本發(fā)明描述了用于在痤瘡治療中使用的化妝品或皮膚病學(xué)組合物，其包含在水楊苷中滴定的植物提取物和1,2-鏈烷二醇的組合，優(yōu)選1,2-癸二醇和柳樹皮(白柳(salixalba))提取物。

尋常痤瘡是年齡在11至30歲之間的患者最常診斷的皮膚病。認(rèn)為痤瘡影響該年齡組中約80％的人，或者考慮到低強(qiáng)度的病變，甚至100％的年輕人。痤瘡的病理發(fā)病機(jī)制是多因素的。在所有患有痤瘡的患者中，出現(xiàn)下述癥狀：皮脂過(guò)度產(chǎn)生、皮脂腺的排泄管和開口的過(guò)度角化、細(xì)菌菌群的發(fā)展和炎癥介質(zhì)在皮膚中的釋放。

在95％的患者中，病變位于面部和軀干的上部，偶爾在身體的其他部位，并且由于該位置和疾病的慢性性質(zhì)，患者具有嚴(yán)重的心理問題。

過(guò)度的皮脂產(chǎn)生和積聚以及阻塞的皮脂腺開口有利于細(xì)菌定殖。微粉刺主要由痤瘡丙酸桿菌(propionibacteriumacnes)占據(jù)，所述痤瘡丙酸桿菌是主要涉及痤瘡發(fā)展的微生物。其他細(xì)菌尤其是表皮葡萄球菌(staphylococcusepidermidis)和糠秕馬拉色菌(malasezziafurfur)。由于脂肪酶的存在，該微生物將皮脂甘油二酯和甘油三酯水解為游離脂肪酸。在水解過(guò)程期間出現(xiàn)的游離脂肪酸具有刺激性、促炎效應(yīng)，并且加劇毛囊角化病。另外，由痤瘡丙酸桿菌產(chǎn)生的透明質(zhì)酸酶、蛋白酶和神經(jīng)氨酸酶也具有促炎效應(yīng)。此外，這種微生物釋放低分子趨化因子(肽)，吸引嗜中性粒細(xì)胞，并且它激活替代補(bǔ)體途徑和經(jīng)典免疫應(yīng)答兩者。替代補(bǔ)體途徑的活化劑是丙酸桿菌屬(propionibacterium)的細(xì)胞壁(b.bergler-czop,internationaljournalofcosmeticscience,2014,36,187–194)。

微生物如痤瘡丙酸桿菌可促使各種皮膚抗微生物肽(amp)的分泌。痤瘡丙酸桿菌的炎癥效應(yīng)并不要求生物是活的或整體存在。在體外，含有膜肽聚糖(pg)和脂多糖(lps)的上清液或者細(xì)胞溶質(zhì)內(nèi)容物或膜蛋白能夠增加tlr2和tlr4的角質(zhì)形成細(xì)胞表達(dá)。

眾所周知的是更多的細(xì)胞因子在痤瘡炎癥中起重要作用。痤瘡丙酸桿菌通過(guò)toll樣受體2(tlr2)的活化來(lái)觸發(fā)促炎介質(zhì)。在這些介質(zhì)中有il-8，其表達(dá)由痤瘡丙酸桿菌誘導(dǎo)。

腫瘤壞死因子-α(tnf-α)是涉及痤瘡發(fā)病機(jī)制的另一種促炎細(xì)胞因子(archivesofdermatologicalresearch2008，第300卷，第7期，第371-376頁(yè))。

白柳樹皮(白柳)的提取物含有水楊苷及其衍生物，其已經(jīng)作為解熱藥和在許多風(fēng)濕病的治療中使用超過(guò)一個(gè)世紀(jì)。

草藥產(chǎn)品例如來(lái)自柳屬(salix)物種的樹皮的各種制劑在整個(gè)歐洲充分公認(rèn)用于治療不同起源的炎癥狀況和疼痛。

柳屬提取物已在各種動(dòng)物模型中證實(shí)了鎮(zhèn)痛、消炎和解熱效應(yīng)(loniewski等人2002)。

例如，對(duì)于含有12％水楊苷的柳屬提取物，劑量依賴性效應(yīng)已在熱板和角叉菜膠誘導(dǎo)的爪水腫測(cè)試(分別為了證實(shí)鎮(zhèn)痛和抗炎效應(yīng)建立的測(cè)試程序)中得到報(bào)道(loniewski等人2002)。

