本發(fā)明涉及一種含有雙歧桿菌和嗜酸乳桿菌的益生菌復合組合物及其應(yīng)用，特別涉及包含雙歧桿菌B.bifidum-12(Bb-12)和嗜酸乳桿菌L.acidophilu-5(La-5)的復合組合物。

背景技術(shù)：

目前國際比較接受的益生菌定義為“益生菌是指在食用足夠量時，對宿主產(chǎn)生有益作用的一種或多種活的微生物，能夠耐胃酸、膽汁，活著到達腸道，在腸道能夠定植一定時間?！逼駷橹?，科學家已發(fā)現(xiàn)的益生菌大體上可分成三大類，包括乳酸桿菌、雙歧桿菌和革蘭氏陽性球菌。當人體住滿足夠的益生菌時，人就會處于健康的狀態(tài)，但是一旦體內(nèi)菌群失去平衡，比如菌種間比例發(fā)生大幅變化或者超出正常數(shù)值時，那么腹瀉、過敏、胃口不佳、疲倦、免疫力低等一系列病癥就會隨之而來，人體的健康就會亮紅燈，而這時適當添加益生菌，協(xié)助體內(nèi)菌群平衡，才能讓人重現(xiàn)健康狀態(tài)。

雙歧桿菌在人體腸內(nèi)發(fā)酵后可產(chǎn)生乳酸和醋酸，能提高鈣、磷、鐵的利用率，具有治療慢性腹瀉、治療便秘、保護肝臟、防治心血管疾病、改善乳糖消化等的作用。經(jīng)過眾多專家學者的不斷探索實驗，已確認雙歧桿菌是腸內(nèi)最有益的菌群，雙歧桿菌數(shù)量的減少乃至消失是“不健康”狀態(tài)的標志。

嗜酸乳桿菌屬于乳桿菌屬，是革蘭氏陽性桿菌，主要存在于小腸中，釋放乳酸、乙酸和一些對有害菌起作用的抗菌素，調(diào)整腸道菌群平衡，抑制腸道不良微生物的增殖。嗜酸乳桿菌對致病微生物具有拮抗作用。嗜酸乳桿菌能分泌嗜酸乳菌素、嗜酸桿菌素、乳酸菌素等抗生素物質(zhì)，對腸道致病菌產(chǎn)生拮抗作用。

攝入含有嗜酸乳桿菌和雙歧桿菌兩種活菌的乳食品對消化器官有好處，特別是對胃腸功能失調(diào)的嬰幼兒和一些長期口服抗菌素而引起胃腸功能失調(diào)的病人，食用含有這兩種活菌的發(fā)酵乳后，可以迅速使腸道內(nèi)的菌群恢復正常平衡，抑制腐敗菌的增殖，所以具有很好的營養(yǎng)保健作用。

“張澤生等人，菊粉低聚果糖與蔗糖低聚果糖對雙歧桿菌體外增值的研究，《中國食品添加劑》，2016年，第1期，第76-80頁”揭示了兩種低聚果糖均能促進雙歧桿菌的體外增殖，但菊粉來源的低聚果糖對雙歧桿菌的體外促生長作用優(yōu)于蔗糖來源的低聚果糖。

“張樹海等人，益生菌對嗜酸乳桿菌LA-5生長的影響，《食品研究與開發(fā)》，2013年，第34卷，第3期，第88-90頁”揭示了菊粉、麥芽低聚糖和低聚異麥芽糖三種益生菌素對LA-5的影響，其中低聚異麥芽糖對LA-5的促進作用最佳，菊粉也能促進LA-5的生長。

“杜亞軍，水溶性膳食纖維促進腸道益生菌生長的研究，《中國乳品工業(yè)》，2015年，第43卷，第7期，第26-29頁”揭示了各種水溶性膳食纖維作為唯一的碳源，或者添加到含葡萄糖的培養(yǎng)基中，均可以顯著促進益生菌的生長。

傳統(tǒng)含益生菌的產(chǎn)品菌種組成單一，隨著保存時間的延長，益生菌的活菌數(shù)量減少，達不到真正改善腸道問題的功效。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

