本發(fā)明屬于醫(yī)療器材領(lǐng)域，具體的說(shuō)，涉及一種醫(yī)用纖維結(jié)腸鏡及其制備方法。

背景技術(shù)：

纖維結(jié)腸鏡是結(jié)腸鏡的一種。由光學(xué)玻璃纖維和內(nèi)鏡體及附件構(gòu)成，可對(duì)全結(jié)腸進(jìn)行直視觀察。適用于檢查結(jié)腸內(nèi)疑有息肉、腫瘤、潰瘍、炎癥、不明原因出血灶等病變。配合X線鋇灌腸或鋇氣雙重造影，可提高結(jié)腸病變的診斷水平。檢查的主要并發(fā)癥為腸穿孔。纖維結(jié)腸鏡的適用：作直腸，盲腸，升結(jié)腸，橫結(jié)腸，乙狀結(jié)腸，結(jié)腸，及回盲部等的觀察診斷治療，由于能直接用肉眼看到上述各部分的病變，從而診斷正確、可靠。內(nèi)窺鏡具有活體取樣機(jī)構(gòu)。

由于檢查過(guò)程中，纖維結(jié)腸鏡通過(guò)肛門進(jìn)入直腸，直到大腸，醫(yī)務(wù)人員觀察結(jié)腸和大腸的內(nèi)部情況，因而纖維結(jié)腸鏡在診斷治療中不可避免地接觸腸道中的各種細(xì)菌及患處的病變組織，對(duì)管道造成感染，故在檢查完畢后有必要對(duì)其進(jìn)行針對(duì)性的徹底清潔，以保證每次診斷治療的清潔安全，避免發(fā)生交叉感染。目前的清洗方法是將纖維結(jié)腸鏡放入清洗池或清洗消毒機(jī)內(nèi)清洗消毒，但是鏡體內(nèi)部角落仍然可能存在殘余的患者體內(nèi)的病原菌并不能夠起到徹底的殺滅作用。

CN 104498228 A中公開(kāi)了一種纖維結(jié)腸鏡的洗滌劑，由以下重量份配比的原料制備而成：水78份，四(3，5-二叔丁基-4-羥基)苯丙酸季戊四醇酯25-27份，0,0-二甲基-S-(甲基氨基甲酰甲基)二硫代磷酸酯20-22份，3-(2，4_二甲基苯基)-2-丙烯酸26-28份，2,2-二甲基-1-丙醇16-18份，2,2_二甲基-1-丙醇丁二酸二異辛酯磺酸鈉12-15份，(S)-N-叔丁氧羰基-2-苯甘氨醇6-8份，4-乙酰氨基-2-羥基苯甲酸8-10份，1-(4-氟苯基)-4-[4-(4-氯苯基)-4-輕基-1-哌啶基]-1-丁酮4-6份。該洗滌劑雖然在去漬和殺菌雙方面上保證纖維結(jié)腸鏡的清潔效果，但是仍然存在著殺菌效果不好的缺陷。

抗菌肽是一類對(duì)細(xì)菌具有很強(qiáng)殺菌效果的小多肽，自上世紀(jì)80年代以來(lái)，抗菌肽作為生物天然免疫的組成成分之一開(kāi)始為人們所發(fā)現(xiàn)和認(rèn)識(shí)，其后不斷有新的抗菌肽在各種生物中發(fā)現(xiàn)并被認(rèn)為是抗感染治療的未來(lái)藥物。它具有攜帶正電荷、極少耐藥、殺菌譜廣、種類繁多、對(duì)哺乳動(dòng)物細(xì)胞毒性低等特點(diǎn)?？咕牡淖饔脵C(jī)制不同于傳統(tǒng)的抗生素，病原菌不易對(duì)其產(chǎn)生耐藥性，一些抗菌肽對(duì)其有很強(qiáng)的殺菌活性，因此有望利用抗菌肽殺滅細(xì)菌特別是腸道致病菌的感染。而將該抗菌肽用于纖維結(jié)腸鏡的表面膜的涂覆，即可實(shí)現(xiàn)纖維結(jié)腸鏡的表面殺菌的效果。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的就是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷，提供一種結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，設(shè)計(jì)合理，防止在纖維結(jié)腸鏡檢查過(guò)程中殘余致病菌的交叉感染，防止纖維結(jié)腸鏡攜帶病菌的交叉感染。

