本發(fā)明涉及腦靶向制劑領(lǐng)域，具體地，涉及一種兩親性嵌段共聚物膠束復(fù)方載藥遞藥系統(tǒng)及腦靶向水溶性膠束的制備方法。

背景技術(shù)：

紫杉類藥物(紫杉醇、多西紫杉醇)是目前治療轉(zhuǎn)移性乳腺癌的主要用藥之一，盡管紫杉類藥物應(yīng)用廣泛，但其有很多無法避免的毒副作用，包括：脫發(fā)、疲乏、肌肉痛、骨髓抑制、神經(jīng)毒、過敏反應(yīng)等。

同時，紫杉類藥物高度不溶于水，其在水中溶解度為0.5μg/ml，因而在給藥時需要以聚氧乙烯蓖麻油及無水乙醇(1:1，V/V)為助溶劑，而聚氧乙烯蓖麻油可能會誘發(fā)患者產(chǎn)生致命的過敏反應(yīng)，因而，為預(yù)防過敏反應(yīng)，需要用大劑量抗組胺藥物及糖皮質(zhì)激素對患者進(jìn)行預(yù)處理。以上諸多不良因素則會降低患者的順應(yīng)性，進(jìn)而在一定程度上限制了紫杉類藥物的應(yīng)用。

拉帕替尼是一種口服的小分子表皮生長因子(EGFR：ErbB-1，ErbB-2)酪氨酸激酶抑制劑。臨床主要用于Her-2陽性且既往接受過包括蒽環(huán)類，紫杉醇，曲妥珠單抗(赫賽汀)治療的晚期或轉(zhuǎn)移性乳腺癌。

基于一系列臨床試驗的結(jié)果，拉帕替尼對于復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移、對赫賽汀耐藥的HER2陽性乳腺癌患者，均有很好的臨床效果，因此目前拉帕替尼可以作為單藥或與化療藥物聯(lián)合在臨床上應(yīng)用。

拉帕替尼在晚期或轉(zhuǎn)移性Her-2陽性的乳腺癌的治療中，具有不可替代的優(yōu)勢。但是，拉帕替尼的水溶性很差，在水中的溶解度僅為0.007mg/ml，難以制備水溶性注射劑，只能以口服片劑的方式給藥。不僅如此，拉帕替尼的生物利用度還很低(小于20％)，需要增加給藥劑量(單次給藥劑量達(dá)1.25g)和給藥頻次。由于該藥物價格昂貴，因此目前服用拉帕替尼極大增加了腫瘤患者的毒副作用及經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，并在一定程度上減弱了患者的依從性。

對于晚期乳腺癌患者而言，上述藥物的副作用極大地降低了依從性從而使療效大打折扣，更重要的是，由于紫杉醇、拉帕替尼很難在腦轉(zhuǎn)移病灶中達(dá)到有效劑量，這些難以忍受的藥物劑型，對乳腺癌腦轉(zhuǎn)移瘤基本無效。

因此，研發(fā)紫杉醇、拉帕替尼復(fù)方水溶性注射給藥系統(tǒng)及具有腦靶向功能的遞藥系統(tǒng)，有望提高生物利用度和抗腫瘤效果，降低毒副作用，提高藥物經(jīng)濟(jì)效益，具有良好的研究價值和臨床意義。

發(fā)明的內(nèi)容

本發(fā)明旨在克服上述缺陷，將紫杉醇、拉帕替尼制成復(fù)方水溶注射劑及具有腦靶向功能的遞藥系統(tǒng)，當(dāng)在該上遞藥系統(tǒng)連接親大腦內(nèi)皮細(xì)胞的短肽分子Angiopep-2，使得載藥膠束具有腦靶向功能，能夠跨越血腦屏障并且到達(dá)腦轉(zhuǎn)移病灶部位，發(fā)揮療效。

