本發(fā)明屬于畜禽養(yǎng)殖業(yè)病害防治技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種復(fù)合酸化劑，還涉及上述復(fù)合酸化劑的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

隨著抗生素和抗菌藥物生長(zhǎng)促進(jìn)劑在動(dòng)物飼料中的禁止添加，尋找無(wú)殘留、無(wú)污染效果良好的抗生素替代品，已成為當(dāng)今動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)研究和畜牧養(yǎng)殖科技開(kāi)發(fā)的重點(diǎn)之一。其中，由多種有機(jī)酸及其鹽類(lèi)復(fù)配而成的復(fù)合酸化劑，通過(guò)降低動(dòng)物腸道pH值，以及抑制腸道有害微生物的繁殖，在維持動(dòng)物腸道健康和促進(jìn)動(dòng)物生產(chǎn)性能方面顯現(xiàn)出優(yōu)異的效果，用復(fù)合酸化劑作為抗生素替代品已得到越來(lái)越多的共識(shí)。

目前，關(guān)于飼用復(fù)合酸化劑的研究報(bào)道已有很多，明確了復(fù)合酸化劑的使用效果。大量的研究表明，被動(dòng)物攝入的酸化劑避免在前部消化道的吸收，順利進(jìn)入后部腸道，是復(fù)合酸化劑發(fā)揮作用的關(guān)鍵之一。在養(yǎng)豬生產(chǎn)中，解決這一問(wèn)題的有效方法是采用合適的包被材料，將酸化劑的有效成分予以包埋處理，制備的微囊化酸化劑可以方便地與飼料混合。一方面避免了有機(jī)酸對(duì)胃粘膜的刺激以及對(duì)內(nèi)源性胃酸分泌的反饋抑制，另一方面微囊化的有機(jī)酸在后部腸道釋放，充分發(fā)揮抑制病原微生物、調(diào)節(jié)微生態(tài)平衡以及促進(jìn)腸黏膜發(fā)育更新的作用。

然而，現(xiàn)代化家禽養(yǎng)殖生產(chǎn)特點(diǎn)對(duì)復(fù)合酸化劑的使用提出了更高的要求。一方面，家禽顆粒飼料通過(guò)料線(xiàn)從料塔分配到禽舍，拌料使用的酸化劑無(wú)法使用；另一方面，通過(guò)飲水使用的酸化劑能夠有效控制水線(xiàn)中細(xì)菌的繁殖和污染。因而，這就要求適用于家禽養(yǎng)殖的復(fù)合酸化劑首先要溶于水以便于通過(guò)飲水添加；其次，具備緩釋特性以保證大部分有效成分到達(dá)后部消化道；第三，減少有機(jī)酸解離狀態(tài)的比例，以避免對(duì)胃粘膜的刺激和造成對(duì)胃酸分泌的反饋性抑制。

因此，開(kāi)發(fā)出一種能廣譜抑菌并具有緩釋特點(diǎn)的水溶性復(fù)合酸化劑具有重要的應(yīng)用價(jià)值。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的之一是解決上述技術(shù)問(wèn)題，提供一種新型的復(fù)合酸化劑新組方。

為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：一種復(fù)合酸化劑，包括甲酸銨、乙酸、丙酸鈣、乳酸、黃原膠和殼寡糖。

具體地，每100ml本發(fā)明的復(fù)合酸化劑中，包括甲酸銨10-30g、乙酸2-6g、丙酸鈣10-30g、乳酸8-22g、殼寡糖0.2-1.2g、黃原膠0.2-2g和余量的蒸餾水。

本發(fā)明的復(fù)合酸化劑的制備方法為：稱(chēng)取甲酸銨10-30g、乙酸2-6g、丙酸鈣10-30g、乳酸8-22g、殼寡糖0.2-1.2g、黃原膠0.2-2g，用蒸餾水定容至100mL并混勻，常溫條件下20-50rpm攪拌2-4h。

優(yōu)選地，每100ml本發(fā)明的復(fù)合酸化劑中，包括甲酸銨24g，乙酸4g，丙酸鈣10g，乳酸18g、殼寡糖0.8g、黃原膠1.2g和余量的蒸餾水。