水楊苷當(dāng)口服時(shí)已知為有效的抗炎劑。

認(rèn)為當(dāng)局部應(yīng)用于人皮膚時(shí)，水楊苷可能具有抗衰老能力。來(lái)自研究的數(shù)據(jù)顯示局部應(yīng)用含有0.5％水楊苷的精華制劑提供了廣譜抗衰老益處，目標(biāo)是可見的人皮膚衰老的主要征兆。針對(duì)基線在皮膚衰老的結(jié)構(gòu)相關(guān)征兆中指出統(tǒng)計(jì)學(xué)改善。這些包括皺紋、細(xì)紋、顎線輪廓、緊致度、延展性和密度。針對(duì)基線還在斑點(diǎn)狀色素沉著、皮膚色調(diào)不均勻、光澤、水合和觸覺粗糙度中可見統(tǒng)計(jì)學(xué)改善。當(dāng)在產(chǎn)品制劑中局部應(yīng)用于人皮膚時(shí)，這些結(jié)果證實(shí)了水楊苷改善可見的衰老征兆的能力。(gopaulremona等人，anevaluationoftheeffectofatopicalproductcontainingsalicinonthevisiblesignsofhumanskinagingjournalofcosmeticdermatology,9,196–201)

根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)已知水楊苷可用作化妝品和局部皮膚病學(xué)制劑中的抗刺激活性化合物(ep0801946)。

水楊苷也可用于與另外的草藥提取物組合。de10034328公開了用于外部應(yīng)用于皮膚，尤其是因紅斑痤瘡(acnerosacea)而變紅的皮膚的化妝品制劑，所述化妝品制劑含有在水性介質(zhì)中的槲皮素、蘆丁、水楊苷和七葉素。

1,2-鏈烷二醇如1,2-戊二醇(inci：戊烯二醇)、1,2-己烷二醇(inci：1,2-己二醇)和1,2-辛二醇(inci：辛酰二醇)及其組合是在個(gè)人護(hù)理產(chǎn)品中廣泛用作增濕劑和抗菌劑的多功能成分。本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知，這些物質(zhì)顯示針對(duì)痤瘡丙酸桿菌的特異性抗菌活性。

wo2011117126描述了1,2-癸二醇和甘草查耳酮a和肉毒堿的組合，所述組合針對(duì)痤瘡丙酸桿菌(propionibacteriumacnes)(痤瘡丙酸桿菌(p.acnes))有效而不刺激皮膚。

ep1731036公開了用于痤瘡治療的含有不同1,2-鏈烷二醇的混合物。

用于治療油性和有瑕疵皮膚的常規(guī)產(chǎn)品，例如含有水/乙醇和/或表面活性劑的清潔產(chǎn)品具有通常使皮膚變得干燥的缺點(diǎn)，并且僅發(fā)揮很少的皮膚護(hù)理作用。特別不利的是，身體對(duì)經(jīng)過(guò)較長(zhǎng)時(shí)間段的含有乙醇和/或洗滌劑的溶液使用的反應(yīng)可能是皮脂的過(guò)度產(chǎn)生，這抵消了在油性、有瑕疵和痤瘡傾向皮膚中的皮脂減少的主要治療目標(biāo)。

對(duì)于痤瘡的局部治療，存在痤瘡劑，如強(qiáng)氧化劑，如過(guò)氧化苯甲酰；α-羥基酸，如水楊酸和乳酸；脂肪族二羧酸如壬二酸；類視黃醇如維甲酸(同義詞：全反式視黃酸)、全反式視黃醛和13-順式視黃酸(異維a酸)；抗雄激素(5α-還原酶)和抗生素如克林霉素、四環(huán)素和紅霉素。

所述物質(zhì)通常針對(duì)痤瘡丙酸桿菌僅具有非常溫和的抗微生物活性，并且必須在化妝品和皮膚病學(xué)制劑中以相對(duì)高的濃度使用-例如高達(dá)5重量％過(guò)氧化苯甲酰和高達(dá)20重量％的壬二酸。

然而，由于高劑量，皮膚被非常不利地過(guò)度使用，這特別表現(xiàn)在非常干燥的皮膚中，這通常部分與由于皮膚ph的強(qiáng)烈降低的嚴(yán)重皮膚刺激相關(guān)。

