本發(fā)明涉及一種防治阿爾茨海默病的藥物組合物及其制備方法，屬于醫(yī)藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：阿爾茨海默病是一種在老年期發(fā)生的以進(jìn)行性癡呆為主要特征的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病。在1907年由德國(guó)醫(yī)生AloisAlzheimer首次描述。其主要臨床表現(xiàn)為進(jìn)行性認(rèn)知功能障礙和記憶力衰退，性格和行為改變，意識(shí)錯(cuò)亂，思考及判斷力喪失，生活自理能力喪失，最終死亡。這種破壞性的大腦退行性疾病剝奪了受害者最具人類特征的品質(zhì)——記憶、推理、抽象化和語(yǔ)言的能力。國(guó)際阿爾茨海默病學(xué)會(huì)于2005年12月在《柳葉刀》上發(fā)表了著名的“德?tīng)柗茄芯抗沧R(shí)”，指出：全球有2430萬(wàn)人患癡呆，每年新增癡呆病例460萬(wàn)(每7秒新增1例患者)?；疾∪藬?shù)每20年增加1倍，到2040年，全球癡呆病例將達(dá)到8110萬(wàn)。阿爾茨海默病的具體發(fā)病機(jī)制目前尚未完全研究透徹，存在多種假說(shuō)，包括膽堿能神經(jīng)元假說(shuō)、Aβ毒性假說(shuō)、Tau蛋白假說(shuō)、胰島素假說(shuō)、自由基損傷假說(shuō)等。然而，阿爾茨海默病是由遺傳因素和環(huán)境因素共同引發(fā)的一種復(fù)雜性疾病，單一的假說(shuō)并不能解釋全部發(fā)病特征。由于其發(fā)病機(jī)制的復(fù)雜性，目前臨床上尚無(wú)特效藥，僅有為數(shù)不多的幾種用于緩解癥狀的藥物。因此，亟需開(kāi)發(fā)出對(duì)于阿爾茨海默病具有確切療效的治療藥物。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一種防治阿爾茨海默病的藥物組合物及其制備方法。本發(fā)明提供了一種防治阿爾茨海默病的藥物組合物，它是由下述重量配比的原料藥制備而成：淫羊藿8～12份、西洋參4.8～7.2份、三七4.8～7.2份、牛樟芝2.4～3.6份、甘草2.4～3.6份。進(jìn)一步地，它是由下述重量配比的原料藥制備而成：淫羊藿10份、西洋參6份、三七6份、牛樟芝3份、甘草3份。進(jìn)一步地，所述的三七為川三七；所述的甘草為炙甘草。進(jìn)一步地，它是由各重量配比原料藥的原生藥粉、水或有機(jī)溶劑的提取物，加入藥學(xué)上可接受的輔料或者輔助性成分制備而成的制劑。進(jìn)一步地，所述的制劑為口服制劑。進(jìn)一步地，所述的制劑為散劑、顆粒劑、膠囊劑、片劑、丸劑、湯劑或合劑。本發(fā)明提供了一種所述藥物組合物的制備方法，包括如下步驟：取各重量配比的原料藥，直接打粉，或者加入水或有機(jī)溶劑提取，再加入藥學(xué)上可接受的輔料或者輔助性成分，即得。進(jìn)一步地，所述的制備方法包括如下步驟：a、制備淫羊藿包合物；b、稱取各重量配比的牛樟芝、西洋參和川三七的粉末、炙甘草或其浸膏的粉末以及淫羊藿包合物，加入藥學(xué)上可接受的輔料或者輔助性成分，即得。進(jìn)一步地，所述淫羊藿包合物的制備方法為：用乙醇溶解淫羊藿浸膏，滴入β-環(huán)糊精飽和水溶液中，于60℃攪拌3個(gè)小時(shí)，15～20℃攪拌1個(gè)小時(shí)，置于0℃冷卻18個(gè)小時(shí)，抽濾，干燥，即得。本發(fā)明提供了所述藥物組合物在制備治療和/或預(yù)防阿爾茨海默病的藥物中的用途。本發(fā)明提供了所述藥物組合物與吡拉西坦在制備治療和/或預(yù)防阿爾茨海默病的聯(lián)合用藥物中的用途。本發(fā)明提供了所述藥物組合物在制備增強(qiáng)免疫的藥物中的用途。本發(fā)明提供了一種防治阿爾茨海默病的顆粒劑，它是由下述重量配比的原輔料制備而成：所述藥物組合物的原料藥、微晶纖維素16.86份、海藻酸鈉1.686份、硬脂酸鎂0.1686份。本發(fā)明提供了一種防治阿爾茨海默病的顆粒劑，它是由下述重量配比的原輔料制備而成：所述藥物組合物的原料藥、微晶纖維素21.86份、海藻酸鈉2.186份、硬脂酸鎂0.2186份、β-環(huán)糊精8份。本發(fā)明提供了一種防治阿爾茨海默病的聯(lián)合用藥物，它含有相同或不同規(guī)格單位制劑的用于同時(shí)或者分別給藥的所述藥物組合物和吡拉西坦，以及藥學(xué)上可接受的載體；其中，所述藥物組合物的原料藥與吡拉西坦的重量配比為：(1.5～2)：3。本發(fā)明提供了一種防治阿爾茨海默病的藥物組合物，其藥理依據(jù)如下：淫羊藿為小檗科淫羊?qū)僦参铮F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)其中樞神經(jīng)系統(tǒng)方面具有廣泛的藥理作用，包括抗抑郁、改善缺血性腦損傷、抗癡呆、抗衰老等作用。在其主要活性成分為淫羊藿苷(ICA)，ICA可通過(guò)抑制tau蛋白磷酸化，提高乙酰膽堿酯酶(AChE)和乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶(ChAT)的活性，降低氧化應(yīng)激反應(yīng)；通過(guò)小膠質(zhì)細(xì)胞-皮質(zhì)神經(jīng)元共培養(yǎng)技術(shù)發(fā)現(xiàn)，ICA能明顯抑制脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的神經(jīng)元退化，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)阿爾茨海默癥病理的改善。此外，除抗氧化、抗炎、抗凋亡以外，ICA在神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)、促進(jìn)神經(jīng)再生方面仍然具有良好的作用，因此可以認(rèn)為，ICA對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病如老年癡呆、缺血性中風(fēng)、抑郁癥等方面均具有良好的防治作用。西洋參莖葉總皂苷(PQS)對(duì)人體的TB淋巴功能具有增強(qiáng)作用，可提高人體的特異性免疫功能。還可通過(guò)誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子和(VEGF)的表達(dá)，減少內(nèi)皮素-1(ET-1)的表達(dá)，從而加強(qiáng)腦梗死患者新生血管的形成和側(cè)支循環(huán)的建立，改善腦血液供應(yīng)及腦缺血缺氧，從而達(dá)到靜心凝神、消除疲勞、增強(qiáng)記憶力等作用，可適用于失眠、煩躁、記憶力衰退及老年癡呆等癥狀。