本發(fā)明涉及中醫(yī)藥及生物科技領(lǐng)域，尤其是一種具有補腎益精、潤肺養(yǎng)陰、抗疲勞、增強機體免疫力、調(diào)節(jié)內(nèi)分泌、改善睡眠、健腦益智、延緩衰老功效的雪蛤活性肽及其制備方法。

背景技術(shù)：

雪蛤是東北林蛙的別名,作為一味很有滋補作用的藥食兩用藥材,取自雌性東北林蛙的輸卵管，東北一帶稱呼為林蛙油，廣東、香港一帶稱呼為雪蛤油、雪蛤膏，但是，隨著時間推移“油”、“膏”就省略掉了，簡稱為“雪蛤”；主要產(chǎn)于我國東北的長白山脈、小興安嶺、張廣才嶺、老爺嶺、完達山脈，是東北地區(qū)特有的蛙種，其雌蛙輸卵管的干燥物稱之為"雪蛤油"，具有補虛潤肺、強身健體的功效，自古在民間就被譽為與東北三寶齊名的傳世滋補佳品?！侗静菥V目》記載：雪蛤油具有：解虛勞發(fā)熱，利水消腫、補虛損。尤益產(chǎn)婦。林蛙油的主要成分是蛙醇，具有“補腎益精，養(yǎng)陰潤肺”的功效?！吨袊幍洹肥蛰d：雪蛤油具有“補腎益精，養(yǎng)陰潤肺”之功效。用于“陰虛體弱，神疲乏力、心悸失眠、盜汗不止、勞嗍咳血”等正的治療?！吨兴幋笤~典》記載：雪蛤油具有獨特的“補腎益精、潤肺養(yǎng)陰”之功效。用于治療“病后、產(chǎn)后虛弱、肺癆咳嗽吐血、盜汗”等癥?！吨袊幬飳W(xué)》記載：雪蛤油是“潤肺、生津、補虛的身體增強劑，是身體衰弱的滋補佳品”。作為一味很有滋補作用的藥材，具有補腎益精、潤肺養(yǎng)陰的功效。還可用于陰虛體弱，神疲乏力、心悸失眠、盜汗不止、勞嗍咳血、心煩不眠，肺燥咳嗽等癥。現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)雪蛤含有蛋白質(zhì)、賴氨酸、精氨酸、組氨酸等多種人體必需的氨基酸和鈣、鉀、鈉、鎂、鋅等多種微量元素。雪蛤還具有抗疲勞、增強機體免疫力、調(diào)節(jié)內(nèi)分泌、改善睡眠、健腦益智、延緩衰老等功效，男女老少都可以服用。雪蛤營養(yǎng)豐富，但雪蛤蛋白是大分子蛋白，相對吸收率低，如添加中草藥，結(jié)合現(xiàn)代生物技術(shù)做成小分子活性肽，將具有更好的臨床功效。

活性肽是一千多種肽的總稱（如大豆肽，海參肽等是活性肽中的一種）。它在人的生長發(fā)育，新陳代謝，疾病以及衰老，死亡的過程中起著關(guān)鍵作用?；钚噪氖侨梭w中最重要的活性物質(zhì)。正是因為它在體內(nèi)分泌量的增多或減少，才使人類有了幼年，童年，成年，老年直到死亡的周期。而服用活性肽便打破了生命的這一周期，從而達到延長生命，有效減緩衰老的神奇效果。肽在生物體內(nèi)作為載體和運輸工具，將人們平常所食的營養(yǎng)輸送到人體各個部位，充分發(fā)揮其功能；肽在生物體內(nèi)作為神經(jīng)遞質(zhì)，傳遞信息；肽具有極強的活性和多樣性，可全面調(diào)節(jié)人體生理功能，增強人體生理活性；肽不僅能提供人體生長發(fā)育所需的營養(yǎng)物質(zhì)，而且具有特殊的生物學(xué)功能，可防治血栓、高血脂、高血壓，延緩衰老，抗疲勞，提高機體免疫力，促進人體對蛋白質(zhì)、維生素、氨基酸、鈣、鐵、鋅、硒、鎂、銅等多種對人體有益微量元素的吸收；有些小肽具有原食品蛋白質(zhì)或其他組成氨基酸所沒有的重要的生理機能。生物活性肽中有些分子量較小的小肽，與氨基酸運輸功能相比，生物活性肽中的小肽具有吸收快速、低耗和不飽和的特點。因此如何將具有：抗疲勞、增強機體免疫力、調(diào)節(jié)內(nèi)分泌、改善睡眠、健腦益智、延緩衰老等功效的雪蛤以及中草藥做成功能和吸收更好的活性肽，更好地達到中醫(yī)藥治未病的目的，真正實現(xiàn)中藥現(xiàn)代化，已成為中醫(yī)藥及生物科技領(lǐng)域亟待解決的課題。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

