本發(fā)明涉及血管滲漏綜合癥的預(yù)防或治療用組合物，更具體地，本發(fā)明涉及含有人參皂苷f1或rh1的血管滲漏綜合癥的預(yù)防或治療用藥物組合物；利用所述藥物組合物治療血管滲漏綜合癥的方法；及含有人參皂苷f1或rh1的血管滲漏綜合癥的預(yù)防或改善用食品組合物。

背景技術(shù)：

已知血管壁的截面具有由內(nèi)皮細(xì)胞(endothelium)構(gòu)成的內(nèi)層(tunicaintima)；由彈性蛋白、膠原纖維等構(gòu)成的結(jié)締組織(connectivetissue)；由平滑肌構(gòu)成的中膜(tunicamedia)及由纖維層構(gòu)成的血管外膜(tunicaadventitia)形成的非對稱結(jié)構(gòu)，這種血管的非對稱結(jié)構(gòu)已知抑制血栓形成，防止血管滲漏，賦予血管流動性。尤其是，由內(nèi)皮細(xì)胞構(gòu)成的血管內(nèi)層的表面蓄積糖成分的高分子而形成糖皮質(zhì)層，所述糖皮質(zhì)層執(zhí)行直接調(diào)節(jié)血管的流動，防止血液和內(nèi)皮細(xì)胞直接接觸，抑制血液內(nèi)成分流入內(nèi)皮細(xì)胞的功能。而且，還參與血管彈性(tone)的調(diào)節(jié)、血液和組織間流體及溶質(zhì)交換、白血球移動、止血及血液凝固、炎癥反應(yīng)等多種生理活性。

這種糖皮質(zhì)層受損時，首先是血管功能損傷，其次是血管相關(guān)的生理活性功能受阻礙。因糖皮質(zhì)層受損而受最大影響的是血管的功能損傷，當(dāng)糖皮質(zhì)層由于傷口、手術(shù)等機(jī)械刺激而受損時，血液內(nèi)的成分通過內(nèi)皮細(xì)胞脫離到血管外部。這種血液內(nèi)成分向血管外部脫離的癥狀叫做血管滲漏(vascularleakage)。所述血管滲漏可以由如上所述的機(jī)械刺激誘發(fā)之外，還可以由過度的氧自由基而誘發(fā)，也可以由消化器官的潰瘍、內(nèi)出血、炎癥、血虛、糖尿病等多種疾病而誘發(fā)。

這種血管滲漏誘發(fā)的疾病的代表例可以舉例血管滲漏綜合癥(vascularleaksyndrome)。已知所述血管滲漏綜合癥是血漿通過血管壁而向血管外部流出，引發(fā)周邊組織的浮腫的疾病，大體上是由于使用白細(xì)胞介素2進(jìn)行治療帶來的副作用而發(fā)病。但是已知的是不是在所有使用白細(xì)胞介素2進(jìn)行治療的患者中發(fā)病，因?yàn)橛杏^點(diǎn)提出可能是因?yàn)榛颊邆€人的遺傳原因而發(fā)病，所述血管滲漏綜合癥又是被認(rèn)為是一種遺傳病。但問題是誘發(fā)血管滲漏綜合癥的患者的樣本不容易獲得，因此對血管滲漏綜合癥的血管滲漏癥狀的研究不容易。因此，作為血管滲漏綜合癥患者的替代方案，將頻繁出現(xiàn)血管滲漏的糖尿病患者作為對象進(jìn)行多種研究，結(jié)果明確了血管滲漏是由于血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(vegf；vascularendothelialgrowthfactor)的過表達(dá)而誘發(fā)。即，有報(bào)道稱糖尿病病發(fā)時誘發(fā)的vegf過表達(dá)分解在內(nèi)皮細(xì)胞的粘黏連結(jié)部(adherensjunction)中對維持內(nèi)皮細(xì)胞間的結(jié)合起重要作用的ve-鈣粘著蛋白(cadherin)，誘發(fā)內(nèi)皮細(xì)胞間的結(jié)合減少及糖皮質(zhì)層的損傷，由此發(fā)生血管滲漏。此外，所述血管滲漏可以由用于治療心血管類疾病的手術(shù)過程而誘發(fā)。例如，治療動脈壁變?nèi)趸騽用}內(nèi)測的壓力增加時動脈的一部分膨脹的疾病的動脈瘤的方法之一，使用在發(fā)生動脈瘤的部位包含的正常血管之間插入支架等假體，從而防止血流進(jìn)一步流入到膨脹部位的手術(shù)方法，所述支架的鄰接部位可以誘發(fā)血管滲漏。如上所述，在動脈瘤治療時發(fā)生的血管滲漏又稱為“血管內(nèi)漏(endoleak)”，發(fā)生所述血管內(nèi)漏時存在需要重新手術(shù)的問題。如上所述，血管滲漏通常導(dǎo)致血液的損失、血壓降低等，由此可能誘發(fā)貧血或血虛引起的第二次損傷，因此人們積極進(jìn)行對有效治療此的方法的研究。

