本發(fā)明概括地涉及可注射的組合物，并且更具體地涉及用于向面部的下部分增加結構和輪廓的可注射的植入物。皮膚填充劑是可注射的、生物相容性組合物，眾所周知其可以矯正(correct)皺紋和皺褶并且增加面部體積。透明質酸(ha)仍然被許多人認為是最理想的皮膚填充劑之一，因為它沒有引起過敏反應的風險，并且它是暫時和可逆的。絕大多數(shù)基于透明質酸的皮膚填充劑已被專門開發(fā)用于治療皮膚的皺紋和皺褶。為了可用于面部輪廓化(contour)或實質上的增容(volumize)，增加組合物的膨脹(bulking)效果(也稱為“提升”)將是有利的。使組合物對于在面部的軟組織中所發(fā)生的剪切(shear)和正常變形的抗性最大化也是有利的。使這些抗性(例如彈性和內(nèi)聚力)最大化的弊端之一，是可預期在這樣做時，組合物的粘度將增加到它們難以用細針注射的程度。因此，亟需一種可注射的基于ha的植入物，將其特別設計為能有效地增加面部的實質性體積，例如用于輪廓化面部的下部分，例如用于填充(augment)或矯正下巴，例如用于下巴后縮的矯正，或者例如用于填充或矯正鼻子。如果這種植入物盡管具有高的粘度，但仍然易于用細針注射，則是非常有利的。長期以來，下巴的形狀被認為是面部的一個重要特征，它引發(fā)了傾向于與個體的性格特征相關聯(lián)的強的美學感知。通常將缺少凸出的有缺陷的下巴標記為“弱下巴”，而突起的下巴則標記為“強下巴”，這兩者都暗示了個性的強弱。已有幾項研究表明，具有平均比例的面部被認為是最有吸引力的，并且將包括小下巴的小特征視為女性中有吸引力的，而將由于成熟而變寬(expanded)的下巴和下頜視為男性中有吸引力的。下巴的外觀是感知吸引力的決定因素，甚至可能影響個人的社會心理健康狀況。下巴填充通常是通過手術將永久性植入物放置在下頜上方來進行。該手術是目前美國美容整形外科學會(americansocietyforaestheticplasticsurgery)(asaps)所進行的頂級美容外科手術之一，并且自2010年以來已增加了71％。后縮的下巴可能是由于在成熟、外傷或面部衰老期間，面部下端的三分之一的生長發(fā)生了變化而造成的，其中后者(面部衰老)加劇了由于前兩者(成熟和外傷)引起的變形或不對稱。下頜骨的性狀影響嘴部、下巴和頸部。隨著個體衰老，該區(qū)域的骨架支撐的減小使軟組織萎縮明顯、使下臉(jowl)更大、減小下巴突出、并且使下頜外形(jawline)更弱。下巴變形是面部最常見的骨畸形中的一種，其中最常見的是以特征為存在正常垂直高度和后縮的骨下巴的水平小頦。由于下頜骨和下巴構成下部分面部的骨架，因此幾十年來已經(jīng)探索出用于治療年齡相關的下巴后縮和下巴區(qū)域的輪廓變化或者治療小頦的填充方法。當矯正下巴后縮的方法為增加體積時，治療方法包括下巴植入物、頦成形術以及注射硅氧烷和半永久性填充劑，如聚甲基丙烯酸甲酯微球和羥磷灰石鈣(calciumhydroxyapatite)。然而，所有這些治療方法都有弊端。例如，下巴植入物和頦成形術包括疼痛的外科手術，該手術可能不會矯正該區(qū)域的下巴后縮和美學混合。這種方法可能加劇骨質吸收和感染，導致需要移除植入物。注射半永久性填充劑是在與半永久填充劑相關的增容能力和不良事件之間的折衷。技術實現(xiàn)要素：因此，本發(fā)明提供了一種可注射的植入物用于面部雕塑(sculpting)，例如，用于在人的下巴和其他面部特征中填充、矯正、修復或產(chǎn)生體積。本發(fā)明提供了暫時的、可逆的、基于ha的結構凝膠，其被專門制造來提供產(chǎn)生面部體積或面部輪廓的安全的微創(chuàng)方法。相對于其它基于ha的注射劑，本發(fā)明的植入物提供了改善的增容和提升性能，原因是在仍然易于用細針注射的同時，包括高彈性和高粘合性在內(nèi)的機械性能的組合。本發(fā)明植入物可用于注射到皮下和/或骨膜上空間(space)。在許多實施方案中，所述植入物在注射后是可模塑(moldable)的，因此允許對整個注射區(qū)域(例如下巴和下頜(jaw)區(qū)域)進行雕塑、輪廓化和塑形。所述植入物通常包含含有與選自下述交聯(lián)劑交聯(lián)的透明質酸(ha)的組合物，所述交聯(lián)劑選自1,4-丁二醇二縮水甘油醚(bdde)、1,4-雙(2,3-環(huán)氧丙氧基)丁烷、1,4-雙縮水甘油氧基丁烷、1,2-雙(2,3-環(huán)氧丙氧基)乙烯和1-(2,3-環(huán)氧丙基)-2,3-環(huán)氧環(huán)己烷。在一些實施方案中，所述植入物通常包含含有與bdde交聯(lián)的透明質酸(ha)的組合物。所述組合物適合于例如通過細規(guī)格的針頭注射，并且能夠在面部填充、矯正或產(chǎn)生體積或提升，例如在面部的下部分，如下巴或下頜，或者用于面部中部，例如鼻子。在一些實施方案中，ha濃度大于20mg/g。在一些實施方案中，ha濃度為約21mg/g，或約22mg/g，或約23mg/g，或約24mg/g，或約25mg/g，或約26mg/g，或約27mg/g，或約28mg/g，或約29mg/g，或約30mg/g或更大。在其它實施方案中，所述組合物具有的ha濃度為22.5mg/g至27.5mg/g，例如25.0mg/g。在一些實施方案中，在給藥或注射到患者的下巴或下頜外形之后的約9個月至約24個月的時間段內(nèi)，該方法增加了患者的下巴或下頜外形或鼻子的體積和提升(lift)。所述組合物可以是可模塑的，例如通過在注射后一段時間內(nèi)對植入物附近的組織進行物理操作。