本發(fā)明涉及以異黃樟素(日文：イソサフロール)(或其衍生物)為有效成分的乳酸脫氫酶抑制劑以及抗癲癇劑。

背景技術(shù)：

癲癇是腦的電活動的過度興奮而導(dǎo)致的神經(jīng)疾病，通過特定的腦波(癲癇腦波)來診斷。其患病率高達總?cè)丝诘募s1％。癲癇治療法以藥物治療為主，在臨床上使用20種以上的癲癇治療藥(非專利文獻1)。但是，已知的是這些現(xiàn)有的癲癇治療藥對約三成的癲癇患者是無效的。在這種背景下，目前需要針對現(xiàn)有的藥無法治療的“難治性癲癇”的治療藥。

癲癇是過度的神經(jīng)電興奮導(dǎo)致的，其治療藥也主要是針對抑制電活動的分子。具體而言，是離子通道、突觸受體、神經(jīng)遞質(zhì)轉(zhuǎn)運體(非專利文獻2)。另一方面，已知在臨床上，針對這些現(xiàn)有的藥無法治療的癲癇患者的一部分，稱作生酮飲食療法的“飲食治療法”是有效的(非專利文獻3)。最近，生酮飲食的抗癲癇機理逐步明確(非專利文獻4～6)。即，如果是對能量代謝路徑產(chǎn)生作用的藥，則有望作為難治性癲癇的治療藥。

抗癲癇藥的一種為司替戊醇(日文：スチリペントール)(cas:49763-96-4,4-二甲基-1-[(3,4-亞甲基二氧基)-苯基]-1-戊烯-3-醇，參照下式(i))。司替戊醇最初作為腦疾病藥而被開發(fā)(專利文獻1)，之后明確其對作為難治性癲癇的一種的dravet綜合征(小兒癲癇的一種)是有效的(非專利文獻7、8)。目前，商品名為ディアコミット的藥物作為dravet綜合征的治療藥在歐洲(2007年認證)和日本(2012年認證)得到臨床使用。但是，雖然對dravet綜合征有效，但是對除此以外的癲癇(特別是成人癲癇)，司替戊醇在臨床試驗中尚未成功(非專利文獻9)。

最近，有報告將司替戊醇作為乳酸脫氫酶(lactatedehydrogenase；ldh)的抑制劑(專利文獻2)。乳酸脫氫酶是指存在于“能量代謝路徑上”、使乳酸與丙酮酸相互轉(zhuǎn)換的“代謝酶”。乳酸脫氫酶抑制劑自身至今為止主要用作抗瘧疾藥開發(fā)(非專利文獻10、11)以及抗癌劑開發(fā)(非專利文獻12、13)。但是，并不清楚這些乳酸脫氫酶抑制劑是否具有抗癲癇作用。即，在現(xiàn)階段，司替戊醇是具有“乳酸脫氫酶抑制作用”的唯一的“抗癲癇劑”。

[化1]

現(xiàn)有技術(shù)文獻

專利文獻

專利文獻1：美國專利第3910959號

專利文獻2：國際公開wo2014/115764

非專利文獻

非專利文獻1：sirven等,mayoclinproc87:879-889,2012

非專利文獻2：meldrum等,neurotherapeutics4:18-61,2007

非專利文獻3：neal等,lancetneurol7:500-506,2008

非專利文獻4：ma等,jneurosci27:3618-3625,2007

非專利文獻5：juge等,neuron68:99-112,2010

非專利文獻6：masino等,jclininvest121:2679-2683,2011

非專利文獻7：perez等,epilepsia40:1618-1626,1999

非專利文獻8：chiron等,lancet356:1638-1642,2000

非專利文獻9：chiron,neurotherapeutics4:123-125,2007

非專利文獻10：deck等,jmedchem41:3879-3887,1998

非專利文獻11：cameron等,jbiolchem279:31429-31439,2004

非專利文獻12：granchi等,jmedchem54:1599-1612,2011

非專利文獻13：farabegoli等,eurjpharmsci47:729-738,2012

非專利文獻14：aboul-enein等,eurjmedchem47:360-369,2012

非專利文獻15：riban等,neuroscience112:101-111,2002

非專利文獻16houser,brainres535:195-204,1990

非專利文獻17：shen等,epilepsyres7:40-48,1990

技術(shù)實現(xiàn)要素：

發(fā)明所要解決的技術(shù)問題

司替戊醇具有芳香族烯丙醇結(jié)構(gòu)，具有以往的抗癲癇藥中不存在的化學(xué)結(jié)構(gòu)(專利文獻1)。而且，是唯一的作為“具有乳酸脫氫酶抑制作用的抗癲癇劑”的化合物(專利文獻2)。對代謝路徑(代謝酶)產(chǎn)生作用的抗癲癇劑有望作為難治性癲癇的治療藥。但是，司替戊醇雖然對一部分小兒難治性癲癇(dravet綜合征)有效，但是并未用于除此以外的難治性癲癇。即，通過維持乳酸脫氫酶抑制活性、改變司替戊醇的化學(xué)結(jié)構(gòu)，期待能夠開發(fā)針對司替戊醇無法治療的難治性癲癇也有效的“抗癲癇劑”。而且，這種抗癲癇劑的產(chǎn)業(yè)利用價值非常高。

但是，如何改變化學(xué)結(jié)構(gòu)才能對司替戊醇無法治療的難治性癲癇產(chǎn)生效果，在現(xiàn)有技術(shù)水平下是不容易設(shè)想的。于是，本發(fā)明的目的在于提供具有“乳酸脫氫酶抑制作用”、對于司替戊醇無法治療的難治性癲癇也有效的抗癲癇劑。解決技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案

本發(fā)明人假定，司替戊醇(芳香族烯丙醇)的特征位的“3號位羥基”(專利文獻1)以及現(xiàn)有技術(shù)中報告的“3號位官能團”(非專利文獻14)反而是不需要的。于是，著眼于從司替戊醇的3號位除去羥基和叔丁基而得的物質(zhì)、即異黃樟素(cas:120-58-1,5-(1-丙烯基)-1,3-苯并二氧雜環(huán)戊烯，參照下式(ii))。本發(fā)明人在此明確了該異黃樟素具有乳酸脫氫酶抑制作用。進一步，對化學(xué)結(jié)構(gòu)與司替戊醇完全不同的多種“將異黃樟素作為母核結(jié)構(gòu)的乳酸脫氫酶抑制劑”進行了鑒定。而且，發(fā)現(xiàn)用異黃樟素等乳酸脫氫酶抑制劑能夠顯著抑制司替戊醇無法抑制的成人難治性癲癇(海馬硬化并發(fā)的顳葉內(nèi)側(cè)癲癇(日文：海馬硬化癥に伴う內(nèi)側(cè)側(cè)頭葉てんかん))，從而完成了本發(fā)明。

[化2]