此外，在本發(fā)明中，以不同的抗癌機(jī)制發(fā)揮療效，不僅能夠克服單藥易耐藥的缺點，并且由于靶向給藥，能夠減少化療藥物對全身的不良作用，有望進(jìn)一步提高生物利用度和抗腫瘤效果，降低毒副作用，提高藥物經(jīng)濟(jì)學(xué)效益。

本發(fā)明提供了一種腦靶向水溶性膠束，其特征在于：將載紫杉醇和拉帕替尼的復(fù)方納米膠束與親大腦內(nèi)皮細(xì)胞的短肽分子Angiopep-2相連接。

進(jìn)一步地，本發(fā)明提供的一種腦靶向水溶性膠束的制備方法，其特征在于，具體制造工序如下所示：

步驟一、在載紫杉醇和拉帕替尼的復(fù)方納米膠束溶液中投入活化劑，活化膠束外層聚合物上的羧基鍵；

步驟二、在活化好的載拉帕替尼的兩親性嵌段納米膠束溶液中投入Angiopep-2,于10-40℃的溫度下孵化，使膠束的羧基鍵與短肽的氨基鍵連接，形成具有靶向功能的膠束；

步驟三、除去活化劑，得到純凈的腦靶向納米膠束水溶液。

進(jìn)一步地，本發(fā)明提供的一種腦靶向水溶性膠束的制備方法，還具有這樣的特點：即、上述活化劑的添加量為拉帕替尼用量的1-10倍；優(yōu)選為3-6倍。

上述Angiopep-2的用量為拉帕替尼用量的0.1-5倍；優(yōu)選為0.3-0.7倍。該Angiopep-2的用量一般為活化劑添加量的0.08-0.5倍。上述用量均為質(zhì)量比。

其中，上述拉帕替尼指用于制備載拉帕替尼的兩親性嵌段納米膠束溶液的過程中所使用的拉帕替尼的量。

進(jìn)一步地，本發(fā)明提供的一種腦靶向水溶性膠束的制備方法，還具有這樣的特點：即、在上述步驟一中，活化劑選自可活化羧基的任何試劑，最優(yōu)選使用N-羥基琥珀酰亞胺和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽。

進(jìn)一步地，本發(fā)明提供的一種腦靶向水溶性膠束的制備方法，還具有這樣的特點：即、上述步驟一的活化時間為0.5-2小時，活化溫度為10-80℃；

上述步驟二的孵化時間為4-12小時。

此外，本發(fā)明提供的一種腦靶向水溶性膠束，還具有這樣的特點：即、上述載紫杉醇和拉帕替尼的復(fù)方納米膠束由拉帕替尼、紫杉醇和聚合物通過薄膜水化法制備而成；

其中，上述聚合物選自聚乙二醇、聚乙二醇馬來酰亞胺或甲氧基聚乙二醇與聚乳酸、聚L-丙交酯-乙交酯、聚ε-己內(nèi)酯、聚(DL-丙交酯-乙交酯)、聚L-丙交酯、聚L-丙交酯中的一種或幾種的共聚產(chǎn)物；形成如：PEG-PLA、mPEG-PLA、malePEG-PLA(聚乙二醇馬來酰亞胺)等等結(jié)構(gòu)的聚合物；

和/或

上述聚合物選自聚乙二醇或甲氧基聚乙二醇與聚乳酸、聚L-丙交酯-乙交酯、聚ε-己內(nèi)酯、聚(DL-丙交酯-乙交酯)、聚L-丙交酯、聚L-丙交酯中的一種或幾種的末端進(jìn)行羧基封端的共聚產(chǎn)物。形成如：HOOC-PEG-PLA、HOOC-mPEG-PLA等等結(jié)構(gòu)的聚合物。

其中，上述共聚物中，聚乙二醇或甲氧基聚乙二醇選自分子量為500-50000的聚乙二醇或甲氧基聚乙二醇；優(yōu)選自分子量為1000-10000范圍內(nèi)的聚乙二醇或甲氧基聚乙二醇；最優(yōu)選自分子量為1000、2000、3000、4000、5000的聚乙二醇或甲氧基聚乙二醇。

