本發(fā)明屬藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一類基于天然產(chǎn)物姜黃素(curcumin)結(jié)構(gòu)的含雜環(huán)小分子化合物的合成及其用于制備抗腫瘤藥物的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
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惡性腫瘤是一種嚴(yán)重威脅人類健康的重大疾病，由于其發(fā)病機(jī)理復(fù)雜，種類眾多，目前和其他疾病的藥物治療相比，抗腫瘤藥物的臨床成功率仍然偏低。另外長期用藥產(chǎn)生的毒副作用、耐藥性也不容忽視。因此，尋找新的高效低毒的抗腫瘤藥物仍然具有迫切的需要。
從天然產(chǎn)物出發(fā)尋找新藥是藥物研究的重要方法。姜黃素(curcumin)是一種多酚類化合物，主要是從姜黃等植物的根莖中提取得到，因其廣泛的生物活性而引起人們的極大關(guān)注。研究發(fā)現(xiàn)姜黃素具有抗腫瘤、抗氧化、抗老年癡呆癥、抗炎、抗HIV、抗菌等多種藥理活性，且毒性極低。但姜黃素生物利用度較低，活性總體偏低，為解決這些問題，人們做了大量工作。從目前的研究進(jìn)展來看，主要是兩個思路，一是從藥劑學(xué)方面入手，用脂質(zhì)體或納米粒子、膠束等包裹和負(fù)載姜黃素；二是以姜黃素為先導(dǎo)物進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造，合成尋找新的類似物，以期得到療效更好的藥物。其中研究姜黃素類似物，得到新分子實體，提高生物利用度，保持姜黃素的低毒性，同時增強(qiáng)其生物活性和選擇性，目前這一方面的研究是藥物化學(xué)領(lǐng)域的熱點(diǎn)。
本發(fā)明提供了以天然產(chǎn)物姜黃素結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)，設(shè)計合成的新的含有雜環(huán)結(jié)構(gòu)的化合物實體，這些化合物具有抗腫瘤活性。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
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本發(fā)明的目的之一在于提供13個姜黃素類似物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的另一目的是提供一種用于治療腫瘤的藥物組合物，其中含有治療有效量的作為化學(xué)成分的權(quán)利要求1所述的化合物中的任何一種或多種或其藥學(xué)上可接受的鹽及藥用輔料。
具體而言，本發(fā)明所述13個姜黃素類似物中，H1的分子式為C23H21NO3，化學(xué)名稱為：(2E,6E)-2-(4-羥基苯亞甲基)-6-(5-甲氧基吲哚-3-亞甲基)環(huán)己酮。H2的分子式為C24H23NO4，化學(xué)名稱為：(2E,6E)-2-(4-羥基-3-甲氧基苯亞甲基)-6-(5-甲氧基吲哚-3-亞甲基)環(huán)己酮。H3的分子式為C25H25NO5，化學(xué)名稱為：(2E,6E)-2-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-6-(5-甲氧基吲哚-3-亞甲基)環(huán)己酮。H4的分子式為C27H27NO4，化學(xué)名稱為：(2E,6E)-2-(4-環(huán)丙甲氧基-3-羥基苯亞甲基)-6-(5-甲氧基吲哚-3-亞甲基)環(huán)己酮。H5的分子式為C22H20N2O2，化學(xué)名稱為：(2E,6E)-2-(5-甲氧基吲哚-3-亞甲基)-6-(吡啶-4-亞甲基)環(huán)己酮。H6的分子式為C25H22N2O2，化學(xué)名稱為：(2E,6E)-2-(吲哚-3-亞甲基)-6-(5-甲氧基吲哚-3-亞甲基)環(huán)己酮。H7的分子式為C22H19NO2，化學(xué)名稱為：(2E,6E)-2-(4-羥基苯亞甲基)-6-(吲哚-3-亞甲基)環(huán)己酮。