本發(fā)明屬于藥物制劑技術(shù)領(lǐng)域，具體來(lái)說(shuō)，涉及一種阿侖膦酸鈉固體脂質(zhì)納米粒及其制備方法。

背景技術(shù)：

骨質(zhì)疏松癥（osteoporosis）是一種系統(tǒng)性骨病，其特征是骨量下降和骨的微細(xì)結(jié)構(gòu)破壞，表現(xiàn)為骨的脆性增加，因此骨折是其常見(jiàn)的并發(fā)癥，以髖部，椎體和橈骨遠(yuǎn)端發(fā)生最多。目前在世界常見(jiàn)病、多發(fā)病中居第7位。骨質(zhì)疏松癥是一種多因素所致的慢性疾病。在骨折發(fā)生之前，通常無(wú)特殊臨床表現(xiàn)。婦女在進(jìn)入絕經(jīng)期后骨量丟失明顯，如無(wú)適當(dāng)預(yù)防和治療，骨質(zhì)疏松將不可避免地造成橈骨、脊柱和髖部等處的骨折。隨著我國(guó)老年人口的增加，骨質(zhì)疏松癥發(fā)病率處于上升趨勢(shì)，在我國(guó)乃至全球都是一個(gè)值得關(guān)注的健康問(wèn)題。

現(xiàn)有防治骨質(zhì)疏松的藥物主要有骨吸收抑制劑、骨形成促進(jìn)劑、解偶聯(lián)劑、骨礦化劑、降鈣素類(lèi)、雌性激素類(lèi)以及中醫(yī)藥等。臨床上以阿侖膦酸鈉(福善美)的應(yīng)用最為廣泛,與降鈣素、雌激素受體調(diào)節(jié)劑和利塞膦酸鈉進(jìn)行比較顯示,阿侖膦酸鈉升高骨密度（BMD）的作用最強(qiáng)。 Bone等報(bào)道了一項(xiàng)大樣本的研究,結(jié)果顯示接受阿侖膦酸鈉治療10年者其BMD持續(xù)增加,10年時(shí)與基線相比,腰椎BMD增加 13.7%, 股骨頸BMD增加 5.5%, 大轉(zhuǎn)子 BMD增加 10.2%。二膦酸鹽類(lèi)藥物是近二十年發(fā)展起來(lái)的一種新藥，其作為骨吸收抑制劑來(lái)預(yù)防骨質(zhì)疏松或者作為抗骨質(zhì)疏松的主要藥物。二膦酸鹽類(lèi)藥物主要機(jī)制是通過(guò)抑制破骨細(xì)胞活性減少骨吸收，降低骨轉(zhuǎn)換，增加骨密度，從而降低骨折的發(fā)生率。

阿侖膦酸鈉是第三代二膦酸鹽類(lèi)藥物的代表藥物，也是臨床上使用最為廣泛的抗骨質(zhì)疏松藥物。其結(jié)構(gòu)式為：

阿侖膦酸鈉為白色結(jié)晶性粉末。在水中略溶，在熱水中溶解，在乙醇或丙酮中不溶，在氫氧化鈉試液中易溶。其化學(xué)名為[4-氨基-1-羥基亞丁基]二膦酸鈉。與前兩代二膦酸鹽類(lèi)藥物相比，阿侖膦酸鈉的抗骨吸收性強(qiáng)，且沒(méi)有骨礦化抑制作用，是惡性腫瘤及佩吉特骨病引起的高鈣血癥的一線治療藥物。但是該藥物治療存在一定副作用，如胃腸道反應(yīng)，反酸 、 胃灼熱 、 腹痛、食管炎、食管潰瘍等上消化道癥狀限制一部分骨質(zhì)疏松患者使用該藥物。并且阿侖膦酸鈉口服生物利用度極低，據(jù)報(bào)道，鼠、犬猴的生物利用度分別為0.9%，1.8%，1.7%，人口服后絕對(duì)生物利用度低于1.0%。因此體內(nèi)血藥濃度極低，常通過(guò)測(cè)定尿液中藥物的累積排泄量來(lái)評(píng)價(jià)其生物利用度。因此，提高其生物利用度，緩解其不良反應(yīng)是該藥目前迫切要解決的問(wèn)題。