為了克服上述益生菌產(chǎn)品組成單一，活菌數(shù)量隨時間延長而減少的缺陷，本發(fā)明提供了一種含有雙歧桿菌Bb-12和嗜酸乳桿菌La-5的益生菌復合組合物，及其在制備改善便秘、口臭、膚質(zhì)的營養(yǎng)品方面的應(yīng)用，所述益生菌復合組合物還能與羊奶粉或抗生素聯(lián)合使用。為方便使用，本發(fā)明還提供了一種28單元型的益生菌復合制劑，每個益生菌復合組合物單元含有本發(fā)明所述的益生菌復合組合物和說明書。

具體來說，針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了如下技術(shù)方案：

一方面，本發(fā)明提供了一種含有雙歧桿菌和嗜酸乳桿菌的益生菌復合組合物，按重量份計算，該益生菌復合組合物包括0.2-0.8重量份的益生菌、0.1-0.7重量份的菊粉和1.5-2.7重量份的可溶性膳食纖維。

優(yōu)選地，其中所述的益生菌為雙歧桿菌Bifidobacterium(Bb-12)和嗜酸乳桿菌Lactobacillus acidophilus(La-5)。

優(yōu)選地，按重量份計，本發(fā)明的益生菌復合組合物包括0.1-0.4重量份Bb-12、0.1-0.4重量份La-5、0.3-0.5重量份的菊粉和1.8-2.3重量份的可溶性膳食纖維。

優(yōu)選地，Bb-12與La-5的重量份比為1:1。

優(yōu)選地，所述可溶性膳食纖維為選自低聚異麥芽糖、聚葡萄糖、果膠、抗性糊精、燕麥β-葡聚糖、大豆低聚糖和羧甲基纖維素中的一種或一種以上，優(yōu)選抗性糊精。

優(yōu)選地，本發(fā)明所述益生菌復合組合物是復合腸道健康營養(yǎng)品。

另一方面，本發(fā)明提供了一種28單元型益生菌復合制劑，該益生菌復合制劑含有28個日用益生菌復合組合物單元，所述日用益生菌復合組合物單元含有前述益生菌復合組合物和使用說明書。

另一方面，本發(fā)明提供了所述益生菌復合組合物在制成腸胃健康營養(yǎng)品方面或制備改善膚質(zhì)的營養(yǎng)品方面的應(yīng)用。

優(yōu)選地，將益生菌復合組合物與藥學上可接受的載體制成制劑。

優(yōu)選地，益生菌復合組合物與藥學上可接受的載體制成的制劑為選自片劑、膠囊劑、顆粒劑和散劑中的任一種。

優(yōu)選地，本發(fā)明提供了所述益生菌復合組合物在制備改善便秘、口臭或膚質(zhì)的營養(yǎng)品或藥品方面的應(yīng)用。

優(yōu)選地，益生菌復合組合物在制備改善便秘、口臭或膚質(zhì)的營養(yǎng)品或藥品方面的應(yīng)用周期為28天。

優(yōu)選地，將本發(fā)明的益生菌復合組合物與羊奶粉聯(lián)合使用。

優(yōu)選地，將本發(fā)明的益生菌復合組合物與抗生素聯(lián)合使用，所述抗生素優(yōu)選為枸櫞酸鉍鉀、阿莫西林和/或替硝唑，更優(yōu)選為枸櫞酸鉍鉀、阿莫西林和替硝唑的組合。

本發(fā)明采用了丹麥科漢森的定制化益生菌菌落Bb-12和La-5，耐酸和耐膽汁性強，益生元和可溶性膳食纖維對益生菌的增殖產(chǎn)生協(xié)同作用，獨特的保存技術(shù)(通常為﹣4℃保存)使得益生菌的活菌數(shù)量不會隨時間而逐漸衰減，具備臨床證實的健康功效。本發(fā)明所述益生菌復合組合物能改善便秘、口臭癥狀，改善膚質(zhì)，減少抗生素副作用，提高人群的生活質(zhì)量。

具體實施方式

本發(fā)明提供了一種含有雙歧桿菌和嗜酸乳桿菌的益生菌復合組合物，包括以下組分：0.2-0.8重量份的益生菌、0.1-0.7重量份的菊粉和1.5-2.7重量份的可溶性膳食纖維。