H8的分子式為C22H20N2O2，化學(xué)名稱為：(2E,6E)-2-(5-甲氧基吲哚-3-亞甲基)-6-(吡啶-3-亞甲基)環(huán)己酮。H9的分子式為C24H20N2O，化學(xué)名稱為：(2E,6E)-2,6-二(吲哚-3-亞甲基)環(huán)己酮。H10的分子式為C25H25NO3，化學(xué)名稱為：(2E,6E)-2-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-6-(N-甲基吲哚-3-亞甲基)環(huán)己酮。H11的分子式為C24H24N2O4，化學(xué)名稱為：(3E，5E)-1-甲基-3-(4-羥基-3-甲氧基苯亞甲基)-5-(5-甲氧基吲哚-3-亞甲基)哌啶-4-酮。H12的分子式為C25H26N2O4，化學(xué)名稱為：(3E，5E)-1-甲基-3-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-5-(5-甲氧基-3-吲哚亞甲基)哌啶-4-酮。H13的分子式為C23H22N2O3，化學(xué)名稱為：(3E，5E)-1-甲基-3-(吲哚-3-亞甲基)-5-(4-羥基-3-甲氧基苯亞甲基)哌啶-4-酮。
具體而言，本發(fā)明所述的13個姜黃素類似物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式分別為：
具體實施方式：
本發(fā)明在以下的實施例中進(jìn)一步說明。這些實施例僅為了說明的目的而非限制本發(fā)明的范圍。
實施例1.中間體的合成
(E)-2-(吲哚-3-亞甲基)環(huán)己酮(A1)的合成：取1.45g(10.0mmol)吲哚-3-甲醛，10mL乙二醇，9.80g(100.0mmol)環(huán)己酮，0.50mL的哌啶于100mL圓底燒瓶中，磁力攪拌下使反應(yīng)液溫度升至160℃～165℃。4h后停止加熱，攪拌冷卻至室溫。將稀釋過的冰乙酸緩慢滴加到圓底燒瓶中，調(diào)節(jié)pH至微酸，此時可見燒瓶中大量棕黃色固體析出，繼續(xù)攪拌3h，抽濾，將所得棕黃色濾餅用冷的蒸餾水(3×20ml)洗三次，干燥后得粗品。用乙酸乙酯重結(jié)晶，得產(chǎn)品1.12g。為淡黃色固體，產(chǎn)率49.8％，m.p.:239-240℃。
(E)-2-(5-甲氧基吲哚-3-亞甲基)環(huán)己酮(A2)的合成：方法同(E)-2-(吲哚-3-亞甲基)環(huán)己酮，只是用5-甲氧基吲哚-3-甲醛代替吲哚-3-甲醛。產(chǎn)品為黃色固體，產(chǎn)率47.1％，m.p.:230-232℃。
(E)-2-(1-甲基吲哚-3-亞甲基)環(huán)己酮(A3)的合成：取4.55g(20mmol)的2-(E)-(吲哚-3-亞甲基)環(huán)己酮,1.50g的K2CO3,20ml的DMF和5.20ml(61mmol)的碳酸二甲酯至100ml的圓底燒瓶中,130℃回流反應(yīng)3.5h。冷至室溫，緩慢加適量冰水混合物，此時有大量黃色固體析出，抽濾、水洗、干燥，乙酸乙酯重結(jié)晶，得純品2.30g，為黃色固體，產(chǎn)率為48.1％，m.p.:146-147℃。
(E)-1-甲基-3-(吲哚-3-亞甲基)-哌啶-4-酮(A4)的合成：取2.49g(10mmol)1-苯甲?；?吲哚-3-甲醛溶解于75mL甲醇中，隨后加入1.8mL(15mmol)1-甲基-哌啶-4-酮，0.2mL哌啶，50℃下攪拌6h，然后室溫繼續(xù)攪拌24h。反應(yīng)結(jié)束后旋干溶劑，將所得油狀液體倒入500mL水中，加4mol/L的鹽酸溶液調(diào)至酸性(pH＝3～4)，攪拌片刻后減壓抽濾。收集濾液，用2mol/L NaOH溶液調(diào)至堿性(pH＝9～10)，攪拌5min后靜置片刻，抽濾，水洗，濾餅用甲醇重結(jié)晶，得產(chǎn)品2.0g。產(chǎn)品為黃色固體，產(chǎn)率58％，m.p.:147-149℃。
(E)-1-甲基-3-(5-甲氧基吲哚-3-亞甲基)-哌啶-4-酮(A5)的合成：同(E)-1-甲基-3-(吲哚-3-亞甲基)-哌啶-4-酮，只是用5-甲氧基吲哚-3-甲醛代替吲哚-3-甲醛，產(chǎn)品為黃色固體，產(chǎn)率90％，m.p.:159-161℃。
