本發(fā)明屬于藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)，涉及以結(jié)構(gòu)式1-6所示蘆竹堿衍生物為活性成分的藥物組合物，它們的制備方法，以及該類(lèi)衍生物及其藥物組合物用作為褪黑素和5-羥色胺受體激動(dòng)劑，它們?cè)谥苽渲委熁蚋纳婆c褪黑素和五羥色胺受體相關(guān)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

褪黑素(melatonin)受體是松果體分泌的一種神經(jīng)內(nèi)分泌激素，由下丘腦交叉上核控制，可以調(diào)節(jié)晝夜節(jié)律，這種節(jié)律性波動(dòng)表現(xiàn)為夜間達(dá)到高峰而白晝降至谷值。mccord和allan于1917年發(fā)現(xiàn)牛松果體可以調(diào)節(jié)環(huán)境中ranapipien蝌蚪皮膚的變化，并確定了褪黑素的結(jié)構(gòu)為n-乙?；?5-甲氧基色胺。按照褪黑激素功能和藥理特性，褪黑素分為mt1，mt2和mt3三種亞型，這些受體被視為潛在的藥物活性靶標(biāo)。其中mt3受體親和位點(diǎn)主要位于具有排毒屬性的、人類(lèi)同源染色體倉(cāng)鼠的醌還原酶(qr2)上。哺乳動(dòng)物中存在的褪黑素受體亞型mt1和mt2已經(jīng)被克隆，兩個(gè)受體亞型同屬于g-偶聯(lián)蛋白受體家族，分享一些特定的氨基酸序列，在氨基酸水平顯示60％的同源性和獨(dú)特的藥理活性。目前，常見(jiàn)的褪黑素受體激動(dòng)劑：他司美瓊(tasimelteon,vec-162)、雷美替胺(ramelteon,tak-375)、β-甲基-6-氯褪黑素(ly-156735,tik-301)，阿戈美拉汀(agomelatine)^[11]等；常見(jiàn)的褪黑素受體拮抗劑：n-乙酰-2-芐基色胺(luzindole)，4-phenyl-2-propionamidotetralin(4-p-pdot)等。

隨著人們對(duì)天然產(chǎn)物研究的深入，越來(lái)越多的天然小分子引起藥物化學(xué)家的興趣。天然小分子蘆竹堿(n,n-二甲基胺甲基吲哚)最初由orekhov和norkina從亞洲禾本科(gramineae)蘆竹屬植物蘆竹(arundodonaxl.)中分離得到，具有與褪黑素受體相似的化學(xué)結(jié)構(gòu)和廣泛的生物活性：包括收縮血管，抗氧化，神經(jīng)遞質(zhì)5-ht2a受體的拮抗劑等作用。蘆竹堿可以抑制cvb3宿主細(xì)胞病變效應(yīng)(cpe)，通過(guò)抑制早期cvb3病毒在宿主細(xì)胞的復(fù)制，作為一種抗cvb3病毒藥物[cn105748474]。蘆竹堿或者醫(yī)藥上可接受的鹽作為活性成分對(duì)人體具有很好的皮膚美白,彈性,抗起皺或皮膚保濕效果[kr2016020240]。

目前，本發(fā)明提供的蘆竹堿衍生物(1-6)作為褪黑素和5-羥色胺受體激動(dòng)劑并用于抗精神疾病有效成分的藥物未見(jiàn)報(bào)道，其衍生物或其藥物組合物作為褪黑素和5-羥色胺受體激動(dòng)劑在制備或治療抗精神疾病藥物中未見(jiàn)報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明旨在提供一種新的具有藥用價(jià)值的蘆竹堿衍生物(1‐6)為活性成分的藥物組合物，其制備方法，以及該類(lèi)衍生物及其藥物組合物作為褪黑素和5‐羥色胺受體激動(dòng)劑，以及其在制備治療或改善與褪黑素和5‐羥色胺受體相關(guān)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的藥物中的應(yīng)用。

為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，本發(fā)明提供了如下的技術(shù)方案：

藥物組合物，含有如下結(jié)構(gòu)式所示的的蘆竹堿衍生物1‐6，以及可藥用載體或賦形劑。

本發(fā)明同時(shí)提供了制備所述的藥物組合物中蘆竹堿衍生物1‐6的方法，蘆竹堿分別與乙胺、吡咯、哌啶、n‐異丙基哌嗪、n‐甲基高哌嗪、高哌嗪，于無(wú)水甲苯中反應(yīng)，110℃回流至反應(yīng)結(jié)束，減壓回收溶劑，制備得到粗產(chǎn)品，硅膠柱層析純化(二乙胺/甲醇/氯仿，v/v/v,2/4/94～3/5/92)制備得到目標(biāo)化合物1‐6。