所述組合物的凝固時間可為植入或注射后約24至約48小時內(nèi)，此時所述組合物不再是可模塑的并且在植入時間內(nèi)基本保持其形狀。在一些實施方案中，所述組合物還包括麻醉劑，例如利多卡因hcl。例如，組合物可以包括約0.3％w/w利多卡因hcl。在優(yōu)選的實施方案中，所述組合物包含在磷酸鹽緩沖液(ph7.2)中的透明質酸凝膠，優(yōu)選地量為約25mg；和鹽酸利多卡因，優(yōu)選地量為約3mg，優(yōu)選地體積補足到1ml。在一些實施方案中，組合物是由低分子量透明質酸和高分子量透明質酸的混合物制成。例如，在用交聯(lián)劑交聯(lián)之前，交聯(lián)的透明質酸可以是由約50％至約100％的低分子量透明質酸制成。在一些實施方案中，在用交聯(lián)劑交聯(lián)之前，交聯(lián)的透明質酸是由約70％至約90％的低分子量透明質酸制成。在一些實施方案中，在用交聯(lián)劑交聯(lián)之前，交聯(lián)的透明質酸是由約90％的低分子量透明質酸制成。在交聯(lián)前主要使用低分子量ha(例如約50％或更大，如約70％或約90％的低分子量ha)，而不是主要使用高分子量ha，來產(chǎn)生更堅固、持續(xù)時間更長、可模塑的水凝膠，其具有更高的粘合性和彈性，尤其是適用于通過皮下或骨膜上注射進行的面部雕塑和填充。在一些實施方案中，ha的交聯(lián)度為約4％至約12％。例如，ha的交聯(lián)度為約4％、或約6％、或約8％、或約10％。在一些實施方案中，ha的交聯(lián)度為約6.5％。在其它實施方案中，ha的交聯(lián)度為約7.5％、或約8.5％、或約9.5％、或約10.5％。在本發(fā)明的另一方面，提供了用于矯正患者下巴后縮的方法。所述方法通常包括在患者的下巴中，通過骨膜上給予有效量的包含bdde交聯(lián)的透明質酸(ha)的組合物，ha的交聯(lián)度為約10％，具有的ha濃度大于20mg/g。例如，在優(yōu)選的實施方案中，ha的濃度為約25mg/g。在具體實施方案中，組合物包含與約10％bdde(w/w)交聯(lián)的低分子量透明質酸(naha)，并且在ph7.2的磷酸鹽緩沖液中，將其配制成濃度為約25mg/g(其中含0.3％鹽酸利多卡因(w/w))，而且在1mlcoc(環(huán)烯烴共聚物)注射器中供應。所述組合物可通過細規(guī)格的針頭擠出，例如針頭的規(guī)格為25g、26g、27g、28g、29g或30g。在具體實施例中，所述針為27g×13mm/27g1/2×26mm。擠出力為以一定速率將所述組合物從其注射器中擠出所需的力(以牛頓n計)。例如，使用所提供的1mlcoc注射器和tsk27g×13mm針頭，將本發(fā)明的一些組合物以約13mm/min擠出時，擠出力可為約4n至約15n，這被認為是非常低的。例如，擠出力可為約7n至約12n，優(yōu)選地約8n至約10n。在本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明提供了用于輪廓化或矯正個體的面部特征(例如，后縮的下巴)的方法。所述方法包括，例如，將有效量的本發(fā)明組合物皮下給藥至患者的治療區(qū)域的步驟，所述有效量為例如約1.0ml或更多，例如約2.0ml或更多，例如約3.0ml或更多，例如4.0ml。待改善或輪廓化的面部特征可為下巴，例如患者的后縮下巴。治療區(qū)域可以包括選自頦前點、頦(mentum)、左下頜前溝、右下頜前溝以及唇下褶痕(sublabialcrease)的區(qū)域。所述治療可包括將所述組合物給予兩個或更多個治療區(qū)域。本文描述的每個特征，以及兩個或更多這樣的特征的每一種組合都將包括在本發(fā)明范圍內(nèi)，條件是包括在這種組合中的特征相互之間沒有不一致。附圖說明圖1示出用于計算患者g-sn-pog角度的面部輪廓和特征點(landmark)。圖2示出平均下巴的burstone角度。具體實施方式在本說明書中使用的某些術語旨在表示如下文詳細描述的以下定義。在術語的定義偏離該術語的常用含義的情況下，除非特別指出，否則申請人意欲使用下文所提供的定義。數(shù)值范圍中的術語“約”容易為本領域技術人員所理解，其優(yōu)選地表示特定值可以+/-10％改變。關于范圍的終點，修飾詞“約”優(yōu)選地表示下端點(lowerendpoint)可以減少10％，上端點(upperendpoint)增加10％。還想到的是，本申請中公開的每個數(shù)值或范圍可以是絕對的，即可刪除修飾詞“約”。在本文中，表示ha的“分子量”的所有數(shù)字應理解為表示以道爾頓(daltons)為單位的重均分子量(mw)。ha的分子量是由固有粘度測量，使用以下markhouwink關系式計算的：固有粘度(l/g)＝9.78×10-5×mw0.690根據(jù)歐洲藥典(ha專論號1472，01/2009)中規(guī)定的方法，測量固有粘度。除非另有說明，分子量指的是重均分子量(mw)。用于制備本發(fā)明組合物的ha可包含高分子量ha、低分子量ha和/或中等分子量ha的混合物，其中高分子量ha的分子量大于約2,000,000da(或固有粘度大于2.2l/g)，其中低分子量ha的分子量小于約1,000,000da(或固有粘度小于1.4l/g)。例如，本發(fā)明組合物中的高分子量ha的平均分子量可為約2mda至約4.0mda，例如約3.0mda(2.9l/g)。在另一個實例中，高分子量ha的平均分子量可為約2.4mda至約3.6mda，例如約3.0mda。