑量，ED90＝減低細(xì)胞生存能力90％的有效劑量。bN.D.＝未確定的。c該值是使用上述提出的公式，使用伊馬替尼與甲福明的相應(yīng)ED(50，75，90)值所計(jì)算的組合指數(shù)。濃度比率為1∶2000(5μM∶10mM)的伊馬替尼及甲福明在殺死TC-32細(xì)胞上具有強(qiáng)協(xié)同作用(CI＜0.3)。濃度5μM及10mM分別與當(dāng)在TC-32細(xì)胞上使用單一藥劑時(shí)，伊馬替尼的ED50(44.40μM)的11％，及甲福明的ED50(11.76mM)的85％相應(yīng)。在TC-71細(xì)胞上測(cè)試的全部濃度比率幾乎都觀察到伊馬替尼與甲福明的協(xié)同作用。在伊馬替尼：甲福明濃度比率為1∶2000(5μM∶10mM)及1∶3000(5μM∶15mM)下看到最強(qiáng)的協(xié)同作用。濃度5μM的伊馬替尼是當(dāng)該單一藥劑使用在TC-71細(xì)胞上時(shí)，此藥物的ED50(23.69μM)的22％。對(duì)甲福明來(lái)說(shuō)，10mM是甲福明如為單一藥劑在TC-71細(xì)胞上時(shí)的ED50(11.59mM)的85％及15mM是125％。在與于TC-32及TC-71細(xì)胞上測(cè)試相同的劑量下，伊馬替尼及甲福明如為單一藥劑或以組合時(shí)都對(duì)MB231-Bo癌細(xì)胞及3T3纖維母細(xì)胞未顯示出任何細(xì)胞毒害性。實(shí)施例3：伊馬替尼及甲福明在腫瘤細(xì)胞中的DNA損傷上的體內(nèi)作用γ組織蛋白H2AX(γ-H2AX)是DNA雙鏈斷裂存在的標(biāo)志，通過(guò)免疫熒光染色及通過(guò)蛋白質(zhì)印跡分析，使用抗-γ-H2AX抗體來(lái)定量其在經(jīng)培養(yǎng)的TC-32細(xì)胞及TC-71細(xì)胞中的水平。這些細(xì)胞是如于上述實(shí)施例1中所描述的處理1、6及12小時(shí)(用于蛋白質(zhì)印跡分析)或24小時(shí)(用于免疫熒光研究)。結(jié)果顯示在圖1A、1B、2A及2B中，其表明伊馬替尼與甲福明組合明顯誘發(fā)更多DNA損傷(如與單獨(dú)任一種藥物比較)。例如，在用伊馬替尼與甲福明二者處理細(xì)胞后，于TC-32細(xì)胞中的γ-H2AX表達(dá)水平如通過(guò)免疫熒光染色測(cè)量是兩倍高(如與用伊馬替尼或甲福明處理比較)。參見(jiàn)圖1A。類似地，在用伊馬替尼與甲福明二者處理細(xì)胞后，于TC-71細(xì)胞中的γ-H2AX表達(dá)也升高(如與用伊馬替尼或甲福明處理比較)。參見(jiàn)圖1B。在另一個(gè)實(shí)施例中，在用伊馬替尼加甲福明處理TC-32細(xì)胞12小時(shí)后，通過(guò)蛋白質(zhì)印跡分析測(cè)量的γ-H2AX水平是4倍高(如與分別用任一種藥物處理細(xì)胞比較)。參見(jiàn)圖2A。同樣，在TC-71細(xì)胞的藥物處理后獲得類似結(jié)果。參見(jiàn)圖2B。實(shí)施例4：伊馬替尼及甲福明在腫瘤生長(zhǎng)上的體內(nèi)作用使用TC-32及TC-71異種移植小鼠模型來(lái)評(píng)估伊馬替尼與甲福明組合的抗腫瘤作用。將在10微升磷酸鹽緩沖鹽液中的2X106個(gè)TC-32或TC-71細(xì)胞接種進(jìn)小鼠的腓腸肌中。在藥物治療前，允許所產(chǎn)生的腫瘤到達(dá)最小直徑0.5cm。最常使用的甲福明劑量是500-1000mg/天，其產(chǎn)生血漿水平約1.1mg/升，相當(dāng)于0.007mM。伊馬替尼通常以在成年患者中400-600mg/天的劑量給藥，此產(chǎn)生血液濃度約1000ng/mL，相當(dāng)于1.7μM。如在Reagan-Shaw等人的2008，F(xiàn)ASEBJ.，22(3)：659-661中所描述的計(jì)算在小鼠中的等效劑量。在小鼠中，甲福明的等效劑量是210-420mg/kg及伊馬替尼的等效劑量是167-250mg/kg。在此研究中，基于在前述實(shí)施例2中所提出的體外結(jié)果，以組合每種藥物的較低劑量可導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的協(xié)同抑制，對(duì)此初始動(dòng)物研究來(lái)說(shuō)，選擇劑量300mg/kg/天的甲福明及50mg/kg/天的伊馬替尼。