本發(fā)明屬于pH敏感材料的制備領(lǐng)域，特別涉及一種載藥pH敏感自組裝脂質(zhì)體的制備方法。

背景技術(shù)：

靜電噴霧作為一種制備微球的新方法，近年來(lái)得到人們的廣泛關(guān)注，前人的研究證明，利用靜電噴霧方法制得的高分子前藥微球在藥物緩釋方面有著很好的治療效果。靜電噴霧的主要原理是高分子溶液在注射泵的推擠下，進(jìn)入到高壓電場(chǎng)中從而被分裂成許多細(xì)小的霧滴，霧滴在噴射過(guò)程中溶劑蒸發(fā)從而形成所需要的微球。

自組裝技術(shù)是當(dāng)代科學(xué)研究領(lǐng)域比較新興的課題，自組裝技術(shù)在制造高質(zhì)量、結(jié)構(gòu)域性質(zhì)可控的新材料上有著巨大的應(yīng)用潛力。自組裝技術(shù)作為一類新興的加工制造技術(shù)，有著廣闊的應(yīng)用前景。分子自組裝就是分子與分子在平衡條件下，因受分子間非共價(jià)鍵力，如氫鍵、靜電作用、疏水親脂作用、π-π相互作用、范德華力的驅(qū)動(dòng)而自發(fā)組合，形成具有結(jié)構(gòu)明確、性能穩(wěn)定的分子聚集體的過(guò)程。

脂質(zhì)體具有良好的生物相容性，作為藥物載體具有提高藥物生物利用度、減輕藥物不良反應(yīng)及靶向作用的特點(diǎn)。磷脂酰膽堿(PC)作為天然脂質(zhì)體卵磷脂的主要成分，是一種兩性分子，由親水的頭部和疏水的尾部組成。近年來(lái)利用磷脂酰膽堿與生物體的相容性以及兩親性，磷脂酰膽堿被廣泛用于藥物載體以及自組裝納米顆粒的制備。磷脂酰膽堿在正常情況不會(huì)形成自組裝脂質(zhì)體，只有在相對(duì)的外界環(huán)境中才能激發(fā)自組裝功能。

藥用丙烯酸樹(shù)脂(Eu)是一種典型的pH依賴型高分子，是口服結(jié)腸定位給藥系統(tǒng)中最常使用的包衣和骨架材料。目前的研究表明，腸溶性材料為載體時(shí)，藥物在胃的酸性環(huán)境中幾乎不溶，而在腸道中定位釋放。因此，此類材料可用于制備胃中不穩(wěn)定的藥物的固體分散體，使其在腸道釋放、吸收，提高其生物利用度。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種載藥pH敏感自組裝脂質(zhì)體的制備方法，本發(fā)明方法制備的自組裝脂質(zhì)體在結(jié)腸靶向的藥物控釋方面有著實(shí)際應(yīng)用；該發(fā)明方法簡(jiǎn)單、快捷、操作安全適用于較大規(guī)模生成，具有廣泛的應(yīng)用領(lǐng)域和良好的商業(yè)前景。

本發(fā)明的一種載藥pH敏感自組裝脂質(zhì)體的制備方法，包括：

(1)將pH敏感高分子聚合物、脂質(zhì)體混合并溶解在有機(jī)溶劑中，攪拌均勻，加入疏水藥物得到含藥電噴原液，然后進(jìn)行靜電噴霧，真空干燥后得到固體顆粒；其中脂質(zhì)體和pH敏感高分子聚合物的質(zhì)量比為1：4-4:4，疏水藥物和脂質(zhì)體的質(zhì)量比為1:5-2:5；