牛樟芝含有豐富的多糖和萜類化合物，可通過(guò)細(xì)胞表面糖蛋白與巨噬細(xì)胞結(jié)合后，激活巨噬細(xì)胞，通過(guò)其吞噬作用吸收、破壞和清除體內(nèi)損傷、衰老和死亡的自身細(xì)胞及侵入體內(nèi)的病原微生物，并誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生一系列的細(xì)胞免疫和體液免疫。其絲菌體提取物對(duì)由自由基誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷具有很好的修復(fù)作用，子實(shí)體提取物對(duì)誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶(iNOS)的表達(dá)有抑制作用，表明其在體內(nèi)具有一定的抗炎活性，此外，多項(xiàng)研究表明，牛樟芝對(duì)大鼠肝臟系統(tǒng)的氧化損傷均有良好的保護(hù)作用，能提高肝臟抗氧化和清除自由基能力，促進(jìn)肝細(xì)胞再生，從而達(dá)到保護(hù)肝臟的作用。三七除具有止血的功效外，其中的有效成分三七總皂苷可促進(jìn)造血細(xì)胞增殖，調(diào)控與造血細(xì)胞增殖和分化相關(guān)的基因表達(dá)上調(diào)，具有良好的補(bǔ)血作用；其還能對(duì)抗由垂體后葉素因其的心肌缺血，提高心肌細(xì)胞耐缺氧能力及對(duì)抗再供氧造成的危害，擴(kuò)張冠脈，增加冠脈血流量，改善心肌微循環(huán)，增加心肌耗氧量，對(duì)心血管系統(tǒng)起到保護(hù)作用。本發(fā)明組合物具有補(bǔ)脾益腎，活血化瘀，醒神益智之功效。主治癡呆之脾腎兩虛、瘀阻腦絡(luò)證。其臨床表現(xiàn)：起病突然，以認(rèn)知功能障礙為主,呈階段性發(fā)展，具有神經(jīng)功能缺損癥狀和體征，記憶力減退，判斷力降低，失認(rèn)失算，語(yǔ)言含糊，詞不達(dá)意，日常生活能力下降，伴頭暈?zāi)垦?，四肢麻木，步履艱難，面白無(wú)華、形寒肢冷、口中流涎，耳鳴耳聾，雙耳重聽(tīng)，兩目無(wú)神，齒枯發(fā)焦，腰膝酸軟，肌肉萎縮，食少納呆，氣短懶言，腹痛喜按，肌膚甲錯(cuò)，舌質(zhì)淡胖大，苔白，舌下絡(luò)脈瘀阻或有瘀點(diǎn)瘀斑脈沉細(xì)弱，雙尺尤甚。本方方解：本證病位主要在腦，與心、肝、脾、腎功能失調(diào)密切相關(guān)。屬本虛標(biāo)實(shí)之候，本虛為脾腎虧虛，標(biāo)實(shí)為瘀血阻于腦絡(luò)。治以活血化瘀治其標(biāo)，補(bǔ)虛扶正，充髓養(yǎng)腦治其本。本發(fā)明藥物組合物中，淫羊藿其性味辛甘溫，補(bǔ)腎助陽(yáng)，溫又助血運(yùn)行，為君藥。臣以西洋參味苦甘性涼，補(bǔ)益肺氣，養(yǎng)陰生津，安神益智，又可制約淫羊藿和川三七的溫燥之性。川三七，味甘苦性溫，主入陽(yáng)明及厥陰經(jīng)，活血化瘀，兼能止血，有止血不留瘀，化瘀不傷正的特點(diǎn)。瘀久容易化熱，故又配伍具辛苦微寒的牛樟芝，清熱泄火，并兼以醒神，共為佐藥。炙甘草，益氣和中并調(diào)和諸藥，為使藥。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及臨床研究結(jié)果均表明，本發(fā)明藥物組合物具有顯著的防治阿爾茨海默病的作用，能有效改善患者的認(rèn)知能力，提高患者日常生活自理能力，具有廣闊的臨床應(yīng)用前景。進(jìn)一步地，本發(fā)明對(duì)所述藥物組合物劑型的制備工藝進(jìn)行了考察，提供了一種口感良好、成型率高、穩(wěn)定性佳的顆粒劑處方，具有極大的臨床應(yīng)用價(jià)值。顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識(shí)和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。以下通過(guò)實(shí)施例形式的具體實(shí)施方式，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。附圖說(shuō)明圖1為海馬組織CA1區(qū)HE染色圖；圖2為各輔料成型率對(duì)比圖；圖3為各輔料休止角對(duì)比圖；圖4為各輔料吸濕性對(duì)比圖；圖5為不同時(shí)間沉降面記錄圖。具體實(shí)施方式本發(fā)明具體實(shí)施方式中使用的原料、設(shè)備均為已知產(chǎn)品，通過(guò)購(gòu)買(mǎi)市售產(chǎn)品獲得。儀器：超純水機(jī)(密理博中國(guó)有限公司，型號(hào)：Milli-QAdvantage)；電熱鼓風(fēng)干燥器(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司，型號(hào)：DHG-9030)；十萬(wàn)分之一電子天平(mettlertoledo，型號(hào)：XS105Du)。以及其他玻璃儀器，篩網(wǎng)等。試藥：牛樟芝(臺(tái)灣)；西洋參(福建同春藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)；20150402)；三七粉(安徽德昌藥業(yè)飲片有限公司，批號(hào)：20150205)；淫羊藿提取物(西安天瑞生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：TR20150406)；炙甘草浸膏(寶雞金森制藥有限公司，批號(hào)：20150303)；微晶纖維素、可溶性淀粉、乳糖、甘露醇、蔗糖、月桂醇硫酸鈉、羧甲基纖維素鈉、海藻酸鈉、硬脂酸鎂；無(wú)水乙醇(A.R)，實(shí)驗(yàn)用水為超純水。實(shí)施例1本發(fā)明藥物組合物顆粒劑的制備處方：牛樟芝3g、西洋參6g、川三七6g、淫羊藿浸膏1g(按原生藥10g計(jì)，淫羊藿浸膏浸膏率為10％)、炙甘草浸膏0.86g(按原生藥3g計(jì)，炙甘草浸膏浸膏率為28.57％)、微晶纖維素16.86g、海藻酸鈉1.686g、硬脂酸鎂0.1686g。制備工藝：稱取西洋參、川三七、炙甘草浸膏、淫羊藿浸膏及牛樟芝的粉末，加入輔料與之混勻(過(guò)80目篩混勻)，滴加80％乙醇做軟材，過(guò)14目篩濕法制粒，烘箱60℃烘干(烘干2h)。