本發(fā)明涉及一種高效輔助降血糖的組合物。尤其涉及青錢柳提取物、辣木葉超微破壁精粉、桑葉提取物和苦瓜提取物的配伍組合物及其制備方法和應(yīng)用。
技術(shù)背景
由于人們生活水平的不斷提高、飲食結(jié)構(gòu)的改變、越來越緊張的生活節(jié)奏以及少動多坐的生活方式等諸多因素影響，全球糖尿病發(fā)病率增長非常迅速。據(jù)統(tǒng)計，糖尿病已成為繼腫瘤、心腦血管疾病之后的第三大嚴重威脅人類健康的慢性病。糖尿病是一種由于血糖失控高出正常水平所造成的全身進行性疾病，0并發(fā)癥多且嚴重，臨床治療除注射胰島素外，主要為口服磺脲類、雙胍類降血糖藥物，存在一定副作用和機體傷害。目前，有效降低血糖、輔助預(yù)防和治療糖尿病的養(yǎng)身保健類產(chǎn)品較少，與國家“治未病”大健康產(chǎn)業(yè)政策不太相符。
青錢柳葉為國家衛(wèi)計委(原衛(wèi)生部)批準的新資源食品(公告號：2013年第10號)，辣木葉為國家衛(wèi)計委(原衛(wèi)生部)批準的新資源食品(公告號：2012年第19號)。桑葉和苦瓜作為傳統(tǒng)藥食同源物質(zhì)，自古以來中醫(yī)就將桑葉作為治療消渴癥(即現(xiàn)代醫(yī)學的糖尿病)的中藥應(yīng)用于臨床，日本古書《吃茶養(yǎng)生記》也記載桑葉有改善“飲水病”(即現(xiàn)代醫(yī)學的糖尿病)的作用。另外，中國自古以來就把苦瓜當作藥用植物來利用，在《救荒本草》和《本草綱目》等古文獻里，都曾經(jīng)提到苦瓜；在糖尿病方面，都強調(diào)它能夠“止渴”、“主治煩渴引飲”等。
《一種含辣木葉的袋泡茶及其制備方法》(專利申請公布號：CN105519721A)公開了一種含辣木葉的袋泡茶及其制備方法。其配方包括質(zhì)量份數(shù)為1～2.8份的青錢柳葉、0.1～1.0份的辣木葉以及0.1～0.5份六堡茶葉，還提供了該種袋泡茶的制備方法包括粉碎、混合、制粒、整袋等步驟，說明書未涉及組成物質(zhì)提取及質(zhì)量控制技術(shù)啟示；《一種既顯著改善血糖血脂又能迅速補充人體必須微量元素的保健食品配制方法》(專利申請公布號：CN105851360A)公開了一種既顯著改善血糖血脂又能迅速補充人體必須微量元素的保健食品配制方法。其配方由重量份數(shù)10～40份顯齒蛇葡萄葉、10～40份青錢柳葉、10～40份辣木葉組成，說明書未涉及工藝參數(shù)及質(zhì)量控制技術(shù)啟示。
本發(fā)明旨在采用新資源食品原料青錢柳葉、辣木葉與傳統(tǒng)藥食同源桑葉、苦瓜組方，通過本發(fā)明特定工藝參數(shù)、原料資質(zhì)、質(zhì)量控制等技術(shù)方案富集為本發(fā)明特定組成物質(zhì)，再通過本發(fā)明特定比例制備顯著降低血糖的組合物。試驗證明對糖尿病小鼠有顯著的降血糖、顯著增強糖尿病小鼠糖耐量的藥理作用。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的第一目的在于提供一種高效輔助降血糖的組合物及其制備方法。第二目的在于提供該組合物的應(yīng)用。
本發(fā)明的第一目的是采用以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的。
首先，本發(fā)明提供一種高效輔助降血糖的組合物，所述組合物由重量份數(shù)400～500份的青錢柳提取物、重量份數(shù)200～300份的辣木葉超微破壁精粉、重量份數(shù)120～240份的桑葉提取物和重量份數(shù)60～180份的苦瓜提取物組成。