(2)將上述固體顆粒溶解在PBS溶液中，即得載藥pH敏感自組裝脂質(zhì)體。

所述步驟(1)中PH敏感高分子聚合物和有機(jī)溶劑的質(zhì)量體積比為0.2g：5mL-0.1g：5mL。

所述步驟(1)中pH敏感高分子聚合物為藥用輔料丙烯酸樹(shù)脂；脂質(zhì)體為磷脂酰膽堿。

所述步驟(1)中有機(jī)溶劑為三氯甲烷和N，N二甲基乙酰胺的混合溶液。

所述三氯甲烷和N，N二甲基乙酰胺的體積比為4:1-5:1。

所述步驟(1)中疏水藥物為模型藥物酮洛芬。

所述步驟(1)中含藥電噴原液的濃度為2％-4％。

所述步驟(1)中靜電噴霧工藝參數(shù)為：流速0.8-1.5mL/h，接收板離電噴口的距離為20-25cm，電壓為10-18kv，環(huán)境溫度為15-35℃，環(huán)境濕度為45-80％。

所述步驟(2)中固體顆粒和PBS的質(zhì)量體積比為0.1g-1g：100ml。

有益效果

(1)本發(fā)明制備的自組裝脂質(zhì)體在后期的結(jié)腸靶向藥物控釋方面有著實(shí)際應(yīng)用；

(2)本發(fā)明方法簡(jiǎn)單、快捷、操作安全適用于較大規(guī)模生產(chǎn)，具有良好的應(yīng)用前景。

附圖說(shuō)明

圖1為實(shí)施例1中電噴載藥復(fù)合微球的掃描電鏡照片(A)和直徑分布圖(B)；

圖2為實(shí)施例2中電噴載藥復(fù)合微球的紅外光譜圖；

圖3為實(shí)施例3中電噴載藥復(fù)合微球的XRD；

圖4為實(shí)施例4所得的載藥pH敏感自組裝脂質(zhì)體的透射電鏡照片；

圖5為實(shí)施例5所得的pH敏感自組裝脂質(zhì)體的粒徑大小及分布曲線；

圖6為實(shí)施例6所得的pH敏感自組裝脂質(zhì)體在pH＝4.5和pH＝7.4下的體外藥物釋放圖；

圖7為實(shí)施例7所得的pH敏感自組裝脂質(zhì)體MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

其中，附圖中PC表示磷脂酰膽堿，Eu表示丙烯酸樹(shù)脂，KET表示酮洛芬，Eu+PC+KET表示電噴載藥pH敏感聚合物微球。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明講授的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書所限定的范圍。

實(shí)施例1

稱取0.03g的磷脂酰膽堿，溶解于3ml三氯甲烷與N，N二甲基乙酰胺的混合溶液中(體積比為4:1)，加入0.06g丙烯酸樹(shù)脂和0.012g的酮洛芬，于磁力攪拌器上在室溫下攪拌，得含藥PH敏感聚合物電噴原液。

將配制好的電噴原液放入5mL注射器中，采用9號(hào)注射針頭作為噴射管，連接高壓電源的正極，鋁箔接受板連接負(fù)極。靜電噴霧工藝條件為：電壓16kv，流速0.8mL/h，接收板距離25cm，溫度25℃，空氣濕度45％。放入真空干燥箱干燥24小時(shí)以上，得到載藥pH敏感聚合物微球。該聚合物微球在電鏡下的觀測(cè)圖如圖1A所示。微球呈圓球狀均勻分布，說(shuō)明加入卵磷脂和酮洛芬后丙烯酸樹(shù)脂的可紡性能沒(méi)有影響。通過(guò)電噴微球的掃描電鏡照片，用Image J統(tǒng)計(jì)出纖維直徑分布圖，如圖1B所示，該分布圖呈現(xiàn)正態(tài)分布，說(shuō)明所制備得到的微球的直徑較為穩(wěn)定，且其平均直徑為1679.87nm。

實(shí)施例2

稱取0.049g的磷脂酰膽堿，溶解于5ml三氯甲烷與N，N二甲基乙酰胺的混合溶液中(體積比為4:1)，加入0.101g丙烯酸樹(shù)脂和0.02g的酮洛芬，于磁力攪拌器上在室溫下攪拌，得含藥PH敏感聚合物電噴原液。

