本發(fā)明涉及中藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種治療腦卒中的中藥組合物及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
腦卒中是危害人類健康及生命的三大疾病之一，僅次于心臟疾病和腫瘤，其死亡率在我國(guó)已達(dá)到21.3％。每年有數(shù)百萬人新患腦卒中或再度復(fù)發(fā)，并有1/4患者死亡。其病理生理改變主要涉及大腦缺血-再灌注所引發(fā)的瀑布式級(jí)聯(lián)反應(yīng),導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞功能障礙、致殘、甚至危及生命。隨著我國(guó)人口老齡化和高血壓患者數(shù)量增加，降低腦卒中的發(fā)病率、死亡率和致殘率已成為當(dāng)前一項(xiàng)刻不容緩的重要任務(wù)。
目前腦卒中的西藥治療主要利用硝苯地平、阿司匹林、組織型凝血酶原激活物(tpa)等進(jìn)行增加腦血流、抗栓、抗凝處理。但由于藥物需要長(zhǎng)期服用，容易出現(xiàn)包括心臟抑制、出血、胃炎、胃潰瘍、過敏反應(yīng)等不良反應(yīng)。此外此類藥物往往作用時(shí)間短，臨床療效不盡如人意。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
發(fā)明目的：為了解決上述問題，本發(fā)明的目的在于提供一種治療腦卒中的中藥組合物及其制備方法和應(yīng)用。
技術(shù)方案：本發(fā)明的目的是通過如下方案實(shí)現(xiàn)的：
一種治療腦卒中的中藥組合物，由包括以下重量份組分的原料制成：桑寄生26-30份，地鱉蟲6-8份，紅花8-10份，桃仁8-10份，皂刺6-8份，伸筋草26-30份，赤芍8-12份，鉤藤26-30份，地龍8-10份，天竺黃8-10份，竹茹8-12份，化橘紅8-12份，茯苓13-15份，生石決明26-30份，代赭石8-10份。
所述治療腦卒中的中藥組合物，由包括以下重量份組分的原料制成：桑寄生28份，地鱉蟲7份，紅花9份，桃仁9份，皂刺7份，伸筋草28份，赤芍10份，鉤藤28份，地龍9份，天竺黃9份，竹茹10份，化橘紅10份，茯苓14份，生石決明28份，代赭石9份。
所述治療腦卒中的中藥組合物，劑型為片劑、膠囊、緩釋片劑、丸劑、顆粒劑、分散片、散劑中的一種。
所述治療腦卒中的中藥組合物，制備方法為：先將地鱉蟲、地龍粉碎后過60目篩，加8倍水，勻漿器勻漿6min，勻漿條件為40℃，10000轉(zhuǎn)，靜置2h，轉(zhuǎn)速為4000離心10min，得上清液a；將茯苓粉碎，過40目，加8倍水浸提3h，浸提溫度為80℃，浸提次數(shù)為2次，浸提液合并，得浸提液a；將生石決明和代赭石，粉碎，加8倍水先煎30min，再加入桑寄生、赤芍、鉤藤、天竺黃、竹茹、伸筋草、紅花、桃仁、化橘紅、皂刺，加水煎煮三次，第一次加總藥材重量的10倍量的水，煎煮2小時(shí)，第二次和第三次分別加8倍量水，各煎煮1小時(shí)，合并煎液、上清液a和浸提液a，濾過，濾液40℃下減壓濃縮成80℃條件下相對(duì)密度為1.17～1.19的浸膏，加入輔料，制備成制劑。
所述治療腦卒中的中藥組合物在制備治療腦卒中藥物中的應(yīng)用。
有益效果：