優(yōu)選地，所述組合物由重量份數(shù)420～480份的青錢柳提取物、重量份數(shù)220～280份的辣木葉超微破壁精粉、重量份數(shù)140～220份的桑葉提取物和重量份數(shù)80～160份的苦瓜提取物組成。
進一步優(yōu)選，所述組合物由重量份數(shù)440～460份的青錢柳提取物、重量份數(shù)240～260份的辣木葉超微破壁精粉、重量份數(shù)160～200份的桑葉提取物和重量份數(shù)100～140份的苦瓜提取物組成。
最優(yōu)選，所述組合物由重量份數(shù)450份的青錢柳提取物、重量份數(shù)250份的辣木葉超微破壁精粉、重量份數(shù)180份的桑葉提取物和重量份數(shù)120份的苦瓜提取物組成。
其次，本發(fā)明所述青錢柳提取物系以青錢柳葉為原料，經(jīng)粗粉為20～40目粗粉，采用質(zhì)量體積比(g/ml)＝1:3、濃度為70～80％乙醇提取2-3次(溫控80℃、提取時間2～4h)，收集提取液減壓濃縮至相對密度1.05(20℃測定)得含黃酮和皂苷濃縮液；殘渣稱重后添加質(zhì)量體積比(g/ml)1：8～8.5純化水煎煮提取2次(溫控90℃，提取時間2～3h)，收集提取液減壓濃縮至相對密度1.23(20℃測定)得含多糖濃縮液；混合2次濃縮液，經(jīng)濃縮、干燥制得青錢柳提取物。青錢柳提取物總黃酮含量8～16％，多糖含量12～28％、優(yōu)選為14％～26％、更優(yōu)選為16～24％
再次，本發(fā)明所述的辣木葉超微破壁精粉系采用低溫氣流粉碎技術(shù)，將干燥辣木葉于﹣20℃、液氮條件下粉碎成800～1200目制得。
另外，本發(fā)明所述桑葉提取物、苦瓜提取物系采用食品級或藥品級原料。其中，桑葉提取物質(zhì)量控制指標限制為：DNJ含量1％～2％，總黃酮含量2％～15％、優(yōu)選為4％～12％、更優(yōu)選為5％～10％?？喙咸崛∥镔|(zhì)量控制指標限制為：苦瓜甙含量5％～20％、優(yōu)選為8％～17％、更優(yōu)選為10％～15％。
最后，按本發(fā)明重量份數(shù)及優(yōu)選重量份數(shù)稱取青錢柳提取物、辣木葉超微破壁精粉、食品或藥品級桑葉提取物及苦瓜提取物，經(jīng)粉碎過80～100目篩，于潔凈不銹鋼容器中經(jīng)充分攪拌混合均勻，即得本發(fā)明組合物。
本發(fā)明的第二目的是采用以下技術(shù)方案實現(xiàn)的。
首先，本發(fā)明所述組合物可用于輔助降低血糖的藥品、保健食品、功能性普通食品、特殊醫(yī)學食品、特殊膳食食品中。
其次，本發(fā)明所述組合物不添加任何輔料可直接制成散劑、顆粒劑、硬膠囊、片劑等固體口服制劑；也可添加水、米醋等中的一種或幾種作為賦形劑制備成水丸；還可添加水、a-環(huán)糊精、β-環(huán)糊精、羧甲基纖維素鈉、淀粉、微晶纖維素、聚維酮、PEG-4000、PEG-6000、硬脂酸鎂、藥用或食品植物油脂等中的一種或幾種進一步制成顆粒劑、片劑、硬膠囊、軟膠囊、丸劑等制劑。
具體實施方式：
下面通過具體實施例對本發(fā)明作進一步說明，但不以任何方式對本發(fā)明加以限制，基于本發(fā)明教導所作的任何變化或替換，均屬本發(fā)明保護范圍。
實施例1：青錢柳提取物制備