干顆粒過(guò)一號(hào)篩整粒，再過(guò)四號(hào)篩篩去細(xì)粉，制成顆粒35.55g，即得本發(fā)明升百顆粒，分裝，密封保存?zhèn)溆谩?shí)施例2本發(fā)明藥物組合物顆粒劑的制備處方：牛樟芝3g、西洋參6g、川三七6g、淫羊藿浸膏1g(按原生藥10g計(jì)，淫羊藿浸膏浸膏率為10％)、炙甘草浸膏0.86g(按原生藥3g計(jì)，炙甘草浸膏浸膏率為28.57％)、微晶纖維素21.86g、海藻酸鈉2.186g、硬脂酸鎂0.2186g、β-環(huán)糊精8g。制備工藝：牛樟芝、西洋參、川三七、炙甘草粉碎成細(xì)粉；取淫羊藿浸膏1g，加10ml無(wú)水乙醇溶解，用滴管緩慢滴入β-環(huán)糊精飽和水溶液中，于60℃下攪拌3個(gè)小時(shí)，15～25℃攪拌1個(gè)小時(shí)，置于0℃下冷卻18個(gè)小時(shí)，抽濾、干燥得淫羊藿包合物6g。按處方量稱取牛樟芝、西洋參、三七、炙甘草細(xì)粉及淫羊藿包合物6g，加入微晶纖維素、海藻酸鈉、硬脂酸鎂，混勻，加入80％乙醇適量，制粒，干燥，制成顆粒46.12g，即得本發(fā)明升百顆粒，分裝，密封保存?zhèn)溆?。以下通過(guò)實(shí)驗(yàn)例證明本發(fā)明的有益效果。以下所述的升百顆粒即根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例1制備得到的顆粒劑。實(shí)驗(yàn)例1本發(fā)明藥物組合物對(duì)阿爾茨海默病大鼠模型的治療作用1、阿爾茨海默病大鼠模型的建立將2mgAβ25～35肽段溶于400μl滅菌蒸餾水中，濃度為5μg/μl封口膜封好后，置37℃孵72h，使其變?yōu)榫奂癄顟B(tài)的Aβ。大鼠經(jīng)10％水合氯醛3.5ml/kg腹腔注射麻醉后，固定于小動(dòng)物立體定位儀上，剪毛消毒,在頭巧中部縱向切口,暴露顱骨，參照《大鼠腦立體定向圖譜》，在顱骨相應(yīng)位置鉆孔(前囟后3.6mm，中線右側(cè)2.1mm)。除假手術(shù)組大鼠外，在無(wú)菌條件下，右側(cè)海馬注射Aβ25～35寡聚體(濃度為2μg/μl)，恒速垂直注射到右側(cè)海馬內(nèi)(硬膜下3.96mm)，以0.2μl/min速度持續(xù)注射5min，注射后留針5min，再緩慢撤針2min，以確保溶液充分彌散。假手術(shù)組按照上面的操作注射等量的生理鹽水。皮膚切開(kāi)處給予少量的青霉素粉劑，然后縫合切口。連續(xù)3天抗生素預(yù)防感染。2、分組與給藥將造模的大鼠隨機(jī)分為：模型組，假手術(shù)組，陽(yáng)性藥組，升百顆粒高、中、低劑量組，每組12只。動(dòng)物造模后第二天，灌胃給藥治療(升百顆粒高、中、低劑量組分別給予升百顆粒1.31g/(kg·d)、2.63g/(kg·d)、5.26/(kg·d)灌胃；陽(yáng)性藥組給予安理申0.525mg/(kg·d)灌胃；模型組和假手術(shù)組給予等劑量生理鹽水)。每天給藥一次，連續(xù)給藥14d。3、學(xué)習(xí)記憶能力測(cè)定采用Morris水迷宮測(cè)試儀，測(cè)定大鼠學(xué)習(xí)記憶能力。Morris測(cè)試系統(tǒng)由圓形水池、可移動(dòng)平臺(tái)和自動(dòng)記錄系統(tǒng)三部分組成。自動(dòng)記錄系統(tǒng)包括攝像機(jī)、監(jiān)視器和計(jì)算機(jī)。水池上方約2m處安裝攝像機(jī)，并與監(jiān)視器和計(jì)算機(jī)相連接。利用計(jì)算機(jī)軟件對(duì)大鼠在水池中的全部活動(dòng)進(jìn)行全程跟蹤，顯示整個(gè)期間大鼠的活動(dòng)軌跡。當(dāng)大鼠爬上平臺(tái)或設(shè)定的時(shí)間已到，計(jì)算機(jī)將停止跟蹤并巧錄下大鼠的游泳軌跡，包括在水池中游泳的總路程、找到平臺(tái)所需要時(shí)間(逃避潛伏期)、尋找平臺(tái)所采用的策略以及朝向錯(cuò)誤角度等，以此觀察大鼠的空間學(xué)習(xí)記憶能力。參照Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)方法，測(cè)量大鼠學(xué)習(xí)和記憶能力。所用水迷宮為一直徑180cm，高55cm的圓形水池，水池內(nèi)壁被漆為黑色，水深30cm，距池壁35cm處放置一高29cm，直徑10cm圓臺(tái)。3.1、隱蔽平臺(tái)試驗(yàn)監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)前1天，在沒(méi)有平臺(tái)的水池中大鼠自由游泳90s，使其熟悉水迷宮的環(huán)境。實(shí)驗(yàn)期間保持平臺(tái)位置不變，讓平臺(tái)中點(diǎn)與池壁之間的距離為35cm。在平臺(tái)對(duì)側(cè)選兩個(gè)與之等距離的點(diǎn)作為入水點(diǎn)，訓(xùn)練時(shí)將動(dòng)物面朝池壁輕輕放入水中，記錄大鼠從入水至找到平臺(tái)的游泳總路程及找到平臺(tái)所需要的時(shí)間(逃避潛伏期)。如果在90s內(nèi)未不到平臺(tái)，大鼠的逃避潛伏期記為90s，連續(xù)監(jiān)測(cè)5天，每天分上、下午2段，每段訓(xùn)練4次。以每天八次潛伏期的算術(shù)均值作為這一天的成績(jī)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果見(jiàn)表1。表1升百顆粒對(duì)AD大鼠Morris水迷宮試驗(yàn)平均逃避潛伏期的影響(n＝8)注：與假手術(shù)組相比*P＜0.05；與模型組相比#P＜0.053.2、空間探索試驗(yàn)在隱蔽平臺(tái)試驗(yàn)結(jié)束24h后，撤除水池中的平臺(tái)。然后任選一相同的入水點(diǎn)，將大鼠面向池壁放入水中。對(duì)大鼠在原平臺(tái)象限的停留時(shí)間進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，測(cè)其在90s內(nèi)在原平臺(tái)象限活動(dòng)時(shí)間與總時(shí)間比值及跨過(guò)原平臺(tái)相應(yīng)位置的次數(shù)。分上、下午2段，每段訓(xùn)練4次，結(jié)果見(jiàn)表2。