本發(fā)明還提供了所述的藥物組合物在制備褪黑素和5‐羥色胺受體激動(dòng)劑中的應(yīng)用，以及所述的藥物組合物在制備治療或改善與褪黑素和5‐羥色胺受體相關(guān)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明另外還提供了如下結(jié)構(gòu)式所示的的蘆竹堿衍生物1‐6在制備治療或改善與褪黑素和5‐羥色胺受體相關(guān)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的藥物中的應(yīng)用，以及蘆竹堿衍生物1‐6在制備抗精神疾病藥物中的應(yīng)用，以及蘆竹堿衍生物1‐6在制備褪黑素和5‐羥色胺受體激動(dòng)劑中的應(yīng)用。

以褪黑素和5‐羥色胺受體激動(dòng)活性為指導(dǎo)發(fā)現(xiàn)蘆竹堿衍生物1‐6具有抗精神疾病作用。本發(fā)明通過(guò)對(duì)蘆竹堿的結(jié)構(gòu)修飾得到6個(gè)衍生物具有較好激動(dòng)活性，其中化合物2和6的活性較好，對(duì)褪黑素受體mt1的ec50值分別為0.51和0.50mμ；對(duì)5‐ht1a的ec50值分別為0.28和0.23mμ。

本發(fā)明化合物用作藥物時(shí)，可以直接使用，或者以藥物組合物的形式使用。該藥物組合物含有0.1–99％，優(yōu)選為0.5–90％的本發(fā)明化合物，其余為藥物學(xué)上可接受的，對(duì)人和動(dòng)物無(wú)毒和惰性的可藥用載體或賦形劑。

所述的藥用載體或賦形劑是一種或多種固體、半固體和液體稀釋劑、填料以及藥物制品輔劑。將本發(fā)明的藥物組合物以單位體重服用量的形式使用。本發(fā)明的藥物可經(jīng)注射(靜注、肌注)和口服兩種形式給藥。

附圖說(shuō)明：

圖1為本發(fā)明蘆竹堿衍生物(1-6)結(jié)構(gòu)示意圖。

具體實(shí)施方式

為了更好地理解本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，用本發(fā)明的實(shí)施例來(lái)說(shuō)明本發(fā)明蘆竹堿衍生物(1‐6)的制備方法和藥理作用結(jié)果，但不以此來(lái)限定本發(fā)明。

下面實(shí)施例中，高分辨電噴霧電離質(zhì)譜(hresims)在lcms‐it‐tof質(zhì)譜儀(shimadzu，kyoto，japan)上測(cè)定，核磁共振譜(¹h和¹³cnmr)由brukeram400(¹h/¹³c，400mhz/100mhz)核磁共振儀(bruker,bremerhaven,germany)測(cè)定，以tms(四甲基硅烷)為內(nèi)標(biāo)。柱色譜硅膠(200～300目)和薄層色譜硅膠gf254均為青島美高集團(tuán)有限公司生產(chǎn)。反應(yīng)試劑購(gòu)自alfaaesar、百靈威和acros公司。

化合物制備實(shí)施例1：

蘆竹堿(2mmol)分別與乙胺、吡咯、哌啶、n‐異丙基哌嗪、n‐甲基高哌嗪及高哌嗪(2～10mmol)溶于10ml無(wú)水甲苯，110℃回流至反應(yīng)結(jié)束，減壓回收溶劑，制備得到粗產(chǎn)品，硅膠柱層析(二乙胺/甲醇/氯仿，v/v/v,2/4/94～3/5/92)純化得到目標(biāo)化合物(1‐6)：