高分子量ha的固有粘度可為大于約2.2l/g，例如約2.5l/g至約3.3l/g。低分子量ha的分子量可為約200,000da(0.2mda)至小于1.0mda，例如約300,000da(0.3ma)至約750,000da(1.1l/g)，最高可以達到但不超過0.99mda(1.4l/g)。低分子量ha的固有粘度可為小于約1.40l/g，例如約0.6l/g至約1.2l/g。優(yōu)選地，低分子量ha材料和高分子量ha材料的分子量分布之間不存在重疊。優(yōu)選地，低分子量ha和高分子量ha的混合物具有雙峰分子量分布。所述混合物也可具有多峰分布。在本發(fā)明的一個方面，所述組合物包含具有高分子量組分和低分子量組分的ha，并且高分子量組分的重均分子量是低分子量組分的重均分子量的至少兩倍。本文所用的“交聯(lián)度”指的是將單個ha聚合物分子或單體鏈連接成永久性結構，或如本文所公開的軟組織填充劑組合物的分子間連接。此外，對于本公開內(nèi)容而言，將交聯(lián)度進一步定義為在基于ha組合物的交聯(lián)部分內(nèi)，交聯(lián)劑與ha-單體單元的重量百分比。其是通過交聯(lián)劑與ha單體的重量比進行測量。如本文所用的“未交聯(lián)的ha”指的是未交聯(lián)的單個ha聚合物分子。未交聯(lián)的ha通常保持水溶性。在所述組合物中也可任選地包括未交聯(lián)的ha組分，例如用作潤滑劑以及有利于注入面部組織。這種組合物可包含未交聯(lián)的ha級分，其中所添加的未交聯(lián)的ha以約0.1mg/g至約3mg/g的濃度存在。優(yōu)選地，未交聯(lián)的ha可以約0.2mg/g至約1.5mg/g的濃度存在。在其它實施方案中，所述凝膠中不存在未交聯(lián)的ha，或者至少未向凝膠中加入未交聯(lián)的ha以用作潤滑劑。本文所述的組合物顯示出高水平的彈性，其表示為彈性模量(g')值，該數(shù)值是通過使用錐板系統(tǒng)的應變?yōu)?.8％的振蕩流變學，以及在一定頻率范圍下測量的。在一些實施方案中，在5hz頻率下測量的組合物的彈性模量為約500pa至約900pa。在基于ha的皮膚填充劑的情況下，這被認為是高彈性的，并且通過使植入物對于剪切變形更具有抗性而有助于提升效果。粘合性指的是凝膠保持附著于其自身的能力，例如，意指對切割的抗性，以及在不將其分離成片狀的情況下伸長或壓縮凝膠的能力。根據(jù)本發(fā)明，所述凝膠的粘合性可以如下量化(參見derekjones“injectablefilers：principlesandpractice”，wiley，2011，第3章)。將小的凝膠樣品(例如1ml)放置在流變儀的平面上。放置所述樣品以使得其形成一個小堆(heap)。將可移動的上板放置在樣品上，使得樣品被完全覆蓋，例如，當以垂直于流變儀表面的方向觀察所述板時，不能看到樣品。為了確保這一點，必須選擇比樣品尺寸大的板尺寸。理想地，將板的中心放置在樣品上。通常，對于1ml凝膠材料，使用25mm直徑的上板。在所述測量的下一步驟中，將可移動板和表面之間的間隙調整到2.5mm。在2分鐘內(nèi)，將所述板從該初始位置緩慢地且穩(wěn)定地移動到間隙寬度為0.9mm時，記錄樣品在法向方向(normaldirection)上施加的力(fn)。一旦間隙寬度達到0.9mm，該系統(tǒng)可以松弛12分鐘。在此期間，測量繼續(xù)。進行五次測量。為了使測得的力歸一化，將測試開始時測量的所有5個初始fn值取平均值(算術平均值)，并從所有其他數(shù)據(jù)點中減去所得到的平均值。將在該測試的壓縮部分結束時(當達到上板和平面之間的最小0.9mm間隙寬度時)的最大力稱為壓縮力，并且該壓縮力為用于確定凝膠粘度的特征值。具體地，20gmf(0.1962n)或更大的力表示本發(fā)明意義上的粘合性材料。在本發(fā)明的上下文中，認為具有較低的壓縮力值的凝膠通常不具有粘合性。測量的準確度的量級為約5gmf。在本發(fā)明的上下文中，可注射制劑具有至少約60gmf，例如約60至約200gmf的高粘合性。例如，在優(yōu)選的實施方案中，粘合性為約60至約100gmf，其將賦予植入物對于面部軟組織中壓力和法向力(normalforce)的高的抗性。在皮膚填充劑的內(nèi)容中，如上定義的粘合性將有助于臨床上由凝膠提供的提升能力(臨床稱為增容/膨脹效果)及其彈性模量g'。雖然粘合性凝膠可以顯示出良好的增容效果，但具有相似彈性模量的非粘合性或弱粘合性材料則表現(xiàn)出較低的提升能力，這是因為在進行垂直壓縮時，非粘合性凝膠材料與具有更大粘合性的材料相比擴散得更多。在本發(fā)明的上下文中，所述組合物表現(xiàn)出高水平的彈性模量和高水平的粘合性，以使植入時的提升效果最大化。在某些有利的、示例性實施方案中，本發(fā)明的植入物或填充劑通常包含粘合性的無菌組合物，其可以通過皮下或骨膜上植入到需要其的患者的下巴區(qū)域、鼻子或下頜外形中，例如需要改善的面部輪廓或更強的下巴的患者。所述組合物通常包含與1,4-丁二醇二縮水甘油醚(bdde)交聯(lián)的交聯(lián)透明質酸(ha)；并且所述組合物的ha濃度大于20mg/g。例如，在一些實施方案中，ha濃度為約22.5mg/g，或約25mg/g，或約27.5mg/g。用于交聯(lián)的ha可以由低分子量透明質酸和高分子量透明質酸的混合物制成。在一些實施方案中，所述組合物在5hz下的彈性模量為約500pa至約900pa，并且粘合性大于約60gmf。