實施例2.化合物H1～H13的合成方法
本發(fā)明提供的化合物，分別是由A1～A5中相應(yīng)的一種中間體與相應(yīng)的芳香醛以1:1～1:2的摩爾比，通過Claisen-Schmidt反應(yīng)得到。所用反應(yīng)溶劑可以是乙二醇、甲醇、乙醇中的任意一種，催化劑為有機(jī)堿哌啶、嗎啉，也可以是NaOH水溶液或SOCl2。若芳香醛有羥基取代時，也可用乙酸溶液、HCl氣體催化。反應(yīng)溫度為室溫至回流溫度，反應(yīng)時間為2～24小時。
化合物的典型合成過程和理化性質(zhì)如下所述：
化合物H1：取0.51g(2mmol)(E)-2-(5-甲氧基吲哚-3-亞甲基)環(huán)己酮和20mL乙酸與50mL三口燒瓶中，攪拌使其溶解，此時溶液呈黑綠色。10min后加入0.31g(2.5mmol)對羥基苯甲醛。然后在室溫下通入HCl氣體，攪拌反應(yīng)3h。停止通HCl氣體，升溫至回流，繼續(xù)反應(yīng)20h。反應(yīng)結(jié)束后，用Na2CO3飽和溶液調(diào)節(jié)反應(yīng)液的pH值，使其呈中性，有黃綠色固體析出。然后過濾，水洗，干燥得粗品。采用干法柱層析純化得產(chǎn)品0.33g。產(chǎn)品為淡黃色固體，產(chǎn)率45.8％，熔點(diǎn)：302-304℃。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ:11.76(s,1H),9.89(s,1H),7.99(s,1H),7.75(d,J＝2.8Hz,1H),7.56(s,1H),7.35-7.41(m,3H),7.22(d,J＝2.0Hz,1H),6.82-6.85(m,3H),3.83(s,3H),2.80-2.87(m,4H),1.77-1.81(m,2H)。ESI-MS[M-1]-(m/z:358.0)。
化合物H2：以3-甲氧基-4-羥基苯甲醛和(E)-2-(5-甲氧基吲哚-3-亞甲基)環(huán)己酮為反應(yīng)原料，合成方法同H1。產(chǎn)品為淡黃色固體，產(chǎn)率56.8％，熔點(diǎn)：188-190℃。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ:11.77(s,1H),9.49(s,1H),7.99(s,1H),7.76(s,1H),7.58(s,1H),7.37(d,J＝8.8Hz,1H),7.22(d,J＝1.6Hz,1H),7.10(s,1H),7.01(d,J＝8.0Hz,1H),6.82-6.86(m,2H),3.83(s,1H),3.82(s,1H),2.91-2.82(m,2H),1.78-1.81(m,2H)。ESI-MS[M-1]-(m/z:388.0)。
化合物H3:取0.51g(2mmol)(E)-2-(5-甲氧基吲哚-3-亞甲基)環(huán)己酮,0.42g(2.5mmol)苯甲醛于50mL圓底燒瓶中，隨后加入30mL甲醇，攪拌下緩慢滴加10％的NaOH溶液6mL，然后加熱溫度至90℃，反應(yīng)5h。反應(yīng)完畢后，冷卻至室溫，緩慢滴加10％的鹽酸至反應(yīng)液中，調(diào)節(jié)混合液pH至弱酸性，析出大量橙黃色固體，抽濾，水洗，干燥得粗品。采用干法柱層析純化得產(chǎn)品0.40g。產(chǎn)品為棕黃色固體，產(chǎn)率49.5％，熔點(diǎn)：135-137℃。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:8.73(s,1H),8.22(s,1H),7.81(s,1H),7.50(s,1H),7.26-7.33(m,2H),7.10(d,J＝8.3Hz,1H),7.01(s,1H),6.90-6.93(m,2H),3.92(s,3H),3.91(s,3H),3.88(s,3H),2.93(d,J＝5.2Hz,2H),2.84(t,J＝5.6Hz,2H),1.86-1.90(m 2H)。ESI-MS[M+1]+(m/z:404.1)。