化合物1‐6結(jié)構(gòu)確定數(shù)據(jù)：

n,n‐二乙基‐3‐吲哚甲胺(n,n‐diethyl‐3‐indolylmethylamine,1):白色粉末,收率97％.¹hnmr(400mhz,cdcl3)δh:8.93(s,1h,nh),7.78‐7.00(m,5h,h‐2,4,5,6,7),3.87(s,2h,‐ch2n),2.69‐2.65(m,4h,

n‐吡咯基吲哚甲胺(n‐pyrrolyl‐3‐indolylmethylamine,2):白色粉末,收率96％.¹hnmr(400mhz,cdcl3)δh:9.27(s,1h,nh),7.75‐7.00(m,5h,h‐2,4,5,6,7),3.91(s,2h,ch2n),2.68(m,4h,h‐2',5'),piperazinyl‐3‐indolylmethylamine,4):白色粉末,收率93％.¹hnmr(400mhz,cdcl3)δh:9.57(s,1h,nh),7.73‐6.94(m,5h,h‐2,4,5,6,7),3.78(s,2h,ch2n),2.69‐2.60(m,9h,h‐1”,2',3',5',6'),1.05(d,6h,me).¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ:136.2(s,c‐8),128.3(s,c‐9),124.4(d,c‐2),121.7(d,c‐6),119.3(d,c‐5),119.3(d,c‐4),111.3(s,c‐3),111.2(d,c‐7),54.5(d,c‐1”),53.1(t,ch2n),53.1(t,c‐3',5'),48.7(t,c‐2',6'),18.7(q,7'),2.17(s,1h,nh),1.82‐1.76(m,2h,h‐3'),.¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ:136.2(s,c‐8),128.1(s,c‐9),123.8(d,c‐2),121.7(d,c‐6),119.3(d,c‐5),119.2(d,‐3‐indolylmethylamine,6):黃色無(wú)定型粉末,收率80％.¹hnmr(400mhz,cdcl3)δh:10.05(s,1h,nh),7.80‐7.02(m,5h,h‐2,4,5,6,7),3.89(s,2h,ch2n),2.89‐2.85(m,4h,h‐2',4'),2.75‐2.69(m,4h,h‐6',7'),2.40(s,3h,nme),1.89‐1.85(m,2h,h‐3').¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ:136.4(s,c‐8),128.1(s,c‐9),124.3(d,c‐2),121.6(d,c‐6),119.4(d,c‐5),119.1(d,c‐4),112.6(s,c‐3),111.3(d,c‐7),57.5(t,c‐6'),56.8(t,c‐7'),54.3(t,c‐4'),54.0(t,c‐2'),53.6(t,ch2n),46.9(q,nme),27.0(t,c‐3').esims:m/z244[m+h]⁺,hresims:c15h21n3[m+h]⁺測(cè)定值244.1742,計(jì)算值為244.1808.

下面以褪黑素和5‐羥色胺受體激動(dòng)活性藥理作用試驗(yàn)說(shuō)明本發(fā)明的蘆竹堿衍生物的藥理作用結(jié)果：

試驗(yàn)例1：

本發(fā)明上述的化合物制備實(shí)施例制備得到的蘆竹堿衍生物(1‐6)在人體腎上皮細(xì)胞mt1‐hek293和5‐ht1a‐hek293細(xì)胞模型上，測(cè)定其對(duì)受體的激動(dòng)活性。

1激動(dòng)活性實(shí)驗(yàn)部分

1.1材料和儀器

活性篩選使用的mt1和5‐ht1a細(xì)胞株分別對(duì)應(yīng)人體腎上皮細(xì)胞mt1‐hek293和5‐ht1a‐hek293，含有10％胎牛血清的細(xì)胞培養(yǎng)基(dulbecco'smodifiedeaglemedium,dmem),10％fbs,hbss購(gòu)自gibco；褪黑素(cas:73‐31‐4)購(gòu)自damas‐beta公司(basel，瑞士)；陽(yáng)性對(duì)照藥物阿戈美拉汀(cas:138112‐76‐2)和5‐羥色胺(cas:50‐67‐9)分別購(gòu)自于薩恩化學(xué)技術(shù)(上海)有限公司和云南澤浩商貿(mào)有限公司；免洗鈣8劑盒(washfreefluo‐8calciumasaaykit,hd03‐0010,hdbbiosciencesco.ltd，上海，中國(guó))。co2恒溫培養(yǎng)箱thermoforma3310(美國(guó))；倒置生物顯微鏡xd‐101型(南京)；flexstation3臺(tái)式多功能酶標(biāo)儀(moleculardevices，加利福尼亞，美國(guó))。