有利地，在一些實施方案中，使用1mlcoc注射器和27g×13mm針頭時，所述組合物的擠出力在13mm/min下為約4n至約15n。在本發(fā)明的一個方面，相對于市售的基于ha的皮膚填充劑而言，提供了具有改善的提升能力的可注射的基于ha的植入物。在本公開內(nèi)容的某些實例下，本發(fā)明的植入物也可稱作皮膚填充劑和皮下填充劑。本發(fā)明的植入物和填充劑是基于透明質酸(ha)和ha的藥學上可接受的鹽(例如透明質酸鈉(naha))。也提供了制備這些組合物的方法以及這些組合物的使用方法。如在本文中使用的，透明質酸(ha)可以指其任意的透明質酸鹽，并且包括但不限于透明質酸鈉(naha)、透明質酸鉀、透明質酸鎂、透明質酸鈣及其組合。ha及其藥學上可接受的鹽均可用于本發(fā)明。此外，在具有麻醉劑的實施方案中，一種或多種麻醉劑的濃度為在注射所述組合物時有效緩解所經(jīng)歷的疼痛的量。至少一種局部麻醉劑可選自氨部卡因(ambucaine)、阿莫拉酮(amolanone)、阿米卡因(amylocaine)、丁氧普魯卡因(benoxinate)、苯佐卡因(benzocaine)、貝托卡因(betoxycaine)、苯柳胺酯(biphenamine)、布比卡因(bupivacaine)、布他卡因(butacaine)、氨苯丁酯(butamben)、布坦卡因(butanilicaine)、丁胺卡因(butethamine)、丁托西卡因(butoxycaine)、卡替卡因(carticaine)、氯普魯卡因(chloroprocaine)、己基苯酰愛康因(cocaethylene)、可卡因(cocaine)、環(huán)美卡因(cyclomethycaine)、地布卡因(dibucaine)、奎尼卡因(dimethisoquin)、二甲卡因(dimethocaine)、地哌冬(diperodon)、雙環(huán)維林(dicyclomine)、去水芽子堿(ecgonidine)、芽子堿(ecgonine)、氯乙烷、依替卡因(etidocaine)、β-優(yōu)卡因(beta-eucaine)、尤普羅辛(euprocin)、非那可明(fenalcomine)、formocaine、?？丝ㄒ?hexylcaine)、羥丁卡因(hydroxytetracaine)、對氨基苯甲酸異丁酯、亮氨卡因甲磺酸酯、左沙屈爾(levoxadrol)、利多卡因(lidocaine)、甲哌卡因(mepivacaine)、美普卡因(meprylcaine)、美布卡因(metabutoxycaine)、氯甲烷、麥替卡因(myrtecaine)、納依卡因(naepaine)、利多卡因(octocaine)、奧索卡因(orthocaine)、奧昔卡因(oxethazaine)、對乙氧卡因(parethoxycaine)、非那卡因(phenacaine)、苯酚、哌羅卡因(piperocaine)、匹多卡因(piridocaine)、聚乙二醇單十二醚(polidocanol)、普拉卡因(pramoxine)、丙胺卡因(prilocaine)、普魯卡因(procaine)、丙泮卡因(propanocaine)、丙對卡因(proparacaine)、丙哌卡因(propipocaine)、丙氧卡因(propoxycaine)、假可卡因(pseudococaine)、吡咯卡因(pyrrocaine)、羅哌卡因(ropivacaine)、水楊醇、丁卡因(tetracaine)、托利卡因(tolycaine)、三甲卡因(trimecaine)、佐拉敏(zolamine)及它們的鹽。在一個實施方案中，所述至少一種麻醉劑為例如以利多卡因hcl形式的利多卡因。本文所述的組合物可具有的利多卡因濃度為所述組合物的約0.1重量％至約5重量％，例如所述組合物的約0.2重量％至約1.0重量％。在一個實施方案中，所述組合物具有的利多卡因濃度為所述組合物的約0.3重量％(w/w％)。本文所述組合物中利多卡因的濃度可以是治療有效的，這意指濃度足以提供治療益處而不對患者造成傷害。本發(fā)明組合物可通過以下步驟制備：提供例如naha纖維形式的純化的ha材料；使ha材料水合，所述ha材料具有所需的分子量，例如所需比例的低分子量和高分子量ha的混合物；并使所需比例的水合的ha材料與合適的交聯(lián)劑交聯(lián)，以形成交聯(lián)的基于ha的凝膠。然后可以將凝膠中和并且溶脹。如果需要，可以加入含有利多卡因(優(yōu)選利多卡因鹽酸鹽的酸性鹽)的溶液，以形成ha/利多卡因凝膠?？梢岳缤ㄟ^用剪切力打漿或混合使凝膠勻化。然后將勻化的組合物裝入注射器中。然后在有效溫度和壓力下，將注射器通過高壓滅菌消毒。例如，通過高壓滅菌對組合物進行滅菌，例如在至少約120℃至約130℃的溫度和/或至少約12磅/平方英寸(psi)至約20psi的壓力下，暴露至少約1分鐘至約15分鐘的時間段。將滅菌的注射器與細針頭一起包裝，以供醫(yī)生使用。更具體地，最初的ha原材料可以包含naha的纖維或粉末，例如細菌來源的naha纖維?；蛘?，ha材料可以為動物來源，例如來自公雞冠。應到想到的是，ha材料可為包括ha的原材料和至少一種其它多糖(例如另一種糖胺聚糖(gag))的組合。在一種制造所述組合物的方法中，將純的干燥的naha纖維在堿性溶液中水合以產(chǎn)生未交聯(lián)的naha凝膠。在該步驟中，任何合適的堿性溶液均可用于水合naha，例如但不限于含有氫氧化鈉(naoh)、氫氧化鉀(koh)、碳酸氫鈉(nahco3)、氫氧化鋰(lioh)等的水性溶液。所得的堿性凝膠的ph將大于7.5。