為克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種營養(yǎng)豐富、吸收好、并具有顯著抗疲勞、增強免疫力、調(diào)節(jié)內(nèi)分泌、改善睡眠、健腦益智、延緩衰老等功效的雪蛤活性肽及其制備方法。本發(fā)明一種雪蛤活性肽及其制備方法是以雪蛤和中草藥為主要原料，采取傳統(tǒng)中醫(yī)配方及嚴謹中藥炮制規(guī)范，運用現(xiàn)代生物技術(shù)先進的加工工藝制備而成，其工序科學(xué)嚴謹，操作性強。

本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的：一種雪蛤活性肽及其制備方法，其特殊之處在于包括雪蛤活性肽、中藥活性肽、低聚異麥芽糖組成。其組分分別為：雪蛤活性肽10%-80%;中藥活性肽1%-5%；低聚異麥芽糖5%-15%，所述組分重量百分比之和為100%。

本發(fā)明所述的雪蛤活性肽及其制備方法是以雪蛤為原料，經(jīng)泡發(fā)、勻漿、酶解、離心而成的雪蛤活性肽液。

本發(fā)明所述的中藥活性肽是以山楂、龍眼肉、葛根、人參、紅景天、枸杞子、熟地、黃芪中的一種或兩種以上的組合原料，采用傳統(tǒng)中藥炮制規(guī)范炮制后，經(jīng)破碎、蒸煮、酶解、離心而成的中草藥活性肽液。

本發(fā)明所述的低聚異麥芽糖是賦形劑或甜味劑，也是功能性益生元。

本發(fā)明一種雪蛤活性肽的制備方法，其特征在于經(jīng)下列步驟實施：

1、雪蛤活性肽的制備：選取干燥凈雪蛤，添加雪蛤重量20-30倍的純凈水進行稀釋泡發(fā)24小時后用組織破碎機破碎勻漿，勻漿后的雪蛤調(diào)ph值5-7，加入蛋白水解酶進行酶解，酶用量為每克阿膠添加6000-10000個酶活單位（u），溫度控制50-60攝氏度之間，酶解3-6小時；酶解完畢沸水熱浴滅酶10-20分鐘后冷卻離心，離心機轉(zhuǎn)速8000-13000rpm左右，即得雪蛤活性肽液。

2、中藥活性肽的制備：稱取中草藥，按中藥炮制規(guī)范炮制后破碎處理；添加中草藥10-20倍的純凈水進行加熱煮沸60-90分鐘后冷卻，過80目篩濾去藥渣，加纖維素酶、果膠酶、木瓜蛋白酶（1:1:1）進行多酶酶解，酶用量為每克中藥添加3000-8000個酶活單位（u），溫度控制在45-60攝氏度之間，酶解2-4小時；酶解完畢沸水熱浴滅酶10-20分鐘后冷卻離心，離心機轉(zhuǎn)速5000-10000rpm左右，即得中草藥活性肽液。