目前關(guān)于阿侖膦酸鈉的專利主要有阿侖膦酸鈉藥物組合物、阿侖膦酸鈉粉物劑、阿侖膦酸鈉泡騰顆粒劑、阿侖膦酸鈉粉針劑、阿侖膦酸鈉固體分散體、阿侖膦酸鈉納米制劑、阿侖膦酸鈉環(huán)糊精包合物、阿侖膦酸鈉腸溶制劑、阿侖膦酸鈉復(fù)方制劑等，這些制劑在減少黏膜刺激性，降低不良反應(yīng)具有顯著優(yōu)勢(shì)，但大部分沒(méi)有其口服生物利用度信息。

固體脂質(zhì)納米粒 (Solid lipid nanoparticles， SLN) 是以固態(tài)的天然或合成的脂質(zhì)為載體制成的粒徑約為50-1000 nm的膠體給藥系統(tǒng)。SLN可口服給藥、注射給藥、局部給藥、肺部給藥，SLN 口服后, 利用納米粒的黏附性可增加載藥粒子在藥效部位或藥物吸收部位的停留時(shí)間和接觸面積, 提高生物利用度 ,減少不規(guī)則吸收。納米微粒具有獨(dú)特的粒徑大小、其超微小體結(jié)構(gòu)非常容易進(jìn)入組織間隙，并通過(guò)被高分子材料包埋藥物，可減少藥物的刺激性，提高藥物的生物利用度。

鑒于此，本發(fā)明對(duì)阿侖膦酸鈉的固體脂質(zhì)納米粒進(jìn)行研究。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種簡(jiǎn)單可行的阿侖膦酸鈉固體脂質(zhì)納米粒制備方法，使其在發(fā)揮其治療作用時(shí)具有良好的緩控釋作用，提高阿侖膦酸鈉生物利用度，從而降低毒副作用。

所得的固體脂質(zhì)納米粒具有粒徑小、包封率高、穩(wěn)定性好的特點(diǎn)。尿液排泄動(dòng)力學(xué)結(jié)果顯示，大鼠口服固體脂質(zhì)納米粒的生物利用度是阿侖膦酸鈉溶液劑的3-4倍。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：本發(fā)明首先公開(kāi)了一種阿侖膦酸鈉固體脂質(zhì)納米粒，包括以下各組分：阿侖膦酸鈉、固態(tài)脂質(zhì)、脂溶性乳化劑、水溶性乳化劑和蒸餾水。

各組分的重量百分含量為 ：阿侖膦酸鈉0.01%-0.05%，固體脂質(zhì)0.29%-0.5%，脂溶性乳化劑 0.19%-0.5%, 水溶性乳化劑0.49%-0.98%, 余量為蒸餾水。

所述固體脂質(zhì)選自單硬脂酸甘油酯，硬脂酸，山崳酸甘油脂中的任意一種或任意兩種按照任意比例組成的混合物 ；優(yōu)選為山崳酸甘油脂。

所述脂溶性乳化劑選自大豆卵磷脂，蛋黃卵磷脂或二者按照任意比例組成的混合物 ；優(yōu)選為大豆卵磷脂。

所述水溶性乳化劑選自脂肪酸山梨坦類(lèi) , 聚山梨酯類(lèi) , 聚氧乙烯聚氧丙烯共聚物類(lèi) ,聚氧乙烯脂肪酸酯類(lèi) , 聚氧乙烯脂肪醇醚類(lèi)中的任意一種或者兩種以上按照任意比例組成的混合物；優(yōu)選為聚氧乙烯聚氧丙烯共聚物類(lèi)；最優(yōu)選為泊洛沙姆 188。

本發(fā)明所提供的阿侖膦酸鈉固體脂質(zhì)納米粒制備方法包括以下步驟 ：

步驟一，精密稱取處方量的各組分，將阿侖膦酸鈉先溶于少量有機(jī)溶劑中，再與固態(tài)脂質(zhì)和脂溶性乳化劑混合，加熱熔融，得到油相 ；

步驟二，將水溶性乳化劑加入蒸餾水中，并加熱到同油相相同的溫度，形成水相 ；

步驟三，將水相倒入油相，經(jīng)高速剪切、超聲破碎后，既得阿侖膦酸鈉固體脂質(zhì)納米粒。

其中，步驟一所述有機(jī)溶劑選自無(wú)水乙醇、甲醇、二甲基亞砜或二氯甲烷中任意一種或兩種以上按照任意比例組成的混合物 ；優(yōu)選為無(wú)水乙醇。