例如，國際公開專利第2010-081172號中公開了能夠防止血管滲漏的化合物；韓國授權(quán)專利第958578號中公開了動脈瘤治療時能夠防止血管內(nèi)漏的支架；韓國授權(quán)專利第1239495號中公開了一種利用能夠表達(dá)αa-晶體蛋白(αa-crystallin)基因的重組腺病毒治療糖尿病視網(wǎng)膜病變的方法；國際公開專利第2014-025127號中公開了抑制vegf-誘導(dǎo)性ve-鈣粘著蛋白分解從而抑制血管滲漏的c-肽。但是上述所開發(fā)的技術(shù)中支架僅局限地用于動脈瘤的治療，化合物或c-肽具有副作用發(fā)生的可能性，因此需要開發(fā)出一種既安全又有效的血管滲漏治療制劑。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

技術(shù)問題

本發(fā)明發(fā)明人為了開發(fā)安全有效地治療血管滲漏綜合癥的制劑而努力研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)來源于人參的多種人參皂苷化合物顯示安全有效的血管滲漏癥治療效果，其中人參皂苷f1或rh1顯示最優(yōu)異的血管滲漏治療效果，由此完成了本發(fā)明。

技術(shù)方案

本發(fā)明的一目的在于提供含有人參皂苷f1或rh1的血管滲漏綜合癥的預(yù)防或治療用藥物組合物。

本發(fā)明的另一目的在于提供利用所述藥物組合物治療血管滲漏綜合癥的方法。

本發(fā)明的又一目的在于提供含有人參皂苷f1或rh1的血管滲漏綜合癥的預(yù)防或改善用食品組合物。

有益效果

本發(fā)明提供的人參皂苷f1或rh1不僅能夠促進(jìn)血管新生，還能抑制血管滲漏，因此可以廣泛用于血管滲漏綜合癥的有效預(yù)防或治療。

附圖說明

圖1a是示出利用10種人參皂苷處理并培養(yǎng)的huvec的照片。

圖1b是示出利用上述10種人參皂苷處理并培養(yǎng)的huvec中形成的血管數(shù)的比較結(jié)果的圖。

圖2a是示出利用10種人參皂苷處理并培養(yǎng)的hrmec的照片。

圖2b是示出利用上述10種人參皂苷處理并培養(yǎng)的hrmec中形成的血管數(shù)的比較結(jié)果的圖。

圖3a是示出利用2種人參皂苷按照不同濃度處理并培養(yǎng)的huvec的照片。

圖3b是示出利用上述2種人參皂苷按照不同濃度處理并培養(yǎng)的huvec中形成的血管數(shù)的比較結(jié)果的圖。

圖4a是示出利用2種人參皂苷按照不同濃度處理并培養(yǎng)的hrmec的照片。

圖4b是示出利用上述2種人參皂苷按照不同濃度處理并培養(yǎng)的hrmec中形成的血管數(shù)的比較結(jié)果的圖。

圖5是示出利用3種人參皂苷按照不同濃度(0、3.125、6.25、12.5或25μm)處理并培養(yǎng)的huvec的增殖水平的比較結(jié)果的圖。

圖6是示出利用3種人參皂苷按照不同濃度(0、6.25、12.5或25μm)處理并培養(yǎng)的hrmec的增殖水平的比較結(jié)果的圖。

圖7a是示出以利用3種人參皂苷處理并培養(yǎng)的huvec為對象進(jìn)行細(xì)胞移動性分析的結(jié)果的照片。

圖7b是示出以利用3種人參皂苷處理并培養(yǎng)的huvec為對象進(jìn)行細(xì)胞移動性分析而獲得的移動細(xì)胞比例的比較結(jié)果的圖。

圖8a是示出以利用3種人參皂苷處理并培養(yǎng)的hrmec為對象進(jìn)行細(xì)胞移動性分析的結(jié)果的照片。

圖8b是示出以利用3種人參皂苷處理并培養(yǎng)的hrmec為對象進(jìn)行細(xì)胞移動性分析而獲得的移動細(xì)胞比例的比較結(jié)果的圖。

圖9是示出人參皂苷f1或rh1預(yù)處理對利用vegf-a處理huvec而誘發(fā)的血管滲漏所產(chǎn)生的效果的比較結(jié)果的圖。

圖10a是示出通過依文思藍(lán)染色肉眼確認(rèn)人參皂苷f1或人參皂苷rh1對在小鼠的耳中由vegf-a誘發(fā)的血管滲漏癥狀的效果的結(jié)果的照片。