3、調(diào)配：取步驟1得到的雪蛤活性肽液、步驟2得到的中草藥活性肽液，稱取低聚異麥芽糖粉進行復(fù)合調(diào)配。

4、調(diào)配好的混合肽液放不銹鋼桶進蒸汽滅菌柜進行殺菌，蒸汽滅菌柜升溫至105-120攝氏度殺菌15-40分鐘，冷卻后即可加純凈水按照口服液生產(chǎn)工藝規(guī)范灌裝成口服液產(chǎn)品；可將混合肽液按照凍干工藝規(guī)范灌裝凍干瓶上凍干機冷凍干燥成瓶裝凍干粉產(chǎn)品；可將混合肽液噴霧干燥或冷凍干燥制備成粉末狀顆粒，按膠囊生產(chǎn)工藝規(guī)范灌裝成膠囊產(chǎn)品。

5、本發(fā)明步驟1、所述的蛋白水解酶為胰蛋白酶、風(fēng)味蛋白酶、復(fù)合蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶中的一種或兩種以上的組合。

本發(fā)明選用雪蛤、中草藥為原料，通過控制酶解生成大量活性肽成分，其營養(yǎng)價值和吸收利用率以及食用安全性大大提高，抗疲勞、增強免疫力、調(diào)節(jié)內(nèi)分泌、改善睡眠、健腦益智、延緩衰老等活性增強，并減輕了中藥的腥苦味，輔以具有益生元稱號的低聚異麥芽糖，不僅改善了口感，也使腸道菌群增殖，改善了胃腸功能，使有效成分更好地吸收利用。本發(fā)明一種雪蛤活性肽按照凍干工藝規(guī)范灌裝凍干瓶上凍干機冷凍干燥成瓶裝凍干粉產(chǎn)品，真空冷凍干燥無添加劑防腐劑，安全性高，保質(zhì)期長；可加純凈水按照口服液生產(chǎn)工藝規(guī)范灌裝成口服液產(chǎn)品，特有的天然風(fēng)味口感良好；將混合肽液噴霧干燥或冷凍干燥制備成粉末狀顆粒，按膠囊生產(chǎn)工藝規(guī)范灌裝成膠囊產(chǎn)品，服用、攜帶方便。本發(fā)明制備工藝嚴謹合理，操作性強，非常適合規(guī)?；a(chǎn)。

具體實施方式

下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做進一步說明

實施例一、1、雪蛤活性肽液的制備：選取干燥凈雪蛤20kg；添加雪蛤重量30倍的純凈水進行稀釋泡發(fā)24小時后用組織破碎機破碎勻漿，勻漿后的雪蛤調(diào)ph值6，加入木瓜蛋白酶、風(fēng)味蛋白酶、胰蛋白酶（1:1:1）多酶進行酶解，酶用量為每克雪蛤添加9500個酶活單位（u），溫度控制50攝氏度，酶解3.5小時；酶解完畢沸水熱浴滅酶10分鐘后冷卻離心，離心機轉(zhuǎn)速12000rpm左右，即得雪蛤活性肽液。

2、中草藥活性肽的制備：稱取葛根1.5kg紅景天1.5kg龍眼肉2kg黃芪1.5kg，按中藥炮制規(guī)范炮制后破碎處理；添加破碎中草藥20倍的純凈水進行加熱煮沸90分鐘后冷卻，用80目篩濾去藥渣，加纖維素酶、果膠酶、木瓜蛋白酶（1:1:1）進行多酶酶解，酶用量為每克中藥添加5000個酶活單位（u），溫度控制在50攝氏度，酶解3小時；酶解完畢沸水熱浴滅酶10分鐘后冷卻離心，離心機轉(zhuǎn)速12000rpm左右，即得中草藥活性肽液。

3、調(diào)配：取步驟1得到的雪蛤活性肽液、步驟2得到的中草藥活性肽液，稱取低聚異麥芽糖粉10kg進行復(fù)合調(diào)配。

4、調(diào)配好的雪蛤混合肽液放不銹鋼桶進蒸汽滅菌柜進行殺菌，蒸汽滅菌柜升溫至120攝氏度殺菌20分鐘，冷卻后即可加純凈水按照口服液生產(chǎn)工藝規(guī)范灌裝成口服液產(chǎn)品；可將混合肽液按照凍干工藝規(guī)范灌裝凍干瓶上凍干機冷凍干燥成瓶裝凍干粉產(chǎn)品；可將混合肽液噴霧干燥或冷凍干燥制備成粉末狀顆粒，按膠囊生產(chǎn)工藝規(guī)范灌裝成膠囊產(chǎn)品。