本發(fā)明提供以下發(fā)明。

[1]乳酸脫氫酶抑制劑，其中含有式(iii)所示的化合物，

[化3]

式(iii)中，

r^a表示氫原子、鹵原子或可被鹵原子取代的烷氧基，

r^b表示氫原子、鹵原子、可被鹵原子取代的烷氧基或硝基，或者表示與r^c、r^d或r^g共同形成可具有取代基的環(huán)狀結(jié)構(gòu)的基團，

r^c表示氫原子或羧基，或者表示與r^b、r^e·r^f或r^g共同形成可具有取代基的環(huán)狀結(jié)構(gòu)的基團，

r^d表示氫原子或-x¹¹-r¹¹，或者表示與r^b或r^g共同形成可具有取代基的環(huán)狀結(jié)構(gòu)的基團，

x¹¹表示亞烷基、-nh-co-、-ch2-nr¹²-co-或-s-，

r¹¹是可具有取代基的芳基、羧基、可被鹵原子取代的烷基、或羥烷基，

r¹²表示羥烷基，

r^e、r^f和r^g

(i)均表示氫原子，或者

(ii)r^e和r^f同時表示＝o、＝nr²¹或＝cr²¹r²²，r^g表示氫原子、-x³¹-r³¹、-o-x³²-r³²、-n(-x³³-r³³)(-x³⁴-r³⁴)或-cr³⁵r³⁶r³⁷，

r²¹表示羥基，或者表示與r^c或r^g共同形成可具有取代基的環(huán)狀結(jié)構(gòu)的基團，

r²²表示硝基、或與氮原子結(jié)合的氫原子可被烷基取代的氨基羰基，

x³¹表示單鍵、亞烯基、-ch2-o-ch2-co-nh-、-ch2-o-ch2-co-或-co-，

r³¹表示可具有取代基的芳基、可具有取代基的雜芳基、可具有取代基的環(huán)烷基、可具有取代基的雜環(huán)氨基、羥基、可被鹵原子取代的烷氧基、或羥烷基，

其中，在x³¹為單鍵、r³¹為可具有取代基的雜環(huán)氨基的情況下，該單鍵與該雜環(huán)氨基的氮原子以外的原子結(jié)合，

x³²表示單鍵或-ch2-co-nh-，

r³²是可具有取代基的芳基、可具有取代基的雜芳基、可具有取代基的環(huán)烷基或可被鹵原子取代的烷基，

x³³和x³⁴分別獨立地表示單鍵、亞烷基、-ch2-co-nh-或-so2-，

r³³和r³⁴分別獨立地表示氫原子、可具有取代基的芳基、可具有取代基的雜芳基、可具有取代基的環(huán)烷基、羥烷基、羧基、可被鹵原子取代的烷基或炔基，或者表示與r^b、r^c、r^d或r^e·r^f共同形成可具有取代基的環(huán)狀結(jié)構(gòu)的基團，或者r³³和r³⁴表示它們與通過作為單鍵的x³³和x³⁴而結(jié)合的氮原子共同形成的可具有取代基的雜環(huán)氨基，

r³⁵、r³⁶和r³⁷分別獨立地表示氫原子或-x³¹-r³¹，或者表示與r^b、r^c、r^d或r^e·r^f共同形成可具有取代基的環(huán)狀結(jié)構(gòu)的基團，

r^h表示氫原子或鹵原子，

其中，r^b與r^c共同組成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)、r^b與r^d共同組成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)、r^b與r^g共同組成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)、r^c與r^e·r^f共同組成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)、r^c與r^g共同組成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)、r^d與r^g共同組成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)、r^e·r^f與r^g共同組成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)在式(iii)中最多只形成1個。

[2]如[1]所述的乳酸脫氫酶抑制劑，其中，所述式(iii)所示的化合物是r^c、r^d、r^e、r^f、r^g均為氫原子的化合物。

[3]如[1]所述的乳酸脫氫酶抑制劑，其中，所述式(iii)所示的化合物是下式(ii)所示的異黃樟素。

[化4]

[4]如[1]所述的乳酸脫氫酶抑制劑，其中，所述式(iii)所示的化合物是未形成r^b與r^c共同組成的所述環(huán)狀結(jié)構(gòu)、r^b與r^d共同組成的所述環(huán)狀結(jié)構(gòu)、r^b與r^g共同組成的所述環(huán)狀結(jié)構(gòu)、r^c與r^e·r^f共同組成的所述環(huán)狀結(jié)構(gòu)、r^c與r^g共同組成的所述環(huán)狀結(jié)構(gòu)、r^d與r^g共同組成的所述環(huán)狀結(jié)構(gòu)、r^e·r^f與r^g共同組成的所述環(huán)狀結(jié)構(gòu)中的任一種的化合物。

[5]如[1]所述的乳酸脫氫酶抑制劑，其中，所述式(iii)所示的化合物是形成有r^b與r^c共同組成的所述環(huán)狀結(jié)構(gòu)、r^b與r^d共同組成的所述環(huán)狀結(jié)構(gòu)、r^b與r^g共同組成的所述環(huán)狀結(jié)構(gòu)、r^c與r^e·r^f共同組成的所述環(huán)狀結(jié)構(gòu)、r^c與r^g共同組成的所述環(huán)狀結(jié)構(gòu)、r^d與r^g共同組成的所述環(huán)狀結(jié)構(gòu)、r^e·r^f與r^g共同組成的所述環(huán)狀結(jié)構(gòu)中的任一種的化合物。

[6]抗癲癇劑，其中，以[1]～[5]中任一項所述的乳酸脫氫酶抑制劑為有效成分。

發(fā)明效果

司替戊醇是唯一的具有“乳酸脫氫酶抑制作用”的“抗癲癇劑”(專利文獻1,2)。但是，司替戊醇在臨床上僅對一部分小兒難治性癲癇(dravet綜合征)有效。本發(fā)明人新發(fā)現(xiàn)了作為第二種具有“乳酸脫氫酶抑制作用”的“抗癲癇劑”的異黃樟素。其顯著抑制了司替戊醇所無法治療的難治性癲癇(作為成人難治性癲癇的顳葉內(nèi)側(cè)癲癇)。進一步，還發(fā)現(xiàn)了以異黃樟素為母核結(jié)構(gòu)的多種乳酸脫氫酶抑制劑。即，異黃樟素和異黃樟素的衍生物在產(chǎn)業(yè)上可用作癲癇治療藥。

附圖說明

圖1是海馬硬化癥模型小鼠(參照實施例)。a：海馬硬化癥模型小鼠的制作方法。b：正常的海馬(左)與呈現(xiàn)海馬硬化癥的海馬(右)的形態(tài)。白色箭頭表示記錄電極的軌跡。c：從海馬硬化癥模型小鼠記錄的癲癇波(三角箭頭)。