本發(fā)明還公開(kāi)了一種上述復(fù)合酸化劑在抑制大腸桿菌、沙門(mén)氏菌、綠膿桿菌、黃曲霉菌等致病菌時(shí)的應(yīng)用。

經(jīng)研究人員多年反復(fù)曲折的研究，創(chuàng)造性地利用黃原膠形成半膠質(zhì)的立體大分子結(jié)構(gòu)，作為有機(jī)酸的緩釋載體；并進(jìn)一步通過(guò)添加特定比例帶正電荷的殼寡糖，極大地?cái)U(kuò)大了其緩沖容量。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明的復(fù)合酸化劑解離態(tài)有機(jī)酸比例較小，分子形態(tài)更有利于進(jìn)入細(xì)菌內(nèi)部發(fā)揮抑菌功能，又避免了氫離子對(duì)胃粘膜的刺激以及對(duì)胃酸分泌的反饋性抑制；水溶性緩釋載體只有進(jìn)入腸道才被降解，穩(wěn)定釋放出有機(jī)酸，能更有效抑制大腸桿菌和沙門(mén)氏菌等致病菌；通過(guò)水線(xiàn)的加藥器方便添加，適應(yīng)于規(guī)?；仪蒺B(yǎng)殖的需要。

附圖說(shuō)明

圖1為復(fù)合酸化劑對(duì)肉雞成活率的影響；

圖2為酸化劑對(duì)肉雞體重的影響；

圖3為復(fù)合酸化劑對(duì)肉雞料重比的影響；

圖4 復(fù)合酸化劑對(duì)肉雞歐洲效益指數(shù)的影響；

圖中，*表示差異顯著（P<0.05），**表示差異極顯著（P<0.01）。

具體實(shí)施方式

以下的實(shí)施例是為了便于更好地理解本發(fā)明，但并不用于限定本發(fā)明。下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。

材料

試劑

甲酸銨（分析純）購(gòu)自鄭州華洋化工產(chǎn)品有限公司；乙酸（分析純）購(gòu)自天津市永大化學(xué)試劑有限公司；丙酸鈣（分析純）購(gòu)自山東同泰維潤(rùn)化工有限公司；乳酸（分析純）購(gòu)自萊陽(yáng)市康德化工有限公司；請(qǐng)補(bǔ)充殼寡糖、黃原膠的購(gòu)買(mǎi)途徑；NaCl（分析純）購(gòu)自天津市廣成化學(xué)試劑有限公司；新潔爾滅購(gòu)自山東利爾康消毒科技股份有限公司；無(wú)水乙醇購(gòu)自萊陽(yáng)市康德化工有限公司。

商品化復(fù)合酸化劑：復(fù)合酸化劑A：荷蘭賽爾可生物公司產(chǎn)品；復(fù)合酸化劑B：百奧明生物公司產(chǎn)品；復(fù)合酸化劑C：濰坊康葆佳生物科技有限公司；復(fù)合酸化劑D：青島易加生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品。

營(yíng)養(yǎng)瓊脂購(gòu)自青島高科園海博生物技術(shù)有限公司；營(yíng)養(yǎng)肉湯購(gòu)自北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司；真菌培養(yǎng)基購(gòu)自北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司；MRS培養(yǎng)基購(gòu)自北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司。

菌株：大腸桿菌臨床分離株（O78）、腸炎沙門(mén)氏菌臨床分離株、綠膿桿菌（ATCC27853），由青島農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室保存；黃曲霉菌（ATCC28539）購(gòu)自北納創(chuàng)聯(lián)生物技術(shù)研究院。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為山東民和牧業(yè)股份有限公司提供的1日齡羅斯308雞苗，體重在41g~42g，每棟雞舍20000只。

培養(yǎng)基配制

所需培養(yǎng)基及配制方法如下：

營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：稱(chēng)取33.0g營(yíng)養(yǎng)瓊脂，加入1000mL蒸餾水，加熱煮沸溶解，121℃高壓滅菌15min。