所得的堿性凝膠的ph可以具有大于9的ph，或大于10的ph，大于12的ph或大于13的ph。所述制造過程中的下一步驟可包括用合適的交聯(lián)劑來交聯(lián)水合的堿性naha凝膠的步驟。交聯(lián)劑可以是已知的適用于使多糖及其衍生物通過其羥基進行交聯(lián)的任何試劑。一種特別合適的交聯(lián)劑為1,4-丁二醇二縮水甘油醚(bdde)。在另一個實施方案中，在ha纖維水合期間，通過在含有交聯(lián)劑(例如bdde)的堿性溶液中使組合的高分子量和低分子量纖維發(fā)生水合，來完成ha的交聯(lián)。在本發(fā)明組合物的ha組分中，交聯(lián)度為至少約4％，并且最高達約12％bdde/ha，w/w，例如約10％，例如約8％，例如約6％，例如約4％。在一個具體實施方案中，交聯(lián)度為約6.5％。在一些實施方案中，ha的交聯(lián)度為約6.5％。在其它實施方案中，ha的交聯(lián)度為約7.5％、或約8.5％、或約9.5％、或約10.5％?？蓪⑺系慕宦?lián)的ha凝膠溶脹以獲得所需的ha濃度。該步驟可通過中和交聯(lián)的水合ha凝膠來實現(xiàn)，例如通過加入含有酸如hcl的水溶液。然后將凝膠在磷酸鹽緩沖鹽水(pbs)溶液中于低溫下溶脹足夠的時間。目前可以通過常規(guī)方法來純化凝膠，例如用磷酸鹽緩沖液透析或醇沉淀來以回收交聯(lián)的材料，以穩(wěn)定材料的ph并移除任何未反應的交聯(lián)劑?？梢约尤腩~外的水或微堿性水溶液以使所述組合物中ha的濃度達到所需濃度。在一些實施方案中，將所述組合物的ha濃度調節(jié)至大于20mg/g，例如至約25mg/g。在其它實施方案中，對ha進行濃度調整以得到約21mg/g，約22mg/g，約23mg/g，約24mg/g，約26mg/g，約27mg/g，約28mg/g，約29mg/g或約30mg/g的ha濃度。在其中最終組合物中包括有麻醉劑(例如利多卡因)的實施方案中，可以調節(jié)純化的交聯(lián)ha凝膠的ph以使所述凝膠成為微堿性，以使得所述凝膠的ph值為大于約7.2，例如約7.5至約8.0。該步驟可以通過任何合適的方法實現(xiàn)，例如通過向凝膠加入適量的稀naoh、koh、nahco3或lioh，或任何其它堿性分子、溶液和/或緩沖組合物。然后將有效量的麻醉劑(例如利多卡因，如利多卡因hcl)加入到純化的交聯(lián)naha凝膠中。例如，在一些實施方案中，將利多卡因hcl以可使用注射用水(wfi)而溶解的粉末形式提供。為了最終的ha/利多卡因組合物具有所需的、基本上中性的ph，采用緩沖液或通過采用稀釋的naoh進行調節(jié)，使所述凝膠保持中性。包含利多卡因的最終組合物可具有的利多卡因濃度為所述組合物的至少約0.1重量％至約5重量％，例如約2重量％，或在另一實例中約0.3重量％。在加入利多卡因hcl后，或者在加入利多卡因hcl期間，使ha/利多卡因凝膠或組合物勻化，以產(chǎn)生具有所需一致性(consistency)和穩(wěn)定性的高度均勻的ha/利多卡因凝膠。優(yōu)選地，勻化步驟包括用受控的剪切力混合、攪拌或打漿凝膠，以獲得基本均勻的混合物。在使ha組合物勻化之后，可將一定量的未交聯(lián)的ha溶液或凝膠加入到所述組合物中以增加潤滑性。在一些實施方案中，在勻化后，不將未交聯(lián)ha的溶液加入到所述組合物中。然后將所述組合物引入注射器并滅菌。根據(jù)本說明書，可使用的注射器包括本領域中已知的能夠遞送粘性皮膚填充劑組合物的任何注射器。注射器的內(nèi)部體積通常為約0.4ml至約3ml，更優(yōu)選地約0.5ml至約1.5ml或約0.8ml至約2.5ml。該內(nèi)部體積與注射器的內(nèi)徑相關聯(lián)，所述內(nèi)徑在注射高粘性皮膚填充劑組合物所需的擠出力中發(fā)揮關鍵性作用。所述內(nèi)徑通常為約4mm至約9mm，更優(yōu)選地為約4.5mm至約6.5mm，或約4.5mm至約8.8mm。此外，從注射器遞送ha組合物所需的擠出力還取決于針頭規(guī)格。所使用的針頭規(guī)格通常包括約18g至約40g，更優(yōu)選地約25g至約33g或約25g至約30g的規(guī)格。例如，在一些實施方案中，將所述組合物裝入1ml注射器中并使用27g針頭注射。一種優(yōu)選的預裝注射器(filledsyringe)的滅菌方法是通過高壓滅菌器。高壓滅菌可通過將熱量、壓力和濕氣(moisture)的混合施加到需要滅菌的樣品上來實現(xiàn)。許多不同的滅菌溫度、壓力和循環(huán)時間可用于此步驟中。例如，預裝注射器可以在至少約120℃至約130℃或更高的溫度下滅菌?？赡芾没蚩赡懿焕脻駳?。在一些實施方案中，所施加的壓力取決于滅菌過程中所用的溫度。滅菌周期可為至少約1分鐘至約20分鐘或更長。滅菌的另一種方法包括使用已知的可殺死或消除可傳染源的氣態(tài)物質。優(yōu)選地，將環(huán)氧乙烷用作滅菌氣體，并且本領域中已知其可用于消毒醫(yī)療器械和產(chǎn)品。滅菌的另一種方法包括使用本領域中已知的用于殺死或消除可傳染源的輻射源。輻照束以含有ha組合物的注射器為目標，并且能量波長殺死或消除不需要的可傳染源。優(yōu)選地，可使用的能量包括但不限于紫外線(uv)光、γ照射、可見光、微波或任何其它波長或波段(其殺死或消除不想要的可傳染源)，優(yōu)選地基本上不改變或降解ha組合物。優(yōu)選地，在將本發(fā)明組合物長時間儲存時，其也保持穩(wěn)定。