本發(fā)明的目的之一在于提供一種強(qiáng)力抗感染和抑制細(xì)菌形成的載緩釋抗菌肽涂層醫(yī)用纖維結(jié)腸鏡。

本發(fā)明的目的之二在于提供一種載緩釋抗菌肽涂層醫(yī)用纖維結(jié)腸鏡的制造方法。

本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的：一種載緩釋抗菌肽涂層醫(yī)用纖維結(jié)腸鏡，包括纖維結(jié)腸鏡本體，其特征在于：所述纖維結(jié)腸鏡的內(nèi)外表面均包覆有抗菌肽緩釋層，所述抗菌肽緩釋層為結(jié)合有抗菌肽聚合物涂層。

上述抗菌素緩釋層厚度為5-30μm。

本發(fā)明的其中一個(gè)技術(shù)方案提供一種纖維結(jié)腸鏡抗菌肽表面涂層的制備方法，將纖維結(jié)腸鏡的本體浸入聚乙烯亞胺的水溶液，該水溶液中聚乙烯亞胺的濃度為5-10mg/ml，含0.14mol/LNaCl中往復(fù)振蕩浸泡40分鐘，會(huì)在纖維結(jié)腸鏡的內(nèi)外表面形成聚合物底層；然后置于100mL質(zhì)量百分比濃度為0.01％的4，4’-二苯基二硫醇的甲醇溶液中反應(yīng)5小時(shí)，反應(yīng)后的纖維結(jié)腸鏡經(jīng)甲醇充分浸洗后真空干燥，與抗菌肽分別在辣根過(guò)氧化物酶和過(guò)氧化氫作用下反應(yīng)，得到表面鍵合抗菌多肽的纖維結(jié)腸鏡。當(dāng)纖維結(jié)腸鏡與細(xì)菌細(xì)胞接觸時(shí)，管子表面的二硫鍵斷裂，還原釋放多肽，發(fā)揮殺菌作用。

所述的抗菌肽為申請(qǐng)人前期篩選獲得，其序列如下：

KJT1：NTIWIPRRPHWQYWSQHWNTSPMTGLR

KJT2：QFFLQCGGGWVCSAHAWWMTRWWSQQR；

KJT3：WKHWGTIILNYEFRMNIAECFSGHDS；

KJT4：RLTWYPIYPMCHWCASAMYQYHHWLHQ；

KJT5：LSQVPGFIPMTHTRLQWLPVGPDQTRS；

KJT6：DRQHAATAQSLSLQYARFLVSWEQNNQ；

KJT7：RIEYHHNQYVTDVCSWQHKWDERGPWP；

本發(fā)明的有益效果在于：本方法制備的帶有抗菌肽涂層的纖維結(jié)腸鏡，具有防止纖維結(jié)腸鏡在體內(nèi)使用后攜帶了患者體內(nèi)的病菌，進(jìn)而導(dǎo)致其他患者交叉感染導(dǎo)致炎癥發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)，具有極大的應(yīng)用前景和重要的社會(huì)價(jià)值價(jià)值?？梢源竺娣e的推廣，可以節(jié)省消毒的成本，以及降低醫(yī)療風(fēng)險(xiǎn)。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1纖維結(jié)腸鏡涂覆層的制備

將纖維結(jié)腸鏡分別依次在蒸餾水、丙酮、70％乙醇、超純水中超聲清洗5分鐘、10分鐘、10分鐘、5分鐘后，再用過(guò)氧乙烷熏蒸滅菌處理后，浸入聚乙烯亞胺的水溶液，該水溶液中聚乙烯亞胺的濃度為10mg/ml，含0.14mol/L NaCl中往復(fù)振蕩浸泡40分鐘，會(huì)在胃鏡管子的內(nèi)外表面形成聚合物底層；然后置于100mL質(zhì)量百分比濃度為0.01％的4，4’-二苯基二硫醇的甲醇溶液中反應(yīng)5小時(shí)，反應(yīng)后的管子經(jīng)甲醇充分浸洗后真空干燥，與KJT-1抗菌肽在辣根過(guò)氧化物酶和過(guò)氧化氫作用下反應(yīng)，得到表面鍵合抗菌多肽的纖維結(jié)腸鏡，命名為KJT-1纖維結(jié)腸鏡。

按照上述方法，分別制備KJT-2～7纖維結(jié)腸鏡。

實(shí)施例2抗菌肽的效果驗(yàn)證

將KJT-1～7多肽用蒸餾水溶解成濃度為2mg/ml，采用瓊脂糖擴(kuò)散法進(jìn)行抗菌活性檢測(cè)。瓊脂糖擴(kuò)散法中使用的菌株為單核增生李斯特氏菌、副溶血性弧菌、空腸彎曲菌、小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌、金黃色葡萄球菌、肉毒梭菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、變形桿菌、布魯氏菌、腸出血性大腸桿菌0157:H7、耶爾森氏菌和霍亂弧菌的組合。菌株培養(yǎng)后，分別取50微升菌液涂布于LB固體培養(yǎng)基。靜置帶菌液吸收后，分別加入濃度為200ppm的多肽溶液。37℃培養(yǎng)1小時(shí)后，觀察抑菌圈的有無(wú)和大小。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1多肽抗菌活性分析結(jié)果