圖10b是通過依文思藍(lán)染色水平的定量分析確認(rèn)人參皂苷f1或人參皂苷rh1對在小鼠的耳中由vegf-a誘發(fā)的血管滲漏癥狀的效果的結(jié)果的圖。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明發(fā)明人在為了開發(fā)能夠更安全有效地預(yù)防或治療血管滲漏綜合癥的制劑而進(jìn)行不同研究的過程中注意到人參皂苷。所述人參皂苷化合物是人參或紅參中含有的化合物的一種，已知對血管新生或血管損傷伴隨的不同疾病顯示治療效果，因此目的是篩選能夠最有效地治療血管滲漏癥狀的人參皂苷。結(jié)果，作為針對作為與血管內(nèi)皮細(xì)胞類似的內(nèi)皮細(xì)胞的人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(humanumbilicalvascularendothelialcells，huvec)和人視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞(humanretinalmicrovascularendothelialcells，hrmec)能夠以優(yōu)異水平促進(jìn)血管生成的人參皂苷，篩選出人參皂苷rh1或f1。驗(yàn)證所篩選的rh1或f1的效果，結(jié)果確認(rèn)其以濃度依賴性方式促進(jìn)細(xì)胞移動，并抑制血管滲漏。

如上所述，迄今為止還沒有關(guān)于人參皂苷rh1或f1的血管滲漏抑制效果的報(bào)道，由本發(fā)明發(fā)明人首次明確。

為了達(dá)成上述目的，作為本發(fā)明的一具體例，提供含有人參皂苷f1或rh1的血管滲漏綜合癥的預(yù)防或治療用藥物組合物。

本發(fā)明的術(shù)語“人參皂苷f1”又稱為20-o-β-d-吡喃葡萄糖基-20(s)-原人參三醇，化學(xué)式為c36h62o9，分子量約為638.87da，指的是從人參分離的具有下列化學(xué)式1所示的結(jié)構(gòu)的化合物。

[化學(xué)式1]

根據(jù)本發(fā)明，所述人參皂苷f1可以用作伴隨血管滲漏的疾病的預(yù)防或治療用藥物組合物的有效成分。

本發(fā)明的術(shù)語“人參皂苷rh1”又稱為20(s)-原人參三醇-6-o-β-d-吡喃葡萄糖苷，化學(xué)式為c36h62o9，分子量約為638.87da，指的是從人參分離的具有下列化學(xué)式2結(jié)構(gòu)的化合物。

[化學(xué)式2]

根據(jù)本發(fā)明，所述人參皂苷rh1可以用作伴隨血管滲漏的疾病的預(yù)防或治療用藥物組合物的有效成分。

本發(fā)明的術(shù)語“血管滲漏綜合癥(vascularleaksyndrome,vascularleakagesyndrome)”是指血漿通過血管壁向血管外部流出的血管滲漏癥狀導(dǎo)致的誘發(fā)周邊組織浮腫的疾病，已知通常是由于使用白細(xì)胞介素2治療的副作用而發(fā)病，發(fā)病與否是由遺傳因素決定。

本發(fā)明的術(shù)語“血管滲漏(vascularleakage)”是指由形成血管的構(gòu)成要素中的血管內(nèi)皮細(xì)胞的糖皮質(zhì)層損傷、血管內(nèi)皮細(xì)胞的結(jié)合力缺損等多種原因而導(dǎo)致血管壁透過性增加，血液內(nèi)成分向血管外部脫離的癥狀，通?？梢酝ㄟ^低血壓、末梢浮腫、低白蛋白血癥等間接診斷。所述血管滲漏是血管滲漏綜合癥的主要癥狀，但除了上述血管滲漏綜合癥以外還可以是由直接損傷血管構(gòu)成要素的機(jī)械刺激誘發(fā)，也可以是由過量的氧自由基而誘發(fā)，還可以由消化器官的潰瘍、內(nèi)出血、炎癥、血虛、糖尿病等多種疾病而誘發(fā)。

根據(jù)本發(fā)明一實(shí)施例，為了篩選具有血管新生促進(jìn)活性的人參皂苷而從10種人參皂苷化合物(ck、rh2、rg3、rb1、f2、rd、re、rg1、rh1或f1)中篩選對huvec和hrmec顯示優(yōu)異的血管新生促進(jìn)活性的人參皂苷，結(jié)果確認(rèn)人參皂苷f1或rh1顯示高水平的促進(jìn)血管生成的效果(圖1及圖2)，用他們處理huvec時顯示濃度依賴性的血管生成促進(jìn)效果(圖3)，促進(jìn)huvec和hrmec的細(xì)胞增殖(圖5及圖6)，促進(jìn)huvec和hrmec的細(xì)胞移動(圖7及圖8)，示出抑制用血管內(nèi)皮生長因子a(vegf-a)處理huvec誘發(fā)的血管滲漏的水平的效果(圖9)，顯示了對在細(xì)胞水平(圖9)和動物水平(圖10a及圖10b)用vegf-a處理而誘發(fā)的血管滲漏水平的抑制效果。