營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基：稱(chēng)取30.0g營(yíng)養(yǎng)肉湯，加入1000mL蒸餾水，加熱煮沸溶解，121℃高壓滅菌20min。

真菌培養(yǎng)基：稱(chēng)取真菌瓊脂28.5g，加入1000mL蒸餾水，加熱煮沸溶解后， 115℃高壓滅菌20min。

主要儀器設(shè)備

醫(yī)用凈化工作臺(tái)（SW-CJ-2F型，蘇凈集團(tuán)安泰公司）；電熱恒溫培養(yǎng)箱（HH·B11·360-s型，上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠(chǎng)）；空氣浴振蕩器（HZQ-C型，哈爾濱市東明醫(yī)療儀器廠(chǎng)）；冰箱（BCD-248WTPM，海爾集團(tuán)）；電熱手提壓力蒸汽消毒器（YXQ·SG41·280型，上海醫(yī)用核子儀器廠(chǎng)）；六聯(lián)電子調(diào)溫萬(wàn)用電爐（龍口市先科儀器公司）；電子天平（YB202N型，上海?？惦娮觾x器廠(chǎng)）；可調(diào)式微量移液器（Dragon lab）；96孔血清板購(gòu)自北京鼎國(guó)昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司；血球計(jì)數(shù)板（XB-K-25型）購(gòu)自上海安信光學(xué)儀器制造有限公司；計(jì)數(shù)器（柯橋醫(yī)療器械廠(chǎng)）；顯微鏡（OLYMPUS）；電子pH計(jì)（DELTA320型，梅特勒-托利多儀器有限公司）。

實(shí)施例1

一種復(fù)合酸化劑，包括甲酸銨、乙酸、丙酸鈣、乳酸、黃原膠和殼寡糖，其中每100ml的復(fù)合酸化劑中包括甲酸銨10g、乙酸2g、丙酸鈣10g、乳酸8g、殼寡糖0.2g、黃原膠0.2g和余量的蒸餾水。

本發(fā)明的復(fù)合酸化劑的制備方法為：稱(chēng)取甲酸銨10g、乙酸2g、丙酸鈣10g、乳酸8g、殼寡糖0.2g、黃原膠0.2g，用蒸餾水定容至100mL并混勻，常溫條件下20-50rpm攪拌2-4h。

實(shí)施例2

一種復(fù)合酸化劑，包括甲酸銨、乙酸、丙酸鈣、乳酸、黃原膠和殼寡糖，其中每100ml的復(fù)合酸化劑中包括甲酸銨14g、乙酸4g、丙酸鈣14g、乳酸12g、殼寡糖0.4g、黃原膠0.4g和余量的蒸餾水。

本發(fā)明的復(fù)合酸化劑的制備方法為：稱(chēng)取甲酸銨14g、乙酸4g、丙酸鈣14g、乳酸12g、殼寡糖0.4g、黃原膠0.4g，用蒸餾水定容至100mL并混勻，常溫條件下20-50rpm攪拌2-4h。

實(shí)施例3

一種復(fù)合酸化劑，包括甲酸銨、乙酸、丙酸鈣、乳酸、黃原膠和殼寡糖，其中每100ml的復(fù)合酸化劑中包括甲酸銨18g、乙酸6g、丙酸鈣18g、乳酸16g、殼寡糖0.6g、黃原膠0.8g和余量的蒸餾水。

本發(fā)明的復(fù)合酸化劑的制備方法為：稱(chēng)取甲酸銨18g、乙酸6g、丙酸鈣18g、乳酸16g、殼寡糖0.6g、黃原膠0.8g，用蒸餾水定容至100mL并混勻，常溫條件下20-50rpm攪拌2-4h。

實(shí)施例4

一種復(fù)合酸化劑，包括甲酸銨、乙酸、丙酸鈣、乳酸、黃原膠和殼寡糖，其中每100ml的復(fù)合酸化劑中包括甲酸銨24g、乙酸2g、丙酸鈣24g、乳酸20g、殼寡糖0.8g、黃原膠1.2g和余量的蒸餾水。