步驟一、二所述油相和水相的溫度為 85℃。

步驟三所述高速剪切的轉(zhuǎn)速為7000轉(zhuǎn)，剪切時(shí)間為3min ；超聲破碎功率為300w，超聲時(shí)間為 3min。

本發(fā)明所制得的阿侖膦酸鈉固體脂質(zhì)納米粒平均包封率62.65±2.41%，粒徑為120.27±1.17nm。

本發(fā)明中所述脂溶性乳化劑、固態(tài)脂質(zhì)、水溶性乳化劑、有機(jī)溶劑的不同種類(lèi)及其不同用量對(duì)阿侖膦酸鈉固體脂質(zhì)納米粒平均粒徑、多分散系數(shù) (PDI)、包封率起重要影響作用。其中，阿侖膦酸鈉與山崳酸甘油脂、大豆卵磷脂、無(wú)水乙醇、泊洛沙姆 188 制備的阿侖膦酸鈉脂質(zhì)納米粒質(zhì)量評(píng)價(jià)較好 ；優(yōu)選的 ,3mg 阿侖膦酸鈉，30mg 山崳酸甘油酯，20mg 卵磷脂、0.4ml 無(wú)水乙醇、50mg 泊洛沙姆 188 所制得的阿侖膦酸鈉固體脂質(zhì)納米粒平均粒徑120.27nm，PDI 為 0.29，zeta 電位為 -19.2，包封率為 62.5%，質(zhì)量評(píng)價(jià)最好。

改變脂溶性乳化劑、固態(tài)脂質(zhì)、水溶性乳化劑的種類(lèi)或用量或者采用不同的制備方法，對(duì)制得的阿侖膦酸鈉固體脂質(zhì)納米粒的粒徑、分散系數(shù)、包封率均會(huì)有顯著影響。例如，在其他條件均一致的情況下，僅改變脂溶性乳化劑的用量，用量分別為 50mg、20mg、10mg時(shí)，所制得的阿侖膦酸鈉固體脂質(zhì)納米粒的質(zhì)量評(píng)價(jià)存在明顯差異，平均粒徑為 90.43 ——130.17nm，多分散系數(shù) (PDI) 為 0.34 —— 0.45，zeta 電位為 -10.85 —— -19.1，包封率為 2.71% —— 62..65% ；其中 , 脂溶性乳化劑用量為 20mg 時(shí)，平均粒徑為 120.27nm，PDI 為0.29，zeta 電位為 -19.1，包封率為 62.65%。質(zhì)量評(píng)價(jià)最好。同時(shí)用溶劑揮發(fā)法和本發(fā)明制備方法制備阿侖膦酸鈉固體脂質(zhì)納米粒，對(duì)各自的最優(yōu)處方制得的納米粒進(jìn)行評(píng)價(jià)結(jié)果為，溶劑揮發(fā)法制得的固體脂質(zhì)納米粒平均粒徑為 128.9nm，PDI 為 0.37，zeta 電位為 -11.6，包封率為 23.8%，故本發(fā)明制備方法更優(yōu)于溶劑揮發(fā)法制備阿侖膦酸鈉固體脂質(zhì)納米粒。

本發(fā)明阿侖膦酸鈉固體脂質(zhì)納米粒體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)研究 ：2 組 SD 大鼠（n=5）分別單劑量口服給與阿侖膦酸鈉固體脂質(zhì)納米粒（以阿侖膦酸鈉4.5mg/kg）和阿侖膦酸鈉溶液劑（4.5mg/kg）后，分別收集 3、6、9、12、15、24、36、48h 時(shí)間點(diǎn)的尿液。尿液樣品采用Agilent 1260 HPLC 測(cè)定各時(shí)間點(diǎn)阿侖膦酸鈉含量。大鼠體內(nèi)阿侖膦酸鈉溶液劑和同濃度阿侖膦酸鈉固體脂質(zhì)納米粒微粒的口服阿侖膦酸鈉固體脂質(zhì)納米粒的血藥濃度均高于口服溶液劑的濃度。阿侖膦酸鈉溶液劑的生物利用度為4.7%，阿侖膦酸鈉固體脂質(zhì)納米粒的生物利用度為12.6%，二者代謝均符合一室模型。結(jié)果說(shuō)明，相對(duì)阿侖膦酸鈉溶液劑，阿侖膦酸鈉固體脂質(zhì)納米粒能顯著提高阿侖膦酸鈉在體內(nèi)的血藥濃度和生物利用度。