圖2表示司替戊醇與異黃樟素對海馬硬化癥模型小鼠的癲癇波的作用(參照實施例)。a：司替戊醇的化學(xué)結(jié)構(gòu)(a1)與司替戊醇對癲癇波的作用(a2)。b：異黃樟素的化學(xué)結(jié)構(gòu)(b1)與異黃樟素對癲癇波的作用(b2)。幾乎未觀察到司替戊醇的抑制作用，而異黃樟素顯示了顯著的癲癇抑制作用。

圖3表示草酰胺酸鈉、司替戊醇與異黃樟素對海馬硬化癥模型小鼠的癲癇波的抑制作用相關(guān)的統(tǒng)計數(shù)據(jù)(參照實施例)。

圖4表示異黃樟素對乳酸脫氫酶(ldh-1,ldh-5)的酶活性的抑制作用(參照實施例)。不存在異黃樟素的情況下的酶活性(對照值)記為100％。即，0％表示乳酸脫氫酶被完全抑制。

圖5表示異黃樟素對乳酸脫氫酶(ldh-5)的酶活性的抑制作用相關(guān)的濃度依賴性數(shù)據(jù)(參照實施例)。異黃樟素的結(jié)構(gòu)式示于上段。圖表的縱軸為抑制率(％抑制)，100％表示乳酸脫氫酶被完全抑制，0％表示完全未抑制。抑制率的計算參照實施例。異黃樟素為500μm則抑制乳酸脫氫酶，為250μm則不會抑制。

圖6表示乳酸脫氫酶的抑制作用比異黃樟素更強的以異黃樟素為母核結(jié)構(gòu)的化合物(參照實施例)。示出了在250μm以下的抑制率(％抑制)為100％(±25％)的化合物。

圖7是圖6所示的以異黃樟素為母核結(jié)構(gòu)的化合物相關(guān)的乳酸脫氫酶的抑制后的濃度(μm)及其抑制率(％抑制)(參照實施例)。

具體實施方式

本發(fā)明提供具以下(a)中記載的乳酸脫氫酶抑制劑以及以該抑制劑為有效成分的(b)中記載的醫(yī)藥品。

(a)含有異黃樟素或以異黃樟素為母核結(jié)構(gòu)的化合物(本說明書中也稱作“異黃樟素類似物”)的乳酸脫氫酶抑制劑。

(b)以(a)中記載的乳酸脫氫酶抑制劑為有效成分的抗癲癇劑。

[化5]

異黃樟素如式(ii)所示，具有在作為芳香環(huán)的1,3-苯并二氧雜環(huán)戊烯的5號位上結(jié)合1-丙烯基而得的化學(xué)結(jié)構(gòu)。另外，表示異黃樟素的式(ii)相當(dāng)于式(iii)中的r^a、r^b、r^c、r^d、r^e、r^f、r^g、r^h均為氫原子時的情況。

另一方面，作為以異黃樟素為母核結(jié)構(gòu)的化合物(異黃樟素類似物)，可例舉例如改變了丙烯基而得的化合物、在作為芳香環(huán)的1,3-苯并二氧雜環(huán)戊烯上結(jié)合官能團而得的化合物。但是，以異黃樟素為母核結(jié)構(gòu)的化合物如果具有乳酸脫氫酶抑制作用則無特別限定，可用作抗癲癇劑。

異黃樟素或異黃樟素類似物是可用式(iii)表示的化合物。式(iii)所示的化合物有時存在多種立體異構(gòu)體，這些立體異構(gòu)體均包含在所示化合物內(nèi)。本發(fā)明中，作為乳酸脫氫酶抑制劑、進一步作為抗癲癇劑的有效成分，可使用多種立體異構(gòu)體的混合物(外消旋體)，也可使用任一種立體異構(gòu)體的純化物。關(guān)于應(yīng)當(dāng)使用外消旋體和各立體異構(gòu)體中的哪一種，只要是本領(lǐng)域技術(shù)人員則能夠根據(jù)需要對各立體異構(gòu)體的有效性進行測試、考慮純化成本，從而適當(dāng)判斷。

[化6]

式(iii)中所含的符號的定義如下所述。某一符號的定義中所用的術(shù)語(例如r^a中的鹵原子)的具體例以及其他說明與其他符號的定義中所用的相同術(shù)語(例如r^b中的鹵原子)相同。

r^a表示氫原子、鹵原子或可被鹵原子取代的烷氧基(-or)。

作為鹵原子的示例，可例舉氟(f)、氯(cl)、溴(br)、碘(i)等。

作為烷氧基的示例，可例舉甲氧基(-och3)、乙氧基(-oc2h5)等來源于碳數(shù)1～4左右的低級醇的基團。烷氧基的氫原子的一部分或全部可被鹵原子取代，也可完全未被取代。烷氧基中的烷基的部分可為直鏈狀，也可為支鏈狀。

r^b表示氫原子、鹵原子、可被鹵原子取代的烷氧基或硝基(-no2)，或者表示與r^c、r^d或r^g共同形成可具有取代基的環(huán)狀結(jié)構(gòu)的基團。

r^c表示氫原子或羧基(-cooh)，或者表示與r^b、r^e·r^f或r^g共同形成可具有取代基的環(huán)狀結(jié)構(gòu)的基團。

羧基也可以是羧化物陰離子(-coo^-)的狀態(tài)。

r^d表示氫原子或-x¹¹-r¹¹，或者表示與r^b或r^g共同形成可具有取代基的環(huán)狀結(jié)構(gòu)的基團。

x¹¹表示亞烷基、-nh-co-、-ch2-nr¹²-co-或-s-。

作為亞烷基的示例，可例舉亞甲基(-ch2-)、亞乙基(-c2h5-)等來源于碳數(shù)1～6左右的低級烷基的二價基團。

r¹¹是可具有取代基的芳基、羧基、可被鹵原子取代的烷基、或羥烷基。

作為芳基的示例，可例舉苯基(-c6h5)、萘基(-c10h9)。

作為芳基所具有的取代基的示例，可例舉鹵原子、可被鹵原子取代的烷基、可被鹵原子取代的烷氧基、羥基、烷硫基(-sr)、羧基、可具有取代基的芳基、可具有取代基的雜芳基、可具有取代基的環(huán)烷基等。取代基的個數(shù)以及取代基的導(dǎo)入部位可為任意，可根據(jù)取代基的性質(zhì)進行適當(dāng)選擇。

作為烷基的示例，可例舉甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、辛基等碳數(shù)1～6左右的低級烷基。烷基可為直鏈狀(正烷基)，也可為支鏈狀(異烷基、新烷基、叔烷基)。烷基的氫原子的一部分或全部可被鹵原子取代，也可完全未被取代。