本發(fā)明的復(fù)合酸化劑的制備方法為：稱(chēng)取甲酸銨24g、乙酸2g、丙酸鈣24g、乳酸20g、殼寡糖0.8g、黃原膠1.2g，用蒸餾水定容至100mL并混勻，常溫條件下20-50rpm攪拌2-4h。

實(shí)施例5

一種復(fù)合酸化劑，包括甲酸銨、乙酸、丙酸鈣、乳酸、黃原膠和殼寡糖，其中每100ml的復(fù)合酸化劑中包括甲酸銨30g、乙酸6g、丙酸鈣30g、乳酸22g、殼寡糖1.2g、黃原膠2g和余量的蒸餾水。

本發(fā)明的復(fù)合酸化劑的制備方法為：稱(chēng)取甲酸銨30g、乙酸6g、丙酸鈣30g、乳酸22g、殼寡糖1.2g、黃原膠2g，用蒸餾水定容至100mL并混勻，常溫條件下20-50rpm攪拌2-4h。

實(shí)施例6

一種復(fù)合酸化劑，包括甲酸銨、乙酸、丙酸鈣、乳酸、黃原膠和殼寡糖，其中每100ml的復(fù)合酸化劑中包括甲酸銨18g、乙酸4g、丙酸鈣24g、乳酸22g、殼寡糖1.0g、黃原膠1.6g和余量的蒸餾水。

本發(fā)明的復(fù)合酸化劑的制備方法為：稱(chēng)取甲酸銨18g、乙酸4g、丙酸鈣24g、乳酸22g、殼寡糖1.0g、黃原膠1.6g，用蒸餾水定容至100mL并混勻，常溫條件下20-50rpm攪拌2-4h。

實(shí)施例7

一種復(fù)合酸化劑，包括甲酸銨、乙酸、丙酸鈣、乳酸、黃原膠和殼寡糖，其中每100ml的復(fù)合酸化劑中包括甲酸銨30g、乙酸2g、丙酸鈣24g、乳酸22g、殼寡糖1.2g、黃原膠1.2g和余量的蒸餾水。

本發(fā)明的復(fù)合酸化劑的制備方法為：稱(chēng)取甲酸銨30g、乙酸2g、丙酸鈣24g、乳酸22g、殼寡糖1.2g、黃原膠1.2g，用蒸餾水定容至100mL并混勻，常溫條件下20-50rpm攪拌2-4h。

實(shí)施例8

一種復(fù)合酸化劑，包括甲酸銨、乙酸、丙酸鈣、乳酸、黃原膠和殼寡糖，其中每100ml的復(fù)合酸化劑中包括甲酸銨24g，乙酸6g，丙酸鈣10g，乳酸18g、殼寡糖0.8g、黃原膠1.2g和余量的蒸餾水。

本發(fā)明的復(fù)合酸化劑的制備方法為：稱(chēng)取甲酸銨24g，乙酸6g，丙酸鈣10g，乳酸18g、殼寡糖0.8g、黃原膠1.2g，用蒸餾水定容至100mL并混勻，常溫條件下20-50rpm攪拌2-4h。

實(shí)施例9

一種復(fù)合酸化劑，包括甲酸銨、乙酸、丙酸鈣、乳酸、黃原膠和殼寡糖，其中每100ml的復(fù)合酸化劑中包括甲酸銨10g、乙酸4g、丙酸鈣30g、乳酸22g、殼寡糖0.8g、黃原膠1.6g和余量的蒸餾水。

本發(fā)明的復(fù)合酸化劑的制備方法為：稱(chēng)取甲酸銨10g、乙酸4g、丙酸鈣30g、乳酸22g、殼寡糖0.8g、黃原膠1.6g，用蒸餾水定容至100mL并混勻，常溫條件下20-50rpm攪拌2-4h。

對(duì)比試驗(yàn)

（1）分別檢測(cè)本發(fā)明實(shí)施例1-實(shí)施例9所得到的各復(fù)合有機(jī)酸和4種商品化復(fù)合酸化劑對(duì)大腸桿菌和沙門(mén)氏菌的MIC，操作方法如下：