表2升百顆粒對(duì)AD大鼠Morris水迷宮試驗(yàn)空間探索能力的影響(n＝8)注：與假手術(shù)組相比*P＜0.05；與模型組相比#P＜0.054、大鼠海馬乙酰膽堿酯酶(AChE)、乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶(ChAT)活性檢測(cè)學(xué)習(xí)記憶能力測(cè)定實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，禁食12h以上，用10％水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠，腹主動(dòng)脈取血，以1500r/min，離心8min，分離血清。檢測(cè)時(shí)將血清用磷酸鹽緩沖液按1:9稀釋，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行AChE和ChAT的檢測(cè)。斷頭取腦，在冰盤(pán)上分離海馬組織，用4℃的生理鹽水反復(fù)沖洗，海馬組織稱重后轉(zhuǎn)移到勻漿管中，然后加入組織質(zhì)量g/生理鹽水體積ml＝l:9的生理鹽水，勻漿，使海馬組織充分的研碎、勻漿化，制成濃度為10％的腦組織液，3000r/min，離心10min，提取上清液，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行AChE和ChAT的檢測(cè)。結(jié)果見(jiàn)表3和表4。表3升百顆粒對(duì)AD模型大鼠海馬組織和血清中AchE含量的影響(n＝8)注：與假手術(shù)組相比*P＜0.05；與模型組相比#P＜0.05表4升百顆粒對(duì)AD模型大鼠海馬組織和血清中ChAT含量的影響(n＝8)注：與假手術(shù)組相比*P＜0.05；與模型組相比#P＜0.055、尼氏染色法檢測(cè)大鼠海馬組織的病理變化實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，經(jīng)4％多聚甲醛灌流滴注大腦后，取腦，去掉嗅球、小腦和低位腦干，經(jīng)石蠟包埋，切片，常規(guī)脫蠟，無(wú)水乙醇浸泡2h，焦油紫浸泡1h，95％乙醇快速分化，無(wú)水乙醇脫水，二甲苯透明后中性樹(shù)膠封片，在光學(xué)顯微鏡下觀察大腦神經(jīng)元病理變化。結(jié)果如圖1所示，假手術(shù)組中大鼠海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞核大而圓，核仁明顯，細(xì)胞排列較致密整齊，錐體細(xì)胞可見(jiàn)多層(圖1A)。模型組中大鼠海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞稀疏，層次不清楚；有部分細(xì)胞缺失；有的細(xì)胞旁有空染區(qū)，出現(xiàn)核固縮、胞質(zhì)濃染、胞體變??；出現(xiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，膠質(zhì)細(xì)胞有多處增生形成結(jié)節(jié)(圖1B)。藥物組中大鼠海馬組織CA1區(qū)錐體細(xì)胞細(xì)胞排列尚整齊，層次尚清楚；較少見(jiàn)核固縮現(xiàn)象；未發(fā)現(xiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)(圖1C)。綜合以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果，升百顆粒對(duì)Aβ1-40所致AD模型大鼠的學(xué)習(xí)記憶功能損傷具有明顯的改善作用，并顯著性降低海馬組織和血清中AchE水平，提升ChAT水平，同時(shí)，抑制AD大鼠海馬CA1區(qū)細(xì)胞壞死、脫失造成的數(shù)量減少，表明升百顆粒具有顯著的防治阿爾茨海默病的作用。實(shí)驗(yàn)例240例老年性癡呆患者應(yīng)用升百顆粒治療的臨床研究阿爾茨海默癥(Alzheimerdisease，AD)屬于臨床常見(jiàn)的神經(jīng)退行性病癥，也是一種最為常見(jiàn)的老年性癡呆癥，其臨床主要特征為認(rèn)知和記憶功能不斷惡化，日常生活能力進(jìn)行性減退，并有各種神經(jīng)精神癥狀和行為障礙。本研究目的在于分析探究升百顆粒治療老年性癡呆患者的情況及臨床療效。1、一般資料本組AD患者40例，其中男22例，女18例，年齡62-81歲，平均年齡72.13±6.53歲，癡呆病程2-6年，平均4.57±1.51年。所有患者均參照參考美國(guó)神經(jīng)病語(yǔ)言障礙卒中研究所針對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)疾病制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)：①患者自述或家人代述本人有半年以上的記憶力減退史；②患者的認(rèn)知功能發(fā)生明顯障礙，且反復(fù)測(cè)試時(shí)不能改正；③在患者的相關(guān)癥狀出現(xiàn)時(shí)，情景記憶損害與認(rèn)知功能障礙相關(guān)或獨(dú)立存在。上述3條癥狀同時(shí)滿足可確診為老年癡呆癥。并進(jìn)行AD、VD及混合性癡呆鑒別診斷。排除良性老年遺忘、老年抑郁癥、顱內(nèi)占位、急性腦外傷以及全身性疾病伴發(fā)癡呆。將患者按照1:1的比例隨機(jī)分為對(duì)照組與治療組，每組20例。其中，對(duì)照組中男性患者10例，女性患者10例，平均年齡70.48±5.11歲，輕度癡呆患者6例、中度癡呆患者7例、重度癡呆患者7例。治療組中男性患者12例，女性患者8例，平均年齡73.78±7.95，輕度癡呆患者5例、中度癡呆患者8例、重度癡呆患者7例。兩組患者的一般資料以及病癥嚴(yán)重分期方面比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，具有可比性。2、治療方法兩組患者均首先給予常規(guī)治療，即給予對(duì)照組患者口服吡拉西坦片治療，1.2g/次，3次/d。治療組患者在對(duì)照組常規(guī)治療的基礎(chǔ)上給予升百顆粒治療，用量10g/次，3次/d。1個(gè)月為一個(gè)療程，治療3個(gè)月后評(píng)價(jià)療效。吡拉西坦片(山東魯抗醫(yī)藥有限公司，規(guī)格：每片0.4g)臨床用量為：2-4片/每次，一日三次，本藥物組合物臨床用量為：11.85g/袋，一日三袋?；钚猿煞值挠昧颗浔龋哼晾魈?本發(fā)明藥物組合物的原料藥＝3:2～3:1.5，安全用量比可訂2:1。