1、傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)提出風(fēng)邪可以直接侵襲人體，發(fā)為中風(fēng)。外風(fēng)浸襲人體，可致半身不遂之中風(fēng)病。其機(jī)理為風(fēng)邪侵人俞穴，偏中于臟腑經(jīng)絡(luò)，引起偏身氣血運(yùn)行不暢、經(jīng)絡(luò)阻滯而發(fā)為偏枯病。其中以風(fēng)痰瘀血痹阻脈絡(luò)和痰熱腑實(shí)風(fēng)痰上擾兩證為常見。臨床表現(xiàn)為半身不遂，肢體麻木腫脹，舌強(qiáng)語謇，手不能握，足不能步，日久關(guān)節(jié)僵硬、畸形。本復(fù)方采用祛風(fēng)通絡(luò)、活血祛瘀、燥濕化痰法。其中以桑寄生祛風(fēng)通絡(luò)，強(qiáng)筋骨，通利全身關(guān)節(jié)；地鱉蟲破血逐瘀，搜剔血積，通經(jīng)活絡(luò)共為君藥。紅花、桃仁破瘀通經(jīng)、行血潤(rùn)燥；皂刺搜風(fēng)通絡(luò)，潰散雍結(jié)；伸筋草、赤芍祛風(fēng)舒筋、活血祛瘀，行血中之滯；鉤藤熄風(fēng)止痙共為臣藥。地龍，性寒，祛濕清熱，以防瘀血久郁化熱，并善通下肢經(jīng)絡(luò)；天竺黃、竹茹、化橘紅、茯苓化痰祛濕，和胃健脾；生石決明鎮(zhèn)肝熄風(fēng)；代赭石平肝降逆，共行佐使之效。諸藥合用，共起祛風(fēng)通絡(luò)、活血祛瘀、燥濕化痰之效。
2、本發(fā)明處方設(shè)計(jì)合理，配伍嚴(yán)謹(jǐn)，經(jīng)長(zhǎng)期的臨床驗(yàn)證，療效確切。
3、本發(fā)明組成為中藥材，無毒副作用，價(jià)格便宜。
具體實(shí)施方式
以下通過實(shí)施例形式，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說明，但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例，凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例1：桑寄生28g，地鱉蟲7g，紅花9g，桃仁9g，皂刺7g，伸筋草28g，赤芍10g，鉤藤28g，地龍9g，天竺黃9g，竹茹10g，化橘紅10g，茯苓14g，生石決明28g，代赭石9g。先將地鱉蟲、地龍粉碎后過60目篩，加8倍水，勻漿器勻漿(40℃，10000轉(zhuǎn)，6min)，靜置2h，離心(4000轉(zhuǎn)，10min)得上清液a。將茯苓粉碎，過40目，加8倍水浸提3h，浸提溫度為80℃，浸提次數(shù)為2次，浸提液合并，得浸提液a。將生石決明和代赭石，粉碎，加8倍水先煎30min，再加入桑寄生、赤芍、鉤藤、天竺黃、竹茹、伸筋草、紅花、桃仁、化橘紅、皂刺，加水煎煮三次，第一次加總藥材重量的10倍量的水，煎煮2小時(shí)。第二次和第三次分別加8倍量水，各煎煮1小時(shí)，合并煎液、上清液a和浸提液a，濾過，濾液40℃下減壓濃縮成相對(duì)密度為1.17～1.19的浸膏，加入輔料，干燥，壓片，包薄膜衣，即得。
實(shí)施例2：桑寄生26g，地鱉蟲6g，紅花8g，桃仁8g，皂刺6g，伸筋草26g，赤芍8g，鉤藤26g，地龍8g，天竺黃8g，竹茹8g，化橘紅8g，茯苓13g，生石決明26g，代赭石8g。先將地鱉蟲、地龍粉碎后過60目篩，加8倍水，勻漿器勻漿(40℃，10000轉(zhuǎn)，6min)，靜置2h，離心(4000轉(zhuǎn)，10min)得上清液a。將茯苓粉碎，過40目，加8倍水浸提3h，浸提溫度為80℃，浸提次數(shù)為2次，浸提液合并，得浸提液a。將生石決明和代赭石，粉碎，加8倍水先煎30min，再加入桑寄生、赤芍、鉤藤、天竺黃、竹茹、伸筋草、紅花、桃仁、化橘紅、皂刺，加水煎煮三次，第一次加總藥材重量的10倍量的水，煎煮2小時(shí)。第二次和第三次分別加8倍量水，各煎煮1小時(shí)，合并煎液、上清液a和浸提液a，濾過，濾液40℃下減壓濃縮成相對(duì)密度為1.17～1.19的浸膏，加入輔料，干燥，灌膠囊，即得膠囊劑。