實施例二、1、雪蛤活性肽液的制備：選取干燥凈雪蛤16kg，添加雪蛤重量25倍的純凈水進行稀釋泡發(fā)24小時后用組織破碎機破碎勻漿，勻漿后的雪蛤調(diào)ph值6.5，加入木瓜蛋白酶、復(fù)合蛋白酶、風(fēng)味蛋白酶（1:1:1）多酶進行酶解，酶用量為每克雪蛤添加10000個酶活單位（u），溫度控制55攝氏度，酶解3小時；酶解完畢沸水熱浴滅酶15分鐘后冷卻離心，離心機轉(zhuǎn)速12000rpm左右，即得雪蛤活性肽液。

2、中草藥活性肽的制備：稱取山楂2kg枸杞子2kg人參0.5kg熟地2kg，按中藥炮制規(guī)范炮制后破碎處理；添加破碎中草藥15倍的純凈水進行加熱煮沸60分鐘后冷卻，用80目篩濾去藥渣，加纖維素酶、果膠酶、木瓜蛋白酶（1:1:1）進行多酶酶解，酶用量為每克中藥添加4000個酶活單位（u），溫度控制在45攝氏度，酶解3.5小時；酶解完畢沸水熱浴滅酶10分鐘后冷卻離心，離心機轉(zhuǎn)速11000rpm左右，即得中草藥活性肽液。

3、調(diào)配：取步驟1得到的雪蛤活性肽液、步驟2得到的中草藥活性肽液，稱取低聚異麥芽糖粉12kg進行復(fù)合調(diào)配。

4、調(diào)配好的雪蛤混合肽液放不銹鋼桶進蒸汽滅菌柜進行殺菌，蒸汽滅菌柜升溫至115攝氏度殺菌30分鐘，冷卻后即可加純凈水按照口服液生產(chǎn)工藝規(guī)范灌裝成口服液產(chǎn)品；可將混合肽液按照凍干工藝規(guī)范灌裝凍干瓶上凍干機冷凍干燥成瓶裝凍干粉產(chǎn)品；可將混合肽液噴霧干燥或冷凍干燥制備成粉末狀顆粒，按膠囊生產(chǎn)工藝規(guī)范灌裝成膠囊產(chǎn)品。

實施例三、1、雪蛤活性肽液的制備：選取干燥凈雪蛤15kg；添加雪蛤重量23倍的純凈水進行稀釋泡發(fā)24小時后用組織破碎機破碎勻漿，勻漿后的阿膠調(diào)ph值6，加入中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、風(fēng)味蛋白酶（1:1:1）多酶進行酶解，酶用量為每克阿膠添加8000個酶活單位（u），溫度控制58攝氏度，酶解4小時；酶解完畢沸水熱浴滅酶12分鐘后冷卻離心，離心機轉(zhuǎn)速10000rpm左右，即得雪蛤活性肽液。

2、中草藥活性肽的制備：稱取龍眼肉2kg山楂2.5kg紅景天2kg黃芪2kg，按中藥炮制規(guī)范炮制后破碎處理；添加破碎中草藥12倍的純凈水進行加熱煮沸55分鐘后冷卻，用80目篩濾去藥渣，加纖維素酶、果膠酶、木瓜蛋白酶（1:1:1）進行多酶酶解，酶用量為每克中藥添加3000個酶活單位（u），溫度控制在55攝氏度，酶解3.5小時；酶解完畢沸水熱浴滅酶12分鐘后冷卻離心，離心機轉(zhuǎn)速10000rpm左右，即得中草藥活性肽液。