從而確認(rèn)人參皂苷f1或rh1顯示不僅促進(jìn)血管新生還抑制血管滲漏的效果，這效果不僅在細(xì)胞水平中顯示還在動物水平中顯示,由此可以知道所述人參皂苷f1或rh1可以用作預(yù)防或治療伴隨血管滲漏的疾病的制劑。

尤其，已知vegf不僅在如癌癥和心血管系統(tǒng)疾病的病態(tài)下分泌而誘發(fā)血管滲漏,而且在形成非正常血管方面起到重大作用。本發(fā)明提供的人參皂苷f1或rh1形成血管同時能夠抑制血管滲漏，可以認(rèn)為所述人參皂苷f1或rh1顯示形成正常新血管的新效果。

因此，本發(fā)明提供的人參皂苷f1或rh1不僅可以用于抑制血管形成的多種血虛疾病，還可以用于治療由于vegf分泌而導(dǎo)致正常血管功能消失且形成非正常血管形成的癌癥或心血管系統(tǒng)疾病。

此外，本發(fā)明組合物可以制造為進(jìn)一步含有藥物組合物制備中通常使用的合適的載體、賦形劑或稀釋劑的血管滲漏綜合癥的預(yù)防或治療用藥物組合物的形態(tài)，所述載體可以包括非天然載體(non-naturallyoccuringcarrier)。具體地，所述藥物組合物分別按照通常的方法劑型化為散劑、顆粒劑、片劑、膠囊劑、混懸液、乳液、糖漿、氣霧劑等口服劑型；外用劑；栓劑；滅菌注射溶液等形態(tài)而使用。在本發(fā)明中，所述藥物組合物中可含有的載體、賦形劑及稀釋劑可以為乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、木糖醇、赤蘚糖醇、麥芽糖醇、淀粉、金合歡膠、藻酸鹽、明膠、磷酸鈣、硅酸鈣、纖維素、甲基纖維素、微晶纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羥基苯甲酸甲酯、羥基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸鎂、礦物油等。本發(fā)明的藥物組合物在制劑化時可以使用通常使用的填充劑、增量劑、結(jié)合劑、濕潤劑、崩解劑、表面活性劑等稀釋劑或賦形劑而制備。用于口服給藥的固體制劑可以包括片劑、丸劑、粉劑、顆粒劑、膠囊劑等，這些固體制劑可以在所述提取物和其組分中混合1種以上的例如淀粉、碳酸鈣(calciumcarbonate)、蔗糖(sucrose)、乳糖(lactose)或明膠等賦形劑制造。除了單純的賦形劑之外，還可以使用硬脂酸鎂、滑石等潤滑劑。作為用于口服的液體制劑，適用懸浮劑、內(nèi)服液劑、乳劑、糖漿劑等，除了作為經(jīng)常使用的單純稀釋劑的水、液體石蠟以外，還可以包括各種賦形劑，例如潤濕劑、甜味劑、芳香劑、保存劑等。用于非口服給藥的制劑中包括滅菌的水溶液、非水性溶劑、懸浮劑、乳劑、冷凍干燥制劑和栓劑。作為非水性溶劑、懸浮劑，可以使用丙二醇、聚乙二醇、橄欖油等植物性油，油酸乙酯等可注射的酯等。作為栓劑的基劑，可以使用半合成椰油酯/棕櫚油酯(witepsol)、聚乙二醇(macrogol)、吐溫61、可可脂、月桂脂、甘油明膠等。

本發(fā)明藥物組合物中含有的所述人參皂苷f1或rh1的含量不受特別限制，但作為一例，以最終組合物總重量為基準(zhǔn)，可以以0.0001～50重量％的含量含有，作為另一示例，可以以0.01～10重量％的含量含有。

上述本發(fā)明的藥物組合物可以以藥劑學(xué)上有效的量給藥，本發(fā)明中術(shù)語“藥劑學(xué)上有效的量”是指以可適用于醫(yī)療治療或預(yù)防的合理的受益/危險比例充分治療或預(yù)防疾病的量，有效用量水平可以由包括根據(jù)疾病的輕重程度、藥物的活性、患者的年齡、體重、健康狀態(tài)、性別、患者對藥物的敏感度、所使用的本發(fā)明組合物的給藥時間、給藥途徑及排出比例、治療持續(xù)時間、與所用的本發(fā)明組合物配合或同時使用的藥物等要素及其他醫(yī)學(xué)領(lǐng)域公知的要素決定。本發(fā)明的藥物組合物可以單獨(dú)給藥或與公知的血管滲漏綜合癥預(yù)防或治療用制劑聯(lián)用給藥?？紤]上述所有要素的情況下，以沒有副作用的最小量獲得最大效果的量給藥尤為重要。