強(qiáng)氧化劑如過(guò)氧化苯甲酰、α-羥基酸如水楊酸和乳酸、以及脂肪族二羧酸如壬二酸的有效性是基于痤瘡丙酸桿菌的抑制。

期望具有提供痤瘡治療的化妝品或皮膚病學(xué)制劑，所述化妝品或皮膚病學(xué)制劑具有針對(duì)痤瘡丙酸桿菌(propionibacteriumacnes)(痤瘡丙酸桿菌(p.acnes))改善的活性，且尤其是針對(duì)發(fā)炎的黑頭粉刺改善的炎癥活性，而不嚴(yán)重刺激皮膚。

該問題通過(guò)包含1,2-癸二醇和柳樹皮提取物的組合的化妝品或皮膚病學(xué)組合物得到解決。與單一物質(zhì)相比，該制劑令人驚訝地顯示協(xié)同的抗菌和抗炎效應(yīng)。

實(shí)驗(yàn)部分

測(cè)定對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌的mic和mbc

測(cè)試目的

測(cè)試的目的是測(cè)定一種或多種樣品針對(duì)微生物的抗微生物活性。在測(cè)定的測(cè)試條件下，獲得的值必須視為測(cè)試樣品對(duì)于測(cè)定的微生物物種特有的。

方法描述

制備含有用測(cè)試微生物接種的培養(yǎng)肉湯的一系列試管，并且要測(cè)試的物質(zhì)以遞減的標(biāo)量濃度引入。

將培養(yǎng)物在預(yù)選微生物的最佳溫度和最佳生長(zhǎng)條件下溫育足夠的時(shí)間段，以證實(shí)發(fā)展。

然后通過(guò)目視觀察指示生長(zhǎng)的濁度來(lái)確定其中發(fā)展微生物群體的試管。其中物質(zhì)以足夠濃度存在以抑制生長(zhǎng)的試管保持澄清。當(dāng)樣品本身的性質(zhì)阻止視覺讀數(shù)時(shí)，或者如果希望確定發(fā)展的缺乏是由于微生物抑制作用還是由于微生物殺死作用，則轉(zhuǎn)移到適當(dāng)?shù)沫傊囵B(yǎng)基用于確認(rèn)。

解釋標(biāo)準(zhǔn)

在其下微生物的生長(zhǎng)被抑制的樣品濃度視為最低抑制濃度(mic)，而在其下不再存在活微生物的樣品濃度視為最低殺菌濃度(mbc)

a)不同物質(zhì)針對(duì)葡萄球菌屬菌種的抗菌活性的評(píng)估

進(jìn)行評(píng)估針對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌的抗菌活性的測(cè)試，評(píng)估下述物質(zhì)：

補(bǔ)骨脂酚、乳鐵蛋白、月桂酸、白藜蘆醇、白柳提取物。

根據(jù)上述方法測(cè)試了這些物質(zhì)針對(duì)痤瘡金黃色葡萄球菌(staphylococcusaureusacnes)atcc25923和表皮葡萄球菌(staphylococcusepidermidis)atcc12228的抗菌活性。結(jié)果顯示于表1中。

表1

不同物質(zhì)針對(duì)痤瘡金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌的最低抑制濃度(mic)和最低殺菌濃度(mbc)

測(cè)試顯示，就測(cè)試的其他物質(zhì)而言，白柳提取物針對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌的活性較弱。

b)不同物質(zhì)針對(duì)痤瘡丙酸桿菌的抗菌活性的評(píng)估

在另一組實(shí)驗(yàn)中，我們根據(jù)上述方法測(cè)試了單獨(dú)和組合的白柳提取物和1,2-癸二醇的抗菌活性，所述1,2-癸二醇是已知顯示針對(duì)痤瘡丙酸桿菌的抗菌活性的物質(zhì)。

所使用的微生物菌株是以2.6x104細(xì)胞/毫升培養(yǎng)基的濃度滴定的痤瘡丙酸桿菌atcc11827。

結(jié)果顯示于表2中。

表2

1,2-癸二醇和白柳提取物針對(duì)痤瘡丙酸桿菌的最低抑制濃度(mic)和最低殺菌濃度(mbc)