例如，在在約2至25攝氏度的溫度下儲存時，許多本發(fā)明組合物的貯存期限為約6個月、約12個月、約18個月或約24個月或更長。在一個具體實施方案中，在2至25攝氏度的溫度下，所述組合物在至少18個月的時間段內(nèi)是穩(wěn)定的。在另一個具體實施方案中，在2至25攝氏度的溫度下，所述組合物在至少24個月的時間段內(nèi)是穩(wěn)定的。用于注射本發(fā)明組合物的技術可以根據(jù)傾斜的角度和取向以及給藥量而變化。通常，將本發(fā)明的組合物以皮下注射和/或骨膜上注射以增加下巴凸出，同時限制對頦前點、頦(下巴的下面)、下頜前溝(左和右)、以及唇下(頦的)褶痕的治療以達到最佳的矯正和美觀的下巴輪廓。合適的注射體積將由研究者確定，但對于初始和補充治療的組合，一般不超過約4.0ml的最大總體積。對于反復治療，允許總計約4.0ml。在任何治療期間(treatmentsession)，允許將不超過約2.0ml注射到單個治療區(qū)域，其中治療區(qū)域被定義為頦前點、頦、下頜前溝(左和右)、以及唇下(頦的)褶痕。在注射本發(fā)明組合物之前，治療區(qū)域必須徹底消毒，以確?？勺⑸涮畛鋭┎粫患毦虍愇?例如化妝品、手套的滑石粉)污染。然后，應該將所提供的27g1/2”/27g×13mm的針頭連接到注射器(根據(jù)使用指南)。在注射本發(fā)明的組合物之前，必須將柱塞桿(plungerrod)壓下直到可以看見產(chǎn)品流出針頭并且在無菌紗布上擦拭任何過量的產(chǎn)品。本發(fā)明的組合物按如下方式注射：緩慢注射本發(fā)明的組合物，并觀察皮膚的顏色變化或變色的跡象。觀察受試者的疼痛或不適。以平穩(wěn)和測量的方式注射本發(fā)明的組合物。插入針頭時應留意注射部位的局部血管解剖結構。抽吸(aspirate)以確保沒有血液回流，其表明針的尖端在血管內(nèi)的位置。可以使用多次小推注，對頦前點進行骨膜上注射?？梢允褂枚啻涡⊥谱?，對頦進行骨膜上注射?？梢允褂蒙顚悠は律刃?deepsubcutaneousfanning)技術，對下頜前溝(左和右)進行注射?？梢允褂弥本€的、逆行或順行的淺表性皮下線形(superficialsubcutaneousthreading)法，對唇下(頦的)褶痕進行注射。在治療完成時，可輕輕按摩治療部位，以確保產(chǎn)品均勻分布，并適合周圍組織的輪廓。如果發(fā)生過度矯正，請輕輕按摩手指之間或骨骼上方的區(qū)域，以獲得最佳效果。不要將本發(fā)明的組合物注入血管中(血管內(nèi))。將透明質酸引入血管可能堵塞血管，并可能導致梗死或栓塞。血管閉塞和栓塞的癥狀包括，與操作不成比例的或遠離注射部位的疼痛，延伸超出注射區(qū)域且可呈現(xiàn)出血管分支分布的立即性發(fā)白(blanching)，以及反映缺血性組織(例如暗灰的外觀或網(wǎng)狀外觀)的顏色變化。在小面積上過于淺表地或大量地注射所述產(chǎn)品都可導致可見的且持久的結塊(lump)和/或變色。當使用逆行性技術時，注射本發(fā)明的組合物時，將壓力均勻地施加在柱塞桿上，同時緩慢地將針頭向后拉。重要的是，正好在針頭穿過皮下/皮膚界面之前停止注射，以防止物質滲出或在皮膚的過于淺表處結束。當使用順行性技術時，在注射開始之前，確保針頭位于皮下組織中。如果針頭被堵塞，不要增加柱塞桿上的壓力，而是停止注射并更換針頭。如果在注射后治療區(qū)域立即腫脹，則可將冰袋短時間地施用于該部位。如果受試者報告持續(xù)1周以上的炎癥反應，或發(fā)生了任何其他的副作用，醫(yī)生應采取適當?shù)闹委?。在?yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的組合物包含在磷酸鹽緩沖液(ph7.2)中的透明質酸凝膠，優(yōu)選地其量為約25mg；和鹽酸利多卡因，優(yōu)選地其量約為3mg，優(yōu)選地體積補足到1ml，將其預裝于例如1ml一次性注射器中，其中透明質酸凝膠與bdde交聯(lián)?？蓪⑦@種預裝的例如1ml一次性注射器以及兩支一次性針頭(例如27g1/2”/27g×13mm針頭)容納于一個試劑盒(泡罩包裝)中。注射器的內(nèi)容物可通過濕熱法(moistheat)進行滅菌。一次性針頭可通過輻射滅菌。本發(fā)明的組合物為旨在用于修復和產(chǎn)生面部體積(例如在下巴和下頜區(qū)域中)的可注射植入物。利多卡因的存在是為了在治療期間減輕受試者的疼痛。實施例1根據(jù)本發(fā)明實施例的可注射植入物的制備稱取預先干燥的分子量為約0.9mda的透明質酸鈉(naha)纖維(0.9g)到第一容器中。稱取預先干燥的分子量為約3.0mda的naha纖維(0.1g)到第二容器中。在20℃至50℃下，將兩種不同等級的naha合并，并且在1％氫氧化鈉溶液中進行稀釋，混合1至2小時，以獲得基本均勻的堿性ha凝膠。在單獨的容器中，將所選擇的交聯(lián)劑1,4-丁二醇二縮水甘油醚(bdde)在1％氫氧化鈉溶液中稀釋至終濃度為10％bdde(wt/wt)。向堿性ha凝膠中加入10％(wt/wt)bdde(1g預先制備的bdde溶液)。將所得混合物進行機械勻化。然后所述混合物在50℃下保持3至4.5小時。隨后將所得的交聯(lián)的ha聚合物浸入含有鹽酸的磷酸鹽緩沖液(pb)中以穩(wěn)定ph。之后將如此獲得的交聯(lián)的ha聚合物浸入磷酸鹽緩沖液的浴液中，以除去未反應的交聯(lián)劑和ha，從而提供純的水凝膠，其中交聯(lián)度為約6.5％。任選地，在1升磷酸鹽緩沖液中，將具有高分子量的干ha材料水合以獲得未交聯(lián)的ha凝膠。