3、療效判定在治療結(jié)束后分別記錄MMSE(老年認(rèn)知功能障礙量表)及ADL(日常生活能力量表)，MMSE檢測(cè)患者的認(rèn)知功能及癡呆的嚴(yán)重程度，ADL檢測(cè)患者的日常生活自理能力。依照中華全國(guó)中醫(yī)學(xué)會(huì)制定的老年性癡呆的中醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)及療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)對(duì)患者進(jìn)行療效判定。其標(biāo)準(zhǔn)為：顯效：治療后評(píng)分增加≥5分，患者主要癥狀消失，神智清晰，定向健全，回答問(wèn)題正確，反應(yīng)靈敏，生活能自理，能進(jìn)行一般社會(huì)活動(dòng)。有效：治療后評(píng)分增加2-4分，患者主要癥狀有所減輕或部分消失，回答問(wèn)題基本正確，但反應(yīng)遲鈍，生活基本能自理，智力與自尊意識(shí)仍有部分障礙。無(wú)效：治療后評(píng)分增加小于等于1分，主要癥狀無(wú)變化或病情發(fā)展，回答問(wèn)題不夠正確，生活不能自理，神智呆傻。同時(shí)對(duì)兩組患者的CDR和GDS量表進(jìn)行記錄并整理分析。CDR量表即老年癡呆評(píng)定量表，通過(guò)醫(yī)療人員與患者及其家屬交流，收集信息，對(duì)患者的認(rèn)知功能，記憶力以及生活的基本能力做出判斷分析。GDS量表即全面衰退量表，通過(guò)對(duì)患者及護(hù)理者進(jìn)行訪談，對(duì)患者的認(rèn)知能力做出記錄及分析。采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4、結(jié)果對(duì)照組與治療組比較用藥3個(gè)療程之后，治療組總有效率為75％，對(duì)照組總有效率為55％，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，兩組臨床療效比例：治療組20例：顯效2(10％)、有效13(65％)、無(wú)效5(25％)、總有效率75％。對(duì)照組20例：顯效1(5％)、有效10(50％)、無(wú)效9(45％)、總有效率55％。兩組患者治療前后CDR、GDS量表評(píng)估結(jié)果比較見(jiàn)表5、6：表5兩組患者治療前后CDR量表評(píng)估結(jié)果比較注：與對(duì)照組治療后比較，*P＜0.05；與本組治療前比較，#P＜0.05。兩組患者治療前的CDR量表評(píng)估結(jié)果比較，無(wú)顯著差異性(P＞0.05)；治療后的CDR量表評(píng)估結(jié)果進(jìn)行比較，治療組患者的評(píng)估結(jié)果明顯優(yōu)于對(duì)照組患者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。表6兩組患者治療前后GDS量表評(píng)估結(jié)果比較注：與對(duì)照組治療后比較，*P＜0.05；與本組治療前比較，#P＜0.05。兩組患者治療前的GDS量表評(píng)估結(jié)果比較，無(wú)顯著差異性(P＞0.05)；治療后的GDS量表評(píng)估結(jié)果進(jìn)行比較，治療組患者的評(píng)估結(jié)果明顯優(yōu)于對(duì)照組患者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。本組資料顯示，經(jīng)過(guò)三個(gè)療程治療后治療組患者M(jìn)MSE和ADL評(píng)分明顯高于對(duì)照組，治療組組患者的總有效率明顯高于對(duì)照組，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。通過(guò)CDR以及GDS量表評(píng)估法對(duì)兩組患者治療后的療效進(jìn)行記錄比較。治療后的CDR量表評(píng)估結(jié)果進(jìn)行比較，治療組患者的評(píng)估結(jié)果明顯優(yōu)于對(duì)照組患者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，說(shuō)明治療組患者接受治療后的癡呆癥狀即生活自理能力要明顯優(yōu)于對(duì)照組；治療后的GDS量表評(píng)估結(jié)果進(jìn)行比較，治療組患者的評(píng)估結(jié)果優(yōu)于對(duì)照組患者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，證實(shí)治療組患者在治療后的認(rèn)知功能高于對(duì)照組。說(shuō)明升百顆粒治療老年性癡呆有較好的療效，能有效改善患者的認(rèn)知能力，提高患者日常生活自理能力，值得臨床推廣。實(shí)驗(yàn)例3本發(fā)明藥物組合物對(duì)免疫力低下小鼠模型的治療作用1、動(dòng)物分組及給藥方法將小鼠隨機(jī)分為6組：空白組，模型組，陽(yáng)性藥組，升百顆粒高、中、低劑量組，每組12只。各組每天灌胃一次，升百顆粒高、中、低劑量組分別給予升百顆粒1.90g/(kg·d)、3.80g/(kg·d)、7.60/(kg·d)灌胃；陽(yáng)性藥組給予貞芪扶正顆粒1.30g/(kg·d)灌胃；模型組和空白組給予等劑量生理鹽水。連續(xù)給藥14d。于灌胃的第10天開(kāi)始，模型組，陽(yáng)性藥組，升百顆粒高、中、低劑量組于灌胃后腹腔注射環(huán)磷酰胺80mg/kg，制造免疫力低下模型，空白組注射生理鹽水，連續(xù)4d。給藥方法與時(shí)間見(jiàn)下表：表7給藥方法及時(shí)間2、增強(qiáng)免疫力功效評(píng)價(jià)目前關(guān)于功能食品增強(qiáng)免疫力的功能檢測(cè)主要從4個(gè)方面進(jìn)行：在細(xì)胞免疫功能、體液免疫功能、單核-巨噬細(xì)胞功能、NK細(xì)胞活性4個(gè)方面任2個(gè)方面結(jié)果陽(yáng)性，可判定該受試樣品具有增強(qiáng)免疫力功能。其中，單核-巨噬細(xì)胞功能指標(biāo)由小鼠碳廓清實(shí)驗(yàn)進(jìn)行評(píng)價(jià)，其原理為：血液中的單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)具有對(duì)進(jìn)入體內(nèi)的異物吞噬清除的功能。