在本發(fā)明的一種優(yōu)選實施方式中，益生菌復合組合物包括以下組分：0.1-0.4重量份雙歧桿菌B.bifidum-12(Bb-12)、0.1-0.4重量份嗜酸乳桿菌L.acidophilu-5(La-5)、0.3-0.5重量份的菊粉和1.8-2.3重量份的可溶性膳食纖維。其中，菊粉的成分為低聚果糖，可溶性膳食纖維為選自低聚異麥芽糖、聚葡萄糖、果膠、抗性糊精、燕麥β-葡聚糖、大豆低聚糖和羧甲基纖維素中的一種或幾種，優(yōu)選抗性糊精。本發(fā)明提供的益生菌復合組合物是復合腸道健康營養(yǎng)品。

在本發(fā)明的一種優(yōu)選實施方式中，本發(fā)明的益生菌復合組合物制成益生菌復合制劑，該復合制劑也稱為28單元型益生菌復合制劑，其含有28個日用益生菌復合組合物單元，所述日用益生菌復合組合物單元含有本發(fā)明所述的益生菌復合組合物和使用說明書。當有腸胃健康問題或者皮膚問題的人群服用時，該制劑作為復合腸道健康或皮膚健康營養(yǎng)品被設(shè)計為28單元型益生菌復合制劑，其臨床應(yīng)用周期為28天，每天服用其中一個單元。依據(jù)不同的適應(yīng)證，本發(fā)明益生菌復合組合物的用法、用量不同，從而每個單元中設(shè)計的益生菌復合組合物的量也不同，每個益生菌復合組合物單元中的量是依據(jù)每天需要服用的總量設(shè)計的。

在本發(fā)明的另一種優(yōu)選實施方式中，益生菌復合組合物被用于制備腸胃健康營養(yǎng)品或改善膚質(zhì)的營養(yǎng)品。益生菌復合組合物與藥學上可接受的載體制成片劑、膠囊、顆粒劑和散劑等不同劑型，將益生菌復合組合物制成不同劑型的一般步驟包括：

1)菌株的發(fā)酵培養(yǎng)：菌種活化→接斜面培養(yǎng)→F瓶培養(yǎng)→卡氏罐培養(yǎng)→種子罐培養(yǎng)→商品罐培養(yǎng)→離心分離→壓濾→造?！稍铩善罚?/p>

2)混勻益生菌復合組合物的各原料成分；

3)加入輔料(載體)成分；

4)混合原料和輔料；

5)按照常規(guī)方法制成不同劑型、包裝。

本發(fā)明益生菌復合組合物的適用對象為有便秘、口臭、皮膚問題以及服用抗生素的人群，也能與羊奶粉聯(lián)合使用，促進人體對羊奶粉的吸收。

對于便秘、口臭、有皮膚問題以及使用抗生素的人群，每次服用本發(fā)明益生菌復合組合物的用量中含有的益生菌復合組合物成分為10-40mg菌株Bb-12、10-40mg菌株La-5，10-70mg菊粉和150-270mg抗性糊精。

本發(fā)明所述的菊粉是一種生物多糖，也叫菊糖，以能量的形式存在于多種植物和蔬菜里，尤其存在于菊科植物例如菊芋、菊苣的塊根中。菊粉分子約由31個β-D-呋喃果糖和1～2個吡喃菊糖殘基聚合而成，果糖殘基之間能通過β-2,1-鍵連接。

下面通過實施例來具體說明本發(fā)明，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當理解的是，這不應(yīng)被理解為對本發(fā)明權(quán)利要求范圍的限制。

