本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。更具體地，涉及哌克昔林在治療胃癌和腸癌方面的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

胃癌和腸癌是世界范圍內(nèi)常見(jiàn)的胃腸道腫瘤，在我國(guó)各種惡性腫瘤中居首位，是全球范圍內(nèi)致人死亡的主要病因之一，并且臨床治療存在很大的困難。

哌克昔林是一種鈣離子通道拮抗劑，具有抑制Ca2+內(nèi)流作用，能舒張血管平滑肌，明顯擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈，增加冠脈血流量，對(duì)心絞痛效果較好，臨床主要用于治療心絞痛。同時(shí)臨床上也用于室性心律失常，尤其是對(duì)其他抗心律失常藥無(wú)效的患者，本品往往能奏效。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，哌克昔林還可以抑制細(xì)胞內(nèi)脂肪酸的分解代謝及促進(jìn)自噬，有研究表明，哌克昔林可以在一定程度上殺死白血病細(xì)胞。

目前，未見(jiàn)有哌克昔林應(yīng)用于胃癌和腸癌等其他疾病領(lǐng)域的報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是克服現(xiàn)有胃癌和腸癌治療藥物的不足以及哌克昔林應(yīng)用的局限，提供哌克昔林的一種新的抗癌應(yīng)用，對(duì)胃癌和腸癌的治療提供了一種新的藥物。

本發(fā)明的目的是提供哌克昔林在制備治療胃癌和/或腸癌的藥物方面的應(yīng)用。

本發(fā)明另一目的是提供一種包含有哌克昔林的治療胃癌和/或腸癌的藥物。

本發(fā)明上述目的通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

本發(fā)明研究顯示，哌克昔林對(duì)胃癌和結(jié)直腸癌具有很好的防治效果，因此可應(yīng)用于胃癌和結(jié)直腸癌的防治。

因此，哌克昔林或其鹽在制備防治（包括預(yù)防和/或治療）胃癌和/或腸癌的藥物方面的應(yīng)用，都在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。

其中，優(yōu)選地，所述腸癌為結(jié)直腸癌。

優(yōu)選地，所述胃癌為Ι到Ⅳ期胃癌。

更優(yōu)選地，所述胃癌為Ⅳ期胃癌。

更優(yōu)選地，所述結(jié)直腸癌為Ι到Ⅳ期結(jié)直腸癌。

更優(yōu)選地，所述結(jié)直腸癌為Ⅳ期結(jié)直腸癌。

另外，所述治療胃癌和/或腸癌的藥物是指抑制胃癌細(xì)胞和/或腸癌細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖和/或克隆形成能力，抑制胃癌細(xì)胞和/或腸癌細(xì)胞的侵襲和/或轉(zhuǎn)移，和/或誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞和/或腸癌細(xì)胞的凋亡的藥物。

優(yōu)選地，所述胃癌細(xì)胞為人胃癌細(xì)胞HGC27或MGC803；所述腸癌細(xì)胞為人結(jié)腸癌細(xì)胞HCT 116或人結(jié)腸腺癌細(xì)胞DLD-1。

一種包含有哌克昔林或其鹽的防治胃癌和/或腸癌的藥物，也在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。

進(jìn)一步地，所述藥物還可以包括其藥學(xué)上可接受的載體等。

本發(fā)明具有以下有益效果：

本發(fā)明提供了哌克昔林及其鹽的一種新應(yīng)用，即應(yīng)用于治療胃癌和結(jié)直腸癌，哌克昔林能夠顯著抑制胃癌和結(jié)直腸癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖，誘導(dǎo)胃癌和結(jié)直腸癌細(xì)胞的凋亡，并抑制其轉(zhuǎn)移，對(duì)結(jié)胃癌和直腸癌具有顯著的療效，可應(yīng)用于胃癌和結(jié)直腸癌的防治方面。

本發(fā)明不僅為胃癌和結(jié)直腸癌的治療提供了一種新的治療藥物和治療途徑，還為哌克昔林的應(yīng)用提供了新的領(lǐng)域。

附圖說(shuō)明

圖1為哌克昔林處理胃癌和結(jié)直腸癌細(xì)胞后存活細(xì)胞比例。

圖2為哌克昔林對(duì)胃癌和結(jié)直腸癌細(xì)胞成瘤的影響。

圖3為哌克昔林對(duì)胃癌和結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖影響。

圖4為哌克昔林對(duì)胃癌和結(jié)直腸癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的影響。