化合物H4:以3-羥基-4-環(huán)丙甲氧基醛和(E)-2-(5-甲氧基吲哚-3-亞甲基)環(huán)己酮為反應(yīng)原料，合成方法同H3。產(chǎn)品為橙色固體，產(chǎn)率46.8％，熔點(diǎn)：189-191℃。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ:11.78(s,1H),9.18(s,1H),8.00(s,1H),7.76(s,1H),7.50(s,1H),7.37(d,J＝8.7Hz,1H),7.22(s,1H),7.02(s,1H),6.94(s,2H),6.84(dd,J＝8.7Hz,J＝1.6Hz,1H),3.86(s,2H),3.83(s,3H),2.81-2.87(m,4H),1.80(t,J＝4.9Hz,2H),1.22-1.28(m,1H),0.59-0.55(m,2H),0.32-0.35(m,2H)。ESI-MS[M+1]+(m/z:430.2)。
化合物H5:以吡啶-4-甲醛和(E)-2-(5-甲氧基吲哚-3-亞甲基)環(huán)己酮為反應(yīng)原料，合成方法同H3。產(chǎn)品為黃色固體。產(chǎn)率42.8％，m.p.:223-226℃。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ:11.86(s,1H),8.62(d,J＝5.6Hz,1H),8.09(s,1H),7.79(d,J＝2.8Hz，1H),7.53(s,1H),7.38-7.44(m,3H),7.26(d,J＝2.0Hz,1H),6.86(dd,J＝8.8Hz,J＝2.4Hz,1H),3.84(s,3H),2.80-2.85(m,4H),1.77-1.80(m,4H)。ESI-MS[M+1]+(m/z:345.2)。
化合物H6:取(E)-2-(吲哚-3-亞甲基)環(huán)己酮1.13g(5mmol)，5-甲氧基吲哚-3-甲醛0.88g(5mmol)，20mL乙二醇，0.50mL六氫吡啶于100mL三口燒瓶中，攪拌下升至175℃～180℃，反應(yīng)50min。停止加熱，攪拌冷卻至室溫。將溶于10mL水的1.00mL乙酸緩慢滴加到三口燒瓶中，繼續(xù)反應(yīng)2h，此時可見燒瓶中大量橙黃色固體析出。過濾，將橙黃色的濾餅用冷的蒸餾水洗三次，干燥。用乙酸乙酯重結(jié)晶，濾出固體，干燥至恒重，得產(chǎn)品0.81g。產(chǎn)品為橙黃色針狀結(jié)晶，產(chǎn)率為42.4％，熔點(diǎn)280℃-282℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:11.85(s,1H),11.73(s,1H),8.02(s,1H),8.00(s,1H),7.74-7.80(m,3H),7.48(d,J＝7.7Hz,1H),7.37(d,J＝7.7Hz,1H),7.16-7.22(m,3H),6.84(dd,J＝8.8Hz,J＝2.2Hz,1H),3.81(s,3H),2.86-2.87(m,4H),1.86-1.90(m,2H)。ESI-MS[M+1]+(m/z:383.2)。
化合物H7:取(E)-2-(吲哚-3-亞甲基)環(huán)己酮1.13g(5mmol)，對羥基苯甲醛0.61g(5mmol)，10mL乙二醇，0.50mL六氫吡啶于100mL三口燒瓶中，攪拌下升至150℃～155℃，反應(yīng)10min～15min。停止加熱，攪拌冷卻至室溫，后處理同H6。產(chǎn)品為棕黃色粉末，產(chǎn)率為55.5％，熔點(diǎn)236℃-237℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:11.90(s,1H),9.91(s,1H),8.02(s,1H),7.81(d,J＝2.8Hz,1H),7.77(d,J＝7.8Hz,1H),7.58(s,1H),7.48(d,J＝8.0Hz,1H),7.40(d,J＝8.6Hz,2H),7.22(td,J＝7.7Hz,J＝1.2Hz,1H),7.17(td,J＝7.6Hz,J＝0.9Hz,1H),2.82-2.88(m,4H),1.81-1.78(m,2H)。ESI-MS[M+1]+(m/z:330.2)。