將配制好的電噴原液放入5mL注射器中，采用9號(hào)注射針頭作為噴射管，連接高壓電源的正極，鋁箔接受板連接負(fù)極。靜電噴霧工藝條件為：電壓14kv，流速0.8mL/h，接收板距離20cm，溫度25℃，空氣濕度50％。放入真空干燥箱干燥24小時(shí)以上，得到載藥pH敏感聚合物微球。剪取1×1cm的纖維膜，進(jìn)行傅里葉變換紅外光譜測(cè)試。

酮洛芬、丙烯酸樹(shù)脂、卵磷脂以及載藥微球的FTIR圖譜如圖2所示，丙烯酸樹(shù)脂在1260cm^-11128cm^-1處存在酯鍵伸縮振動(dòng)，在1728cm^-1附近存在羰基伸縮振動(dòng)。而在1250cm^-1和1047cm^-1處的峰是卵磷脂中的PO 2-基團(tuán)的伸縮振動(dòng)的結(jié)果。酮洛芬在1695cm^-1和1655cm^-1處出現(xiàn)碳氧雙鍵的伸縮振動(dòng)峰，在復(fù)合載藥納米微球的紅外圖譜中都可以看到這些特征峰的存在，表明酮洛芬成功負(fù)載在微球上。

實(shí)施例3

稱取0.101g的磷脂酰膽堿，溶解于5ml三氯甲烷與N，N二甲基乙酰胺的混合溶液中(體積比為4:1)，加入0.1g丙烯酸樹(shù)脂和0.039g的酮洛芬，于磁力攪拌器上在室溫下攪拌，得含藥pH敏感聚合物電噴原液。

將配制好的電噴原液放入5mL注射器中，采用9號(hào)注射針頭作為噴射管，連接高壓電源的正極，鋁箔微球接受板連接負(fù)極。靜電噴霧工藝條件為：電壓15kv，流速1.0mL/h，接收板距離21cm，溫度25℃，空氣濕度70％。既得pH敏感聚合物微球。對(duì)各種原材料和載藥納米微球的XRD表征如圖3所示，酮洛芬在載入納米纖維前，在2θ為15°、18.3°、22.8°等處均有衍射峰值，而在載入微球之后特征峰消失，說(shuō)明酮洛芬在納米微球中是呈無(wú)定型狀態(tài)存在的。

實(shí)施例4

稱取0.04g的磷脂酰膽堿，溶解于4ml三氯甲烷與N，N二甲基乙酰胺的混合溶液中(體積比為4:1)，加入0.081g丙烯酸樹(shù)脂和0.016g的酮洛芬，于磁力攪拌器上在室溫下攪拌，得含藥PH敏感聚合物電噴原液。

將配制好的電噴原液放入5mL注射器中，采用9號(hào)注射針頭作為噴射管，連接高壓電源的正極，鋁箔接受板連接負(fù)極。靜電噴霧工藝條件為：電壓16kv，流速0.9mL/h，接收板距離22cm，溫度25℃，空氣濕度40％。放入真空干燥箱干燥24小時(shí)以上，得到載藥pH敏感聚合物微球。真空干燥后，取0.102g固體顆粒加入100mL PBS溶液溶解，制成脂質(zhì)體納米懸浮液，取一滴滴至銅網(wǎng)上，36℃下自然蒸干，用透射電鏡觀察，結(jié)果如圖4所示。可以觀察到脂質(zhì)體納米粒呈現(xiàn)出近球型結(jié)構(gòu)。

實(shí)施例5

稱取0.075g的磷脂酰膽堿，溶解于5ml三氯甲烷與N，N二甲基乙酰胺的混合溶液中(體積比為5:1)，加入0.102g丙烯酸樹(shù)脂和0.03g的酮洛芬，于磁力攪拌器上在室溫下攪拌，得含藥pH敏感聚合物電噴原液。