作為羥烷基的示例，可例舉羥甲基(-ch2oh)、羥乙基(-c2h5oh)等來源于碳數(shù)1～4左右的低級醇的基團。羥烷基中的烷基部分可為直鏈狀，也可為支鏈狀。羥烷基中的羥基個數(shù)以及部位可為任意。

r¹²表示羥烷基。

r^e和r^f分別單獨并相互獨立地表示氫原子、羥基或可被鹵原子取代的烷基，或者同樣地表示＝o、＝nr²¹、＝cr²¹r²²。

r²¹表示羥基，或者表示與r^c或r^g共同形成可具有取代基的環(huán)狀結(jié)構(gòu)的基團。

r²²表示硝基、或與氮原子結(jié)合的2個氫原子可相互獨立地被烷基取代的氨基羰基。

r^g表示氫原子、-x³¹-r³¹、-o-x³²-r³²、-n(-x³³-r³³)(-x³⁴-r³⁴)、-cr³⁵r³⁶r³⁷。

x³¹表示單鍵、亞烯基、-ch2-o-ch2-co-nh-、-ch2-o-ch2-co-或-co-。

作為亞烯基的示例，可例舉1-亞丙烯基(-ch＝ch-ch2-)、2-亞丙烯基(-ch-ch＝ch2-)等來源于碳數(shù)2～6左右的低級烯基的二價基團。碳-碳雙鍵的數(shù)量以及位置可為任意。

r³¹表示可具有取代基的芳基、可具有取代基的雜芳基、可具有取代基的環(huán)烷基、可具有取代基的雜環(huán)氨基、羥基、可被鹵原子取代的烷氧基、或羥烷基。

其中，在x³¹為單鍵、r³¹為可具有取代基的雜環(huán)氨基的情況下，該單鍵與該雜環(huán)氨基的氮原子以外的原子結(jié)合(該規(guī)定是為了避免-x³¹-r³¹與后述的“r³³和r³⁴表示它們與通過作為單鍵的x³³及x³⁴而結(jié)合的氮原子共同形成的可具有取代基的雜環(huán)氨基”的情況下的-n(-x³³-r³³)(-x³⁴-r³⁴)的重復(fù))。

作為雜芳基的示例，可例舉吡啶基(-c5h5n)、吡嗪基(-c4h3n2)、三嗪基(-c3h2n3)、四嗪基(-c2hn4)、吡咯基(-c4h4n)、噻吩基(-c4h3s)、呋喃基(-c4h3o)、1,3-苯并二氧雜環(huán)戊烯基、化合物no.26所具有的基團、化合物no.34所具有的基團。雜芳基所具有的取代基的示例、數(shù)量以及位置與上述芳基所具有的取代基相同。

作為環(huán)烷基的示例，可例舉環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基等碳數(shù)1～6左右的基團。環(huán)烷基所具有的取代基的示例、數(shù)量以及位置與上述芳基所具有的取代基相同。

作為雜環(huán)氨基的示例，可例舉吡咯烷基(-c4h8n)、哌啶基(-c5h10n)、哌嗪基(-c4h9n2)、化合物no.70所具有的基團(參照圖6-10)。雜環(huán)氨基可具有的取代基的示例、數(shù)量以及位置與上述芳基所具有的取代基相同。例如，在雜環(huán)氨基為哌嗪基的情況下，作為其取代基的示例，可例舉可具有取代基(鹵原子、鹵代烷基等)的苯基。

x³²表示單鍵或-ch2-co-nh-。

r³²是可具有取代基的芳基、可具有取代基的雜芳基、可具有取代基的環(huán)烷基或可被鹵原子取代的烷基。

x³³和x³⁴分別獨立地表示單鍵、亞烷基、-ch2-co-nh-或-so2-。

r³³和r³⁴分別獨立地表示氫原子、可具有取代基的芳基、可具有取代基的雜芳基、可具有取代基的環(huán)烷基、羥烷基、羧基、可被鹵原子取代的烷基或炔基，或者表示與r^b、r^c、r^d或r^e·r^f共同形成可具有取代基的環(huán)狀結(jié)構(gòu)的基團，或者r³³和r³⁴表示它們與通過作為單鍵的x³³和x³⁴而結(jié)合的氮原子共同形成的可具有取代基的雜環(huán)氨基。

作為炔基的示例，可例舉2,3-丙炔基(-ch2-c≡ch)等碳數(shù)2～6左右的低級炔基。碳-碳三鍵的數(shù)量以及位置可為任意。

-n(-x³³-r³³)(-x³⁴-r³⁴)所示的r^g表示與r^b、r^c、r^d或r^e·r^f共同形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)的基團的情況下，可以是-x³³-r³³或-x³⁴-r³⁴中的一方與r^b、r^c、r^d或r^e·r^f結(jié)合而形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)、另一方(特別是除氫原子以外)相當(dāng)于與該環(huán)狀結(jié)構(gòu)所含的n結(jié)合的取代基的形式(化合物no.57：參照圖6-8以及化合物no.91：參照圖6-13)，也可以是-x³³-r³³和-x³⁴-r³⁴均與r^b、r^c、r^d或r^e·r^f共同形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)的形態(tài)(化合物no.55：參照圖6-7，包含來源于r³³和r³⁴的雙鍵)。

r³⁵、r³⁶和r³⁷分別獨立地表示氫原子或-x³¹-r³¹，或者表示與r^b、r^c、r^d或r^e·r^f共同形成可具有取代基的環(huán)狀結(jié)構(gòu)的基團。

-cr³⁵r³⁶r³⁷所示的r^g表示與r^b、r^c、r^d或r^e·r^f共同形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)的基團的情況下，可以是選自r³⁵、r³⁶和r³⁷中的1個或2個與r^b、r^c、r^d或r^e·r^f連接而形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)、剩余的基團(特別是除氫原子以外)相當(dāng)于與該環(huán)狀結(jié)構(gòu)所含的c結(jié)合的取代基的形態(tài)(化合物no.54：參照圖6-7，包含來源于r³⁵和r³⁶的雙鍵以及來源于r³⁷的取代基?；衔飊o.59和60：參照圖6-8，包含分別來源于r³⁵以及r³⁶的奎寧環(huán)結(jié)構(gòu)內(nèi)的兩個鍵)。另外，同樣以-cr³⁵r³⁶r³⁷表示的r^g表示與r^b、r^c、r^d或r^e·r^f共同形成如縮合環(huán)的環(huán)狀結(jié)構(gòu)的基團的情況下，選自r³⁵、r³⁶和r³⁷的1個或2個如上所述，可表示與r^b、r^c、r^d或r^e·r^f連接而形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)的一部分(縮合環(huán)的一方)、剩余的基團與形成該環(huán)狀結(jié)構(gòu)的骨架的一個原子連接而形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)的另一部分(縮合環(huán)的另一方)的基團(化合物no.61-65：參照圖6-9)。

r^h表示氫原子或鹵原子，

其中，r^b與r^c共同組成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)、r^b與r^d共同組成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)、r^b與r^g共同組成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)、r^c與r^e·r^f(＝nr²¹或＝cr²¹r²²的r²¹)共同組成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)、r^c與r^g(-n(-x³³-r³³)(-x³⁴-r³⁴)的r³³或r³⁴、或者是-cr³⁵r³⁶r³⁷的r³⁵、r³⁶或r³⁷)共同組成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)、r^d與r^g共同組成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)、r^e·r^f與r^g共同組成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)在式(iii)中最多只形成1個。即，不存在例如同時形成由r^b與r^c共同構(gòu)成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)、以及由r^b與r^d共同構(gòu)成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)的情況，形成前者的情況下，r^d表示氫原子或-x¹¹-r¹¹(不表示與r^b共同形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)的基團)。