關(guān)于本發(fā)明的阿侖膦酸鈉固體脂質(zhì)納米粒的制備方法，其優(yōu)點(diǎn)在于 ：

（1）該固體脂質(zhì)納米粒將阿侖膦酸鈉藥物包裹在內(nèi)酯核中，增加其水溶性及穩(wěn)定性，可使藥物穩(wěn)定緩慢釋放，提高藥物的生物利用度，降低毒副作用

（2）使用易揮發(fā)、毒性較小的無(wú)水乙醇溶劑作為有機(jī)溶劑，且有機(jī)溶劑用量很少，與現(xiàn)有研究中多使用的溶劑揮發(fā)法制備納米粒比較 , 本發(fā)明使用的有機(jī)溶劑毒性更低、殘留更少；

（3）以泊洛沙姆 188 溶液作為水溶性乳化劑，且加入大豆卵磷脂作為脂溶性乳化劑，保證所制納米粒的粒徑減小、載藥量提高；

（4）制備工藝簡(jiǎn)單，包封率高，便于工業(yè)化生產(chǎn)。

附圖說(shuō)明

圖1是阿侖膦酸鈉固體脂質(zhì)納米粒的 HPLC-UV 圖。A 為阿侖膦酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品液相圖，B 為阿侖膦酸鈉固體脂質(zhì)納米粒中游離藥物的液相圖。

圖 2 是阿侖膦酸鈉固體脂質(zhì)納米粒的粒徑分布圖。

圖 3 是阿侖膦酸鈉固體脂質(zhì)納米粒的電位圖。

圖 4 是阿侖膦酸鈉固體脂質(zhì)納米粒體外釋放曲線圖。

圖 5 是阿侖膦酸鈉固體脂質(zhì)納米粒微粒透射電鏡圖。

圖 6是阿侖膦酸鈉固體脂質(zhì)納米粒及同濃度阿侖膦酸鈉溶液劑在大鼠體內(nèi)的尿液排泄動(dòng)力學(xué)曲線圖。

具體實(shí)施方式

為了更好的說(shuō)明本實(shí)驗(yàn)的技術(shù)方案，特給出了以下實(shí)例，但本發(fā)明并不僅限于以下實(shí)例。

實(shí)施例1：阿侖膦酸鈉固體脂質(zhì)納米粒的制備；處方：阿侖膦酸鈉 3mg，山崳酸甘油脂 30mg，大豆卵磷脂 20mg，泊洛沙姆 188 50mg，無(wú)水乙醇 0.4ml，蒸餾水 10ml。

制得阿侖膦酸鈉固體脂質(zhì)納米粒 ：步驟一，精密稱取處方量的各組分，將阿侖膦酸鈉先溶于少量有機(jī)溶劑（無(wú)水乙醇）中，再與山崳酸甘油脂和大豆卵磷脂混合，加熱到 85℃使脂質(zhì)熔融，得到油相 ；步驟二，將泊洛沙姆188加入10ml蒸餾水中，并加熱到同油相相同的溫度，形成水相 ；步驟三，將水相倒入油相，7000rpm 高速剪切 3min 后，300w 超聲破碎 3min，既得阿侖膦酸鈉固體脂質(zhì)納米粒。

實(shí)施例 2 阿侖膦酸鈉固體脂質(zhì)納米粒的制備；處方如下 ：阿侖膦酸鈉 5mg；山崳酸甘油脂 50mg；大豆卵磷脂 20mg；泊洛沙姆 188 50mg；無(wú)水乙醇 0.4ml；蒸餾水 10ml。

制得阿侖膦酸鈉固體脂質(zhì)納米粒 ：步驟一，精密稱取處方量的各組分，將阿侖膦酸鈉先溶于少量有機(jī)溶劑（無(wú)水乙醇）中，再與山崳酸甘油脂和大豆卵磷脂混合，加熱到 85℃使脂質(zhì)熔融，得到油相 ；步驟二，將泊洛沙姆188加入10ml蒸餾水中，并加熱到同油相相同的溫度，形成水相 ；步驟三，將水相倒入油相，7000rpm 高速剪切 3min 后，300w 超聲破碎 3min，既得阿侖膦酸鈉固體脂質(zhì)納米粒。