所述的7個(gè)多肽都具有較大的抑菌圈。在短時(shí)間內(nèi)具有好的抑制腸道致病菌的效果。

實(shí)施例3抗菌肽的溶血活性

采集人或者兔的新鮮血液lmL，肝素抗凝后溶解到PBS溶液中，I000g離心5min,收集紅細(xì)胞；用PBS洗滌3遍，再用I0ml PBS重懸；取100μL紅細(xì)胞懸液與100μL用PBS溶解的不同濃度的抗菌肽溶液混合均勻，在37℃培養(yǎng)箱內(nèi)恒溫孵育Ih；Ih后取出，4℃1000g離心5min；取出上清液用酶標(biāo)儀在540nm處測(cè)光吸收值；每組取平均值，并比較分析。其中100μ1PBS作為陰性對(duì)照；100μ10.2％Tritonx-100作為陽(yáng)性對(duì)照。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，7個(gè)抗菌肽分別在2000微克/ml的濃度下均沒(méi)有發(fā)生溶血想象，具有極大的應(yīng)用空間。

實(shí)施例4含有多肽涂層的纖維結(jié)腸鏡的抗菌性檢測(cè)

將實(shí)施例1制備得到的7種纖維結(jié)腸鏡以及沒(méi)有多肽涂層的纖維結(jié)腸鏡，分別給予具有腸出血性大腸桿菌0157:H7陽(yáng)性的腸道疾病患者使用，使用后，通過(guò)常規(guī)的清洗殺菌方式進(jìn)行清洗。之后，在無(wú)菌的環(huán)境中，將纖維結(jié)腸鏡內(nèi)外表面分別置于PBS水環(huán)境中震蕩、沖洗30min，然后通過(guò)濾菌膜過(guò)濾水體，將濾菌膜表面用培養(yǎng)基沖洗，37攝氏度培養(yǎng)24h，之后檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，采用實(shí)施例1制備得到的7種胃鏡中均沒(méi)有檢測(cè)到腸出血性大腸桿菌0157:H7細(xì)菌的存在，而沒(méi)有多肽涂層的纖維結(jié)腸鏡中檢測(cè)到腸出血性大腸桿菌0157:H7的存在，總致病菌菌數(shù)共計(jì)35個(gè)。這也說(shuō)明，多肽涂層具有較好的抑制細(xì)菌在普通纖維結(jié)腸鏡中殘留的功能。

其它幾種菌制備的涂層采用其他幾種病原菌：耶爾森氏菌和霍亂弧菌進(jìn)行上述同樣的檢驗(yàn)，結(jié)果顯示含有抗菌肽涂層的纖維結(jié)腸鏡中均沒(méi)有檢測(cè)到病原菌的存在。

以上為本發(fā)明的具體實(shí)施例，其作用在于對(duì)本發(fā)明的內(nèi)容做進(jìn)一步詳細(xì)的說(shuō)明，使閱讀者更易理解，但不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明所要求的保護(hù)。

序列表

〈110〉南昌青囊中醫(yī)藥有限責(zé)任公司

〈120〉一種醫(yī)用纖維結(jié)腸鏡及其制備方法

〈210〉1

〈211〉27

〈212〉PRT

〈400〉KJT1

NTIWIPRRPHWQYWSQHWNTSPMTGLR

〈210〉2

〈211〉27

〈212〉PRT

〈400〉KJT2

QFFLQCGGGWVCSAHAWWMTRWWSQQR；

〈210〉3

〈211〉26

〈212〉PRT

〈400〉KJT3

WKHWGTIILNYEFRMNIAECFSGHDS；

〈210〉4

〈211〉27

〈212〉PRT

〈400〉KJT4

RLTWYPIYPMCHWCASAMYQYHHWLHQ；

〈210〉5

〈211〉27

〈212〉PRT

〈400〉KJT5

LSQVPGFIPMTHTRLQWLPVGPDQTRS；

〈210〉6

〈211〉27

〈212〉PRT

〈400〉KJT6

DRQHAATAQSLSLQYARFLVSWEQNNQ；

〈210〉7

〈211〉27

〈212〉PRT

〈400〉KJT7

RIEYHHNQYVTDVCSWQHKWDERGPWP；