本發(fā)明的藥物組合物給藥量根據(jù)使用目的、疾病的輕重程度、患者年齡、體重、性別、既往病例或作為有效成分使用的物質(zhì)的種類等，由本領(lǐng)域技術(shù)人員決定。例如，本發(fā)明的藥物組合物每一成人給藥約0.1ng～100mg/kg，優(yōu)選為1ng～約10mg/kg，本發(fā)明的組合物的給藥頻率可以為1天一次或分割用量分?jǐn)?shù)次給藥，但不限于此。所述用量在任何方面來講都不用于限定本發(fā)明范圍。

根據(jù)本發(fā)明另一具體例，提供一種預(yù)防或治療血管滲漏綜合癥的方法，其包括將上述藥學(xué)組合物以藥劑學(xué)上有效的量給藥至具有血管滲漏綜合癥發(fā)病可能性或發(fā)病的個體的步驟。

本發(fā)明的術(shù)語“個體”是指具有血管滲漏綜合癥發(fā)病可能性或發(fā)病的包括鼠、家畜、人等的哺乳動物、養(yǎng)殖魚類等，不受特別限制。

針對本發(fā)明的血管滲漏綜合癥預(yù)防或治療用藥物組合物的給藥途徑，只要是所述組合物能夠到達(dá)靶組織，則可以通過任意通常的給藥途徑給藥。所述組合物可以根據(jù)目的通過腹腔內(nèi)給藥、靜脈內(nèi)給藥、肌肉內(nèi)給藥、皮下給藥、皮內(nèi)給藥、口服給藥、鼻內(nèi)給藥、肺內(nèi)給藥、直腸內(nèi)給藥等路徑給藥，而不受特別現(xiàn)實(shí)。但是，口服給藥時由于胃酸而使所述人參皂苷f1或rh1變性，因此口服組合物可以以被涂覆活性藥劑或保護(hù)其不在胃中分解的方式被劑型化。此外，所述組合物可以通過能夠使得活性物質(zhì)移動到靶細(xì)胞的任意裝置進(jìn)行給藥。

根據(jù)本發(fā)明另一具體例，提供一種含有人參皂苷f1或rh1的血管滲漏綜合癥預(yù)防或改善用食品組合物。

作為所述血管滲漏綜合癥預(yù)防或治療用藥物組合物的有效成分的人參皂苷f1或rh1，源自作為藥用天然物的人參等以往用作中藥材而其安全性已得到論證的天然物，從而所述人參皂苷f1或rh1可以直接食用，也可以制造為有助于血管滲漏綜合癥的預(yù)防或改善的食品形態(tài)來吸收。

此時，所述食品中含有的所述人參皂苷f1或rh1的含量，相對于食品組合物的總重量可以以0.001～50重量％，更優(yōu)選為0.1～10重量％的含量含有，而沒有特別限制。食品為飲料時，以100ml為基準(zhǔn)可以以1～10g，優(yōu)選以2～7g的比例含有。此外，所述組合物還可以含有通常用于食品組合物以提高氣味、味道、視覺等的額外成分。例如，可以含有維生素a、維生素c、維生素d、維生素e、維生素b1、維生素b2、維生素b6、維生素b12、煙酸(niacin)、生物素、葉酸(folate)、泛酸(panthotenicacid)等。此外可以含有鋅(zn)、鐵(fe)、鈣(ca)、鉻(cr)、鎂(mg)、錳(mn)、銅(cu)等礦物。此外，還可以含有賴氨酸、色氨酸、半胱氨酸、纈氨酸等氨基酸。此外，還可以含有防腐劑(山梨酸鉀、苯甲酸鈉、水楊酸、脫氫乙酸鈉等)、殺菌劑(漂白粉和高度漂白粉、次氯酸鈉等)、抗氧化劑(丁基羥基茴香醚(bha)、二丁基羥基甲苯(bht)等)、著色劑(焦油色素等)、發(fā)色劑(亞硝酸鈉、亞硝酸鈉等)、漂白劑(亞硫酸鈉)、調(diào)味劑(msg谷氨酸鈉等)、甜味劑(甘素、環(huán)磺酸鹽、糖精、鈉等)、香料(香草醛、內(nèi)酯類等)、膨脹劑(明礬、d-酒石酸氫鉀等)、強(qiáng)化劑、乳化劑、增粘劑(糊料)、成膜劑、膠基、消泡劑、溶劑、改良劑等食品添加劑(foodadditives)。上述添加物可以根據(jù)食品的種類來選擇并以適宜的量使用。