另外，r^g為氫原子時，r^e和r^f也限定為氫原子。即，r^g規(guī)定為氫原子是為了使式(iii)所示的化合物中包含r^e、r^f和r^g均為氫原子的異黃樟素及其衍生物，式(iii)所示的化合物中，不包含r^e為羥基、r^f為烷基(叔丁基)、r^g為氫原子的司替戊醇。

作為式(iii)所示的化合物的具體例，可例舉圖6-1～6-13所示的化合物(no.1～94)。其中，具有規(guī)定的環(huán)狀結(jié)構(gòu)(環(huán)bc、環(huán)bd、環(huán)bg、環(huán)cef、環(huán)cg、環(huán)dg或環(huán)efg)的化合物為no.44～94(參照下述對應(yīng)表)，不具有環(huán)狀結(jié)構(gòu)的化合物為no.1～43。對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，化合物no.1～94以及其他的式(iii)所示的化合物均是可獲得的，或者是可通過公知的方法合成的。

[表1]

作為本發(fā)明的優(yōu)選實施方式的一種，可例舉與異黃樟素原本的結(jié)構(gòu)接近且r^e、r^f、r^g均為氫原子、r^c和r^d也為氫原子的異黃樟素或其類似物。即，優(yōu)選式(iii)中的丙烯基的3號位碳原子以及1號位和2號位的碳原子未經(jīng)修飾、僅1,3-苯并二氧雜環(huán)戊烯基部分可被修飾(r^a、r^b、r^h可為氫原子以外的原子)的化合物。

作為本發(fā)明的一種優(yōu)選實施方式，優(yōu)選r^e和r^f同樣地表示＝o、＝nr²¹或＝cr²¹r²²，r^g表示-x³¹-r³¹、-o-x³²-r³²、-n(-x³³-r³³)(-x³⁴-r³⁴)或-cr³⁵r³⁶r³⁷的實施方式，其中多數(shù)化合物所屬的r^e和r^f同樣地表示＝o的實施方式特別優(yōu)選。

作為本發(fā)明的一種優(yōu)選實施方式，可例舉r^b與r^c共同組成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)、r^b與r^d共同組成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)、r^b與r^g共同組成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)、r^c與r^e·r^f共同組成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)、r^c與r^g共同組成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)、r^d與r^g共同組成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)、r^e·r^f與r^g共同組成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)均未在式(iii)中形成的異黃樟素類似物。作為這種異黃樟素類似物的具體例，有異黃樟素以及化合物no.1～44。

作為本發(fā)明的一種優(yōu)選實施方式，可例舉在式(iii)中形成有r^b與r^c共同組成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)、r^b與r^d共同組成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)、r^b與r^g共同組成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)、r^c與r^e·r^f共同組成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)、r^c與r^g共同組成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)、r^d與r^g共同組成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)、r^e·r^f與r^g共同組成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)中的任一種的異黃樟素類似物。

r^b與r^c形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)的情況下，式(iii)可記為下式(iii-bc)。式(iii-bc)中，分別與原本r^b結(jié)合的1,3-苯并二氧雜環(huán)戊烯基上的碳原子以及原本r^c結(jié)合的丙烯基上的碳原子以虛線連接的基團r^bc表示r^b與r^c共同構(gòu)成可具有取代基的環(huán)狀結(jié)構(gòu)(環(huán)bc)的基團，其他符號的定義與式(iii)相同。

[化7]

r^b與r^d形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)的情況下，式(iii)可記為下式(iii-bd)。式(iii-bd)中，分別與原本r^b結(jié)合的1,3-苯并二氧雜環(huán)戊烯基上的碳原子以及原本r^d結(jié)合的丙烯基上的碳原子以虛線連接的基團r^bd表示r^b與r^d共同構(gòu)成可具有取代基的環(huán)狀結(jié)構(gòu)(環(huán)bd)的基團，其他符號的定義與式(iii)相同。

[化8]

r^b與r^g形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)的情況下，式(iii)可記為下式(iii-bg)。式(iii-bg)中，分別與原本r^b結(jié)合的1,3-苯并二氧雜環(huán)戊烯基上的碳原子以及原本r^g結(jié)合的丙烯基上的碳原子以虛線連接的基團r^bg表示r^b與r^g共同構(gòu)成可具有取代基的環(huán)狀結(jié)構(gòu)(環(huán)bg)的基團，其他符號的定義與式(iii)相同。

[化9]

r^c與r^e·r^f形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)的情況下，式(iii)可記為下式(iii-cef)。式(iii-cef)中，分別與原本r^c和r^g結(jié)合的丙烯基上的碳原子以虛線連接的基團r^cef表示r^c與r^e·r^f共同構(gòu)成可具有取代基的環(huán)狀結(jié)構(gòu)(環(huán)cef)的基團，其他符號的定義與式(iii)相同。

[化10]

r^c與r^g形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)的情況下，式(iii)可記為下式(iii-cg)。式(iii-cg)中，分別與原本r^c和r^g結(jié)合的丙烯基上的碳原子以虛線連接的基團r^cg表示r^c與r^g共同構(gòu)成可具有取代基的環(huán)狀結(jié)構(gòu)(環(huán)cg)的基團，其他符號的定義與式(iii)相同。

[化11]

r^d與r^g形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)的情況下，式(iii)可記為下式(iii-dg)。式(iii-dg)中，分別與原本r^d和r^g結(jié)合的丙烯基上的碳原子以虛線連接的基團r^dg表示r^d與r^g共同構(gòu)成可具有取代基的環(huán)狀結(jié)構(gòu)(環(huán)dg)的基團，其他符號的定義與式(iii)相同。

[化12]

r^e·r^f與r^g形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)的情況下，式(iii)可記為下式(iii-efg)。式(iii-efg)中，與原本r^e·r^f和r^g結(jié)合的丙烯基上的同一碳原子以虛線連接的基團r^efg表示r^e·r^f與r^g共同構(gòu)成可具有取代基的環(huán)狀結(jié)構(gòu)(環(huán)efg)的基團，其他符號的定義與式(iii)相同。