實(shí)施例 3 阿侖膦酸鈉固體脂質(zhì)納米粒的制備；處方如下 ：阿侖膦酸鈉 1mg

山崳酸甘油脂 50mg；大豆卵磷脂 25mg；泊洛沙姆 188 30mg；無(wú)水乙醇 0.4ml；蒸餾水 10ml。

制得阿侖膦酸鈉固體脂質(zhì)納米粒 ：步驟一，精密稱取處方量的各組分，將阿侖膦酸鈉先溶于少量有機(jī)溶劑（無(wú)水乙醇）中，再與山崳酸甘油脂和大豆卵磷脂混合，加熱到 85℃使脂質(zhì)熔融，得到油相 ；步驟二，將泊洛沙姆188加入10ml蒸餾水中，并加熱到同油相相同的溫度，形成水相 ；步驟三，將水相倒入油相，11000rpm 高速剪切 3min 后，300w 超聲破碎 3min，既得到阿侖膦酸鈉固體脂質(zhì)納米粒。

實(shí)施例 4：阿侖膦酸鈉固體脂質(zhì)納米粒的包封率和載藥量測(cè)定。

4.1 本發(fā)明采用高效液相色譜法測(cè)定阿侖膦酸鈉濃度。其HPLC-UV色譜條件為 ：色 譜 柱 ：Venusil AA 分析柱(4.6×250 mm，5 μ m)；流 動(dòng) 相 ：乙酸鈉乙腈溶液 (0.095mol﹒L^-1， pH 6.5，溶劑A)--80%乙 腈(溶劑B),梯度洗脫，條件如下：0-10 min， 100％A; 10.1-12 min，線性梯度100-70％A；12.1-15 min，線性梯度70-50％A；15.1-18 min，線性梯度50-0％A；18.1-20 min，恒梯度0-100％A；20.1-25 min，100％A。流速為0.8 mL/min，柱溫40 ?C，進(jìn)樣量10 uL，檢測(cè)波長(zhǎng)270 nm。

4.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線及方法學(xué)驗(yàn)證；標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：配制1mg/Ml ALE對(duì)照品溶液備用。加入蒸餾水將對(duì)照品溶液分別稀釋成1.0、5.0、25.0、50.0、100.0、200.0和250.0μg/mL后,衍生化后注入液相色譜儀測(cè)定。結(jié)果表明標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為 標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y = 0.0032x + 0.0164，R2 = 0.999。阿侖膦酸鈉對(duì)照品 HPLC 圖譜如圖 1 所示。

4.3包封率和載藥量測(cè)定。

取實(shí)施例 1 的固體脂質(zhì)納米?；鞈乙?于Millipore（分子截留量 10,000 Da）離心超濾管上端，4000 rpm 離心15min，取下端溶液，衍生化后采用 HPLC-UV 測(cè)定外水相中游離藥物的含量。按照下列公式計(jì)算納米粒的包封率和載藥量，其測(cè)定結(jié)果表明所制得的阿侖膦酸鈉固體脂質(zhì)納米粒平均包封率為 62.65%，載藥量大于 4%。

包封率 =(W 總 一 W 游離 )/W 總 X100%；

載藥量 =(W 總 一 W 游離 )/W 載體 X100%；

其中，W 總 是藥物的總重量，W 游離 是未包進(jìn)納米粒中的藥物的重量，W 載體 是納米粒中載體的重量。

實(shí)施例 5 阿侖膦酸鈉固體脂質(zhì)納米粒的粒徑和電位的測(cè)定；所制阿侖膦酸鈉固體脂質(zhì)納米粒的粒徑及電位均由南昌大學(xué)分析測(cè)試中心測(cè)定。結(jié)果如圖 2 和圖 3 所示。

實(shí)施例 6 阿侖膦酸鈉固體脂質(zhì)納米粒的穩(wěn)定性考察。

6.1 評(píng)價(jià)指標(biāo)；

1） 外觀 ：肉眼觀察不同取樣點(diǎn)的脂質(zhì)體樣品，按以下標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)價(jià) ：a. 無(wú)沉淀；b. 有少許絮凝，稍振搖可復(fù)原；c. 不可逆沉淀。

2） 包封率 ：包封率是評(píng)價(jià)脂質(zhì)體制劑質(zhì)量好壞的重要指標(biāo)，同時(shí)脂質(zhì)體在貯存過(guò)程中易發(fā)生滲漏，因此包封率的監(jiān)測(cè)十分必要。