實(shí)施例3：桑寄生30g，地鱉蟲8g，紅花10g，桃仁10g，皂刺8g，伸筋草30g，赤芍12g，鉤藤30g，地龍10g，天竺黃10g，竹茹12g，化橘紅12g，茯苓15g，生石決明30g，代赭石10g。先將地鱉蟲、地龍粉碎后過60目篩，加8倍水，勻漿器勻漿(40℃，10000轉(zhuǎn)，6min)，靜置2h，離心(4000轉(zhuǎn)，10min)得上清液a。將茯苓粉碎，過40目，加8倍水浸提3h，浸提溫度為80℃，浸提次數(shù)為2次，浸提液合并，得浸提液a。將生石決明和代赭石，粉碎，加8倍水先煎30min，再加入桑寄生、赤芍、鉤藤、天竺黃、竹茹、伸筋草、紅花、桃仁、化橘紅、皂刺，加水煎煮三次，第一次加總藥材重量的10倍量的水，煎煮2小時(shí)。第二次和第三次分別加8倍量水，各煎煮1小時(shí)，合并煎液、上清液a和浸提液a，濾過，濾液40℃下減壓濃縮成相對(duì)密度為1.17～1.19的浸膏，加入輔料，干燥，制備成顆粒劑。
本發(fā)明中的藥材均選用藥典品種。
實(shí)施例4：對(duì)腦卒中的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型藥效學(xué)研究
1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：雄性清潔級(jí)sd大鼠，體重250-300g，購(gòu)于浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物合格證號(hào)scxk(浙)2014-0001，自由攝食和飲水，在實(shí)驗(yàn)環(huán)境中適應(yīng)3d后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
2.實(shí)驗(yàn)藥物：按上述實(shí)施例1的制備方法制備得片劑。每片為5g，其中含生藥量為25.83g。
給藥劑量：按照《人和動(dòng)物間按體表面折算的等效劑量比值表》，參照sd大鼠的用量換算，每日60公斤人的用量為215g生藥量，每日每只200g的sd大鼠的用量為215÷60×5×0.2＝3.58g生藥量，因每片為5g，其中含生藥量為25.83g，即每只sd大鼠的用量為0.69g片劑，因此確定低劑量每只灌胃0.69g片劑，中劑量和高劑量分別灌胃1.38g和2.76g，每日每只200g的sd大鼠灌胃的片劑含生藥量分別為3.58g，7.16g，14.32g，則按sd大鼠體重計(jì)，低劑量、中劑量和高劑量分別為17.9g生藥量/kg、35.8g生藥量/kg和71.6g生藥量/kg。
陽(yáng)性藥尼莫地平購(gòu)于北京拜耳醫(yī)藥保健有限公司(批號(hào)：6924147652011)。按照體表面積換算，尼膜地平劑量為10.8mg/kg。
3.儀器與試劑：synergy2型酶標(biāo)儀，美國(guó)biotek公司；xhf-d型組織分散器，寧波新芝生物技術(shù)公司；bcl-2和bax一抗購(gòu)于武漢博士德生物工程有限公司(批號(hào)分別為ba0412、ba0315)；tunel凋亡試劑盒，美國(guó)羅氏診斷試劑公司、批號(hào)：10768100；il-1β、il-6和tnf-α試劑盒購(gòu)于北京華英生物技術(shù)研究所(批號(hào)分別為20160102、20160102、20151211)；水合氯醛，上海五聯(lián)化工廠，批號(hào)：20000218；紅四氮唑(ttc)，上海試劑三廠，批號(hào)：000619。
4.實(shí)驗(yàn)方法