[化13]

r^bc、r^bd、r^bg、r^cef、r^cg、r^dg、r^efg分別含有碳原子、氮原子、氧原子或硫原子中的至少一個來作為形成環(huán)bc、環(huán)bd、環(huán)bg、環(huán)cef、環(huán)cg、環(huán)dg、環(huán)efg的骨架的一部分的原子。各環(huán)(環(huán)狀結(jié)構(gòu))優(yōu)選為五元環(huán)、六元環(huán)、七元環(huán)或它們的縮合環(huán)(化合物no.59,60：參照圖6-8(奎寧環(huán)(日文：キヌクリジン)結(jié)構(gòu))、化合物61-65,66-68：參照圖6-9、化合物86,87：參照圖6-12)或螺環(huán)(化合物no.94：參照圖6-13)。形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)的骨架的原子之間可以單鍵、雙鍵或三鍵中的任意方式結(jié)合，環(huán)狀結(jié)構(gòu)可為芳香族性，也可不為芳香族性。

形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)的骨架的各原子可結(jié)合有氫原子或鹵原子，也可結(jié)合有取代基。作為環(huán)狀結(jié)構(gòu)所具有的取代基，可結(jié)合有例如作為上述芳基的取代基而示例的取代基、以雙鍵方式結(jié)合的氧原子或氮原子(化合物no.48-52：參照6-6和6-7)、其他較大的取代基(例如，作為化合物no.45-47,58的r¹的基團：參照圖6-6、作為化合物no.48-52的r⁴的基團：參照圖6-6～6-7、化合物no.55中所示的基團：參照圖6-7、化合物no.58所示的基團：參照圖6-8、作為化合物no.61,64的r³的基團：參照圖6-9)。相當(dāng)于這種取代基的部分(分支部分)也包含于r^bc、r^bd、r^bg、r^cef、r^cg、r^dg、r^efg各自所示的基團的一部分。

作為本發(fā)明的醫(yī)藥品的對象的癲癇的種類無特別限定，為癲癇即可。實施例中，作為其中一個示例，示出了對成人難治性癲癇“海馬硬化并發(fā)的顳葉內(nèi)側(cè)癲癇”具有優(yōu)良的抗癲癇作用的示例。

醫(yī)藥品通常作為醫(yī)藥組合物進行調(diào)制。本發(fā)明的醫(yī)藥品除有效成分之外，還可根據(jù)需要而含有其他藥劑或功能性化合物。例如，可考慮含有用于改善有效成分的體內(nèi)動態(tài)的其他化合物的醫(yī)藥品等。另外，也可含有調(diào)制醫(yī)藥品而所需的賦形劑、稀釋劑、添加劑等。

醫(yī)藥品的劑型、給藥方法無特別限定，可根據(jù)醫(yī)藥品的用途適當(dāng)選擇即可。作為給藥方法，可例舉口服劑型和注射劑型等示例。作為口服劑型，可選擇片劑、膠囊劑、顆粒劑、散劑、干糖漿等。另外，如果是注射劑型，則可考慮用任意的稀釋劑(生理鹽水和葡萄糖液等)溶解而得的制劑。

本發(fā)明的醫(yī)藥品考慮目的、給藥對象(患者)的年齡、性別、體重、疾病程度、給藥路徑等，以適當(dāng)?shù)挠行С煞至亢痛螖?shù)進行給藥即可。如果是醫(yī)師和藥劑師等本領(lǐng)域技術(shù)人員，則可根據(jù)各患者的狀態(tài)來決定給藥量。

實施例

方法

海馬硬化癥模型小鼠的制作與測定(圖1～圖3)：海馬硬化癥模型小鼠的制作按照過往的文獻來進行(非專利文獻15)。在實驗中使用了6-7周的icr小鼠。用氯胺酮(100mg/kg)與甲苯噻嗪(20mg/kg)混合液對小鼠進行充分麻醉后，固定于腦定位固定裝置。在頭部的海馬上方使用微小玻璃電極和漢密爾頓注射器(日文：ハミルトンシリンジ)向背側(cè)海馬(前囟(日文：ブレグマ)后方1.6mm，從中心線向側(cè)方1.6mm，離腦表面的深度1.4mm)注入用于引發(fā)癲癇的微量的紅藻氨酸(0.8nmol,40nl，日文：カイニン酸)，然后在紅藻氨酸注射部位附近埋入用于記錄癲癇腦波的金屬電極(200μm徑)。進一步，由于在體內(nèi)(invivo)電測定中需要進行頭部固定，在頭部安裝小型的塑料制u型框。手術(shù)兩周后，測定了海馬處的癲癇波。頭部通過u型框固定，對癲癇波增幅，通過帶通濾波器(0.5-30hz)進行測定，使用ad轉(zhuǎn)換器導(dǎo)入計算機。測定基線腦波30分鐘后，向腹腔內(nèi)給予司替戊醇(300mg/kg)、異黃樟素(100-300mg/kg)、草酰胺酸鈉(250-500mg/kg)或生理鹽水，記錄了1小時。草酰胺酸鈉溶于水中，司替戊醇與異黃樟素溶于羧甲基纖維素鈉(1％)中，然后給藥至腹腔內(nèi)。數(shù)據(jù)分析中，分別統(tǒng)計給藥前30分鐘與給藥后30分鐘的具有0.5mv以上的振幅的高振幅癲癇波，將給藥前的癲癇波的數(shù)量進行標(biāo)準(zhǔn)化，藉此評價了藥效。海馬硬化癥導(dǎo)致的形態(tài)變化的觀察中，將腦切片為300μm后，用10％福爾馬林固定，并用0.05％的甲酚紫進行了染色。

異黃樟素導(dǎo)致的乳酸脫氫酶的抑制的評價(圖4)：乳酸脫氫酶的活性通過基于nadh的光吸收的通用方法進行了測定。乳酸脫氫酶是使丙酮酸與乳酸相互轉(zhuǎn)換的酶。此時，nadh與nad也相互轉(zhuǎn)換。從乳酸轉(zhuǎn)變丙酮酸時的乳酸脫氫酶活性中，添加乳酸(20mm)、nad(200μm)和乳酸脫氫酶，測定了生成的nadh的反應(yīng)速度。另一方面，從丙酮酸轉(zhuǎn)變?yōu)槿樗釙r的乳酸脫氫酶活性中，添加丙酮酸(1.0mm)、nadh(200μm)和乳酸脫氫酶，測定了減少的nadh的反應(yīng)速度。兩個反應(yīng)均在100mm的磷酸鈉緩沖液(ph7.3)以及37℃的條件下進行，nadh的340nm的光吸收用吸光光度計每隔30秒測定了3.5分鐘，求出了反應(yīng)速度。作為乳酸脫氫酶，研究了兩種人乳酸脫氫酶(人ldh-1,ldh-5)。乳酸脫氫酶的量以兩種乳酸脫氫酶的最大速度大致相同的方式進行設(shè)定，乳酸→丙酮酸的活性為，ldh-1為0.0033單元/ml、ldh-5為0.01單元/ml，丙酮酸→乳酸的活性為，ldh-1為0.0017單元/ml、ldh-5為0.0033單元/ml。對于這些酶反應(yīng)體系，通過添加異黃樟素(500μm)來研究了乳酸脫氫酶的抑制作用。