上述共聚物中，聚乳酸、聚L-丙交酯-乙交酯、聚ε-己內(nèi)酯、聚(DL-丙交酯-乙交酯)、聚L-丙交酯或聚L-丙交酯選自分子量為100-50000的上述化合物；優(yōu)選自分子量為200-20000范圍內(nèi)的上述化合物中的一種或多種，與聚乙二醇或甲氧基聚乙二醇形成的嵌段聚合的產(chǎn)物。

此外，本發(fā)明提供的一種腦靶向水溶性膠束，還具有這樣的特點：即、上述載紫杉醇和拉帕替尼的復(fù)方納米膠束的具體制備方法如下所示：

步驟一、將拉帕替尼、紫杉醇和聚合物共同溶解于有機(jī)溶劑中；

步驟二、于10-60℃的溫度下，除去有機(jī)溶劑，得到薄膜；

步驟三、于10-60℃的恒溫水浴條件下，使薄膜全部溶解于水中，得到載藥膠束液體；水的用量根據(jù)后續(xù)反應(yīng)的需要進(jìn)行添加，優(yōu)選為有機(jī)溶劑用量的0.5-5倍。

步驟四、通過過濾，獲得純凈的載藥膠束液體。

此外，本發(fā)明提供的一種腦靶向水溶性膠束，還具有這樣的特點：即、上述拉帕替尼、紫杉醇和聚合物的質(zhì)量比為1:0.2-1：5-20。優(yōu)選為1:0.3-0.6：8-14。上述比例均指質(zhì)量比。

此外，本發(fā)明提供的一種腦靶向水溶性膠束，還具有這樣的特點：即、上述有機(jī)溶劑選自低沸點的容易，優(yōu)選為醇類溶劑，最優(yōu)選為甲醇；

上述聚合物選自共聚產(chǎn)物和末端進(jìn)行羧基封端的共聚產(chǎn)物；這兩種聚合物溫度混合物；

其中，上述共聚產(chǎn)物和末端進(jìn)行羧基封端的共聚產(chǎn)物的質(zhì)量比為10:0.1-5。

最優(yōu)選自所述聚合物選自PEG-PLA和COOH-PEG-PLA＝10:0.8-2(質(zhì)量比)的混合物，或malePEG-PLA和COOH-PEG-PLA＝10:0.8-2(質(zhì)量比)的混合物。

此外，本發(fā)明還提供了上述的一種腦靶向水溶性膠束的應(yīng)用，其特征在于：具有雙重腦靶向功能，應(yīng)用于治療乳腺癌腦轉(zhuǎn)移的病癥。

本發(fā)明的作用和效果：

在本發(fā)明中，通過制備復(fù)方的水溶性載藥納米膠束，并在此基礎(chǔ)上制備連接有腦靶向功能的載藥膠束。利用氨基和羧基鍵將膠束與靶向分子Angiopep-2連接，制備成具有雙重腦靶向功能的納米載藥膠束。經(jīng)靶向載藥膠束透體外血腦屏障的能力研究實驗可知，本發(fā)明涉及的接有靶向分子的膠束具有良好的穿透血腦屏障的功能。

此外，目前膠束的制備方法主要是透析法、自組裝法、靜電作用法、化學(xué)結(jié)合法，但是，這些方法都存在各種各樣的缺點，比如：透析法靜電作用法，不適合大規(guī)模生產(chǎn)；自組裝法，僅依靠范德華力等非共價鍵連接，所得膠束不穩(wěn)定，化學(xué)結(jié)合法對材料的要求性很高。

為了克服上述缺陷，在本發(fā)明中，采用薄膜水化法制備載紫杉醇和拉帕替尼的復(fù)方水溶性膠束，利用聚合物的生物特性，形成疏水內(nèi)殼包裹藥物紫杉醇和拉帕替尼，親水外殼提供良好的水溶性，能提高紫杉醇和拉帕替尼這兩類水溶性極差的藥物的水溶解性能，從而能擴(kuò)展該類藥物的應(yīng)用。此外，經(jīng)檢測該薄膜水化法制備的復(fù)方膠束的粒徑及電鏡圖發(fā)現(xiàn)，其載藥量包封率完全能滿足臨床需求。