這種未交聯(lián)的ha凝膠可被加入到交聯(lián)的ha組合物中，以占總ha濃度的最高達5％(w/w)。然后將所得的水凝膠進行機械勻化以確保最終的均勻性，并將其裝入已經(jīng)在高壓滅菌器中滅菌過的注射器中。所得的凝膠為可以通過細規(guī)格針頭(例如27規(guī)格)進行皮下或骨膜上給藥的可注射組合物。該組合物可用于修復、輪廓化(contour)或產(chǎn)生面部體積(例如在人的下巴、下頜區(qū)域或鼻子中)，如本文別處所記載的。在本發(fā)明的一個方面，提供了用于改善患者面部輪廓的方法。例如，在一些實施方案中，提供了用于改變?nèi)说膅-sn-pog面部角度的方法，例如用于增加人的g-sn-pog面部角度。例如，在一些實施方案中，提供了用于矯正患者的下巴后縮的治療方法。在本發(fā)明的一些實施方案中，所治療的患者的初始的治療前g-sn-pog面部角度為小于約165°。治療后，所述患者的g-sn-pog面部角度增加，即面部角度大于初始的治療前的面部角度。在一個實施方案中，在給藥步驟后，所述患者的g-sn-pog面部角度為約169°或更大。g-sn-pog角度可使用常規(guī)設備和計算進行測量，例如，可使用canfield科學面部成像設備，基于由患者的數(shù)字圖像得到的面部角度的計算。圖1示出了用于計算患者的g-sn-pog角度的面部輪廓和特征點，使用已知方法可將其用于來診斷或確定下巴后縮的存在和/或程度。所述方法通常包括向患者面部的至少一個治療區(qū)域，給予有效量的這樣一種組合物，所述組合物包含bdde交聯(lián)的透明質酸(ha)，ha的交聯(lián)度為約6.5％或約10％，并且所述組合物具有大于20mg/g的ha濃度。在一些實施方案中，提供了治療方法，所述方法包括將組合物(例如本文所述)通過骨膜上給予至患者面部的至少一個治療區(qū)域中，其中患者的g-sn-pog面部角度為145°至165°。面部角度值可基于對由患者的數(shù)字圖像得到的面部角度的計算或者使用其他技術得到的面部角度的計算。根據(jù)一些實施方案，相對于治療前(例如在臨給藥步驟之前)患者的g-sn-pog面部角度，給藥的步驟會使所述患者的g-sn-pog面部角度增加。在一些實施方案中，在給藥步驟后的一段時間，至少約3個月，或更優(yōu)選至少約6個月，例如約9個月至約24個月，所述患者具有增加的g-sn-pog角度。例如，在給藥步驟后的至少約6個月，或至少約9個月，或至少約12個月或至少約18個月或至少約24個月，所述患者具有增加的g-sn-pog角度。在一些實施方案中，治療區(qū)域是選自以下的區(qū)域：頦前點、頦、左下頜前溝、右下頜前溝，以及唇下褶痕。治療可以包括將組合物給予兩個或更多治療區(qū)域。所述給藥包括將組合物按每個治療區(qū)域約0.5ml至約3.0ml的量進行骨膜上或皮下注射。在一些實施方案中，注入給定治療區(qū)域的量不超過2.0ml。在一些實施方案中，在單個治療期間——所有治療區(qū)域中——注射的總量為2.0ml至約6.0ml，例如約2.5ml，約3.0ml，約3.5ml，約4.0ml，約4.5ml，約5.0ml，約5.5ml或約6.0ml。在一些實施方案中，在單個治療期間的給藥量為約4.0ml或更少。下巴和下頜中體積的修復或產(chǎn)生在一個方面，本發(fā)明提供了在下巴和下頜中修復或產(chǎn)生體積的方法，例如對整個面部特定治療區(qū)域的雕塑、塑形和輪廓化。治療區(qū)域可以包括一個或多個頦前點(下巴前表面上最突出的點)、頦(下巴的最低點)、左下頜前溝和右下頜前溝(左側靠近下頜角點的凹槽(leftantigonionnotch)和右側靠近下頜角點的凹槽(rightantigonionnotch))、以及唇下(頦的)褶痕(下唇和頦之間的褶痕)。下巴的形狀和凸出有助于作為吸引力基礎的面部的成比例平衡。通常將缺少凸出的下巴標記為“弱下巴”，而凸出的下巴則標記為“強下巴”并且暗示了個性的強弱。已有幾項研究表明，具有平均比例的面部被認為是最有吸引力的，并且將包括小下巴的少年特征視為女性中有吸引力的，而將強的下巴和下頜視為男性中有吸引力的。下巴的外觀是感知吸引力的決定因素，并且可能影響個人的社會心理健康狀況。平均比例是通過對群體中的面部輪廓的示意圖分析來規(guī)定的，并且包括鼻子、唇部和頦之間的距離和角度。在頭部測量分析中已經(jīng)使用了幾個軟組織特征點以測量和診斷與平均面部參數(shù)相比的下巴前突(protrusion)和后縮偏離。對于面部上部分和面部前下部分的交點和由眉間點、鼻中隔下點和頦前點(g-sn-pog)上的點而形成的角度進行廣泛的分析，以了解人群中常見的平均下巴凸出。已將平均下巴的burstone角度(圖2)定義為大約169°，并且近似角度(168°至169°)已在幾項研究中得到確認。與平均下巴的偏差增加將產(chǎn)生面部不具有吸引力的感知。分析面部輪廓與吸引力感知之間的關系表明，下巴突起在這種感知中發(fā)揮著重要的作用。為了理解下巴突起程度和吸引力之間的關系，將一系列與理想輪廓圖像相比改變?yōu)?毫米以內(nèi)的增加的輪廓圖像，呈現(xiàn)給一組預治療的正畸患者、臨床醫(yī)生和非專業(yè)人士。要求受試者按照7分likert量表給每張圖像評分，從極其不具有吸引力到極其具有吸引力。對于每2毫米的下巴后縮，在likert量表上感知吸引力的評分會平均下降0.15，并且在4毫米變化后，感知吸引力的評分則是顯而易見的。