圖5為哌克昔林對(duì)胃癌和結(jié)直腸癌細(xì)胞侵襲的影響。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合說(shuō)明書(shū)附圖和具體實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但實(shí)施例并不對(duì)本發(fā)明做任何形式的限定。除非特別說(shuō)明，本發(fā)明采用的試劑、方法和設(shè)備為本技術(shù)領(lǐng)域常規(guī)試劑、方法和設(shè)備。

除非特別說(shuō)明，以下實(shí)施例所用試劑和材料均為市購(gòu)。

實(shí)施例1 哌克昔林對(duì)胃癌和結(jié)直腸癌細(xì)胞及其成瘤的影響

1、實(shí)驗(yàn)材料

（1）藥物：哌克昔林在臨床上常用其馬來(lái)酸鹽，本實(shí)施例以馬來(lái)酸哌克昔林為實(shí)驗(yàn)藥物。

馬來(lái)酸哌克昔林的化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下所示：

（2）癌細(xì)胞：

胃癌細(xì)胞：人胃癌細(xì)胞HGC27和MGC803；

結(jié)直腸癌細(xì)胞：人結(jié)腸癌細(xì)胞HCT 116和人結(jié)腸腺癌細(xì)胞DLD-1。

（3）市購(gòu)的細(xì)胞凋亡試劑盒。

2、實(shí)驗(yàn)分組

（1）對(duì)照組：空白對(duì)照，即癌細(xì)胞不經(jīng)過(guò)任何藥物處理。

（2）實(shí)驗(yàn)組：使用馬來(lái)酸哌克昔林處理癌細(xì)胞。

3、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)馬來(lái)酸哌克昔林對(duì)胃癌和結(jié)直腸癌細(xì)胞凋亡的影響

（1）我們?cè)谑装逯袖伜媒Y(jié)直腸癌細(xì)胞，待其貼壁后，加入0μM（即對(duì)照）、3μM、4μM（或5μM）的馬來(lái)酸哌克昔林處理細(xì)胞24h，然后通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。

具體方法如下：

1）將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HGC27和MGC803細(xì)胞、HCT 116和DLD-1細(xì)胞用胰酶消化后，取1~2×10⁵細(xì)胞均勻鋪到十二孔板中。

2）待細(xì)胞貼壁后，更換成含有不同濃度馬來(lái)酸哌克昔林的培養(yǎng)基，孵育24h。

3）消化細(xì)胞之后，根據(jù)凋亡檢測(cè)試劑盒的方法處理細(xì)胞，Annexin V和PI染色完成之后通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。

（2）實(shí)驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果如圖1所示，圖1中顯示的百分比為Annexin V和PI雙陰性（即存活細(xì)胞）比例，使用馬來(lái)酸哌克昔林處理后，胃癌和結(jié)直腸癌細(xì)胞的死亡數(shù)明顯增加，表明哌克昔林能夠誘導(dǎo)胃癌和結(jié)直腸癌細(xì)胞凋亡。

4、馬來(lái)酸哌克昔林對(duì)成瘤的影響

（1）在六孔板中鋪好胃癌和結(jié)直腸癌細(xì)胞，待其貼壁后，加入0μM 、1μM 和2μM 馬來(lái)酸哌克昔林處理胃癌和腸癌細(xì)胞，觀察馬來(lái)酸哌克昔林對(duì)HGC27和MGC803細(xì)胞、HCT 116和DLD-1細(xì)胞克隆形成的影響。

具體方法如下：

1）取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HGC27和MGC803細(xì)胞、HCT 116和DLD-1細(xì)胞，用胰酶將細(xì)胞消化，取每孔500個(gè)細(xì)胞均勻鋪到六孔板中。

2）待細(xì)胞貼壁后，更換含有不同濃度馬來(lái)酸哌克昔林的培養(yǎng)基，繼續(xù)37℃培養(yǎng)箱中孵育細(xì)胞。

3）孔板中的出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的克隆時(shí)，終止培養(yǎng)，吸去培養(yǎng)基，用PBS小心清洗。

4）甲醇固定后用結(jié)晶紫染色，在空氣中風(fēng)干。

5）倒置顯微鏡中拍照。

（2）實(shí)驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果如圖2所示，胃癌和結(jié)直腸癌細(xì)胞經(jīng)過(guò)馬來(lái)酸哌克昔林處理后，克隆形成數(shù)目明顯下降，表明哌克昔林可以顯著抑制胃癌和結(jié)直腸癌細(xì)胞成瘤。