此外，可以利用含有所述人參皂苷f1或rh1的血管滲漏綜合癥預(yù)防或改善用食品組合物制造血管滲漏綜合癥預(yù)防或改善用功能性保健食品。

作為具體例，利用所述食品組合物可以制造能夠預(yù)防或改善血管滲漏綜合癥的加工食品，例如，果子、飲料、酒類、發(fā)酵食品、罐頭、乳加工食品、肉類加工食品或面條加工食品的形態(tài)的功能性保健食品。此時，果子包括餅干、派、蛋糕、面包、糖果、果凍、口香糖、谷物(cereal)(包括谷物片等代餐食品類)等。飲料包括飲用水、碳酸飲料、功能性離子飲料、果汁(例如蘋果汁、梨汁、葡萄汁、蘆薈汁、柑橘汁、桃汁、胡蘿卜汁、番茄汁等)、甜米露等。酒類包括清酒、威士忌、燒酒、啤酒、洋酒、果酒等。發(fā)酵食品包括醬油、大醬、辣椒醬等。罐頭包括水產(chǎn)物罐頭(例如金槍魚罐頭、青花魚罐頭、秋刀魚罐頭、海螺罐頭等)、畜產(chǎn)品罐頭(牛肉罐頭、豬肉罐頭、雞肉罐頭、火雞罐頭等)、農(nóng)產(chǎn)品罐頭(玉米罐頭、桃罐頭、菠蘿罐頭等)。乳加工食品包括芝士、黃油、酸奶等。肉類加工食品包括炸豬排、炸牛排、炸雞排、香腸、糖醋肉、炸肉塊、宮廷烤牛肉等。面條加工食品包括密封包裝生面等面條。此外，所述組合物可以用于甑煮食品(retortfood)、湯類等。

本發(fā)明的術(shù)語“功能性保健食品(functionalfood)”是與特定保健用食品(foodforspecialhealthuse,foshu)相同的術(shù)語，是指加工成除了營養(yǎng)供給之外，還能夠顯示生物體調(diào)節(jié)功能的醫(yī)學(xué)、醫(yī)療效果高的食品，所述食品為了獲得對血管滲漏綜合癥的預(yù)防或改善有用的效果，可以制備成片劑、膠囊、粉末、顆粒、液狀、丸等多種形態(tài)。

具體實(shí)施例

下面通過實(shí)施例更詳細(xì)說明本發(fā)明。但這些實(shí)施例僅例示本發(fā)明，本發(fā)明范圍不由這些實(shí)施例限定。

實(shí)施例1：顯示血管新生促進(jìn)活性的人參皂苷的篩選

利用10種人參皂苷化合物(ck、rh2、rg3、rb1、f2、rd、re、rg1、rh1或f1)，比較huvec(humanumbilicalvascularendothelialcells)和hrmec(humanretinalmicrovascularendothelialcells)的血管新生促進(jìn)活性。即，所述huvec或hrmec分別利用2％胎牛血清(fbs)、egm-2(龍沙公司(lonza),沃克斯維爾,馬里蘭州)培養(yǎng)基，在維持5％co2、37℃的條件下進(jìn)行培養(yǎng)。在96-孔板中利用基質(zhì)膠(bd生物科學(xué)公司)涂覆1小時，以104個/孔將huvec或hrmec與分別用25μm的人參皂苷化合物(ck、rh2、rg3、rb1、f2、rd、re、rg1、rh1或f1)處理的0.1％fbs和ebm-2培養(yǎng)基混合后，接種至涂覆有基質(zhì)膠(matrigel)的96-孔板。培養(yǎng)4小時后，實(shí)施管形成分析法(tubeformationassay)，用顯微鏡觀察并照相來比較管數(shù)量(圖1a、1b、2a及2b)。此時，陰性對照組使用dmso代替人參皂苷處理并培養(yǎng)的細(xì)胞，陽性對照組使用已知促進(jìn)血管新生的vegf-a處理并培養(yǎng)。

首先，圖1a是示出利用10種人參皂苷處理并培養(yǎng)的huvec的照片，圖1b是示出利用上述10種人參皂苷處理并培養(yǎng)的huvec中形成的血管數(shù)的比較結(jié)果的圖。如圖1所示，確認(rèn)了培養(yǎng)huvec時，人參皂苷ck、rb2或rg3顯示抑制血管生成效果，人參皂苷rb1或f2沒有顯示特別差異，人參皂苷rd、re,rg1,rh1或f1顯示出促進(jìn)血管生成效果。