對于患者和臨床醫(yī)生而言，需要進行外科手術的下巴后縮程度為11mm，而對于非專業(yè)人員為10mm。最有吸引力的圖像為能夠顯示出理想的正頜輪廓的圖像，其具有落在(restingon)真正的垂直線上的軟組織頦前點。實施例2用于在具有下巴后縮或弱下巴的受試者中增加sgnpog面部角度的方法通過在32歲男性受試者的下巴和/或下頜區(qū)域中進行皮下或骨膜上注射，將本發(fā)明的組合物作為可注射植入物給予。所述受試者抱怨他有一個“弱下巴”。醫(yī)生測量了受試者的面部角度，并確定g-sn-pog角度約為150°，這大大地低于平均下巴的經(jīng)典burstone角度(約169°)。該測量是基于從使用canfield成像設備和軟件獲得的數(shù)字圖像而得出的面部角度的計算。醫(yī)生認為受試者的下巴/下頜后縮適于這樣的矯正，即其治療目標為水平地增加下巴突出(在剖面圖中)，而不是下巴拉長或變寬。醫(yī)生認為通過使用本文所述的可植入組合物，他可以為受試者提供更具吸引力的面部輪廓和更強的下頜外形。如下所述，受試者經(jīng)歷三次治療階段，包括初始治療、補充(top-up)治療和重復治療。對于每次治療，治療區(qū)域包括至少一個或多個以下的治療區(qū)域：頦前點(下巴前表面上最突出的點)、頦(下巴的最低點)、左下頜前溝(左側靠近下頜角點的凹槽)、右下頜前溝(右側靠近下頜角點的凹槽)、和/或唇下褶痕(下唇和頦之間的褶痕)。在任何治療期間，醫(yī)生在單個治療區(qū)域內(nèi)植入不超過2.0ml。對受試者進行的初始治療如下。醫(yī)生使用無菌皮膚處理(preparation)，并按照他的標準操作進行麻醉。施用冰和局部麻醉可減輕注射不適。注射麻醉僅限于治療區(qū)域，并且確定注射麻醉的給藥不會使所規(guī)劃的治療區(qū)域變形。使用由試劑盒提供的針(27規(guī)格×13mm/27g1/2”)，醫(yī)生通過皮下和/或骨膜上注射本文所述的組合物以增加下巴凸出(在剖面視圖中為水平地)，以及進行美學上的雕塑、輪廓化和塑形，同時限制了對頦前點、頦、下頜前溝及唇下(頦的)褶痕的治療。合適的注射技術已記載在上文中。治療目標為增加下巴凸出(在剖面視圖中為水平地)并實現(xiàn)符合美學的下巴輪廓。醫(yī)生確定用于組合的初始治療和可能的補充治療的合適注射體積為最高達約4.0ml。醫(yī)生使用對覆蓋組織的人工操作來溫柔地塑造(mold)治療區(qū)域，以實現(xiàn)所需的面部輪廓。如果受試者需要，或者如果按照醫(yī)生的觀點，通過初始治療未能達到下巴凸出和/或美學輪廓的最佳(完全)增加，則在初始治療后約30天進行補充治療。如果進行補充治療，所給予的組合物的體積以組合總量(初始治療和補充治療)計為約2.0ml至約4.0ml之間。在該探視期間，醫(yī)生評估治療區(qū)域的任何局部反應，并討論任何報告的癥狀。捕獲3d面部數(shù)字圖像(正面和輪廓圖像)，用于下巴后縮角度的客觀計算。如果醫(yī)生在補充的隨訪中確定初始治療后未能達到下巴凸出或美學輪廓的最佳(完全)增加，則應建議受試者可以接受補充治療。如果如果按照醫(yī)生的觀點認為需要和/或受試者希望進行重復治療，則在18至24個月期間的預定訪視中給予單次重復治療。對于重復治療，下巴的注射體積不超過4.0ml的總體積。盡管已經(jīng)在一定程度上詳細描述和說明了本發(fā)明，但是應當理解，本公開內(nèi)容僅用于舉例說明，并且本領域技術人員在不偏離后文中權利要求所限定的本發(fā)明范圍的情況下，能夠獲得對各個部分的組合和布置的許多變化。除非另有說明，否則應理解在說明書和權利要求書中使用的所有表示成分的量、性質(例如分子量、反應條件等)的數(shù)值在所有情況下都被術語“約”修飾。因此除非有相反指示，否則說明書和所附權利要求中提出的數(shù)值參數(shù)為近似值，該近似值可根據(jù)待通過本發(fā)明獲得的期望性質而改變。最低限度，但不是試圖限制對權利要求范圍的等同原則的應用，每個數(shù)值參數(shù)至少應該根據(jù)所報告的有效數(shù)字的數(shù)值和通過應用普通舍入技術來解釋。盡管闡明本發(fā)明的較寬范圍的數(shù)值范圍和參數(shù)是近似值，但是具體實施例中列出的數(shù)值是盡可能精確報道的。然而，任何數(shù)值都固有地包含在其各自的試驗測定中存在的必然由標準偏差產(chǎn)生的某些誤差。盡管闡明本發(fā)明的較寬范圍的數(shù)值范圍和參數(shù)是近似值，但是具體實施例中列出的數(shù)值是盡可能精確報道的。然而，任何數(shù)值都固有地包含在其各自的試驗測定中存在的必然由標準偏差產(chǎn)生的某些誤差。在權利要求中可以使用表述由……組成或基本上由……組成來進一步限制本文公開的具體實施方案。當在權利要求中使用時，無論是原始提交的還是根據(jù)修改添加的，過渡術語“由……組成”均不包括權利要求中未指定的任何要素、步驟或成分。過渡術語“基本上由...組成”將權利要求的范圍限定至指定的材料或步驟，以及不會實質上會影響基本和新的特征的那些材料和步驟。本文所要求保護的本發(fā)明的實施方案在本文中被固有地或明確地描述和實現(xiàn)?？傊?，應當理解，本文公開的本發(fā)明的實施方案是對本發(fā)明的原理的舉例說明。在本發(fā)明范圍內(nèi)可以采用其它修改。因此，通過示例而非限制的方式，可根據(jù)本文的教導利用本發(fā)明的備選形式(configuration)。因此，本發(fā)明并不限于所準確示出和描述的那些。當前第1頁12當前第1頁12