實施例中所用的儀器與試劑說明如下：

1.儀器

混合機：長沙市雨花區(qū)中誠制藥機械廠

一步制粒機：FL-120C型沸騰制粒器，上海遠東制藥機械總廠

壓片機：ZP-9B旋轉(zhuǎn)式壓片機，上海綠翊機械制造有限公司

包衣機：湖南中誠制藥機械廠

膠囊填充劑：北京翰林精工科技有限公司NJP-1200

顆粒包裝機：北京邁威機械有限責任公司PW129-CO

2.試劑

益生菌株Bb-12和La-5：購自丹麥科漢森公司；

菊粉：河南正興食品添加劑有限公司；

抗性糊精：山東天美生物技術(shù)有限公司

奶粉：內(nèi)蒙古伊利實業(yè)集團股份有限公司

淀粉：湖北中料化工有限公司

制備實施例

實施例1

將益生菌復合組合物制成片劑的步驟包括：

(1)用常規(guī)方法發(fā)酵擴大培養(yǎng)Bb-12和La-5菌株；

(2)取1g菌株Bb-12、1g菌株La-5，加入1g菊粉，混合，加入15g抗性糊精，混勻；

(3)淀粉過80目篩，作為制劑中的輔料備用；

(4)將步驟(3)得到的淀粉加入到步驟(2)所得的混合粉中，直至重量為100g；

(5)采用一步制粒機對上述混合粉末造粒，過10目篩，然后加入0.4％硬脂酸鎂，采用常規(guī)壓片機進行壓片(規(guī)格為1g/片)，接著包衣(常規(guī)薄膜衣)，裝瓶。

實施例2

本實施例采用與實施例1基本相同的方法制備片劑，不同之處在于各組分的用量變?yōu)?g菌株Bb-12、3g菌株La-5，5g菊粉，23g抗性糊精，淀粉為載體。片劑規(guī)格為1g/片。

實施例3

本實施例采用與實施例1基本相同的方法制備膠囊劑。不同之處在于各組分用量變?yōu)椋?g菌株Bb-12、2g菌株La-5，3g菊粉，18g抗性糊精，淀粉為載體。采用一步制粒機對所有混合粉末造粒，過10目篩，然后用全自動膠囊充填機將造粒所得的顆粒裝入膠囊，得到膠囊劑(規(guī)格為內(nèi)容物0.5g/膠囊)。

實施例4

本實施例采用與實施例1基本相同的方法制備顆粒劑。不同之處在于各組分用量變?yōu)椋?g菌株Bb-12、4g菌株La-5，7g菊粉，27g抗性糊精，以淀粉為載體。采用一步制粒機對所得的混合物粉末造粒，過10目篩，然后用顆粒包裝機將所得顆粒封裝入袋，得到顆粒劑(1g/袋)。

實施例5

本實施例采用與實施例1基本相同的方法制備散劑。不同之處在于各組分用量變?yōu)椋?g菌株Bb-12、2g菌株La-5，4g菊粉，21g低聚異麥芽糖，淀粉為載體。直接將混合物粉末包裝入袋，即可得到散劑(1g/袋)。

實施例6

本實施例采用與實施例1基本相同的方法制備散劑。不同之處在于各組分用量變?yōu)椋?g菌株Bb-12、2g菌株La-5，5g菊粉，21g抗性糊精，以奶粉為載體。直接將混合物粉末包裝入袋，即可得到散劑(1g/袋)。

效果實施例

實施例7 改善便秘癥狀

(1)診斷標準

功能性便秘診斷標準采用國際功能性胃腸疾病(FGIDS)-RomeⅢ功能性便秘診斷標準：①必須符合以下二項或二項以上：a.至少25％的排便感到費力；b.至少25％的排便為干球狀便或硬便；c.至少25％的排便有不盡感；d.至少25％的排便有肛門直腸梗阻感/阻塞感；e.至少25％的排便需要手法幫助(如用手指幫助排便、盆底支持)；f.排便次數(shù)<3次/周；②在不使用瀉藥的情況下時很少出現(xiàn)稀便；③沒有足夠的證據(jù)診斷腸道易激綜合征(IBS)。診斷前癥狀出現(xiàn)至少6個月，且近3個月癥狀符合以上診斷標準。

(2)納入標準

符合功能性便秘診斷標準的受試者：年齡18-80歲，共300例，簽署知情同意書。

(3)服用方法

所有的受試者被隨機平均分成6組，將實施例1-6制備的益生菌復合組合物片劑、膠囊、顆粒劑和散劑，分別按照早晚各一次，每次服用1片/袋、或者兩粒(膠囊)，連續(xù)服用28天。相應(yīng)地，被設(shè)計成28單元型益生菌復合制劑的每個單元中含有一天的用量，即每個單元中含有分兩次服用的用量，早晚各一次，每次服用1片/袋、或者兩粒(膠囊)。