然后，圖2a是示出利用10種人參皂苷處理并培養(yǎng)的hrmec的照片，圖2b是示出利用上述10種人參皂苷處理并培養(yǎng)的hrmec中形成的血管數(shù)的比較結(jié)果的圖。如圖2所示，確認(rèn)了培養(yǎng)hrmec時，人參皂苷ck、rb2或rg3顯示抑制血管生成效果，人參皂苷re、rb1、rg1,rd、f1、f2或rh1顯示出促進(jìn)管生成效果。

同時，在培養(yǎng)所述huvec或hrmec時共同顯示促進(jìn)血管生成的效果的人參皂苷為re、rd、f1或rh1，其中兩種類的細(xì)胞培養(yǎng)時顯示出比陽性對照組還要高水平的管生成促進(jìn)效果的為人參皂苷f1或rh1。

從而，篩選所述人參皂苷f1或rh1用于以后的實(shí)驗(yàn)。

實(shí)施例2：依據(jù)人參皂苷處理濃度的血管新生促進(jìn)效果

利用上述實(shí)施例1中篩選的人參皂苷f1或rh1以不同濃度(12.5μm、25μm或50μm)處理并培養(yǎng)按照上述實(shí)施例1的方法培養(yǎng)的huvec或hrmec4小時，實(shí)施血管形成分析法以比較所形成的管的數(shù)量(圖3及圖4)。此時，陰性對照組使用利用dmso代替人參皂苷處理并培養(yǎng)的細(xì)胞，陽性對照組使用已知為促進(jìn)血管新生的vegf-a處理并培養(yǎng)的細(xì)胞。

圖3a是示出利用2種人參皂苷按照不同濃度處理并培養(yǎng)的huvec的照片，圖3b是示出利用上述2種人參皂苷按照不同濃度處理并培養(yǎng)的huvec中形成的血管數(shù)的比較結(jié)果的圖。如圖3所示，在培養(yǎng)huvec時2種人參皂苷都濃度依賴性地促進(jìn)血管生成，以50μm處理時比陽性對照組顯示更高水平的管形成。

圖4a是示出利用2種人參皂苷按照不同濃度處理并培養(yǎng)的hrmec的照片，圖4b是示出利用上述2種人參皂苷按照不同濃度處理并培養(yǎng)的hrmec中形成的血管數(shù)的比較結(jié)果的圖。如圖4所示，在培養(yǎng)hrmec時雖然2種人參皂苷沒有顯示明顯濃度依賴性地促進(jìn)血管生成的效果，但在各個濃度均顯示了比陽性對照組更高水平的管形成。

實(shí)施例3：依據(jù)人參皂苷處理濃度的細(xì)胞增殖促進(jìn)效果

用上述實(shí)施例1中已確認(rèn)為促進(jìn)血管形成的三種人參皂苷(f1、rh1或rg1)以不同濃度(0μm、3.125μm、6.25μm、12.5μm或25μm)處理并培養(yǎng)根據(jù)上述實(shí)施例1的方法培養(yǎng)的huvec或hrmec48小時，以培養(yǎng)細(xì)胞為對象實(shí)施mtt分析法，比較了細(xì)胞增殖水平(圖5及圖6)。此時，陰性對照組使用利用dmso代替人參皂苷處理并培養(yǎng)的細(xì)胞，陽性對照組使用已知為促進(jìn)血管新生的vegf-a處理并培養(yǎng)的細(xì)胞。

圖5是示出利用3種人參皂苷按照不同濃度(0、3.125、6.25、12.5或25μm)處理并培養(yǎng)的huvec的增殖水平的比較結(jié)果的圖。如圖5所示，確認(rèn)了在培養(yǎng)huvec時人參皂苷f1促進(jìn)約20％的細(xì)胞增殖、人參皂苷rh1促進(jìn)約100％的細(xì)胞增殖以及人參皂苷rg1促進(jìn)約60％細(xì)胞增殖。

圖6是示出利用3種人參皂苷按照不同濃度(0、6.25、12.5或25μm)處理并培養(yǎng)的hrmec的增殖水平的比較結(jié)果的圖。如圖6所示，確認(rèn)了在培養(yǎng)hrmec時3種人參皂苷均促進(jìn)約20％的細(xì)胞增殖。

實(shí)施例4：人參皂苷的細(xì)胞移動促進(jìn)效果

以huvec或hrmec為對象，為了確認(rèn)上述實(shí)施例1中確認(rèn)為促進(jìn)管形成的3種人參皂苷對細(xì)胞移動性的影響，實(shí)施了細(xì)胞移動性分析。