以異黃樟素為母核結(jié)構(gòu)的乳酸脫氫酶抑制劑的鑒定(圖5～圖7)：nadh的吸光為紫外區(qū)域(340nm)，吸收該波長的化合物的種類多，不適合使用化學(xué)物庫的篩選。此處，為了評價從丙酮酸向乳酸轉(zhuǎn)換的乳酸脫氫酶活性，首先添加丙酮酸(100μm)、nadh(100μm)和乳酸脫氫酶(人ldh-5,0.015u/ml)，在100mm的磷酸鈉緩沖液(ph7.3)中以37℃的條件反應(yīng)60分鐘(ldh酶反應(yīng)，200μl/孔)。在該階段，首先用酶標(biāo)儀測定作為背景的492nm的吸光度(發(fā)色反應(yīng)前的吸光度)。然后，為了測定ldh酶反應(yīng)中殘留的nadh的量，將溶解有黃遞酶(diaphorase)(25u/ml)與int(5mm)的顯色溶液以100μl/孔的量添加，在100mm的磷酸鈉緩沖液(ph7.3)中以37℃的條件反應(yīng)10分鐘(顯色反應(yīng))。int在nadh存在下由于黃遞酶而變化為int甲瓚(formazan)進行顯色，因此用酶標(biāo)儀測定了int甲瓚所具有的492nm的吸光度(顯色反應(yīng)后的吸光度)。為了排除各化合物本身所具有的吸光的影響，將顯色反應(yīng)后的吸光度減去顯色反應(yīng)前的吸光度而得的值作為“吸光度變化值(δa)”進行計算，由δa計算了抑制率。

抑制率(％抑制)的計算如下所述。在乳酸脫氫酶存在的條件下進行上述反應(yīng)時的δa記為“0％對照值”，不存在乳酸脫氫酶的條件下進行上述反應(yīng)時的δa記為“100％對照值”。0％對照條件下，ldh酶反應(yīng)后殘留的nadh少，從而呈現(xiàn)低δa，100％對照條件下不發(fā)生ldh酶反應(yīng)，因此顯示高δa。然后，在以異黃樟素為母核結(jié)構(gòu)的化合物存在的情況下進行與0％對照相同的反應(yīng)，將該δa記為“化合物存在下的δa”。如果對所考察的化合物不具有乳酸脫氫酶抑制作用，則顯示接近0％對照值的低δa，如果具有該抑制作用，則顯示接近100％對照值的高δa。具體而言，抑制率(％)＝100×(化合物存在下的δa-0％對照值)/(100％對照值-0％對照值)，該抑制率為100％(±25％)的化合物作為乳酸脫氫酶抑制劑，記載于圖6和圖7。

異黃樟素和以異黃樟素為母核結(jié)構(gòu)的化合物(no.1-94,參照圖6)按以下方式獲得。異黃樟素與化合物no.1獲自東京化成工業(yè)株式會社(東京化成)、化合物no.2-5及no.7-9獲自sigma公司、化合物no.6獲自bionet公司。另外，化合物no.10-94使用了文部科學(xué)省創(chuàng)藥等支援技術(shù)基礎(chǔ)平臺的化合物庫。對于異黃樟素，如圖5所示，計算了500μm至10μm的各濃度下的抑制率。對于化合物no.1-9，計算了100、50、25、10μm下的抑制率，抑制率為100±25％的最低濃度及其抑制率示于圖7。另外，對于化合物no.10-94，計算了250μm或50μm下的抑制率，所用的濃度及其抑制率示于圖7。

結(jié)果

海馬硬化并發(fā)的顳葉內(nèi)側(cè)癲癇是代表性的成人難治性癲癇(現(xiàn)有藥物無法治療的癲癇)。首先，按照過往的文獻(非專利文獻15)向海馬給予微量的紅藻氨酸，制作了海馬硬化癥模型小鼠(圖1a)。給予紅藻氨酸2周以后，觀察到海馬的形態(tài)變化，椎體神經(jīng)細胞層變細，(圖1b；ca1)、齒狀回變得肥大化(圖1b；dg)。這與已有報告的海馬硬化癥模型小鼠的情況相同(非專利文獻15)，與人海馬硬化癥中的癥狀類似(非專利文獻16)。另外，對該海馬進行記錄，觀察到了自發(fā)產(chǎn)生的高振幅的癲癇波(圖1c；三角箭頭)。即，該海馬硬化癥模型小鼠是如以往研究中報告的慢性癲癇模型。

然后，向該海馬硬化癥模型小鼠的腹腔內(nèi)給予司替戊醇或異黃樟素，研究了抗癲癇作用。從作為小兒抗癲癇藥的司替戊醇(圖2a1)除去3號位的羥基與叔丁基后，得到異黃樟素(圖2b1)。即使向腹腔內(nèi)給予司替戊醇(300mg/kg)，癲癇波也幾乎未得到抑制(圖2a2)。這與司替戊醇僅用作針對小兒癲癇(dravet綜合征)的抗癲癇藥的現(xiàn)狀是一致的。

另一方面，如果像腹腔內(nèi)給予異黃樟素(300mg/kg)，則發(fā)現(xiàn)癲癇波得到顯著抑制(圖2b2)。這些抗癲癇作用相關(guān)的統(tǒng)計數(shù)據(jù)示于圖3。首先，向腹腔內(nèi)給予作為乳酸脫氫酶抑制劑而熟知的草酰胺酸鈉時，500mg/kg的濃度下顯示弱抗癲癇作用(圖3；生理鹽水，n＝7；250mg/kg,n＝7；500mg/kg,n＝7)。根據(jù)以往研究的報導(dǎo)，如果向大鼠的腹腔給予司替戊醇300mg/kg，則藥物誘發(fā)性(戊四唑誘發(fā)性)的急性癲癇發(fā)作得到抑制，此時的血漿濃度為20-100μg/ml(85-427μm)(非專利文獻17)。但是，即使向腹腔內(nèi)給予司替戊醇300mg/kg，對該海馬硬化癥模型小鼠的抗癲癇作用也非常小(圖3；n＝8)。另一方面，如果向腹腔內(nèi)給予異黃樟素，則在200-300mg/kg的情況下觀察到了顯著的抗癲癇作用(圖3；100mg/kg,n＝8；200mg/kg,n＝8；300mg/kg,n＝8)。這些結(jié)果顯示異黃樟素是對于難治性癲癇模型小鼠也具有效果的抗癲癇劑。