白柳提取物單獨(dú)僅顯示弱抗菌活性。

1,2-癸二醇已知針對(duì)痤瘡丙酸桿菌有效。

白柳提取物和1,2-癸二醇的組合(1:1)令人驚訝地展示針對(duì)痤瘡丙酸桿菌的協(xié)同抗菌效應(yīng)。

1,2-癸二醇和白柳提取物的組合能夠獲得兩倍濃度的1,2-癸二醇的相同mic，并且極大改善其mbc。

所選擇的順序關(guān)聯(lián)度與過(guò)氧化苯甲酰一致，所述過(guò)氧化苯甲酰通常已知為針對(duì)痤瘡丙酸桿菌的強(qiáng)抗菌劑。

白柳提取物和1,2-癸二醇的抗炎活性的體外評(píng)估

該測(cè)試的目的是借助于在生物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?角質(zhì)形成細(xì)胞培養(yǎng)物hacat)中tnfα、il1α、il8合成調(diào)節(jié)的研究，來(lái)評(píng)估白柳提取物、1,2-癸二醇及其組合的抗炎活性。

tnfα、il1α、il8是與痤瘡過(guò)程相關(guān)的炎癥介質(zhì)。

基于痤瘡過(guò)程在皮脂腺毛囊內(nèi)部執(zhí)行，選擇角質(zhì)形成細(xì)胞培養(yǎng)物作為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，所述皮脂腺毛囊是由角質(zhì)形成細(xì)胞組成的組織。

為了在我們的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭写碳ぱ装Y過(guò)程，選擇了脂多糖(lps)。lps是由細(xì)菌例如痤瘡丙酸桿菌分泌的促炎介質(zhì)。

1,2-癸二醇(smal)在機(jī)械攪拌和培養(yǎng)基的添加下用玉米油(37℃)乳化，從下述比率開始：在1ml培養(yǎng)基的最終體積(37℃)中，用100μl玉米油乳化的0.05g。

將白柳提取物(wmal)在培養(yǎng)基中直接稀釋，從下述比率開始：在1ml(37℃)中的0.05g；在培養(yǎng)基(37℃)中的后續(xù)稀釋。

對(duì)于測(cè)試執(zhí)行，用lps(來(lái)自大腸桿菌(escherichiacoli)的脂多糖，10ng/ml)和以3個(gè)濃度的測(cè)試產(chǎn)品處理人角質(zhì)形成細(xì)胞(hacat)，在初步細(xì)胞毒性測(cè)試后在非細(xì)胞毒性試劑中加以選擇。

在監(jiān)測(cè)的實(shí)驗(yàn)期結(jié)束時(shí)，借助于elisa測(cè)定來(lái)測(cè)量細(xì)胞因子水平。

將結(jié)果與陰性對(duì)照(未經(jīng)受lps的細(xì)胞，ctr-)和陽(yáng)性對(duì)照(用lps處理的細(xì)胞，ctr+)進(jìn)行比較。

通過(guò)使用5.0％至0.0012％的濃度范圍(連續(xù)稀釋1:2)，對(duì)兩種產(chǎn)品進(jìn)行初步細(xì)胞毒性測(cè)試。根據(jù)所獲得的結(jié)果，選擇下述濃度來(lái)分析抗炎活性：

1,2-癸二醇(smal)：0.002％

白柳提取物(wmal)：0.04％-0.02％-0.01％

對(duì)測(cè)試開始初期的兩種原材料的混合物執(zhí)行第二次細(xì)胞毒性測(cè)試，以驗(yàn)證抗炎活性中的作用協(xié)同性；測(cè)試濃度如下：

smal0.002％+wmal:0.04％-0.02％-0.01％

對(duì)照和用測(cè)試產(chǎn)品處理的細(xì)胞的培養(yǎng)基用于借助于elisa法的促炎細(xì)胞因子tnfα、il1α和il8的劑量。

商業(yè)elisa試劑盒用于細(xì)胞因子數(shù)量的測(cè)定。

定量測(cè)定使用由已知標(biāo)準(zhǔn)和不斷增長(zhǎng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞因子組成的校準(zhǔn)曲線。

不同實(shí)驗(yàn)組中獲得的數(shù)據(jù)經(jīng)受統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，并且根據(jù)t檢驗(yàn)進(jìn)行比較。對(duì)于p<0.05，變化視為顯著的。