4.1自制尼龍栓子：將一長(zhǎng)40mm，直徑0.24mm的尼龍線的一端加熱為光滑的球形。用酒精擦干凈并于距球端18mm處標(biāo)記，置于生理鹽水中備用。
4.2大鼠分組及大腦中動(dòng)脈缺血再灌注(mcao)模型的復(fù)制
大鼠隨機(jī)分為6組：假手術(shù)組、模型組(以上兩組給予等容積的生理鹽水)、陽(yáng)性藥物組(尼莫地平10.8mg/kg)、低劑量組(17.9g/kg)、中劑量組(35.8g/kg)、高劑量組(71.6g/kg)。連續(xù)灌胃給藥7天后，進(jìn)行mcao復(fù)制。
mcao復(fù)制方法：大鼠以10％水合氯醛(35mg/kg)腹腔麻醉，常規(guī)備皮、消毒、鋪巾，取頸正中切口切開頸部皮膚及皮下組織，分離右頸總動(dòng)脈(cca)、頸外動(dòng)脈(eca)及頸內(nèi)動(dòng)脈(ica)，結(jié)扎eca及cca近心端，在兩個(gè)結(jié)扎端之間的cca剪一小口，將尼龍線栓經(jīng)該小口再經(jīng)ica送至顱內(nèi)。尼龍線栓插入深度為19±0.5mm。腦缺血24小時(shí)后將栓線抽提至cca，再灌注24小時(shí)后進(jìn)行下列指標(biāo)檢測(cè)。假手術(shù)組除不插尼龍線外其余步驟同上。
4.3觀測(cè)指標(biāo)：
4.3.1大鼠局灶性腦缺血行為評(píng)分法
待手術(shù)后大鼠蘇醒后24h進(jìn)行評(píng)分。5分：無神經(jīng)功能缺損癥狀；4分：提尾時(shí)病灶對(duì)側(cè)前肢不能完全伸直；3分：向患側(cè)對(duì)側(cè)轉(zhuǎn)圈；2分：向患側(cè)對(duì)側(cè)跌倒；1分：不能自己行走，意識(shí)喪失。
4.3.2ttc染色測(cè)量腦梗塞率
ttc是一種常用的病理組織染料，使活體腦組織染成紅色，梗死的腦組織不被染色。因此可把不被染色的梗塞區(qū)和被染色的正常腦組織分離。
插線24小時(shí)評(píng)分后斷頭取腦，將腦組織置冰冷的生理鹽水中(2～3℃)，去除嗅球、小腦和低位腦干后，冠狀切四刀，得到五片。第一刀在腦前極與視交叉連線中間；第二刀在視交叉部位；第三刀在漏斗柄部位；第四刀在漏斗柄與后葉尾極之間。然后迅速將腦片置于20ml含有1％ttc的磷酸鹽緩沖液中，37℃避光溫孵30min，其中每隔7～8min翻動(dòng)一次，經(jīng)染色后正常腦組織呈玫瑰紅色，而缺血組織呈白色，且界限分明。溫孵完畢后將白色組織仔細(xì)挖下稱重，以梗死組織質(zhì)量占總腦組織質(zhì)量百分比作為腦梗塞率。
4.3.3組織學(xué)檢查
mcao處理24h后斷頭取腦，置10％甲醛溶液中固定，石蠟包埋，切片，一部分用甲苯胺藍(lán)染色，封片后顯微鏡下觀察尼氏小體數(shù)目。另一部分用tunel法進(jìn)行凋亡細(xì)胞計(jì)數(shù)。
4.3.4生化和炎癥指標(biāo)檢測(cè)
取腦組織，加入ns用高速分散器制備成10％的腦組織勻漿，離心，獲得上清液。按照試劑說明書步驟，采用酶標(biāo)儀法檢測(cè)腦勻漿超氧化物歧化酶(sod)、過氧化氫酶(cat)、谷胱甘肽過氧化物酶(gsh-px)和丙二醛(mda)的水平。另外采用elisa法檢測(cè)腦組織勻漿中il-1β、il-6、tnf-α三種炎癥因子的含量。
4.3.5對(duì)bcl-2和bax蛋白表達(dá)的影響
取新鮮大鼠腦組織，使用蛋白提取試劑盒提取總蛋白，bca法進(jìn)行蛋白定量，利用上樣緩沖液稀釋成統(tǒng)一濃度。行sds-聚丙烯酰胺凝膠電泳后，進(jìn)行pvdf轉(zhuǎn)膜。轉(zhuǎn)膜后將膜置入5％的脫脂奶粉封閉液中封閉1h。然后用一抗4℃孵育過夜，洗膜后孵育二抗。用pbst洗膜。滴加蛋白化學(xué)發(fā)光劑(ecl)，進(jìn)行曝光，拍照。利用imagej軟件進(jìn)行蛋白的表達(dá)定量分析。