此外，通過研究發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明提供的此類復(fù)方載藥膠束比空白膠束的粒徑更小，能使該藥物在應(yīng)用的過程中，順利的到達(dá)目標(biāo)靶點位置，因此，大大提高了其臨床上的應(yīng)用。

其后，該水溶性的膠束以氨基羧基鍵形成的共價鍵連接膠束與靶向短肽分子，使得膠束具有親大腦內(nèi)皮細(xì)胞功能。而載藥膠束具有的腦靶向功能，能夠跨越血腦屏障并且到達(dá)腦轉(zhuǎn)移病灶部位，發(fā)揮療效。

由此可見，采用本發(fā)明的方法獲得的腦靶向納米膠束，即能夠滿足水溶性強(qiáng)可注射的要求，提高生物利用度減少單次給藥劑量，降低患者經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，提高患者依從性。

而且，本發(fā)明提供的腦靶向水溶性膠束，還具有腦靶向功能，可用于臨床乳腺癌腦轉(zhuǎn)移的治療，提高腦轉(zhuǎn)移患者的生存率和生活質(zhì)量。

更重要的是，在本發(fā)明中，提供的一種水溶性載藥膠束，以不同的抗癌機(jī)制發(fā)揮療效，不僅能夠克服單藥易耐藥的缺點，并且由于靶向給藥，能夠減少化療藥物對全身的不良作用，有望進(jìn)一步提高生物利用度和抗腫瘤效果，降低毒副作用，提高藥物經(jīng)濟(jì)學(xué)效益。

由此可見，本發(fā)明的產(chǎn)品，擁有良好的穩(wěn)定性及生物相容性，既可以解決紫杉醇和拉帕替尼難溶性的實際問題，又能提供了一種能夠主動靶向腦轉(zhuǎn)移病灶的遞藥系統(tǒng)，貢獻(xiàn)了一種全新的給藥劑型，解決乳腺癌腦轉(zhuǎn)移患者無藥可用的困境。

附圖說明

附圖1、實施例一涉及的載紫杉醇和拉帕替尼的兩親性復(fù)方嵌段納米膠束1#的制備流程圖；

附圖2、實施例一涉及的載紫杉醇和拉帕替尼的兩親性復(fù)方嵌段納米膠束1#的粒徑；

附圖3、實施例一涉及的載紫杉醇和拉帕替尼的兩親性復(fù)方嵌段納米膠束1#的電鏡圖；

附圖4、實施例二涉及的載紫杉醇和拉帕替尼的兩親性復(fù)方嵌段納米膠束2#和腦靶向納米膠束的制備流程圖。

附圖5、實施例二涉及的載紫杉醇和拉帕替尼的兩親性復(fù)方嵌段納米膠束2#的粒徑；

附圖6、實施例二涉及的載紫杉醇和拉帕替尼的兩親性復(fù)方嵌段納米膠束2#的Zeta電位圖；

附圖7、靶向載藥膠束透體外血腦屏障的能力研究圖，即、建立體外血腦屏障模型后，兩種膠束在相同時間內(nèi)穿透BBB模型并進(jìn)入Skbr-3細(xì)胞的定性比較圖，其中，a為載cou-6的空膠束在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的分布，b為DAPI在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的分布，c為a,b圖片疊加。

具體實施方式

實施例一、載紫杉醇和拉帕替尼的兩親性復(fù)方嵌段納米膠束1#

A.制備階段：本實施例一涉及的載紫杉醇和拉帕替尼的兩親性復(fù)方嵌段納米膠束1#采用如圖1所示的制備流程進(jìn)行制備。

在本實施例中，采用薄膜水化法，使用甲醇作為溶劑，將聚合物malePEG-PLA和拉帕替尼、紫杉醇共溶解，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除盡有機(jī)溶劑并使用蒸餾水將薄膜溶于水中，形成載藥膠束，過濾得到純凈的水溶性的載拉帕替尼納米膠束。