3、調(diào)配：取步驟1得到的雪蛤活性肽液、步驟2得到的中草藥活性肽液，稱取低聚異麥芽糖粉8kg進行復(fù)合調(diào)配。

4、調(diào)配好的雪蛤混合肽液放不銹鋼桶進蒸汽滅菌柜進行殺菌，蒸汽滅菌柜升溫至112攝氏度殺菌40分鐘，冷卻后即可加純凈水按照口服液生產(chǎn)工藝規(guī)范灌裝成口服液產(chǎn)品；可將混合肽液按照凍干工藝規(guī)范灌裝凍干瓶上凍干機冷凍干燥成瓶裝凍干粉產(chǎn)品；可將混合肽液噴霧干燥或冷凍干燥制備成粉末狀顆粒，按膠囊生產(chǎn)工藝規(guī)范灌裝成膠囊產(chǎn)品。

實施例四、1、雪蛤活性肽液的制備：選取干燥凈雪蛤10kg，添加雪蛤重量26倍的純凈水進行稀釋泡發(fā)24小時后用組織破碎機破碎勻漿，勻漿后的阿膠調(diào)ph值6，加入木瓜蛋白酶、風(fēng)味蛋白酶（1:1）雙酶進行酶解，酶用量為每克阿膠添加8500個酶活單位（u），溫度控制56攝氏度，酶解4.5小時；酶解完畢沸水熱浴滅酶13分鐘后冷卻離心，離心機轉(zhuǎn)速12000rpm左右，即得雪蛤活性肽液。

2、中草藥活性肽的制備：稱取葛根2kg枸杞子2.5kg龍眼肉3kg，按中藥炮制規(guī)范炮制后破碎處理；添加中草藥16倍的純凈水進行加熱煮沸75分鐘后冷卻，用80目篩濾去藥渣，加纖維素酶、果膠酶、木瓜蛋白酶（1:1:1）進行多酶酶解，酶用量為每克中藥添加3000個酶活單位（u），溫度控制在58攝氏度，酶解4小時；酶解完畢沸水熱浴滅酶10分鐘后冷卻離心，離心機轉(zhuǎn)速12000rpm左右，即得中草藥活性肽液。

3、調(diào)配：取步驟1得到的雪蛤活性肽液、步驟2得到的中草藥活性肽液，稱取低聚異麥芽糖粉11kg進行復(fù)合調(diào)配。

4、調(diào)配好的雪蛤混合肽液放不銹鋼桶進蒸汽滅菌柜進行殺菌，蒸汽滅菌柜升溫至105攝氏度殺菌40分鐘，冷卻后即可加純凈水按照口服液生產(chǎn)工藝規(guī)范灌裝成口服液產(chǎn)品；可將混合肽液按照凍干工藝規(guī)范灌裝凍干瓶上凍干機冷凍干燥成瓶裝凍干粉產(chǎn)品；可將混合肽液噴霧干燥或冷凍干燥制備成粉末狀顆粒，按膠囊生產(chǎn)工藝規(guī)范灌裝成膠囊產(chǎn)品。

實施例五、1、雪蛤活性肽液的制備：選取雪蛤11kg；添加雪蛤重量27倍的純凈水進行稀釋泡發(fā)24小時后用組織破碎機破碎勻漿，勻漿后的雪蛤調(diào)ph值6.5，加入木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、復(fù)合蛋白酶（1:1:1）多酶進行酶解，酶用量為每克雪蛤添加6000個酶活單位（u），溫度控制56攝氏度，酶解6小時；酶解完畢沸水熱浴滅酶13分鐘后冷卻離心，離心機轉(zhuǎn)速9500rpm左右，即得雪蛤活性肽液。

2、中草藥活性肽的制備：稱取枸杞子3kg葛根3.5kg山楂2kg，按中藥炮制規(guī)范炮制后破碎處理；添加中藥15倍的純凈水進行加熱煮沸80分鐘后冷卻，用80目篩濾去藥渣，加纖維素酶、果膠酶、木瓜蛋白酶（1:1:1）進行多酶酶解，酶用量為每克中藥添加4000個酶活單位（u），溫度控制在50攝氏度，酶解3小時；酶解完畢沸水熱浴滅酶10分鐘后冷卻離心，離心機轉(zhuǎn)速8000rpm左右，即得中草藥活性肽液。