當(dāng)碳顆粒以注射的方式進(jìn)入血液后即迅速被肝、脾等器官中的巨噬細(xì)胞吞噬而使其在血漿中的濃度降低，可通過(guò)吞噬率來(lái)反映單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)的功能。在一定范圍內(nèi)，碳顆粒的清除速率與其劑量呈指函數(shù)關(guān)系，即吞噬速度與血碳濃度成正比，而與已吞噬的碳粒量成反比。細(xì)胞免疫功能指標(biāo)由脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)進(jìn)行評(píng)價(jià)，其原理為：T細(xì)胞在體外收到特異性抗原或非特異性有絲分裂原刺激后，可出現(xiàn)代謝旺盛、蛋白質(zhì)和核酸合成增加、細(xì)胞體積增大并能進(jìn)行分裂的淋巴母細(xì)胞，此稱為淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化。淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的高低可以反應(yīng)機(jī)體的細(xì)胞免疫水平。因此可作為測(cè)定機(jī)體細(xì)胞免疫功能的指標(biāo)之一。體液免疫功能指標(biāo)由血清溶血素實(shí)驗(yàn)進(jìn)行評(píng)價(jià)，其原理為：以SRBC為細(xì)胞性抗原對(duì)小鼠進(jìn)行免疫。B細(xì)胞在抗原刺激下增殖、分化成漿細(xì)胞，漿細(xì)胞在淋巴結(jié)或淋巴組織中經(jīng)(3-4d)成熟，分泌與SRBC相對(duì)應(yīng)的抗體－－溶血素，并釋放到體液中，通過(guò)測(cè)定溶血素可反映機(jī)體的特異性體液免疫功能。NK細(xì)胞殺傷活性指標(biāo)通過(guò)測(cè)定乳酸脫氫酶(LDH)進(jìn)行評(píng)價(jià)，其原理為：正常情況下，LDH不能透過(guò)細(xì)胞膜，當(dāng)細(xì)胞受到NK細(xì)胞的殺傷后細(xì)胞膜通透性增加，LDH釋放到細(xì)胞外。通過(guò)使用LDH基質(zhì)液(含乳酸鋰等)在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀上比色測(cè)定乳酸脫氫酶，可間接反映機(jī)體的NK細(xì)胞殺傷活性。2.1小鼠碳廓清實(shí)驗(yàn)于第14天灌胃2小時(shí)后，按小鼠體重5ml/kg尾靜脈注射體積比1:4稀釋的墨汁，分別于尾靜脈注射后2分鐘(t2)和10分鐘(t1)，用定量毛細(xì)管于球后毛細(xì)血管叢取血20ul，溶于3ml0.1％NaCO3溶液。同毛細(xì)管吹打均勻，置分光光度計(jì)在波長(zhǎng)680nm下比色，分別測(cè)定光密度值(OD)：A1、A2。根據(jù)小鼠體重m、肝重m1和脾重m2，按下式計(jì)算廓清指數(shù)K、吞噬指數(shù)α：廓清指數(shù)K＝(lgA1-lgA2)/(t2-t1)吞噬指數(shù)α＝[m/(m1+m2)]×3√K實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)下表：表8升百顆粒對(duì)免疫力低下小鼠模型廓清指數(shù)的影響(n＝10)注：與空白組相比*P＜0.05；與模型組相比#P＜0.052.2脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)2.2.1脾細(xì)胞懸液制備于第14天灌胃2小時(shí)后，將小鼠頸椎脫臼處死，無(wú)菌取脾，置于盛有適量無(wú)菌Hanks液的小平皿中，用鑷子輕輕將脾撕碎，用消毒磨棒輕輕捻碎，制成單個(gè)細(xì)胞懸液。經(jīng)200目篩過(guò)濾，低滲去除紅細(xì)胞，用Hanks液洗3次，每次離心10min(1000r/min)，然后將細(xì)胞懸浮于2ml的完全培養(yǎng)液中。2.2.2使用臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù)將細(xì)胞懸液0.5ml加入試管中。加入0.5ml0.4％臺(tái)盼藍(lán)染液，染色2-3分鐘。吸取少許懸液涂于載破片上，加上蓋片。鏡下取幾個(gè)任意視野分別計(jì)死細(xì)胞和活細(xì)胞數(shù)，計(jì)細(xì)胞活力(死細(xì)胞能被臺(tái)盼藍(lán)染色，鏡下可見(jiàn)深藍(lán)色細(xì)胞，活細(xì)胞不被染色，鏡下呈無(wú)色透明狀)。計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù)應(yīng)在95％以上。2.2.3調(diào)整細(xì)胞濃度為2×107/ml將血球計(jì)數(shù)板及蓋片擦拭干凈，并將蓋片蓋在計(jì)數(shù)板上。將細(xì)胞懸液吸出少許，滴加在蓋片邊緣，使懸液充滿蓋片和計(jì)數(shù)板之間。靜置3分鐘。鏡下觀察，計(jì)算計(jì)數(shù)板四大格細(xì)胞總數(shù)，壓線細(xì)胞只記左側(cè)和上方的。按下式計(jì)算：細(xì)胞數(shù)/ml＝(四大格細(xì)胞總數(shù)/4)×10000。(鏡下偶見(jiàn)由兩個(gè)以上細(xì)胞組成的細(xì)胞團(tuán)，按單個(gè)細(xì)胞計(jì)算。)2.2.4淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)將細(xì)胞懸液分兩孔加入96孔培養(yǎng)板中，每孔1ml，一孔加濃度100μg/mlConA50μL(相當(dāng)于5μg)，另一孔不加ConA作為對(duì)照，每份分裝3孔作為平行樣，置5％CO2，37℃培養(yǎng)72小時(shí)。培養(yǎng)結(jié)束前4小時(shí)，每孔輕輕吸去上清液0.7ml，加入0.7ml不含小牛血清的RPM11640培養(yǎng)液，同時(shí)加入MTT(5mg/ml)50μl/孔，繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)。培養(yǎng)結(jié)束后，每孔加入1ml酸性異丙醇，吹打混勻，使紫色結(jié)晶完全溶解。用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀，以570nm波長(zhǎng)測(cè)定光密度值。用加ConA孔的光密度值減去不加ConA孔的光密度值代表淋巴細(xì)胞的增殖能力。