實(shí)施例2 哌克昔林對(duì)胃癌和結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖的影響

1、實(shí)驗(yàn)材料

（1）藥物：同實(shí)施例1。

（2）癌細(xì)胞：同實(shí)施例1。

（3）市購(gòu)的MTS試劑盒。

2、通過(guò)MTT方法檢測(cè)馬來(lái)酸哌克昔林處理后HGC27和MGC803細(xì)胞，以及HCT 116和DLD-1細(xì)胞活性

（1）在96孔板中鋪好胃癌和結(jié)直腸癌細(xì)胞，待其貼壁后，加入含有0μM 、5μM、10μM、20μM馬來(lái)酸哌克昔林的培養(yǎng)基處理細(xì)胞，然后在24h、48h、72h通過(guò)MTT方法檢測(cè)HGC27和MGC803細(xì)胞、HCT 116和DLD-1細(xì)胞活性。

具體方法如下：

1）將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HGC27和MGC803細(xì)胞、HCT 116和DLD-1細(xì)胞用胰酶消化后，取4×10³細(xì)胞均勻鋪到96孔板中。

2）待細(xì)胞貼壁后，更換含有不同濃度馬來(lái)酸哌克昔林的培養(yǎng)基。

3）加入藥物24h、48h、72h后，按1:10比例加入MTS試劑，37℃孵育2h后，用酶標(biāo)儀檢測(cè)490nm吸光值。

（2）實(shí)驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果如圖3所示，胃癌和結(jié)直腸癌細(xì)胞經(jīng)過(guò)馬來(lái)酸哌克昔林處理后，細(xì)胞活性明顯下降，表明哌克昔林可以顯著抑制胃癌和結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖。

實(shí)施例3 哌克昔林對(duì)胃癌和結(jié)直腸癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的影響

1、實(shí)驗(yàn)材料

（1）藥物：同實(shí)施例1。

（2）胃癌細(xì)胞：同實(shí)施例1。

（3）有預(yù)包被基質(zhì)膠和無(wú)預(yù)包被基質(zhì)膠的Transwell小室。

2、通過(guò)Transwell小室檢測(cè)馬來(lái)酸哌克昔林處理后，對(duì)HGC27和MGC803細(xì)胞、HCT 116和DLD-1細(xì)胞侵襲和遷移的影響

（1）在六孔板中鋪好胃癌和結(jié)直腸癌細(xì)胞，待其貼壁后，加入0μM 、3μM 和4μM （或5μM）馬來(lái)酸哌克昔林處理胃癌細(xì)胞48h，加入0μM、4μM和6μM馬來(lái)酸哌克昔林處理腸癌細(xì)胞48h，再通過(guò)Transwell小室檢測(cè)馬來(lái)酸哌克昔林處理后HGC27和MGC803細(xì)胞、HCT 116和DLD-1細(xì)胞侵襲和遷移的影響。

具體方法如下：

1）將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HGC27和MGC803細(xì)胞、HCT 116和DLD-1細(xì)胞用胰酶消化后，取6×10⁵細(xì)胞均勻鋪到六孔板中。

2）待細(xì)胞貼壁后，更換含有不同濃度馬來(lái)酸哌克昔林的培養(yǎng)基。

3）加入藥物處理后，胰酶消化細(xì)胞，PBS清洗后，用無(wú)血清培養(yǎng)基重懸計(jì)數(shù)。

4）取200μl細(xì)胞懸液，分別含有細(xì)胞數(shù)為1×10⁵加到無(wú)預(yù)包被基質(zhì)膠和有包被基質(zhì)膠的Transwell上室，在下室中加入600μl含100%血清的培養(yǎng)基。

5）37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)細(xì)胞48h，取出小室，甲醇固定后用結(jié)晶紫染色，用棉簽去除上室中殘余細(xì)胞后，在空氣中風(fēng)干。

6）倒置顯微鏡中拍照。

（2）實(shí)驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果如圖4和圖5所示，胃癌和結(jié)直腸癌細(xì)胞經(jīng)過(guò)馬來(lái)酸哌克昔林處理后，遷移和侵襲到下室中的細(xì)胞數(shù)目明顯下降，表明哌克昔林可以顯著地抑制胃癌和結(jié)直腸癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力，且該抑制效果呈濃度依賴(lài)性。