本發(fā)明屬于生物制藥和納米技術領域，涉及藥物遞送系統(tǒng)，具體涉及一種新型果膠納米藥物的制備方法。

背景技術：

果膠（Pectin）是存在于植物細胞壁中的多糖類大分子物質(zhì)，它與聚乙二醇同為食品級高分子營養(yǎng)物質(zhì)，疏水藥物用高分子八臂聚乙二醇和果膠納米載體共同包載，遞送到靶細胞，可以達到緩慢釋放藥物的目的，自組裝過程包裹另一種藥物，達到互相促進的作用，可以實現(xiàn)兩種藥物的協(xié)同作用，從而增加療效。

雙氫青蒿素（DHA）是一種非生物堿倍半萜內(nèi)脂，存在與從植物黃花蒿莖葉中，其作用方式是通過其內(nèi)過氧化物（雙氧）橋，經(jīng)血紅蛋白分解后產(chǎn)生的游離鐵所介導，產(chǎn)生不穩(wěn)定的有機自由基及/或其他親電子的中介物，與體內(nèi)蛋白質(zhì)形成共價加合物，具有抑制腫瘤細胞增殖、誘導細胞凋亡、抗突變、保肝、調(diào)節(jié)機體免疫等多種生物活性。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術中的不足，提供一種新型果膠納米藥物的制備方法，果膠與載藥多臂聚乙二醇在水介質(zhì)中可自組裝形成納米粒子，解決DHA的水溶相差，生物利用度低等問題，使用果膠和八臂聚乙二醇為藥物載體，靶向性好，載藥量高，避免藥物的不完全釋放和突釋情況對患者帶來的毒副作用。

一種新型果膠納米藥物的制備方法的技術方案如下：

一種新型果膠納米藥物的制備方法，其特征在于，載有雙氫青蒿素（DHA)的八臂聚乙二醇（8ARM-PEG-COOH）與果膠（PET）通過酯鍵相連。

所述的一種新型果膠納米藥物的制備方法，其納米粒子中DHA的載藥量為1%-40%，納米粒子半徑10-200nm。

本發(fā)明所述的一種新型果膠納米藥物的制備方法，包括以下步驟：

（1）用20ml四氫呋喃溶解1.0g的八臂聚乙二醇，加入1.0g激活劑 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽（EDC），0.12g催化劑4-二甲氨基吡啶（DMAP），攪拌，再加入0.1～10mol雙氫青蒿素反應40～48h，反應物混合物旋蒸，透析過夜，透析液冷凍干燥，得到粉末A；

（2）取0.2g步驟（1）中的粉末A溶于DMSO，加入0.2g EDC和0.02g DMAP，反應30min，然后加入一定量的果膠，反應30～50h，得到反應混合液；

（3）將步驟（2）中得到的反應混合液加入乙醚，得到絮狀沉淀，離心洗滌多次，真空干燥，得到果膠-載藥八臂聚乙二醇粉末B；

（4）取20mg步驟（3）中粉末B和5mg 10-羥基喜樹堿溶于5ml二甲基亞砜，溶解5min，然后逐滴滴入去離子水中，所得溶液透析過夜，冷凍干燥，得到所述果膠-多臂聚乙二醇納米粒子。

優(yōu)選地，步驟（1）步驟（2）所述的八臂聚乙二醇與雙氫青蒿素的摩爾比為1:0.5～1:10；

優(yōu)選地，步驟（2）所述的果膠與載藥八臂聚乙二醇的摩爾比為0.1:0.01～0.1:1；

優(yōu)選地，步驟（2）所述的果膠-多臂聚乙二醇自組裝納米粒子粒徑10-200nm；

優(yōu)選地，步驟（2）所述的果膠-多臂聚乙二醇自組裝納米粒子的質(zhì)量百分比0.01%-90%；

優(yōu)選地，（1）-（4）所述的一種新型果膠納米藥物的制備方法，具有緩釋功能、癌靶向性及穩(wěn)定的粒徑大小。

本發(fā)明以果膠與八臂聚乙二醇為藥物載體，DHA與親水線性聚合物八臂聚乙二醇鍵接，所得的果膠-載藥八臂聚乙二醇的聚合物自組裝制備納米粒子，結(jié)構(gòu)比較穩(wěn)定，制作工藝簡單，實現(xiàn)藥物的水溶性和緩釋功能，以及對癌細胞的靶向性，并具有較高載藥量，納米藥物的粒徑為10-200nm。

相對現(xiàn)有技術，本發(fā)明具有以下有益效果：

本發(fā)明的一種新型果膠納米藥物具有癌靶向性，生物相容性好，毒副作用低，具有緩釋功能，果膠-載藥八臂聚乙二醇的聚合物在自組裝的同時還包裹HCPT，增大了載藥量，聯(lián)合DHA和HCPT靶向作用于腫瘤部位，以達到誘導腫瘤凋亡的目的。本發(fā)明的藥物合成及自組裝成納米藥物過程操作簡單，只需在水介質(zhì)中形成納米粒子，納米粒子穩(wěn)定。

附圖說明

圖1為合成高分子化合物PET-8ARM-PEG-DHA的核磁圖

圖2為納米粒子的透射電鏡形貌圖。

具體實施方式

下面結(jié)合具體實施方式，對本發(fā)明作進一步說明。

實施例1、一種新型果膠納米藥物的制備方法：

（1）PET的乙?；?/p>

取一定量的PET（酯化度50%～75%），緩慢加入冰醋酸、乙酸酐和硫酸，冰浴下反應一段時間，然后升溫至50℃，攪拌至溶液澄清，混合物旋蒸，乙醇洗至中性，冷凍干燥，得到乙?；z粉末A。

（2）8ARM-PEG-DHA的合成

用20ml四氫呋喃溶解1.0g的八臂聚乙二醇，加入1.0g激活劑 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽（EDC），0.12g催化劑4-二甲氨基吡啶（DMAP），攪拌，再加入2mol雙氫青蒿素反應40～48h，反應物混合物旋蒸，透析過夜，透析液冷凍干燥，得到粉末B；

（3）PET-8ARM-PEG-DHA的合成

取0.2g步驟（2）中的粉末B溶于DMSO，加入0.2g EDC和0.02g DMAP，反應30min，然后加入0.1g果膠，反應30～50h，得到反應混合液；

（4）PET-8ARM-PEG-DHA的純化

將步驟（3）中得到的反應混合液加入乙醚，得到絮狀沉淀，離心洗滌多次，真空干燥，得到果膠-載藥八臂聚乙二醇粉末C；

（5）PET-8ARM-PEG-DHA和HCPT的自組裝

取30mg步驟（4）中粉末B和8mg 10-羥基喜樹堿溶于5ml二甲基亞砜，攪拌溶解5min，然后逐滴滴入去離子水中，納米粒子溶液在PBS溶液中透析12h，每3h換一次透析液，所得溶液透析過夜，冷凍干燥，得到所述果膠-八臂聚乙二醇納米粒子，粒徑大小為10～80nm。

實施例2、一種新型果膠納米藥物的制備方法：

在本實例中，通過與實施例1相同的合成方法及步驟，八臂聚乙二醇與雙氫青蒿素的摩爾比為1:4，所述的果膠與載藥八臂聚乙二醇的摩爾比為1:4測得粒徑大小為20～100nm。