3） 粒徑 ：脂質(zhì)體粒子的表面自由能大，貯存過(guò)程中，粒子有自發(fā)的聚集傾向，使粒徑增大。

6.2 穩(wěn)定性加速試驗(yàn)；我們?cè)?25℃下進(jìn)行穩(wěn)定性加速試驗(yàn)。將 A-SLN 混懸液置于安瓿瓶中，于 25℃避光條件下保存，分別于 0，0.5，1，1.5，2 月定時(shí)取樣，按上述穩(wěn)定性考察項(xiàng)目進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果表明，ALE-SLN 液隨著放置時(shí)間的延長(zhǎng)，制劑中粒徑增大不明顯，包封率有所降低，顏色漸漸加深成牛奶白色。

實(shí)施例 7 阿侖膦酸鈉固體脂質(zhì)納米粒的體外釋放實(shí)驗(yàn)

取5mL新制ALE-SLN和阿侖膦酸鈉溶液劑分別轉(zhuǎn)入處理好的透析袋中，置入內(nèi)含100mL生理鹽水溶液的錐形瓶中，37±1℃磁力攪拌，轉(zhuǎn)速100-150 r/min。分別于0.5、l、2、4、6、8、10、12、14、24、36、48h取樣5mL（及時(shí)補(bǔ)充同溫生理鹽水溶液5mL）。 所得樣品衍生化后，色譜圖記錄，計(jì)算已釋放藥物量；另取新制ALE-SLN 0.5mL，加入4.0mL無(wú)水乙醇，加熱破壞后離心，取上清液，衍生化后進(jìn)樣，計(jì)算總藥量。并根據(jù)已釋放藥量和總藥量計(jì)算累積釋放率(Q)。以Q對(duì)時(shí)間（t）作圖。

體外釋放結(jié)果表明：ALE-SLN在2h、4h、10h阿侖膦酸鈉累計(jì)釋放率分別為44.8%、62.14%、79.51%，且ALE-SLN 的釋放曲線明顯比ALE溶液劑的緩慢持久，即說(shuō)明ALE-SLN在體外具有良好的緩釋性。

實(shí)施例 8 阿侖膦酸鈉固體脂質(zhì)納米粒的在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)研究

8.1 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

選取健康雌性 SD 大鼠 30 只，平均分為兩組，分別以 4.5 mg/kg 劑量單次口服給與阿侖膦酸鈉固體脂質(zhì)納米粒和阿侖膦酸鈉溶液劑。分別收集時(shí)間點(diǎn) 3、6、9、12、15、24、36、48h的尿液。尿液收集后立即5000 r·min^-1離心5min，取上清，記錄實(shí)際體積置于-20℃冰箱備用。

8.2 尿樣處理

取出凍存?zhèn)溆玫哪蛞簶悠?，自然溫度下解凍后，?800μl 于離心管內(nèi)，加入甲醇3.2 mL以沉淀蛋白質(zhì)，漩渦振蕩、超聲約2 min，于8000 r·min^-1離心5 min，取上清。真空離心烘干后，用200.0 μL蒸餾水復(fù)溶，過(guò)預(yù)先用水活化后的SPE柱，棄去濾液；SPE柱再用5%甲醇1.0 mL洗脫，棄去濾液；然后再用40%甲醇1.0 mL洗脫，收集濾液，烘干。用200.0 μL水復(fù)溶后，往每個(gè)離心管中分別準(zhǔn)確加入20.0 μL二氨基庚二酸內(nèi)標(biāo)溶液，100.0 μL三乙胺乙腈溶液，100.0 μL異硫氰酸苯酯乙腈溶液，渦旋混勻，靜置1h，然后加入800.0 μL正己烷，振搖后放置10min，取下層溶液，用0.45 μm濾膜過(guò)濾，進(jìn)樣10.0 μL。采用 Agilent 1260 HPLC 測(cè)定各時(shí)間點(diǎn)阿侖膦酸鈉含量。

8.3 口服生物利用度比較

口服阿侖膦酸鈉固體脂質(zhì)納米粒的尿液累計(jì)排泄量均高于口服溶液劑的累計(jì)排泄量。二者尿液排泄動(dòng)力學(xué)曲線如圖 6。采用 DAS 2.0 計(jì)算各藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。阿侖膦酸鈉溶液劑的生物利用度為 4.7%，阿侖膦酸鈉固體脂質(zhì)納米粒的生物利用度為12.6%，二者代謝均符合單室模型。結(jié)果說(shuō)明，相對(duì)阿侖膦酸鈉溶液劑，阿侖膦酸鈉固體脂質(zhì)納米粒能顯著提高阿侖膦酸鈉在體內(nèi)的濃度和生物利用度。