結(jié)果見(jiàn)下表：表9升百顆粒對(duì)免疫力低下小鼠模型脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的影響(n＝10)注：與空白組相比*P＜0.05；與模型組相比#P＜0.052.3血清溶血素測(cè)定實(shí)驗(yàn)2.3.1動(dòng)物分組及給藥方法將小鼠隨機(jī)分為6組：空白組，模型組，陽(yáng)性藥組，升百顆粒高、中、低劑量組，每組12只。各組每天灌胃一次，升百顆粒高、中、低劑量組分別給予升百顆粒1.90g/(kg·d)、3.80g/(kg·d)、7.60/(kg·d)灌胃；陽(yáng)性藥組給予貞芪扶正顆粒1.30g/(kg·d)灌胃；模型組和空白組給予等劑量生理鹽水。連續(xù)給藥14d。于灌胃的第10天開(kāi)始，模型組，陽(yáng)性藥組，升百顆粒高、中、低劑量組于灌胃后腹腔注射環(huán)磷酰胺80mg/kg，制造免疫力低下模型，空白組注射生理鹽水，連續(xù)4d。于灌胃第9天開(kāi)始，同時(shí)腹腔注射5％(V/V)綿羊紅細(xì)胞，每只0.2ml，免疫6d。2.3.2半數(shù)溶血值(HC50)的測(cè)定摘除小鼠眼球取血，放置1h，2000r/min離心10min，分離血清，血清用生理鹽水作1:2稀釋。制備綿羊紅細(xì)胞(SRBC)懸液(從健康年輕(約半歲)綿羊頸靜脈采血，加入兩倍量的Alsever’s血細(xì)胞保存液，置4℃保存。實(shí)驗(yàn)時(shí)取保存的羊血，用生理鹽水洗滌3次，每次2000r/min離心5min，除去其中的纖維蛋白和白細(xì)胞、血小板等，以生理鹽水配成所需濃度)；制備豚鼠血清(豚鼠心臟抽血，分離血清，將血清加入壓積綿羊紅細(xì)胞(SRBC)中。按豚鼠血清：SRBC＝5:1(V/V)，于4℃冰箱中放置30min，以除去非特異性補(bǔ)體參與的溶血，2000r/min離心10min，吸取上清液，用生理鹽水稀釋成1:10血清，備用)。實(shí)驗(yàn)管中依次加入125μl10％SRBC(V/V)、250μl補(bǔ)體(稀釋的豚鼠血清)以及250μl稀釋后的血清樣品；對(duì)照1管依次加入125μl10％SRBC(V/V)、250μl補(bǔ)體(稀釋的豚鼠血清)以及250μl生理鹽水；對(duì)照2管依次加入125μl10％SRBC(V/V)、250μl生理鹽水以及250μl稀釋后的血清樣品。37℃孵育30min后，冰浴終止反應(yīng)10min，以2000r/min離心10min。取上清250μl加入到96孔培養(yǎng)板中，以酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀測(cè)定波長(zhǎng)540nm的吸光度(A)值。用實(shí)驗(yàn)管吸收度減去對(duì)照管(對(duì)照1管和對(duì)照2管)吸收度，結(jié)果見(jiàn)下表：表10升百顆粒對(duì)免疫力低下小鼠模型血清溶血素水平的影響(n＝10)注：與空白組相比*P＜0.05；與模型組相比#P＜0.052.4乳酸脫氫酶(LDH)測(cè)定實(shí)驗(yàn)2.4.1脾細(xì)胞懸液的制備(效應(yīng)細(xì)胞)無(wú)菌取脾，置于盛有適量無(wú)菌Hanks液的小平皿中，用鑷子輕輕將脾撕碎，用消毒磨棒輕輕捻碎，制成單個(gè)細(xì)胞懸液。經(jīng)200目篩過(guò)濾，低滲去除紅細(xì)胞，用Hanks液洗3次，每次離心10min(1000r/min)，然后將細(xì)胞懸浮于2ml的完全培養(yǎng)液中。用臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù)(應(yīng)在95％以上)，最后用RPMI1640完全培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度為2×107個(gè)/ml。2.4.2靶細(xì)胞的傳代實(shí)驗(yàn)前24h將靶細(xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng)。應(yīng)用前以Hanks液洗3次，用RPMI1640完全培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度為4×105個(gè)/ml。2.4.3NK細(xì)胞活性檢測(cè)取靶細(xì)胞和效應(yīng)細(xì)胞各100μl(效靶比50：1)，加入U(xiǎn)型96孔培養(yǎng)板中；靶細(xì)胞自然釋放孔加靶細(xì)胞和培養(yǎng)液各100μl，靶細(xì)胞最大釋放孔加靶細(xì)胞和1％NP40或2.5％Triton各100μl；上述各項(xiàng)均設(shè)三個(gè)復(fù)孔，于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4h。然后將96孔培養(yǎng)板以1500r/min離心5min，每孔吸取上清100μl置平底96孔培養(yǎng)板中，同時(shí)加入LDH基質(zhì)液100μl，反應(yīng)3min，每孔加入1mol/L的HCl30μl，以酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀測(cè)定波長(zhǎng)490nm的吸光度(A)值。NK細(xì)胞活性為X，計(jì)算公式為：X＝[(Af-An)/(Am-An)]×100式中：Af－－反應(yīng)孔吸光度An－－自然釋放孔吸光度Am－－最大釋放孔吸光度結(jié)果見(jiàn)下表：表11升百顆粒對(duì)免疫力低下小鼠模型NK細(xì)胞活性的影響(n＝10)注：與空白組相比*P＜0.05；與模型組相比#P＜0.05綜合小鼠碳廓清實(shí)驗(yàn)、脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)、血清溶血素測(cè)定實(shí)驗(yàn)和乳酸脫氫酶測(cè)定實(shí)驗(yàn)結(jié)果，證明升百顆粒對(duì)環(huán)磷酰胺所致免疫力低下模型小鼠的單核-吞噬細(xì)胞功能、細(xì)胞免疫功能、體液免疫功能和NK細(xì)胞活性均具有明顯的改善作用。實(shí)驗(yàn)例4填充劑及其用量對(duì)本發(fā)明顆粒劑質(zhì)量的影響發(fā)明人前期對(duì)潤(rùn)濕劑濃度進(jìn)行了考察，從制粒難易度及用料成本考慮，以80％乙醇作為潤(rùn)濕劑為最佳。分別選用可溶性淀粉，乳糖，甘露醇，微晶纖維素，糊精，木糖醇作為填充劑，根據(jù)實(shí)施例1工藝制備顆粒劑，主要從成型率，吸濕性，流動(dòng)性和性狀等方面考察填充劑對(duì)顆粒劑質(zhì)量的影響。