1.2實(shí)驗(yàn)過(guò)程

制備得到不同骨架有機(jī)酸托品酯，在人體腎上皮細(xì)胞mt1‐hek293和5‐ht1a‐hek293細(xì)胞模型上，以阿戈美拉汀和5‐羥色胺為陽(yáng)性對(duì)照，對(duì)所合成衍生物進(jìn)行mt1和5‐ht1a受體激動(dòng)活性測(cè)定。mt1和5‐ht1a受體激動(dòng)活性用化合物對(duì)mt1和5‐ht1a受體激動(dòng)率和半數(shù)有效濃度表達(dá)(ec50)，ec50－藥物對(duì)相應(yīng)癥狀產(chǎn)生50％最大效應(yīng)時(shí)的濃度。利用graphpadsoftware公司開(kāi)發(fā)的基礎(chǔ)生物統(tǒng)計(jì)及繪圖綜合軟件graphpadprism5.0進(jìn)行ec50計(jì)算，具體試驗(yàn)方法參考文獻(xiàn)^[17‐19]。采用dulbecco's改良的eagle培養(yǎng)基，將細(xì)胞以4×104/孔的密度，在matrigel包被的96孔黑壁透底板中，于co2濃度為5％的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。吸取上清液然后，棄去原培養(yǎng)基，加入新鮮配置的染液100μl/孔，37℃避光60min。準(zhǔn)備待測(cè)樣品：配制不同濃度的待測(cè)樣品，測(cè)試樣品置入另一個(gè)透底板中。兩塊板同時(shí)放入flexstation3臺(tái)式多功能酶標(biāo)儀中。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)由flexstation3臺(tái)式多功能酶標(biāo)儀讀取，ec50值通過(guò)graphpadprism5軟件計(jì)算得到；激動(dòng)率＝δδa/δδc×100％(a:測(cè)試樣品；c:陽(yáng)性對(duì)照)。

2.結(jié)果：濃度為1.00mm，蘆竹堿及其衍生物(1‐6)的激動(dòng)活性如表(1)所示：

表1蘆竹堿衍生物對(duì)mt1和5‐ht1a受體的激動(dòng)活性^a

注：^a所有測(cè)試化合物濃度約為1mm,阿戈美拉汀測(cè)試濃度1.11μm，5‐羥色胺測(cè)試濃度6.67μm.為三次測(cè)定的平均值，激動(dòng)活性表達(dá)為(n＝3).

表2衍生物2和6半數(shù)有效濃度(ec50,mm)

注：化合物1‐6測(cè)試濃度范圍為0.02～1.52μm；為三次測(cè)定的平均值，ec50表達(dá)為(n＝3)。

3.結(jié)論：實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，已測(cè)定的蘆竹堿衍生物對(duì)mt1和5‐ht1a受體具有較強(qiáng)的激動(dòng)活性，具有與褪黑素和受體相關(guān)的潛在的調(diào)節(jié)或治療作用。

制劑實(shí)施例1：

按制備實(shí)施例1的方法制備得到的得蘆竹堿衍生物1‐6，分別或混合用少量的dmso溶解后，按常規(guī)加注射用水，精濾，灌封滅菌制成注射液。

制劑實(shí)施例2：

按制備實(shí)施例1的方法先制備得到蘆竹堿衍生物1‐6，分別或混合，用少量的dmso溶解后，將其溶于無(wú)菌注射用水中，攪拌使溶解，用無(wú)菌抽濾漏斗過(guò)濾，再無(wú)菌精濾，分裝于安瓿中，低溫冷凍干燥后無(wú)菌熔封得粉針劑。

制劑實(shí)施例3：

按制備實(shí)施例1的方法先制備得到蘆竹堿衍生物1‐6，分別或混合，按其與賦形劑重量比為9:1的比例加入賦形劑，制成粉劑。

制劑實(shí)施例4：

按制備實(shí)施例1的方法先制備得到得到蘆竹堿衍生物1‐6，分別或混合，按其與賦形劑重量比為5:1的比例加入賦形劑，制粒壓片。

制劑實(shí)施例5：

按制備實(shí)施例1的方法先制備得到的蘆竹堿衍生物1‐6，分別或混合，按常規(guī)口服液制法制成口服液。

制劑實(shí)施例6：

按制備實(shí)施例1的方法先制備得到的蘆竹堿衍生物1‐6，分別或混合，按其與賦形劑重量比為5:1的比例加入賦形劑，制成膠囊。

制劑實(shí)施例7：

按制備實(shí)施例1的方法先制得蘆竹堿衍生物1‐6，分別或混合，按其與賦形劑重量比為3:1的比例加入賦形劑，制成膠囊。

制劑實(shí)施例8：

按制備實(shí)施例1的方法先制備得到的蘆竹堿衍生物1‐6，分別或混合，按其與賦形劑重量比為5:1的比例加入賦形劑，制成顆粒劑。