具體地，在具備培養(yǎng)插件(culture-insert)的培養(yǎng)容器(culture-insertofμ-dish,ibidi公司)中涂覆0.1％的明膠，添加egm-2培養(yǎng)基之后，接種了按照上述實(shí)施例1的方法培養(yǎng)的huvec或hrmec，培養(yǎng)至飽和度為90％，去除上述插件。然后將培養(yǎng)基替換為含有3種人參皂苷(f1、rh1或rg1)25μm和0.1％fbs的ebm-2培養(yǎng)基，接著培養(yǎng)12小時，用顯微鏡分析了huvec或hrmec細(xì)胞的移動水平(圖7a、圖7b、圖8a及圖8b)。此時，陰性對照組使用利用dmso代替人參皂苷處理并培養(yǎng)12小時的細(xì)胞，陽性對照組使用已知為促進(jìn)血管新生的vegf-a處理并培養(yǎng)12小時的細(xì)胞，參考對照組使用了沒有培養(yǎng)的細(xì)胞。

圖7a是示出以利用3種人參皂苷處理并培養(yǎng)的huvec為對象進(jìn)行細(xì)胞移動性分析的結(jié)果的照片，圖7b是示出移動細(xì)胞比例的比較結(jié)果的圖。如圖7所示，確認(rèn)了3種人參皂苷均促進(jìn)huvec的移動性。

圖8a是示出以利用3種人參皂苷處理并培養(yǎng)的hrmec為對象進(jìn)行細(xì)胞移動性分析的結(jié)果的照片，圖8b是示出移動細(xì)胞比例的比較結(jié)果的圖。如圖8所示，確認(rèn)了3種人參皂苷均促進(jìn)hrmec的移動性。

實(shí)施例5：人參皂苷的血管滲漏抑制效果

實(shí)施例5-1：在細(xì)胞水平人參皂苷f1或rh1對血管滲漏產(chǎn)生的效果分析

利用25μm的上述實(shí)施例1中篩選的人參皂苷f1或rh1對按照上述實(shí)施例的方法培養(yǎng)的huvec預(yù)處理1小時，并利用已知為誘導(dǎo)血管滲漏的vegf-a進(jìn)行處理，實(shí)施了血管滲透性分析(vascularpermeabilityassay)(圖9)。此時，陰性對照組使用利用dmso代替人參皂苷處理并培養(yǎng)的細(xì)胞，陽性對照組使用已知為促進(jìn)血管新生的vegf-a處理并培養(yǎng)的細(xì)胞，比較組使用人參皂苷f1或rh1預(yù)處理而沒有利用vegf-a處理的細(xì)胞。

圖9是示出人參皂苷f1或rh1預(yù)處理對利用vegf-a處理huvec而誘發(fā)的血管滲漏所產(chǎn)生的效果的比較結(jié)果的圖。如圖9所示，確認(rèn)了在利用vegf-a處理huvec時發(fā)生了較高水平的血管滲漏，但通過人參皂苷f1或rh1的預(yù)處理得到抑制。同時，還確認(rèn)了用人參皂苷f1或rh1預(yù)處理后再利用vegf-a處理huvec，相比僅利用人參皂苷f1或rh1處理huvec的情況血管滲漏的水平減少。

實(shí)施例5-2：在生物體內(nèi)人參皂苷f1或rh1對血管滲漏產(chǎn)生的效果分析

在7周齡icr雄性小鼠尾部靜脈注射200ml的1％依文思藍(lán)(evansblue)染色藥，反應(yīng)10分鐘使得血液變藍(lán)。

接著，在小鼠耳部分別皮內(nèi)注射的作為陰性對照組的pbs、作為陽性對照組的vegf-a、1.25μm的人參皂苷f1、1.25μm的人參皂苷rh1、的vegf-a/1.25μm的人參皂苷f1或的vegf-a/1.25μm的人參皂苷rh1。

30分鐘后，對小鼠進(jìn)行安樂死，摘取耳部，用肉眼觀察血液滲漏的量(圖10a)，然后放入甲酰胺中并在37℃下固定24小時，在620nm處測定吸光度，定量評價人參皂苷f1和人參皂苷rh1的血液滲漏抑制效果(圖10b)。

圖10a是示出通過依文思藍(lán)染色肉眼確認(rèn)人參皂苷f1或人參皂苷rh1對在小鼠的耳中由vegf-a誘發(fā)的血管滲漏癥狀的效果的結(jié)果的照片，圖10b是通過依文思藍(lán)染色水平的定量分析確認(rèn)人參皂苷f1或人參皂苷rh1對在小鼠的耳中由vegf-a誘發(fā)的血管滲漏癥狀的效果的結(jié)果的圖。

如圖10a及圖10b所示，確認(rèn)了人參皂苷f1或人參皂苷rh1在如小鼠的生物體內(nèi)也能夠有效抑制由vegf-a誘導(dǎo)的血管滲漏癥狀。

從而，從上述結(jié)果可以知道人參皂苷f1或rh1不僅在細(xì)胞水平和動物水平促進(jìn)血管新生，還顯示抑制血管滲漏的效果。