將配制好的電噴原液放入5mL注射器中，采用9號(hào)注射針頭作為噴射管，連接高壓電源的正極，鋁箔微球接受板連接負(fù)極。靜電噴霧工藝條件為：電壓12kv，流速1.0mL/h，接收板距離23cm，溫度26℃，空氣濕度60％。真空干燥后，取0.1g固體顆粒加入100mL PBS溶液溶解，制成脂質(zhì)體納米懸浮液，采用動(dòng)態(tài)光散射的方法對(duì)其粒徑大小以及分布進(jìn)行測(cè)量，所得的測(cè)量結(jié)果如圖5所示，結(jié)果顯示脂質(zhì)體納米粒的直徑大小成正態(tài)分布，平均粒徑在260nm左右。

實(shí)施例6

稱取0.101g的磷脂酰膽堿，溶解于5ml三氯甲烷與N，N二甲基乙酰胺的混合溶液中(體積比為5:1)，加入0.102g丙烯酸樹(shù)脂和0.039g的酮洛芬，于磁力攪拌器上在室溫下攪拌，得含藥pH敏感聚合物電噴原液。

將配制好的電噴原液放入5mL注射器中，采用9號(hào)注射針頭作為噴射管，連接高壓電源的正極，鋁箔微球接受板連接負(fù)極。靜電噴霧工藝條件為：電壓14kv，流速0.9mL/h，接收板距離20cm，溫度24℃，空氣濕度65％。真空干燥后，取0.1g固體顆粒加入100mL PBS溶液溶解，制成脂質(zhì)體納米懸浮液，采用透析的方法去除游離酮洛芬之后，分別在不同pH條件下測(cè)藥物的釋放量。所得的結(jié)果如圖6所示。由圖可知，酮洛芬的釋放速率相對(duì)較快，在不同PH條件下對(duì)藥物的累積釋放量不同，在酸性條件下藥物釋放較少，這是因?yàn)榫酆衔锉┧針?shù)脂的酸性敏感性所造成的。

實(shí)施例7

稱取0.101g的磷脂酰膽堿，溶解于5ml三氯甲烷與N，N二甲基乙酰胺的混合溶液中(體積比為5:1)，加入0.102g丙烯酸樹(shù)脂和0.042g的酮洛芬，于磁力攪拌器上在室溫下攪拌，得含藥pH敏感聚合物電噴原液。

將配制好的電噴原液放入5mL注射器中，采用9號(hào)注射針頭作為噴射管，連接高壓電源的正極，鋁箔微球接受板連接負(fù)極。靜電噴霧工藝條件為：電壓14kv，流速0.9mL/h，接收板距離24cm，溫度24℃，空氣濕度45％。真空干燥后，取0.101g固體顆粒加入100mL PBS溶液溶解，制成脂質(zhì)體納米懸浮液，配成不同濃度的溶液(分別是3mg/L,6mg/L,12mg/L,24mg/L)，紫外照射48小時(shí)殺菌消毒。

將200μL的L929成纖維細(xì)胞以4000/孔的密度種植在96孔板上，在37℃，5％CO₂的條件下分別24小時(shí)后，去除培養(yǎng)基，接著加入180μL的DMEM和20μL的脂質(zhì)體懸浮液。培養(yǎng)24小時(shí)后，再去除培養(yǎng)基，加入180μL的DMEM和20μL的MTT培養(yǎng)4小時(shí)。去除培養(yǎng)基，加入400μL的DMSO，在37℃的恒溫?fù)u床上搖20min.然后用酶標(biāo)儀測(cè)量溶液在570nm時(shí)的吸光度。結(jié)果如圖7所示，可以看出脂質(zhì)體納米顆粒與空白對(duì)照相比，細(xì)胞的生長(zhǎng)狀況良好，說(shuō)明此載藥脂質(zhì)體相容性良好，適合應(yīng)用于生物醫(yī)用領(lǐng)域。