(4)評分標準

按照便秘評估量表1，對排便頻率、排便困難程度、排便不盡感、腹痛和排便時間分別進行積分，將每位受試者的得分相加之和作為癥狀積分(0-12分)。

表1 便秘評估量

使用本發(fā)明的益生菌復合組合物后，癥狀積分減少2分以上為有效，減少2分以下無效。統(tǒng)計受試者每天的排便情況，第14、28天的研究結(jié)果見表2。

表2 受試者服用本發(fā)明益生菌復合組合物后的效果

從表2可以看出，連續(xù)使用本發(fā)明的益生菌復合組合物后，受試者的便秘癥狀得到改善，尤其連續(xù)服用28天后的癥狀改善更為明顯，效果最好的益生菌復合組合物為實施例3制備的規(guī)格為0.5g的膠囊，每次用量含有的益生菌復合組合物成分為20mg菌株Bb-12、20mg菌株La-5，30mg菊粉，180mg抗性糊精，最好長期服用。

實施例8 改善口臭

(1)納入標準

采用感官分析法來確定口臭的級別。感官分析法又稱鼻測法，是一種通過檢查者的嗅覺來檢測口臭是否存在的主觀檢測法。最常用的嗅覺判斷標準是艾莉森(Allison)和卡茨(Katz)于1919年提出的0-5級分類法。

感官分析的具體操作是采用吸管法，將一次性塑料管放入受試者口中，受試者閉口通過塑料管將口腔中其他呼出，檢查者在另一端嗅氣體進行判斷，并確定嗅覺評分。計分在2或2以上的診斷為口臭。共360名由于工作忙碌、生活習慣等原因?qū)е驴诔舻娜巳簠⑴c試驗，年齡18-45歲。

(2)服用方法

所有的受試者被隨機平均分成6組，將實施例1-6制備的益生菌復合組合物片劑、膠囊、顆粒劑和散劑，按照早中晚各一次，每次服用1片/袋、或者兩粒(膠囊)，連續(xù)服用28天。相應(yīng)地，被設(shè)計成28單元型益生菌復合制劑的每個單元中含有一天的用量，即每個單元中含有分3次服用的用量，早中晚各一次，每次服用1片/袋、或者兩粒(膠囊)。

(3)評分

在試驗期間，每隔5天以及在第14天和28天進行一次口臭的感官評價，統(tǒng)計受試者的評分變化，第14、28天的評分結(jié)果見表3。

表3 受試者連續(xù)服用本發(fā)明益生菌復合組合物14、28天后的效果

從表3可以看出，連續(xù)服用本發(fā)明的益生菌復合組合物后，受試者的口臭癥狀均得到改善，到第28天更明顯，效果最好的益生菌復合組合物為實施例4制備的規(guī)格為1g的顆粒劑，每次用量含有的益生菌復合組合物成分為40mg菌株Bb-12、40mg菌株La-5，70mg菊粉，270mg抗性糊精，最好長期服用。實施例9改善膚質(zhì)

(1)納入標準

因腸道消化功能紊亂，導致排毒不暢，代謝物質(zhì)在體內(nèi)堆積從而產(chǎn)生皮膚問題。共50名受試者參加實驗，其中25名為女性，所有的受試者都有比如氣色差、皮膚暗黃、長斑或長痘等皮膚問題，年齡18-35歲。

(2)服用方法

將實施例6制備的益生菌復合組合物散劑，按照每天1次，每次服用1袋，連續(xù)服用28天。相應(yīng)地，被設(shè)計成28單元型益生菌復合制劑的每個單元含有一天的用量，即每個單元含有1次服用的量；每個單元含有1袋實施例6制備的散劑。