1）菌種的復(fù)蘇

用無(wú)菌接種環(huán)分別挑取-20℃凍存的大腸桿菌菌株和沙門(mén)氏菌菌株，采用分離劃線(xiàn)的方法將其接種于普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板，放于37℃溫箱培養(yǎng)18h，取出后保存于4℃冰箱。

2）菌懸液制備

用白色無(wú)菌槍頭從復(fù)蘇后的細(xì)菌平板上分別挑取一個(gè)大腸桿菌和沙門(mén)氏菌的單菌落注入含有5mL滅菌營(yíng)養(yǎng)肉湯的無(wú)菌試管中，將包扎完畢的試管做好標(biāo)記放入搖床，37℃震蕩培養(yǎng)8h取出。

3）菌懸液濃度測(cè)定

用微量移液器吸取4.5mL無(wú)菌生理鹽水分別注入滅菌離心管并進(jìn)行標(biāo)號(hào)，用微量移液器吸取0.5mL菌液注入1號(hào)離心管吹打混勻，吸取0.5mL混勻后菌液注入2號(hào)離心管吹打混勻，同法依次進(jìn)行倍比稀釋?zhuān)瑢⒋竽c桿菌和沙門(mén)氏菌稀釋至15號(hào)離心管。取無(wú)菌平皿做標(biāo)記，用微量移液器吸取1mL稀釋后菌液注入平皿，將高壓滅菌后的普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基冷卻至適宜溫度后倒入平皿，輕微晃動(dòng)使其與菌液混勻。每種濃度的菌液倒兩個(gè)平板做重復(fù)，并設(shè)置普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板作為陰性對(duì)照。待平皿中的營(yíng)養(yǎng)瓊脂凝固后將其放入37℃溫箱培養(yǎng)。18h后取出培養(yǎng)好的平板，觀(guān)察不同濃度的菌液在普通瓊脂培養(yǎng)基平板的生長(zhǎng)密度，取菌落數(shù)在30-300之間的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。

4）菌液稀釋與藥液添加

取無(wú)菌離心管進(jìn)行標(biāo)記并加入滅菌營(yíng)養(yǎng)肉湯，依據(jù)上一步驟測(cè)得的菌懸液濃度將大腸桿菌和沙門(mén)氏菌原菌液分別進(jìn)行倍比稀釋到所需濃度，即10⁵cfu/mL。

取滅菌離心管進(jìn)行標(biāo)記，將實(shí)施例1-實(shí)施例9所得到的各復(fù)合有機(jī)酸和4種商品化復(fù)合酸化劑用普通營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基分別進(jìn)行50、100、200、400、800、1000、1200、1300、1400、1500倍稀釋?zhuān)梦⒘恳埔浩魑∠♂尯蟮牟煌瑵舛鹊膹?fù)合有機(jī)酸分別對(duì)應(yīng)添加在96孔板中，1-10孔濃度從高到低，每孔各加100μL，并用微量加液器吸取100μL稀釋后的菌懸液加入對(duì)應(yīng)的各孔中。將孔內(nèi)液體充分混勻，此時(shí)各孔含液體200μL，藥液稀釋濃度分別為100、200、400、800、1600、2000、2400、2600、2800、3000倍稀釋?zhuān)?1、12孔分別加入200μL菌液和營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基作為陰性對(duì)照。將96孔板放入37℃溫箱培養(yǎng)18-20h后取出并觀(guān)察結(jié)果。

（2）本發(fā)明實(shí)施例8的復(fù)合酸化劑和4種商品化復(fù)合酸化劑的緩沖力測(cè)定

用蒸餾水將本發(fā)明實(shí)施例8所制得的復(fù)合酸化劑和上述4種商品化復(fù)合酸化劑分別進(jìn)行100、200、400、800、1000、1600、2000倍稀釋?zhuān)秒娮觩H計(jì)測(cè)定不同稀釋倍數(shù)的復(fù)合酸化劑的pH值，檢驗(yàn)其pH穩(wěn)定性。