對(duì)藥物治療來(lái)說(shuō)，將小鼠劃分成四組，每組15只動(dòng)物，且如下治療：(i)媒介物；(ii)單獨(dú)甲福明，150mg/kg，每日兩次通過(guò)口服灌食；(iii)單獨(dú)伊馬替尼，50mg/kg，每日一次通過(guò)腹膜內(nèi)注射；及(iv)伊馬替尼與甲福明組合。在給藥前，將甲福明與伊馬替尼二者溶解在無(wú)菌生理食鹽水中。藥物治療連續(xù)二周。在開(kāi)始治療后，每五天進(jìn)行非侵入性生物熒光成像以監(jiān)視腫瘤生長(zhǎng)，直到第21天。結(jié)果表明，在TC-32及TC-71異種移植小鼠模型二者中，甲福明與伊馬替尼組合在二周治療期間幾乎完全抑制腫瘤生長(zhǎng)。參見(jiàn)圖3A及3B。此外，在這些動(dòng)物中的腫瘤持續(xù)生長(zhǎng)，其明顯比在單一藥物組或媒介物組的小鼠中的腫瘤慢。參見(jiàn)Id。該藥物組合并無(wú)觀察到急性或慢性毒性。在第21天時(shí)，讓小鼠安樂(lè)死及解剖腫瘤以進(jìn)行病理學(xué)檢驗(yàn)。染色腫瘤組織，使用末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶dUTP缺口末端標(biāo)記(TUNEL)檢測(cè)凋亡細(xì)胞的存在。使用ImageExpress自動(dòng)顯微鏡，在10x物鏡下獲得腫瘤切片瘤段蒙太奇圖像。以單盲方式手動(dòng)計(jì)數(shù)具有TUNEL-陽(yáng)性染色的細(xì)胞數(shù)目。結(jié)果顯示出在TC-32及TC-71異種移植小鼠模型二者中，給藥伊馬替尼與甲福明組合導(dǎo)致3-5倍高的凋亡細(xì)胞數(shù)目(如與任一種藥物單獨(dú)在腫瘤組織中比較)。分別參見(jiàn)圖4A及4B。對(duì)TC-32細(xì)胞來(lái)說(shuō)，在用伊馬替尼+甲福明治療后所看見(jiàn)的TUNEL-陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目明顯高于對(duì)照，單獨(dú)甲福明及單獨(dú)伊馬替尼(分別為p＝0.002、p＝0.031及p＝0.025)。在TC-71細(xì)胞中，在用伊馬替尼+甲福明治療后所看見(jiàn)的TUNEL-陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目也明顯高于對(duì)照，單獨(dú)甲福明及單獨(dú)伊馬替尼(分別為p＝0.002、p＝0.006及p＝0.043)。實(shí)施例5：經(jīng)藥物治療的腫瘤細(xì)胞的基因表達(dá)分布圖使用來(lái)自SuperArrayBioscienceCorporation(Frederick，MDUSA)的人類DNA損傷信號(hào)傳導(dǎo)途徑RT2-PCR陣列檢驗(yàn)在經(jīng)伊馬替尼及伊馬替尼/甲福明治療的TC-32及TC-71細(xì)胞中的基因表達(dá)。該陣列檢測(cè)與DNA損傷及DNA修復(fù)途徑相關(guān)的一組84個(gè)基因的表達(dá)。在該陣列上包括管家基因(housekeepinggenes)以標(biāo)準(zhǔn)化RNA量。如先前描述的分析所產(chǎn)生的數(shù)據(jù)。參見(jiàn)Rodriguez等人的2010，BreastCancerRes.Treat.，123(1)：189-196。檢驗(yàn)在用伊馬替尼或用伊馬替尼加甲福明治療12小時(shí)的TC-32細(xì)胞及TC-71細(xì)胞中的基因表達(dá)。在TC-32細(xì)胞中，9個(gè)基因的表達(dá)因伊馬替尼治療而明顯地向上調(diào)節(jié)，同時(shí)由伊馬替尼與甲福明的組合抑制。該9個(gè)基因是DNA-依賴性蛋白質(zhì)激酶催化亞單位(PRKDC)、DNA連接酶4(LIG4)、N-甲基嘌呤-DNA糖苷酶(MPG)、β細(xì)胞骨架肌動(dòng)蛋白(ACTB)、DNA糖苷酶/AP裂解酶Neil2(NEIL2)、DNA錯(cuò)配修復(fù)蛋白質(zhì)(MLH1)、復(fù)制蛋白A3(RPA3)、阿塔辛(Ataxin)3(ATXN3)、DNA切除修復(fù)蛋白質(zhì)ERCC-5(ERCC5)。