具體工藝步驟如下：

步驟一、將4mg拉帕替尼、2mg紫杉醇和40mg聚合物malePEG-PLA共同溶解于6ml的甲醇中(在研究中發(fā)現(xiàn)，拉帕替尼在多種溶劑中均不能達(dá)到實驗所需的溶解度，而在甲醇中溶解狀態(tài)好)；

步驟二、將混合溶液用移液器轉(zhuǎn)移至250ml茄形瓶中，在40℃的恒溫水浴條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除盡有機(jī)溶劑，得到附著于茄形瓶內(nèi)的淡黃色薄膜。

步驟三、取下茄形瓶，用移液槍吸取4ml的蒸餾水，在40℃的恒溫水浴條件下使薄膜全部溶解于水中，得到淡黃色透明的載藥膠束液體。

步驟四、將所得的膠束液體過濾，除去游離藥物，得到純凈的載藥膠束液體。

B.膠束理化性能測定

B-1.膠束粒徑電位測定

(i).加雙蒸水將載藥膠束LPTN+PTX-MIC稀釋至適當(dāng)濃度，采用粒度/Zeta電位測定儀測定粒徑值。

如圖2所示，載紫杉醇和拉帕替尼的兩親性復(fù)方嵌段納米膠束1#的粒徑為16.3nm。

作為比對，在本實施例中還采用薄膜水化法，將適量的malePEG2000-PLA200溶于甲醇后，制備成的空白膠束，其粒徑為20nm左右>載藥膠束的粒徑。

由此可以，看出，在載入紫杉醇和拉帕替尼后，膠束粒徑反而降低了。

(ii).將膠束溶液稀釋后滴加于覆蓋碳膜的銅網(wǎng)上，用磷鎢酸(pH 7.0，2％，w/v)負(fù)染，室溫干燥后置于透射電子顯微鏡下觀察膠束外部形態(tài)，如圖3所示，其分散性佳。

B-2.載藥量包封率的測定

(i).紫杉醇HPLC分析的色譜條件

色譜柱：Dikma Diamonsil C18(4.6×250mm，5μm)

流動相：乙腈∶雙蒸水(50∶50)

流速：1.0mL/min

檢測器：紫外檢測器

檢測波長：228nm

柱溫：35℃

進(jìn)樣量：20μL

(ii).拉帕替尼HPLC分析的色譜條件

色譜柱：Dikma Diamonsil C18(4.6×250mm，5μm)

流動相：乙腈∶0.01MKH2PO4溶液(PH＝6.2)(65∶35)

流速：1.0ml/min

檢測器：紫外檢測器

檢測波長：253nm

柱溫：35℃

進(jìn)樣量：20μL

精密吸取過濾后的LPTN+PTX-MIC溶液，加入定量甲醇稀釋并釋放出拉帕替尼，超聲5min使聚合物溶解完全，0.45μm微孔濾膜過濾，取溶液進(jìn)樣測定。按照下式分別計算包封率(Entrapping Efficiency，EE)與載藥量(Drug Loading Capacity，DLC)：

紫杉醇的載藥量DLC為2％，包封率EE為79％,

拉帕替尼的載藥量DLC為5％，包封率EE為81％。

實施例二、載紫杉醇和拉帕替尼的兩親性復(fù)方嵌段納米膠束2#和腦靶向納米膠束

A.制備階段：本實施例二涉及的載紫杉醇和拉帕替尼的兩親性復(fù)方嵌段納米膠束2#和腦靶向納米膠束采用如圖4所示的制備流程進(jìn)行制備。

在本實施例二中，同樣采用薄膜水化法，使用甲醇作為溶劑，將聚合物malePEG-PLA,COOH-PEG-PLA，紫杉醇和拉帕替尼按照比例共同溶解于甲醇中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除盡有機(jī)溶劑并使用蒸餾水將薄膜溶于水中，形成載藥膠束，并利用氨基和羧基鍵形成的共價鍵將膠束與靶向分子Angiopep-2連接，制備成具有腦靶向功能的納米載藥膠束。