（3）本發(fā)明實(shí)施例8的復(fù)合酸化劑和4種商品化復(fù)合酸化劑對(duì)綠膿桿菌和黃曲霉菌的MIC和MBC測(cè)定，檢測(cè)本發(fā)明實(shí)施例8的復(fù)合酸化劑和上述4種商品化復(fù)合酸化劑對(duì)綠膿桿菌和黃曲霉菌的MIC和MBC，具體操作方法同上（復(fù)合酸化劑對(duì)大腸桿菌和沙門(mén)氏菌的MIC檢測(cè)）。

（4）本發(fā)明實(shí)施例8的復(fù)合酸化劑的臨床應(yīng)用效果

首先選擇某采用地面平養(yǎng)模式共8棟雞舍的肉雞場(chǎng)作為試驗(yàn)雞場(chǎng)。試驗(yàn)前按常規(guī)要求進(jìn)行熏蒸消毒；試驗(yàn)期間定點(diǎn)打料，自動(dòng)通風(fēng)，雞只自由采食和飲水，保持各組飼養(yǎng)環(huán)境條件一致，并按常規(guī)免疫程序進(jìn)行免疫。將本發(fā)明實(shí)施例8的復(fù)合酸化劑按以下方案添加到雞的日常飲水中，其中4棟雞舍為試驗(yàn)組，4棟為對(duì)照組。試驗(yàn)周期為42 d。試驗(yàn)期間為控制疾病使用的其余藥物完全相同。試驗(yàn)方案：1-6日齡，將復(fù)合酸化劑用飲用水稀釋至體積比為飲用水的0.1%，全天飲用；9日齡以后，將復(fù)合酸化劑用飲用水稀釋至體積比為飲用水的0.05%，全天飲用，用3d停2d。弱毒苗飲水免疫時(shí)，則當(dāng)天停用，其它方式免疫不受影響。使用磺胺類(lèi)、青霉素鉀、硫氰酸紅霉素藥物時(shí)停用12h，其它藥物不受影響。

1）酸化劑對(duì)肉雞成活率的影響：肉雞出欄時(shí)統(tǒng)計(jì)每組試驗(yàn)雞的總數(shù)量，計(jì)算肉雞的成活率。

2）酸化劑對(duì)肉雞體重的影響：肉雞出欄時(shí)稱(chēng)取每棟雞舍雞只的總體重，并統(tǒng)計(jì)每棟雞舍雞只的總數(shù)，計(jì)算肉雞的只均重。

3）酸化劑對(duì)肉雞料重比的影響：肉雞出欄時(shí)統(tǒng)計(jì)每棟雞舍飼喂的總飼料重量，根據(jù)每棟雞舍出欄時(shí)總體重與其初體重的差值計(jì)算出雞的日增重（料重比=耗料量/日增重）。

4）酸化劑對(duì)肉雞歐洲效益指數(shù)的影響：根據(jù)測(cè)定的試驗(yàn)數(shù)據(jù)，計(jì)算肉雞的歐洲效益指數(shù)，歐洲效益指數(shù)=（成活率×體重）/(料重比×出欄天數(shù))×10000，體重單位為kg。

數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析

采用GraphPad Prism統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，所有指標(biāo)以每個(gè)重復(fù)為單位，P＞0.05表示差異不顯著，P<0.05表示差異顯著，P<0.01表示差異極顯著。

結(jié)果與分析

（1）本發(fā)明實(shí)施例1-實(shí)施例9所得到的各復(fù)合有機(jī)酸和4種商品化復(fù)合酸化劑對(duì)大腸桿菌和沙門(mén)氏菌的MIC：檢測(cè)9種復(fù)合有機(jī)酸和4種商品化復(fù)合酸化劑對(duì)大腸桿菌和沙門(mén)氏菌的MIC和MBC，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 9種復(fù)合有機(jī)酸和4種商品化復(fù)合酸化劑對(duì)大腸桿菌和沙門(mén)氏菌的MIC和MBC