取青錢柳葉，除雜、干燥、粉碎后過24目篩。稱取10kg青錢柳葉粗粉置提取罐中，添加質(zhì)量體積比(g/ml)＝1:3、濃度為75％乙醇熱回流提取2次(溫控80℃，每次3小時)，合并兩次提取液減壓濃縮至相對密度1.05(20℃測定)，得含黃酮和皂苷類成分的濃縮液；乙醇熱回流提取后剩余殘渣稱重，添加質(zhì)量體積比(g/ml)＝1：8純化水煎煮2次(溫控90℃，每次提取2小時)，合并2次提取液減壓濃縮至相對比度1.23(20℃測定)得含多糖成分的濃縮液；合并乙醇熱回流、水煎煮濃縮液，經(jīng)濃縮、干燥得青錢柳提取物2.5kg，經(jīng)檢測：總黃酮含量15％、多糖含量21％。
附圖說明：圖1為青錢柳提取物提取工藝流程圖
實施例2：辣木葉超微破壁精粉制備
將液氮氣流低溫粉碎機(高橋/M-250型)開機預(yù)冷至﹣20℃，稱取干燥辣木葉(水分含量≤10％)1.5kg置粉碎機中，開機粉碎至1000目，得辣木葉超微破壁精粉1.25kg。
實施例3：桑葉提取物、苦瓜提取物準備
購置規(guī)格為1:10的食品級桑葉提取物1.5kg。自檢黃酮含量6％、DNJ含量1.8％。
購置苦瓜苷含量≥10％食品級苦瓜提取物(Q/HLB031-2013)1kg。自檢苦瓜甙含量13％。
實施例4：組合物制備1
取實施例1制備的青錢柳提取物400g、實施例2制備的辣木葉超微破壁精粉300g、實施例3準備的桑葉提取物240g和苦瓜提取物60g，粉碎過80目篩，于潔凈不銹鋼容器中充分攪拌混合均勻，得組合物996g。
實施例5：組合物制備2
取實施例1制備的青錢柳提取物420g、實施例2制備的辣木葉超微破壁精粉280g、實施例3準備的桑葉提取物220g和苦瓜提取物80g，粉碎過100目篩，于潔凈不銹鋼容器中充分攪拌混合均勻，得組合物991g。
實施例6：組合物制備3
取實施例1制備的青錢柳提取物450g、實施例2制備的辣木葉超微破壁精粉250g、實施例3準備的桑葉提取物180g和苦瓜提取物120g，粉碎過80目篩，于潔凈不銹鋼容器中充分攪拌混合均勻，即組合物995g。
實施例7：組合物制備4
取實施例1制備的青錢柳提取物480g、實施例2制備的辣木葉超微破壁精粉220g、實施例3準備的桑葉提取物160g和苦瓜提取物140g，粉碎過100目篩，于潔凈不銹鋼容器中充分攪拌混合均勻，即組合物989g。
實施例8：組合物制備5
取實施例1制備的青錢柳提取物500g、實施例2制備的辣木葉超微破壁精粉200g、實施例3準備的桑葉提取物120g和苦瓜提取物180g，粉碎過100目篩，于潔凈不銹鋼容器中充分攪拌混合均勻，即組合物993g。
實施例9：硬膠囊制備
取實施例6制備的組合物100g，經(jīng)濕法制粒、干燥、充填，制得輔助降血糖的硬膠囊。
實施例10：水丸制備
取實施例7制備的組合物100g，采用純化水、米醋作為賦形劑，制成輔助降血糖的水丸。
實施例11：顆粒劑制備
取實施例6制備的組合物200g，添加適量淀粉、羧甲基纖維素鈉、β-糊精，經(jīng)濕法制軟材、擠壓過篩、干燥、整粒制成輔助降血糖的顆粒劑。
實施例12：片劑制備
取實施例6制備的組合物200g，添加適量淀粉、聚維酮、硬脂酸鎂，經(jīng)濕法制粒、干燥、壓片制得輔助降血糖的片劑。
為了更進一步對本發(fā)明組合物的技術(shù)效果進行說明，本發(fā)明選取實施例1制備的青錢柳提取物、實施例2制備的辣木葉超微破壁精粉、實施例3準備的桑葉提取物和苦瓜提取物以及四者非本發(fā)明組合比例按實施例7制備的組合物(由青錢柳提取物200g、辣木葉超微破壁精粉500g、桑葉提取物60g、苦瓜提取物240g混合制成)作為對照樣品，編號依次為①、②、③、④、⑤；選取實施例6所制備的組合物作為試驗樣品，編號為⑥；選取消渴丸(Xiaoke Pill,XKP，廣州中藥一廠)作為陽性對照藥物；同時設(shè)空白對照組、模型對照組以排除造模干擾與誤差。同時開展小鼠降糖試驗和糖耐量試驗，結(jié)果如下：