具體工藝步驟如下：

步驟一、將4mg拉帕替尼、2mg紫杉醇和40mg聚合物malePEG-PLA、4mg聚合物COOH-PEG-PLA共同溶解于6ml的甲醇中(因拉帕替尼在多種溶劑中均不能達(dá)到實驗所需的溶解度，而在甲醇中溶解狀態(tài)好)

步驟二、將混合溶液用移液器轉(zhuǎn)移至250ml茄形瓶中，在恒溫水浴條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除盡有機(jī)溶劑，得到附著于茄形瓶內(nèi)的淡黃色薄膜。

步驟三、取下茄形瓶，用移液槍吸取4ml蒸餾水，在恒溫水浴條件下使薄膜全部溶解于水中，得到淡黃色透明的載藥膠束液體。

步驟四、將所得的膠束液體過濾，除去游離藥物，得到純凈的載藥膠束液體。

步驟五、在膠束溶液中投入過量的14.2mg的EDC(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽)和4mg的NHS(N-羥基琥珀酰亞胺)，室溫孵化0.5小時，用于活化膠束外層聚合物上的羧基鍵(COOH-)。

步驟六、在活化好的膠束溶液中投入2mg的Angiopep-2,室溫孵化6小時，使膠束的羧基鍵與短肽的氨基鍵連接，形成具有靶向功能的膠束。

步驟七、超濾，除去活化劑EDC,NHS，得到純凈的靶向載藥膠束水溶液。

B.膠束理化性能測定

B-1.靶向載藥膠束的粒徑電位測定

(i).加雙蒸水將靶向載藥膠束ANG-LPTN+PTX-MIC稀釋至適當(dāng)濃度，采用粒度/Zeta電位測定儀測定粒徑值。

如圖5所示，載拉帕替尼的兩親性嵌段納米膠束2#的粒徑為19.9nm。

從上述數(shù)據(jù)可以看出，按本實施例二的方法制造的復(fù)方兩親性嵌段納米膠束2#的粒徑也小于空白膠束的粒徑。

(ii).將膠束溶液稀釋后滴加于覆蓋碳膜的銅網(wǎng)上，用磷鎢酸(pH 7.0，2％，w/v)負(fù)染，室溫干燥后置于透射電子顯微鏡下觀察膠束外部形態(tài)，如圖6所示，其分散均勻。

B-2.靶向載藥膠束透體外血腦屏障的能力研究

根據(jù)文獻(xiàn)利用Transwell細(xì)胞培養(yǎng)板構(gòu)建體外血腦屏障模型，按照上述方法制備載熒光香豆素6的兩種膠束，一種不接靶向分子，一種接載靶向分子。

利用香豆素6能進(jìn)入細(xì)胞漿但不能進(jìn)入細(xì)胞核，而染料DAPI主要染色細(xì)胞核的特性，觀察兩種膠束在相同時間內(nèi)穿越血腦屏障模型的量。

如圖7所示，建立體外血腦屏障模型后，兩種膠束在相同時間內(nèi)穿透BBB模型并進(jìn)入Skbr-3細(xì)胞的定性比較。

a為載cou-6的空膠束在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的分布，b為DAPI在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的分布，c為a,b圖片疊加，可以直觀地觀察到下圖，即接有靶向分子的膠束在相同時間內(nèi)對BBB的穿透能力明顯強(qiáng)于未接靶向分子的膠束。