4.1成型性檢測(cè)將制備好的顆粒稱重先過(guò)一號(hào)篩再過(guò)五號(hào)篩，收集能通過(guò)一號(hào)篩但不能通過(guò)五號(hào)篩的顆粒稱重。反復(fù)測(cè)試5批顆粒成型率。結(jié)果見(jiàn)圖2。成型率＝(過(guò)篩后顆粒質(zhì)量(g)/過(guò)篩前顆粒質(zhì)量(g))×100％由圖2可知，參與評(píng)價(jià)的5種輔料中，微晶纖維素的成型率最高(82.05％)。由此可說(shuō)明，從成型性方面考慮，微晶纖維素最適宜作為填充劑添加至本發(fā)明升百顆粒劑中。4.2休止角檢測(cè)采用固定漏斗法將3只漏斗串聯(lián)并固定于水平放置的濾紙上一定的高度(H＝1.5cm)，小心地將顆粒沿漏斗壁倒入最上的漏斗中直到濾紙上形成的顆粒圓錐體尖端接觸到漏斗口為止，由濾紙上量出的圓錐底部的直徑(2R)，計(jì)算出休止角(tga)，每組5次試驗(yàn)，取平均值，見(jiàn)圖3。休止角值(tga)＝H/R4.3吸濕性檢測(cè)取所制顆粒劑3g，置25℃烘箱中恒重48h。將底部放有NaCl飽和溶液的玻璃干燥器中定時(shí)放入NaCl直到形成過(guò)飽和溶液，此時(shí)干燥器內(nèi)的相對(duì)濕度為75％。將顆粒劑平鋪于干燥至恒重的扁形稱量瓶中，厚度不超過(guò)3mm，精密稱定后置于上述干燥器內(nèi)(扁稱量瓶蓋打開(kāi))。48h后稱量計(jì)算吸濕百分率。共做兩組計(jì)算平均值，見(jiàn)圖4。吸濕率＝((吸濕后重量-吸濕前重量)/吸濕前重量)×100％4.4堆密度檢測(cè)將過(guò)篩后的顆粒稱取10g(M)放入干燥的量筒(50ml量筒)中輕輕振動(dòng)讀出刻度數(shù)(V)mL，每組5次試驗(yàn)，取平均值，見(jiàn)表12：表12堆密度檢測(cè)4.5性狀描述表13性狀描述由表13可知，綜合歸納各顆粒劑性狀描述，結(jié)合顆粒均勻度、硬度、制粒過(guò)程是否結(jié)塊，可認(rèn)為微晶纖維素所制顆粒效果最好。綜合考慮上述各項(xiàng)指標(biāo)，以用量為處方原藥量比例1:1的微晶纖維素為填充劑，80％乙醇作為潤(rùn)濕劑進(jìn)行制粒，所得顆粒劑成型率高，性狀好，流動(dòng)相與吸濕性均良好。實(shí)驗(yàn)例5輔料的選用對(duì)本發(fā)明顆粒劑口感的影響1、甜味劑在實(shí)施例1處方的基礎(chǔ)上增加甜味劑阿巴斯甜，用量分別為總處方量的0.3％，0.5％，0.7％，經(jīng)品嘗發(fā)現(xiàn)其甜味無(wú)法遮蓋藥物的苦味，而是形成一股又苦又甜的味道，口感更為怪異，故最終不予考慮。2、包和材料發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明顆粒劑的苦味主要由淫羊藿所致。選用β-環(huán)糊精作為包合材料，選取淫羊藿浸膏粉末和β-環(huán)糊精的比例為1:4，1:6，1:8，1:10的條件下進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。稱取β-環(huán)糊精8g，使用磁力攪拌器在60℃下加水制成飽和溶液(8g量的β-環(huán)糊精在60℃下于100ml水中達(dá)到飽和)。精密稱取相應(yīng)比例淫羊藿提取物，加十倍量乙醇溶解后，緩慢滴入60℃的β-環(huán)糊精飽和溶液，恒溫?cái)嚢?h，之后降溫至室溫?cái)嚢?h，取出，冷藏12h，抽濾，用少量乙醇洗滌濾餅，之后再用少量水洗滌。于60℃烘箱中干燥4h，既得，稱取重量，計(jì)算產(chǎn)率(見(jiàn)表14)。表14淫羊藿β-環(huán)糊精包合物產(chǎn)率淫羊藿提取物(g)β-環(huán)糊精(g)包合物(g)產(chǎn)率(％)286.3463.401.3386.1666.02186.1368.110.885.9267.27最終確定淫羊藿提取物:β-環(huán)糊精＝1:8，即：精密稱取淫羊藿提取物1g，溶于10ml乙醇后，緩慢滴入60℃的β-環(huán)糊精飽和溶液，恒溫?cái)嚢?h，之后降溫至室溫?cái)嚢?h，取出，冷藏12h，抽濾，用少量乙醇洗滌濾餅，之后再用少量水洗滌。于60℃烘箱中干燥4h，平均得6g淫羊藿包和物。在未計(jì)算包和率的情況下，將6g產(chǎn)物全部添加至處方中。淫羊藿經(jīng)包和之后，口感沒(méi)有先前那么苦，將改良后的處方進(jìn)行試喝，發(fā)現(xiàn)口感較之前好了很多，苦味完全能夠接受，說(shuō)明此方法可行。實(shí)驗(yàn)例6輔料的選用對(duì)本發(fā)明混懸型顆粒劑沉降時(shí)間的影響由于升百顆粒劑中的主要成分為西洋參，三七生藥直接打粉，不溶于水，故本顆粒的溶解度差，從而導(dǎo)致口感及外觀較差。由于粉末量太大，故采用添加助懸劑增加溶液粘稠度的方法延長(zhǎng)其沉降時(shí)間(制成混懸型顆粒劑)。分別采用了不同用量的羧甲基纖維素鈉(4％，5％，6％,)，和海藻酸鈉(4％，5％，6％)，同時(shí)均加以處方量0.5％的硬脂酸鎂增強(qiáng)其助懸性。通過(guò)實(shí)驗(yàn)測(cè)量比較其沉降容積比，來(lái)確定不同用量的羧甲基纖維素鈉和海藻酸鈉的助懸性的高低。稱取6份樣品(加入處方量4％、5％和6％的羧甲基纖維素鈉分別為1號(hào)處方、2號(hào)處方和3號(hào)處方；加入處方量4％、5％和6％的海藻酸鈉分別為4號(hào)處方、5號(hào)處方和6號(hào)處方；以上1-6號(hào)處方均再加入處方量0.5％的硬脂酸鎂；不添加助懸劑的純處方藥材為7號(hào)處方)各5g置入具塞量筒中，加入蒸餾水至50ml刻度，密塞，用力振搖1min，根據(jù)下降液面補(bǔ)加蒸餾水至50ml刻度，之后用力振搖1min，靜置，記下混懸物的開(kāi)始高度Ho，之后分別記錄靜置5min、10min、30min、1h、2h、3h、12h后的沉降面高度H，按下式計(jì)算：沉降體積比(F)＝H/Ho經(jīng)實(shí)驗(yàn)比較(見(jiàn)圖5)，海藻酸鈉的助懸效果優(yōu)于羧甲基纖維素鈉，助懸效果最好的為添加處方量6％的海藻酸鈉配以處方量0.5％的硬脂酸鎂。但5％的海藻酸鈉配以處方量0.5％的硬脂酸鎂已能達(dá)到助懸要求，綜合考慮用料成本及總處方量，最終選擇5％的海藻酸鈉配以處方量0.5％的硬脂酸鎂作為助懸劑。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3