化合物H8:以吡啶-3-甲醛和(E)-2-(5-甲氧基吲哚-3-亞甲基)環(huán)己酮為反應(yīng)原料，合成方法同H3。產(chǎn)品為黃色固體。產(chǎn)率36.6％，m.p.:207-210℃。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ:11.83(s,1H,N-H),8.72(d,J＝1.1Hz,1H),8.54-8.56(d,J＝8.0Hz,1H),8.07(s,1H),7.92(d,J＝8.4Hz,1H),7.79(d，J＝2.7Hz,1H),7.62(s,1H),7.49-7.45(m,1H),7.38(d,J＝8.4Hz,1H),7.25(d,J＝2.1Hz,1H),6.86(dd,J＝8.8Hz,J＝2.4Hz,1H),3.84(s,3H),2.82-2.88(m,4H),1.79-1.82(m,2H)。ESI-MS[M+1]+(m/z:345.0)。
化合物H9:取2.90g(20mmol)吲哚-3-甲醛，0.98g(10mmol)環(huán)己酮，10mL乙二醇，0.50mL六氫吡啶于250mL三口燒瓶中，攪拌下使反應(yīng)液溫度升至175℃～180℃，反應(yīng)50min。停止加熱，攪拌冷卻至室溫。將溶于5.00mL水的0.50mL乙酸緩慢滴加到三口燒瓶中，繼續(xù)攪拌2h，此時可見燒瓶中析出大量棕黃色固體。過濾，水洗三次。用乙酸乙酯將濾餅充分溶解，濾去難溶物，再用(50ml×2)的冷的蒸餾水洗滌，分液后，濃縮溶液，干法柱層析，得產(chǎn)品1.99g。產(chǎn)品為棕黃色固體，產(chǎn)率為56.5％，熔點(diǎn)275℃-277℃。1H NMR(400MHz,CD3COCD3),δ：8.22(s,2H),7.88((dd,J＝6.8Hz,J＝1.9Hz,2H),7.79(s,2H),7.52(dd,J＝7.0Hz,J＝2.1Hz,2H),7.20-7.24(m,4H),2.93-2.97(m,4H),1.94-1.98(m,2H)。ESI-MS[M-1]-(m/z:351.1)。
化合物H10:以((E)-2-(1-甲基吲哚-3-亞甲基)環(huán)己酮和3,4-二甲氧基苯甲醛為反應(yīng)原料，合成方法同H6。產(chǎn)品為深綠色粉末狀固體。產(chǎn)率56.0％,，熔點(diǎn)：154℃-156℃，為深綠色粉末狀固體。1H NMR(400MHz,d6-DMSO)δ：8.01(s,1H),7.88(s,1H),7.80(d,J＝8.0Hz,1H),7.61(s,1H),7.54(d,J＝8.1Hz,1H),7.29(t,J＝7.7Hz,1H),7.29(t,J＝7.2Hz,1H),7.12(d,J＝7.1Hz,2H),7.03(d,J＝8.7Hz,1H),3.91(s,3H),3.81(s,3H),3.78(s,3H),2.82-2.94(m,4H),1.83-1.80(m,2H)。ESI-MS[M+1]+(m/z:388.0)。
化合物H11:取0.48g(2mmol)(E)-3-(3-吲哚亞甲基)-1-甲基-哌啶-4-酮溶解于100mL乙酸中，攪拌5min后加入0.46g(3mmol)4-羥基-3-甲氧基苯甲醛，30℃水浴攪拌下通入氯化氫氣體2h，溶液由黃色變?yōu)楹谏＠^續(xù)反應(yīng)2d然后倒入過量飽和碳酸氫鈉溶液中，調(diào)節(jié)pH至7，此時可見有黃色固體析出，減壓抽濾，水洗。用二氯甲烷提取濾餅，經(jīng)無水硫酸鈉干燥過夜，濃縮二氯甲烷溶液，干法柱層析，得產(chǎn)品0.42g，黃色固體，產(chǎn)率52.0％，m.p.:103-105℃。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ:11.81(d,J＝1.5Hz,1H,),9.57(s,1H),7.92(s,1H),7.64(d,J＝2.6Hz,1H),7.56(s,1H),7.37(d,J＝8.7Hz,1H),7.25(d,J＝2.1Hz,1H),7.06(d,J＝1.0Hz,1H),6.93(d,J＝8.4Hz,1H),6.84～6.88(2H,m),3.84(s,3H),,3.83(s,3H),3.72(s,2H),3.67(s,2H),2.46(s,3H)。ESI-MS[M+1]+(m/z:405.1)。