4.3.6統(tǒng)計(jì)方法
數(shù)據(jù)用spss11.5統(tǒng)計(jì)軟件處理，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差
5實(shí)驗(yàn)結(jié)果
5.1對(duì)行為學(xué)、腦梗死率、尼氏小體和凋亡細(xì)胞數(shù)目的影響
實(shí)施例1中藥制劑中、高劑量組可顯著提高mcao大鼠行為學(xué)評(píng)分，減少大腦梗死率；低、中、高三個(gè)劑量組均可增加大腦尼氏小體數(shù)目，減少凋亡細(xì)胞數(shù)目(與模型組比較，p<0.05，0.01)。此外，高劑量組在增加尼氏小體和減少凋亡神經(jīng)元數(shù)目方面，甚至優(yōu)于尼莫地平。提示該中藥制劑在增加mcao大鼠神經(jīng)元數(shù)量上具有優(yōu)勢(shì)。結(jié)果見表1。
表1實(shí)施例1中藥制劑對(duì)mcao大鼠行為學(xué)、腦梗死率、尼氏小體和凋亡細(xì)胞數(shù)目的影響
與模型組比較，*p<0.05，**p<0.01。
5.2對(duì)生化指標(biāo)和炎癥因子的影響
實(shí)施例1中藥制劑中、高劑量組可顯著提高mcao大鼠腦組織中cat含量，減少il-6和tnf-α含量(與模型組比較，p<0.05，0.01)；低、中、高三個(gè)劑量組均可增加腦組織sod、gsh-px水平，減少mda和il-1β水平(與模型組比較，p<0.05，0.01)。此外，高劑量組在增加sod、cat、減少il-6方面，甚至優(yōu)于尼莫地平。提示該中藥制劑在提高mcao大鼠神經(jīng)元抗氧化能力和抗炎能力上具有優(yōu)勢(shì)。結(jié)果見表2和表3。
表2實(shí)施例1中藥制劑對(duì)mcao大鼠sod、cat、gsh-px和mda的影響
與模型組比較，*p<0.05，**p<0.01。
表3實(shí)施例1中藥制劑對(duì)mcao大鼠il-1β、il-6和tnf-α的影響
與模型組比較，*p<0.05，**p<0.01。
5.3對(duì)bcl-2和bax蛋白表達(dá)的影響
實(shí)施例1中藥制劑低、中、高三個(gè)劑量組均可顯著提高mcao大鼠腦組織中抗凋亡蛋白bcl-2的表達(dá)，減少促凋亡蛋白bax的表達(dá)(與模型組比較，p<0.05，0.01)。此外，高劑量組減少bax表達(dá)的作用強(qiáng)于尼莫地平。提示該中藥制劑前面的抗神經(jīng)元凋亡機(jī)制與調(diào)節(jié)bcl-2和bax的表達(dá)有關(guān)。結(jié)果見表4。
表4實(shí)施例1中藥制劑對(duì)mcao大鼠bcl-2和bax蛋白表達(dá)的影響
與模型組比較，*p<0.05，**p<0.01。
6.實(shí)驗(yàn)結(jié)論：該復(fù)方制劑可顯著提高mcao大鼠行為學(xué)評(píng)分，減少大腦梗死率和凋亡神經(jīng)元數(shù)目，并增加尼氏小體數(shù)目，提示藥物具有顯著的改善腦卒中癥狀，減少神經(jīng)元損傷的藥效。而在進(jìn)一步的機(jī)制研究中發(fā)現(xiàn)，該制劑不僅能提高mcao大鼠神經(jīng)元抗氧化能力和抗炎能力，而且還對(duì)凋亡相關(guān)蛋白bcl-2和bax的表達(dá)具有調(diào)控作用。此外，該復(fù)方制劑在保存神經(jīng)元數(shù)量，增加抗氧化和抗炎效果、調(diào)控凋亡相關(guān)蛋白上優(yōu)于尼莫地平。