根據(jù)表1可知，實(shí)施例8的復(fù)合有機(jī)酸對(duì)大腸桿菌和沙門(mén)氏菌的MIC為1:2000，MBC分別為1:1800和1:2000，對(duì)大腸桿菌和沙門(mén)氏菌的抑制效果最好，優(yōu)于其他實(shí)施例的復(fù)合有機(jī)酸和4種商品化復(fù)合酸化劑，也優(yōu)于本發(fā)明的各組分中的任一單酸的效果。

（2）本發(fā)明實(shí)施例8的復(fù)合有機(jī)酸和4種商品化復(fù)合酸化劑的pH穩(wěn)定性測(cè)定結(jié)果

將本發(fā)明實(shí)施例8的復(fù)合有機(jī)酸上述4種商品化復(fù)合酸化劑分別進(jìn)行相應(yīng)倍數(shù)的稀釋?zhuān)瑴y(cè)其不同稀釋倍數(shù)的pH值，檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 實(shí)施例8的復(fù)合有機(jī)酸和4種商品化復(fù)合酸化劑不同稀釋濃度的pH值

根據(jù)表2，本發(fā)明的實(shí)施例8的復(fù)合有機(jī)酸和4種商品化復(fù)合酸化劑不同稀釋倍數(shù)的pH測(cè)定結(jié)果可知，復(fù)合酸化劑新組方不同倍數(shù)稀釋液的pH值相對(duì)穩(wěn)定，并未隨著稀釋倍數(shù)的變化而發(fā)生顯著升降，說(shuō)明新組方具有良好的緩沖力。而且跟商品化酸化劑相比，游離酸度低，對(duì)胃黏膜的刺激作用小。

（3）本發(fā)明實(shí)施例8的復(fù)合有機(jī)酸和4種商品化復(fù)合酸化劑對(duì)綠膿桿菌和黃曲霉菌的抑菌效果

檢測(cè)本發(fā)明實(shí)施例8的復(fù)合有機(jī)酸和4種商品化復(fù)合酸化劑對(duì)綠膿桿菌和黃曲霉菌的MIC和MBC，檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 本發(fā)明實(shí)施例8的復(fù)合有機(jī)酸和4種商品化復(fù)合酸化劑對(duì)綠膿桿菌和黃曲霉菌的抑菌效果

根據(jù)表3可知，本發(fā)明實(shí)施例8的復(fù)合有機(jī)酸對(duì)綠膿桿菌和黃曲霉菌作用效果良好，對(duì)綠膿桿菌的MIC和MBC分別為1:2400和1:2200， 對(duì)黃曲霉菌的MIC和MBC均為1:400，均不同程度優(yōu)于同時(shí)測(cè)定的4種商品化復(fù)合酸化劑。

經(jīng)研究人員多年的反復(fù)曲折的研究，找出了本發(fā)明的復(fù)合有機(jī)酸，其對(duì)大腸桿菌和沙門(mén)氏菌有良好的抑菌效果，且實(shí)施例8的復(fù)合有機(jī)酸對(duì)大腸桿菌和沙門(mén)氏菌的抑菌效果最好，對(duì)大腸桿菌和沙門(mén)氏菌的 MIC和MBC高于所有受試復(fù)合酸化劑產(chǎn)品和4種商品化復(fù)合酸化劑，并且，通過(guò)實(shí)施例8的復(fù)合有機(jī)酸不同稀釋倍數(shù)的pH值，結(jié)果表明其pH穩(wěn)定性良好，緩沖能力強(qiáng)，對(duì)胃黏膜的刺激作用小，亦優(yōu)于所比較的4種商品化復(fù)合酸化劑。

（4）本發(fā)明實(shí)施例8的復(fù)合酸化劑的臨床應(yīng)用效果

1)酸化劑對(duì)肉雞成活率影響的結(jié)果：由圖1可見(jiàn)，試驗(yàn)組的肉雞成活率極顯著高于對(duì)照組（P<0.01），說(shuō)明使用復(fù)合酸化劑有助于提高肉雞成活率。