化合物H12:取0.48g(2mmol)(E)-3-(3-吲哚亞甲基)-1-甲基-哌啶-4-酮和0.37g(2.2mmol)3，4-二甲氧基苯甲醛溶解于100mL甲醇中，隨后加入1g氫氧化鈉的5mL水溶液，溶液由黃色變?yōu)榧t色。繼續(xù)反應(yīng)4h。旋干溶劑，乙酸乙酯提取，硫酸鈉干燥過夜。濃縮乙酸乙酯溶液，干法柱層析，得產(chǎn)品0.39g，紅色固體，產(chǎn)率47.0％，m.p.:201-203℃。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ:11.83(s,1H),7.94(s,1H),7.65(d,J＝2.6Hz,1H),7.59(s,1H),7.37(d,J＝8.7Hz,1H),7.26(d,J＝2.0Hz,1H),7.08(s,1H),7.05(s,1H),6.84(dd,J＝8.7Hz,J＝2.3Hz,1H),3.84(s,3H),3.81(s,6H),3.73(s,2H),3.68(s,2H),2.46(s,3H)。ESI-MS[M+1]+(m/z:419.1)。
化合物H13:以((E)-3-(3-吲哚亞甲基)-1-甲基-哌啶-4-酮和4-羥基-3-甲氧基苯甲醛為反應(yīng)原料，合成方法同H11。產(chǎn)品為黃色固體，產(chǎn)率50％，m.p.:227-230℃。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ:11.96(s,1H),9.59(s,1H),7.95(s,1H),7.78(d,J＝7.7Hz,1H),7.71(d,J＝2.7Hz,1H),7.57(s,1H),7.49(d,J＝7.9Hz,2H),7.25-7.16(m,2H),6.94(dd,J＝8.5Hz,1.7Hz,1H),6.87(d,J＝8.1Hz,2H),3.83(s,3H),3.73(s,2H),3.70(s,2H),2.47(s,3H)。ESI-MS[M+1]+(m/z:375.2)。
實施例3.化合物的抗腫瘤活性測定
采用MTT法測定化合物的抗腫瘤活性。將待測的癌細(xì)胞常規(guī)接種于完全培養(yǎng)基中，在37℃和5％的CO2飽和濕度下，對細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)、擴(kuò)增。細(xì)胞經(jīng)過0.25％胰蛋白酶消化后，向其中加入培養(yǎng)液將其稀釋成1×105個/ml瘤細(xì)胞懸液(胎盼藍(lán)染色，活細(xì)胞數(shù)均＞95％)，供試驗用。
在96孔無菌培養(yǎng)板上分別設(shè)陰性對照孔、陽性對照孔和待測物的不同濃度孔，用DMSO將待測化合物配成各種不同濃度的稀液，同時每個濃度設(shè)3個復(fù)孔。在96孔無菌培養(yǎng)板上分別接種制備好的細(xì)胞懸液，培養(yǎng)24h后，向其中加入不同濃度的待測化合物及陽性對照藥。將等量的培養(yǎng)液加入到陰性對照孔內(nèi)，隨后在培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。分別于72h后取出，每孔加入MTT(四甲基偶氮唑藍(lán))20μl，繼續(xù)培養(yǎng)4h，取出后，將其放入離心機(jī)，然后離心，棄掉上清液。在每孔中分別加入150μl的DMSO，震動后，將紫藍(lán)色甲瓚結(jié)晶徹底溶解。用酶標(biāo)儀與562nm處測定各孔的OD值，并最終通過計算得出IC50值。
選用細(xì)胞株為食管癌EC109和胃癌MGC803，以5-FU(5-氟尿嘧啶)和順鉑為陽性對照藥。最終各化合物對細(xì)胞株的IC50值見表1。從表1結(jié)果可以看出，大部分化合物對實驗細(xì)胞株都有一定的抑制作用，且其IC50值也大都接近或低于姜黃素和陽性對照藥，說明化合物有較強(qiáng)的抗腫瘤活性。
表1受試化合物對腫瘤細(xì)胞增殖的抑制作用