(3)評分

在試驗期間，跟蹤受試者的皮膚變化，包括氣色是否變好、斑和痘的嚴重程度是否得到改善。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，連續(xù)服用本發(fā)明益生菌復合組合物7天后，受試者的皮膚狀況開始改善，連續(xù)服用28天后，皮膚狀況改善明顯的受試者占80％，女性受試者占50％，說明本發(fā)明的益生菌復合組合物能夠改善人群的膚質(zhì)，尤其是有皮膚問題的人群在服用本發(fā)明的益生菌復合組合物后，膚質(zhì)明顯變好，而且女性服用益生菌復合組合物的效果比男性好。為改善膚質(zhì)并長期維持好的膚質(zhì)，最好長期服用本發(fā)明益生菌復合組合物。

實施例10與抗生素聯(lián)合使用

由于幽門螺桿菌感染而采用抗生素三聯(lián)療法的人群，在治療期間容易出現(xiàn)包括腹瀉、便秘、嘔吐在內(nèi)的常見副作用。

共140名因幽門螺桿菌感染而使用抗生素三聯(lián)療法的受試者參加試驗，所述抗生素三聯(lián)療法為同時服用50mg枸櫞酸鉍鉀、500mg阿莫西林和200mg替硝唑；受試者的年齡為45-55歲。

服用方法：

采用安慰劑對照平行試驗，受試者被隨機平均分成7組，其中1組為安慰劑組，共20名受試者，服用不含益生菌復合組合物的空白載體；

另外6組為試驗組，試驗組受試者服用益生菌復合組合物的方法如下：

將實施例1-6制備的益生菌復合組合物制劑，按照每天早晚各1次，每次服用1片/袋、或者兩粒(膠囊)，在三聯(lián)療法期間和治療結(jié)束后的三周內(nèi)繼續(xù)服用。

研究結(jié)果：

因三聯(lián)療法導致的副作用發(fā)生率明顯下降，幽門螺桿菌的清除率提高，受試者的治療順應(yīng)性提高，即完成三聯(lián)療法的受試者比例提高，具體結(jié)果見表4。

表4 三聯(lián)療法期間同時服用益生菌復合組合物的效果

從表4可知，受試者在三聯(lián)療法期間同時服用本發(fā)明的益生菌復合組合物后，副作用的發(fā)生率下降40-50％，幽門螺桿菌清除率提高10-13％，完成三聯(lián)療法的受試者比例提高25-30％，說明本發(fā)明益生菌復合組合物能夠明顯改善三聯(lián)療法給患者帶來的腸道不適，提高完成三聯(lián)療法的容易度。

受試者在三聯(lián)療法結(jié)束后，繼續(xù)服用本發(fā)明的益生菌復合組合物三周，經(jīng)檢測表明，受試者糞便中的雙歧桿菌占厭氧菌的比例恢復到抗生素(三聯(lián)療法)治療前的水平，即腸道雙歧桿菌菌群得以恢復，說明本發(fā)明益生菌復合組合物能夠重建腸道菌群。

實施例11 與羊奶粉聯(lián)合使用

招募60名受試者參與試驗，年齡為10-15歲，試驗周期為28天。將受試者隨機平均分成A和B兩組:

A組在試驗期間同時服用羊奶粉和益生菌復合組合物(實施例2制備的片劑)，具體為：每天1次，每次1袋羊奶粉和1片益生菌復合組合物；

B組在試驗期間服用與A組相同量的羊奶粉和空白載體(不含益生菌復合組合物)；

在試驗期間，記錄受試者的食欲變化、出現(xiàn)腸道不適的幾率和出現(xiàn)感冒的幾率；結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在28天的試驗周期內(nèi)，A組受試者的食欲普遍要比B組高，A組受試者中出現(xiàn)腸道不適或感冒的人數(shù)為2人，其中一人出現(xiàn)腸道不適的原因是由飲食不當造成的，與本試驗無關(guān)；B組受試者出現(xiàn)腸道不適或感冒的人數(shù)為6人，相比之下，說明益生菌復合組合物與羊奶粉聯(lián)合使用后，能夠加強改善胃腸道功能，建議青少年在食用羊奶粉的時候同時食用本發(fā)明的益生菌復合組合物，達到營養(yǎng)的充分吸收，促進腸道健康。

以上所述僅為本發(fā)明較佳實施例，并不用于局限本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)所做的修改、等同替換和改進等，均需要包含在發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。