這些基因充當(dāng)DNA修復(fù)基因并參與二種正規(guī)修復(fù)途徑，即，通過(guò)非同源性末端接合(NHEJ)的DNA雙鏈修復(fù)及通過(guò)同源重組(HR)的DNA雙鏈修復(fù)。轉(zhuǎn)至TC-71細(xì)胞，在這些細(xì)胞中鑒別出11個(gè)基因，其由伊馬替尼明顯地向上調(diào)節(jié)并且由伊馬替尼與甲福明的組合抑制。該11個(gè)基因是核苷酸切除修復(fù)同系物MMS19(MMS19)、LIG4、β-2-微球蛋白(B2M)、復(fù)制因子C激活劑1(RFC1)、聚ADP-核糖聚合酶2(PARP2)；乳房癌2，早期發(fā)作(BRCA2)；三個(gè)啟動(dòng)修復(fù)核酸外切酶(primerepairexonuclease)1(TREX1)、著色性干皮病互補(bǔ)C組(XPC)、UV切除修復(fù)蛋白質(zhì)RAD23同系物A(RAD23A)、A/G特異腺嘌呤DNA糖苷酶(MUTYH)、及APEX核酸酶多功能DNA修復(fù)酶(APEX1)。這些基因也富含于上述提及的相同二種正規(guī)途徑，即，由NHEJ及HRDNA雙鏈修復(fù)中。值得注意的是，LIG4是一種經(jīng)由NHEJ的DNA雙鏈斷裂修復(fù)必需的基因，其是在TC-32細(xì)胞及TC-71細(xì)胞二者中鑒別出由伊馬替尼向上調(diào)節(jié)并且由伊馬替尼加甲福明抑制的唯一基因。不受理論限制，這些結(jié)果表明，將甲福明加入至細(xì)胞將抑制DNA內(nèi)源性修復(fù)途徑，其中該途徑將響應(yīng)于伊馬替尼引發(fā)的DNA損傷而升高。此兩種藥物在引發(fā)DNA損傷及抑制DNA修復(fù)上的結(jié)合作用可解釋伊馬替尼與甲福明的協(xié)同作用。實(shí)施例6：升高的基因表達(dá)與臨床結(jié)果的相關(guān)性使用Ohali肉瘤數(shù)據(jù)組(Ohali等人，2004，Oncogene，23(55)：8997-9006)探索在上述實(shí)施例5的RT2-PCR陣列研究中所鑒別出的19個(gè)高度表達(dá)的基因的臨床關(guān)聯(lián)性。該數(shù)據(jù)組包括來(lái)自20個(gè)尤因肉瘤樣品(14個(gè)原發(fā)位置腫瘤及6個(gè)轉(zhuǎn)移性樣品)的基因表達(dá)信息、和與臨床結(jié)果有關(guān)的相應(yīng)信息。臨床結(jié)果包括死亡、轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)。結(jié)果顯示在下列表3中。表3基因表達(dá)水平與臨床結(jié)果的相關(guān)性基因倍數(shù)差異a相關(guān)的臨床結(jié)果ACTB3.881死亡B2M4.3475年復(fù)發(fā)MLH11.139轉(zhuǎn)移PRKDC3.5765年復(fù)發(fā)XPC1.6755年復(fù)發(fā)APEX12.3965年復(fù)發(fā)ERCC51.5613年復(fù)發(fā)MMS191.3985年復(fù)發(fā)RAD23A1.5703年復(fù)發(fā)a在差的結(jié)果樣品對(duì)好的結(jié)果樣品中的基因表達(dá)的倍數(shù)差異。結(jié)果表明，在來(lái)自具有差的預(yù)后的患者的樣品中，所檢驗(yàn)的19個(gè)基因的9個(gè)明顯向上調(diào)節(jié)(如與來(lái)自具有好的預(yù)后的患者的樣品比較)。其它實(shí)施方案在此專利說(shuō)明書(shū)中所公開(kāi)了的全部特征可以任何組合進(jìn)行組合。在此專利說(shuō)明書(shū)中所公開(kāi)的每個(gè)特征可由提供相同、同等或類似目的的可替代的特征替代。因此，除非其它方面有明確地描述，否則所公開(kāi)的每個(gè)特征僅是同等或類似特征的一般系列的實(shí)例。本領(lǐng)域技術(shù)人員可從上述說(shuō)明容易地查明本發(fā)明的基本特征，并且可以在不背離其精神及范圍的情況下對(duì)本發(fā)明形成多種改變及更改以使其適應(yīng)多種用途及條件。因此，其它實(shí)施方案也在所附權(quán)利要求書(shū)的范圍內(nèi)。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3