然后，通過酶活性測定來研究異黃樟素是否具有乳酸脫氫酶抑制作用。不存在異黃樟素時的乳酸脫氫酶的酶活性記為100％，評價了存在異黃樟素(500μm)時的酶活性。乳酸脫氫酶由兩種亞單元(ldha和ldhb)構(gòu)成，僅由ldha構(gòu)成的是ldh-5，僅由ldhb構(gòu)成的是ldh-1。首先，研究了異黃樟素對于從乳酸向丙酮酸轉(zhuǎn)換的乳酸脫氫酶活性的作用，發(fā)現(xiàn)異黃樟素對于人ldh-1和ldh-5均具有抑制作用(圖4，乳酸→丙酮酸；ldh-1,n＝4；ldh-5,n＝4)。進一步，研究了異黃樟素對于從丙酮酸向乳酸轉(zhuǎn)換的乳酸脫氫酶活性的作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，對于人ldh-1和ldh-5，丙酮酸→乳酸方向的酶活性均被抑制，而且該抑制效果強(圖4，丙酮酸→乳酸；ldh-1,n＝5；ldh-5,n＝6)。這些結(jié)果顯示異黃樟素為乳酸脫氫酶的抑制劑。

最后，從以異黃樟素為母核結(jié)構(gòu)的化合物中尋找了具有乳酸脫氫酶抑制作用的化合物。首先，在各種濃度的異黃樟素下研究乳酸脫氫酶(ldh-5)的抑制率，發(fā)現(xiàn)500μm時抑制乳酸脫氫酶，250μm時不會抑制。另外還尋找了以異黃樟素為母核結(jié)構(gòu)的比異黃樟素更強的乳酸脫氫酶的抑制劑。其結(jié)果是，作為在250μm以下幾乎完全抑制乳酸脫氫酶的“以異黃樟素為母核結(jié)構(gòu)的化合物”，鑒定了以下94種化合物(圖6,圖7)。

94種化合物的詳細情況如下所述(圖6)。首先，化合物no.1-44是在異黃樟素的1-丙烯基的3號位的碳原子上結(jié)合有各種取代基的化合物(圖6-1～6-6)。具體包含以下化合物。丙烯基的3號位形成羰基(式iii的r^e和r^f為＝o)、3號位還結(jié)合有包含芳香環(huán)的取代基(式iii的r^g包含取代或未取代的芳基或雜芳基)的化合物(no.1-9,11-13)。丙烯基的3號位形成肟基(式iii的r^e和r^f為＝nr²¹)、還結(jié)合有芳香環(huán)的化合物(no.14)。丙烯基的3號位形成酯鍵(式iii的r^g為-o-x³²-r³²)的化合物(no.15-17)。丙烯基的3號位形成酰胺鍵(式iii的r^g為-n(-x³³-r³³)(-x³⁴-r³⁴))的化合物(no.18-39)。丙烯基不僅3號位形成羰基、而且1號位和2號位結(jié)合有各種取代基(式iii的r^c和r^d為氫原子以外的原子)的化合物(no.40-43)。通過丙烯基的3號位的碳原子與尿嘧啶結(jié)構(gòu)結(jié)合(r^e和r^f同樣地表示＝cr²¹r²²、且r^e·r^f與r^g共同形成環(huán)狀結(jié)構(gòu))的化合物(no.44)。另外，化合物no.10是司替戊醇的羥基被羰基取代、叔丁基的一個碳原子被羥基取代而得的化合物。此外，化合物no.1-44中的數(shù)種在異黃樟素的1,3-苯并二氧雜環(huán)戊烯基的苯環(huán)的5號位以外還結(jié)合有各種取代基(式iii的r^a、r^b或r^h為氫原子以外的原子)。

然后，化合物no.45-68是異黃樟素的1-丙烯基的2號位與3號位的c-c鍵形成環(huán)結(jié)構(gòu)的一部分(式iii的r^d與r^g共同形成環(huán)狀結(jié)構(gòu))的化合物(圖6-6～6-9)。具體包含以下化合物。通過丙烯基的2號位與3號位的c-c鍵與五元環(huán)結(jié)合的化合物(no.45-58)。五元環(huán)的構(gòu)成元素不僅有碳，還包含由氮·氧·硫構(gòu)成的雜環(huán)。另外，化合物no.45-58的丙烯基的3號位處均形成羰基。還有通過丙烯基的2號位與3號位的c-c鍵與奎寧環(huán)結(jié)構(gòu)結(jié)合的化合物(no.59,60)。通過丙烯基的2號位與3號位的c-c鍵與由五元環(huán)和六元環(huán)構(gòu)成的縮合環(huán)結(jié)合的化合物(no.61-68)。另外，化合物no.61-68的丙烯基的3號位處均形成羰基。此外，化合物no.45-68中的數(shù)種在異黃樟素的1,3-苯并二氧雜環(huán)戊烯基的苯環(huán)的5號位以外也結(jié)合有各種取代基。

進一步，化合物no.69-94是異黃樟素的1-丙烯基的1號位至3號位的c＝c-c鍵形成環(huán)結(jié)構(gòu)的一部分(式iii的r^c與r^e·r^f或r^c與r^g共同形成環(huán)狀結(jié)構(gòu))的化合物(圖6-10～6-12；no.69-87)，或者是由異黃樟素的1-丙烯基的全部或一部分形成三環(huán)化合物(式iii的r^b與r^c、r^b與r^d或r^b與r^g共同形成環(huán)狀結(jié)構(gòu))的化合物(圖6-12～6-13；no.88-94)。具體包含以下化合物。丙烯基的1號位至3號位的c＝c-c鍵形成異唑結(jié)構(gòu)的一部分的化合物(no.69-81)、或者形成噻吩結(jié)構(gòu)的一部分的化合物(no.82)。丙烯基的1號位至3號位的c＝c-c鍵形成雙環(huán)化合物的一部分的化合物(no.83-87)。還有丙烯基的3號位結(jié)合有氮、該氮與1,3-苯并二氧雜環(huán)戊烯基的6號位結(jié)合的三環(huán)化合物(no.88-91)。丙烯基的2號位結(jié)合有硫、該硫與1,3-苯并二氧雜環(huán)戊烯基的6號位結(jié)合的三環(huán)化合物(no.92)。丙烯基的1號位結(jié)合有氮、通過碳鏈與1,3-苯并二氧雜環(huán)戊烯基的6號位結(jié)合的三環(huán)化合物(no.93,94)。以上94種化合物中觀察到了乳酸脫氫酶的抑制活性(圖7)。

如上所述，確認異黃樟素是具有“乳酸脫氫酶抑制作用”、對于司替戊醇無法治療的難治性癲癇也有效的“抗癲癇劑”。另外，確認多種以異黃樟素為母核結(jié)構(gòu)的化合物具有乳酸脫氫酶抑制作用。