由此可見，本實施例提供的復(fù)方載藥膠束具備良好的物理性能，在此基礎(chǔ)上制備的腦靶向復(fù)方載藥膠束，具有良好的穿透血腦屏障的功能。

利用兩種具有不同的抗腫瘤機(jī)制的藥物，并且已經(jīng)證實具有協(xié)同作用的藥物，制備成復(fù)方智能給藥系統(tǒng)，能夠滿足降低毒副作用減少給藥劑量，治療腦轉(zhuǎn)移病灶的需求。

上述實施例一和二中，選用的malePEG-PLA為malePEG2000-PLA200，而研究者還通過采用不同的聚合物來合成納米膠束，并經(jīng)測定發(fā)現(xiàn)，此類納米膠束均擁有良好的穩(wěn)定性及生物相容性，既可以解決紫杉醇和拉帕替尼難溶性的實際問題，又提供了一種能夠主動實現(xiàn)雙重靶向腦轉(zhuǎn)移病灶的遞藥系統(tǒng)。

具體示例如下：

實施例三、載拉帕替尼的兩親性嵌段納米膠束3#

在本實施例三中，將4mg拉帕替尼、2mg紫杉醇和40mg聚合物mPEG2000-PLA200共同溶解于6ml的甲醇中；將混合溶液用移液器轉(zhuǎn)移至250ml茄形瓶中，在40℃的恒溫水浴條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除盡有機(jī)溶劑，得到附著于茄形瓶內(nèi)的淡黃色薄膜；取下茄形瓶，用移液槍吸取4ml的蒸餾水，在40℃的恒溫水浴條件下使薄膜全部溶解于水中，得到淡黃色透明的載藥膠束液體；將所得的膠束液體過濾，除去游離藥物，得到純凈的載藥膠束液體。

實施例四、載拉帕替尼的兩親性嵌段納米膠束4#

在本實施例四中，將4mg拉帕替尼、1mg紫杉醇和20mg聚合物PEG(2000)-b-PLGA(10000)共同溶解于5ml的甲醇中；將混合溶液用移液器轉(zhuǎn)移至250ml茄形瓶中，在40℃的恒溫水浴條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除盡有機(jī)溶劑，得到附著于茄形瓶內(nèi)的薄膜；取下茄形瓶，用移液槍吸取5ml的蒸餾水，在40℃的恒溫水浴條件下使薄膜全部溶解于水中，得到透明的載藥膠束液體；將所得的膠束液體過濾，除去游離藥物，得到純凈的載藥膠束液體。

實施例五、載拉帕替尼的兩親性嵌段納米膠束5#

在本實施例五中，將4mg拉帕替尼、4mg紫杉醇和80mg聚合物PEG(5000)-b-PCL(10000)共同溶解于10ml的甲醇中；將混合溶液用移液器轉(zhuǎn)移至250ml茄形瓶中，在40℃的恒溫水浴條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除盡有機(jī)溶劑，得到附著于茄形瓶內(nèi)的薄膜；取下茄形瓶，用移液槍吸取8ml的蒸餾水，在60℃的恒溫水浴條件下使薄膜全部溶解于水中，得到透明的載藥膠束液體；將所得的膠束液體過濾，除去游離藥物，得到純凈的載藥膠束液體。

上述載拉帕替尼的兩親性嵌段納米膠束3#-5#的粒徑均小于20nm。

紫杉醇的載藥量DLC為2-4％，包封率EE為77-80％,

拉帕替尼的載藥量DLC為5-7％，包封率EE為79-83％。

實施例六、載拉帕替尼的兩親性嵌段納米膠束6#和其腦靶向納米膠束

在本實施例六中，將4mg拉帕替尼、2mg紫杉醇和40mg聚合物mPEG2000-PLA200、4mg聚合物COOH-mPEG2000-PLA200共同溶解于6ml的甲醇中，將混合溶液用移液器轉(zhuǎn)移至250ml茄形瓶中，在恒溫水浴條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除盡有機(jī)溶劑，得到附著于茄形瓶內(nèi)的淡黃色薄膜。取下茄形瓶，用移液槍吸取4ml蒸餾水，在恒溫水浴條件下使薄膜全部溶解于水中，得到淡黃色透明的載藥膠束液體。將所得的膠束液體過濾，除去游離藥物，得到純凈的載藥膠束液體6#。在膠束溶液中投入過量的14.2mg的EDC和4mg的NHS，室溫孵化0.5小時。在活化好的膠束溶液中投入2mg的Angiopep-2,室溫孵化6小時，超濾除去活化劑EDC,NHS，得到純凈的靶向載藥膠束水溶液6#。