試驗動物及器材：健康昆明種雄性小鼠(體重26±2g)；5％四氧嘧啶水溶液(臨用新配)、血糖測定試劑盒(按說明書使用)、全自動生化檢測儀、721-B型紫外分光光度計。
給樣劑量：本發(fā)明所述組合物(試驗樣品⑥)60kg成年人給樣劑量確定為7g/天，據(jù)此折算每天小鼠給樣劑量為1.05g/kg BW。依據(jù)等劑量給樣可比原則確定對照樣品⑤每天給樣劑量為1.05g/kg BW，結(jié)合消渴丸(Xiaoke Pill,XKP，廣州中藥一廠)的日最高推薦量確定陽性對照組消渴丸每天給樣量為1.05g/kgBW。依據(jù)等劑量給樣可比原則，結(jié)合國家藥典或相關(guān)行業(yè)標準推薦的青錢柳提取物、辣木葉、桑葉提取物、苦瓜提取物最高日推薦劑量確定對照樣品①～④給樣劑量均為1.05g/kgBW。
造模及分組：選取健康昆明種雄性小鼠400只，隨機選取20只作為空白組(NC)，剩余380只用于造模。造模前，所有動物禁食48h(自由飲水)，380只造模小鼠尾靜脈注射(iv)注射80mg/㎏BW四氧嘧啶，空白組注射等劑量生理鹽水，注射完畢后30s恢復(fù)給食，正常飼養(yǎng)5天，禁食5h，從380只造模小鼠眼眶靜脈采血0.05ml，EDTA抗凝、離心取血漿測定空腹血糖值，血糖高于13mmol/L者為高血糖造模成功動物用于試驗。共有334只小鼠造模成功，從中選取320只隨機分成8組(每組2個重復(fù)，每個重復(fù)20只)。分設(shè)模型組(TNB)、消渴丸陽性對照組(XKP)、試驗①～⑥組。
降低空腹血糖實驗：試驗組每天灌胃樣①～⑥樣品1.05g/kg BW、陽性對照每天灌胃XKP 1.05g/kg BW、TNB和NC組每天分別灌胃等體積蒸餾水(灌胃前為禁食5h)，連續(xù)試驗6周，于每周最后一天灌胃后稱重并測空腹血糖，試驗結(jié)果見表1和表2。
糖耐量實驗：連續(xù)試驗6周后，采集末次空腹血糖作為0h時血糖值。各組再分別灌胃葡萄糖溶液2g/kg BW，給葡萄糖后0.5、1、2h從小鼠眼眶靜脈采血，分別測定血糖值，試驗結(jié)果見表3。
表1：試驗小鼠體重測定結(jié)果
表2：試驗小鼠空腹血糖檢測結(jié)果
表3：試驗小鼠糖耐量檢測結(jié)果
備注：表1～3中，TNB組、XKP組、①～⑥組2個重復(fù)間小鼠血糖值無顯著性差異，統(tǒng)計時將其合并。
表1～3看出：試驗結(jié)束時，試驗⑥組相較于TNB組、試驗①～⑤組小鼠體重、空腹血糖值、糖耐量測定結(jié)果具有高度統(tǒng)計學差異(P＜0.01)，試驗⑥組相較于XKP組小鼠體重、空腹血糖值、糖耐量測定結(jié)果具有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。顯示本發(fā)明組合物(試驗樣品⑥)相較于樣品①～⑤，可顯著改善糖尿病小鼠體重、顯著降低空腹血糖、顯著增強四氧嘧啶糖尿病小鼠葡萄糖耐受能力，其藥理活性強于經(jīng)典降糖藥消渴丸。
綜上，本發(fā)明所述組合物能顯著改善試驗性糖尿病小鼠的體重下降、快速降低空腹血糖、顯著增強糖耐量作用。其藥理活性優(yōu)于陽性對照藥消渴丸，對于輔助降血糖、糖尿病預(yù)防和治療藥品、保健食品、功能性普通食品、特殊醫(yī)學食品、特殊膳食食品研究開發(fā)具有極其重要意義。