在下表3中，報(bào)告了對(duì)于每個(gè)測(cè)試系列獲得的數(shù)據(jù)。

結(jié)果表示為在實(shí)驗(yàn)期過(guò)程中釋放到培養(yǎng)基內(nèi)的細(xì)胞因子(平均值±標(biāo)準(zhǔn)差)以及與對(duì)照相比的平均％變化。

為了比較兩個(gè)不同的工作期，所獲得的數(shù)據(jù)以0-100％的尺度標(biāo)準(zhǔn)化，其中ctr-為0，并且ctr+為100％；所有其他數(shù)據(jù)在此間隔內(nèi)計(jì)算。

對(duì)這些數(shù)據(jù)執(zhí)行通過(guò)t檢驗(yàn)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，并且p<0.05的變化視為顯著的。

在獲得的結(jié)果的基礎(chǔ)上，觀察到smal和wmal能夠顯著降低lps誘導(dǎo)的炎癥標(biāo)記物tnfα、il1α和il8的釋放，所述炎癥標(biāo)記物都與痤瘡有關(guān)。

對(duì)于分析的所有物質(zhì)，以組合的物質(zhì)wmal和smal顯示協(xié)同效應(yīng)。

表3

用smal、wmal及其結(jié)合處理的細(xì)胞培養(yǎng)物ctr-、ctr+中的細(xì)胞因子的劑量。結(jié)果表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(以ng/l表示)和與對(duì)照相比的平均％變化。

制劑可具有各種性質(zhì)，基于水的、水-醇和無(wú)水的。在最常用中的有表面活性劑體系(甚至包括例如洗發(fā)劑、泡浴劑、沐浴露、液體肥皂和固體肥皂、膠束水、液體洗滌劑)、油包水乳液、水包油乳液、精華、凝膠、油、水性溶液、水醇溶液、無(wú)水棒、粉餅、洗劑、乳、防曬霜、曬后產(chǎn)品和遮瑕(camouflage)產(chǎn)品(即cc霜、bb霜)。

任選可能和有利的是使用根據(jù)本發(fā)明的組合物作為藥物制劑的基質(zhì)。

本領(lǐng)域技術(shù)人員當(dāng)然知道，如果沒有常規(guī)助劑和添加劑，化妝品組合物通常是不可想象的。在其中包括例如稠度賦予劑、填料、香料、著色劑、乳化劑、另外的活性化合物例如維生素或蛋白質(zhì)、防曬劑、穩(wěn)定劑、驅(qū)蟲劑、醇、水、鹽、具有蛋白水解或角質(zhì)水解活性的物質(zhì)、增稠劑、潤(rùn)膚劑、脂肪酸、螯合劑、舒緩劑、二醇、著色劑、緩沖物質(zhì)。

柳樹皮提取物根據(jù)歐洲藥典專著“extracta”進(jìn)行制備。用水和/或乙醇提取柳屬的各個(gè)物種包括紅皮柳(s.purpureal.)、s.saphnoidesvill.和爆竹柳(s.fragilisl.)的完整或成碎片的干燥的嫩枝樹皮或者完整的干燥的當(dāng)年小枝小片。以水楊苷表示的水楊酸衍生物的總含量必須為至少5％；優(yōu)選10％至20％。

根據(jù)本發(fā)明的白柳提取物必須滴定至不小于20％(w/w)的表示為水楊苷的水楊酸衍生物的總濃度。

白柳提取物和1,2-癸二醇之間的比率為1:100至100:1，或1:50至50:1，或1:10至10:1，優(yōu)選1:5至5:1；更優(yōu)選1:1。

制劑中白柳提取物的總量在0.001％至10％，優(yōu)選0.01％(w/w)至5％(w/w)，更優(yōu)選0.3％(w/w)至1％(w/w)的范圍內(nèi)。

制劑中1,2-癸二醇的總量在0.001％(w/w)至10％(w/w)，優(yōu)選0.01％(w/w)至5％(w/w)，更優(yōu)選0.3％(w/w)至1％(w/w)的范圍內(nèi)。

實(shí)例

下述實(shí)例不應(yīng)表示對(duì)本發(fā)明的限制。

實(shí)例1

防曬霜

實(shí)例2

精華

實(shí)例3

保濕膏

實(shí)例4

凝膠

實(shí)例5

液體洗滌劑

實(shí)例6

cc霜

實(shí)例7

增濕霜

實(shí)例8

洗滌劑

實(shí)例9

防曬霜

實(shí)例10

防曬霜2