實施例七、載拉帕替尼的兩親性嵌段納米膠束7#和其腦靶向納米膠束

在本實施例七中，將4mg拉帕替尼、3mg紫杉醇和21mg聚合物PEG(2000)-b-PLGA(10000)、5mg聚合物COOH-PEG(2000)-b-PLGA(10000)共同溶解于7ml的甲醇中，將混合溶液用移液器轉(zhuǎn)移至250ml茄形瓶中，在恒溫水浴條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除盡有機(jī)溶劑，得到附著于茄形瓶內(nèi)的薄膜。取下茄形瓶，用移液槍吸取6ml蒸餾水，在恒溫水浴條件下使薄膜全部溶解于水中，得到透明的載藥膠束液體。將所得的膠束液體過濾，除去游離藥物，得到純凈的載藥膠束液體7#。在膠束溶液中投入過量的4mg的EDC和4mg的NHS，室溫孵化1小時。在活化好的膠束溶液中投入4mg的Angiopep-2,室溫孵化8小時，超濾除去活化劑EDC,NHS，得到純凈的靶向載藥膠束水溶液7#。

實施例八、載拉帕替尼的兩親性嵌段納米膠束8#和其腦靶向納米膠束

在本實施例七中，將4mg拉帕替尼、4mg紫杉醇和55mg聚合物PEG(5000)-b-PCL(10000)、15mg聚合物COOH-PEG(5000)-b-PCL(10000)共同溶解于6ml的甲醇中，將混合溶液用移液器轉(zhuǎn)移至250ml茄形瓶中，在恒溫水浴條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除盡有機(jī)溶劑，得到附著于茄形瓶內(nèi)的薄膜。取下茄形瓶，用移液槍吸取8ml蒸餾水，在恒溫水浴條件下使薄膜全部溶解于水中，得到透明的載藥膠束液體。將所得的膠束液體過濾，除去游離藥物，得到純凈的載藥膠束液體8#。在膠束溶液中投入過量的25mg的EDC和8mg的NHS，室溫孵化2小時。在活化好的膠束溶液中投入1mg的Angiopep-2,室溫孵化12小時，超濾除去活化劑EDC,NHS，得到純凈的靶向載藥膠束水溶液8#。

上述載拉帕替尼的兩親性嵌段納米膠束6#-8#的粒徑均小于20nm。

紫杉醇的載藥量DLC為1-4％，包封率EE為76-82％,

拉帕替尼的載藥量DLC為4-9％，包封率EE為78-85％。

通過上述實驗可以發(fā)現(xiàn)，以上為本專利提供的一種新型的復(fù)方水溶性載藥膠束遞藥系統(tǒng)，均擁有良好的穩(wěn)定性及生物相容性，既可以解決紫杉醇和拉帕替尼難溶性的實際問題，此外還可利用兩種藥物不同的抗腫瘤原理，通過協(xié)同作用加強(qiáng)對腫瘤的殺傷作用，并且因為連接了靶向分子，能夠主動穿透血腦屏障，聚集于腦部腫瘤組織部位，通過雙重靶向作用對乳腺癌腦轉(zhuǎn)移患者發(fā)揮作用，即便既往使用過紫杉醇，已經(jīng)產(chǎn)生耐藥的患者，也能從中獲益。由此，貢獻(xiàn)了一種全新的給藥劑型，解決乳腺癌腦轉(zhuǎn)移患者無藥可用的困境。