3、調(diào)配：取步驟1得到的雪蛤活性肽液、步驟2得到的中草藥活性肽液，稱取低聚異麥芽糖7kg進行復(fù)合調(diào)配。

4、調(diào)配好的雪蛤混合肽液放不銹鋼桶進蒸汽滅菌柜進行殺菌，蒸汽滅菌柜升溫至110攝氏度殺菌35分鐘，冷卻后即加純凈水按照口服液生產(chǎn)工藝規(guī)范灌裝成口服液產(chǎn)品；可將混合肽液按照凍干工藝規(guī)范灌裝凍干瓶上凍干機冷凍干燥成瓶裝凍干粉產(chǎn)品；可將混合肽液噴霧干燥或冷凍干燥制備成粉末狀顆粒，按膠囊生產(chǎn)工藝規(guī)范灌裝成膠囊產(chǎn)品。

實施例六、1、雪蛤活性肽液的制備：選取干燥凈雪蛤12kg；添加雪蛤重量24倍的純凈水進行稀釋泡發(fā)24小時，勻漿后的阿膠調(diào)ph值6，加入木瓜蛋白酶、風(fēng)味蛋白酶（1:1）雙酶進行酶解，酶用量為每克阿膠添加6000個酶活單位（u），溫度控制56攝氏度，酶解6小時；酶解完畢沸水熱浴滅酶13分鐘后冷卻離心，離心機轉(zhuǎn)速9000rpm左右，即得阿膠活性肽液。

2、中草藥活性肽的制備：稱取枸杞子3.5kg葛根2.5kg紅景天2.5kg，按中藥炮制規(guī)范炮制后破碎處理；添加中藥15倍的純凈水進行加熱煮沸80分鐘后冷卻，用80目篩濾去藥渣，加纖維素酶、果膠酶、木瓜蛋白酶（1:1:1）進行多酶酶解，酶用量為每克中藥添加6500個酶活單位（u），溫度控制在50攝氏度，酶解2小時；酶解完畢沸水熱浴滅酶10分鐘后冷卻離心，離心機轉(zhuǎn)速12000rpm左右，即得中草藥活性肽液。

3、調(diào)配：取步驟1得到的雪蛤活性肽液、步驟2得到的中草藥活性肽液、稱取低聚異麥芽糖粉6.5kg進行復(fù)合調(diào)配。

4、調(diào)配好的雪蛤混合肽液放不銹鋼桶進蒸汽滅菌柜進行殺菌，蒸汽滅菌柜升溫至110攝氏度殺菌40分鐘，冷卻后即可加純凈水按照口服液生產(chǎn)工藝規(guī)范灌裝成口服液產(chǎn)品；可將混合肽液按照凍干工藝規(guī)范灌裝凍干瓶上凍干機冷凍干燥成瓶裝凍干粉產(chǎn)品；可將混合肽液噴霧干燥或冷凍干燥制備成粉末狀顆粒，按膠囊生產(chǎn)工藝規(guī)范灌裝成膠囊產(chǎn)品。

本發(fā)明制備的一種雪蛤活性肽按照凍干工藝規(guī)范灌裝凍干瓶上凍干機冷凍干燥成瓶裝凍干粉產(chǎn)品，真空冷凍干燥無添加劑防腐劑，安全性高，保質(zhì)期長；加純凈水按照口服液生產(chǎn)工藝規(guī)范灌裝成口服液產(chǎn)品，顏色天然，易于吸收，特有的天然風(fēng)味口感良好；將混合肽液噴霧干燥或冷凍干燥制備成粉末狀顆粒，按膠囊生產(chǎn)工藝規(guī)范灌裝成膠囊產(chǎn)品，服用攜帶方便。本發(fā)明制備的一種雪蛤活性肽采取傳統(tǒng)中醫(yī)配方及嚴謹中藥炮制規(guī)范，運用現(xiàn)代生物技術(shù)先進的加工工藝制備而成，其工序科學(xué)嚴謹合理，操作性強，非常適合規(guī)模化生產(chǎn)。