2）復(fù)合酸化劑對(duì)肉雞體重影響的結(jié)果：由圖2可見(jiàn)，試驗(yàn)組肉雞只均重極顯著高于對(duì)照組（P<0.01），說(shuō)明復(fù)合酸化劑有助于提高肉雞體重。

3）復(fù)合酸化劑對(duì)肉雞料重比的影響結(jié)果：由圖3可見(jiàn)：試驗(yàn)組的料重比顯著低于對(duì)照組（P<0.05），說(shuō)明酸化劑在降低肉雞料重比方面具有一定的作用。

4）復(fù)合酸化劑對(duì)肉雞歐洲指數(shù)的影響結(jié)果：歐洲效益指數(shù)是通過(guò)肉雞成活率、肉雞體重、肉雞料重比及生產(chǎn)管理等各項(xiàng)指標(biāo)，綜合衡量肉雞養(yǎng)殖的盈利指標(biāo)，指數(shù)越大盈利越多。由圖4可見(jiàn)，試驗(yàn)組的歐洲效益指數(shù)極顯著高于對(duì)照組（P＜0.01）。

雖然大腸桿菌和沙門(mén)氏菌是危害養(yǎng)雞業(yè)常見(jiàn)的重要致病菌，但綠膿桿菌的致病作用及黃曲霉菌產(chǎn)生的毒素引發(fā)的嚴(yán)重后果也不容忽視，因此，開(kāi)發(fā)對(duì)綠膿桿菌和黃曲霉菌具有良好抑制作用的酸化劑產(chǎn)品對(duì)提高畜牧生產(chǎn)經(jīng)濟(jì)價(jià)值具有重要意義。根據(jù)實(shí)施例8的復(fù)合有機(jī)酸對(duì)這兩種病原菌的MIC和MBC測(cè)定結(jié)果可知，實(shí)施例8的復(fù)合有機(jī)酸對(duì)綠膿桿菌的MIC和MBC分別可達(dá)到1:2400與1:2200，抑制效果良好，高于所有4種受試商品化復(fù)合有機(jī)酸化劑對(duì)綠膿桿菌的抑制效果。實(shí)施例8的復(fù)合有機(jī)酸對(duì)黃曲霉菌的MIC和MBC均為1:400，與其他三種致病菌比較，抑菌效果相對(duì)較差，但是可以達(dá)到與選取的國(guó)外進(jìn)口復(fù)合酸化劑產(chǎn)品A同樣的抑制效果，并優(yōu)于另外3種商品化酸化劑。

在抗生素的使用逐步受到限制以及人們安全環(huán)保意識(shí)逐漸提高的情況下，酸化劑作為一種新型綠色添加劑，憑借其無(wú)污染、無(wú)殘留、無(wú)毒副作用等優(yōu)點(diǎn)，已經(jīng)逐步成為畜牧養(yǎng)殖業(yè)中的必需添加劑。然而目前，飼料酸化劑在畜牧生產(chǎn)中的使用尚存在一定的問(wèn)題，比如酸化劑常與飼料中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)發(fā)生拮抗作用，常因?yàn)榕c飼料中的堿性物質(zhì)中和而失去作用等。很多酸化劑產(chǎn)品種類(lèi)單一，緩沖能力差；配方不科學(xué)，性能不穩(wěn)定，另外，多數(shù)酸化劑釋放速度過(guò)快，在胃內(nèi)被迅速吸收，影響胃的發(fā)育并抑制胃酸分泌，而無(wú)法到達(dá)小腸發(fā)揮降低小腸pH，抑制有害菌繁殖和促進(jìn)益生菌生長(zhǎng)的作用，為解決這些問(wèn)題，本研究開(kāi)發(fā)出性能穩(wěn)定且釋放緩慢的包被型酸化劑產(chǎn)品，經(jīng)臨床試驗(yàn)表明，這種酸化劑在提高肉雞采食量、成活率、料重比、只均重和歐洲效益指數(shù)方面與對(duì)照組相比具有明顯的優(yōu)勢(shì)。

以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出：對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)，這些改進(jìn)應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。