本發(fā)明涉及一種枇杷提取物及其制備的降糖枇杷紅茶提取物口含片，屬于食品
技術領域：
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背景技術：
：枇杷葉是薔薇科枇杷屬植物枇杷eriobotryajaponica(thunb.)lindl.的干燥葉，是一味常用中藥，收載于歷版中國藥典供中醫(yī)臨床使用。枇杷果可食用，枇杷花可以制成花茶供飲用，而枇杷葉目前也屬于藥食兩用的植物資源，具有清肺止咳、降逆止嘔作用，用于治療肺熱咳嗽、氣逆喘氣、胃熱嘔逆、煩熱口渴等癥狀。新近的研究發(fā)現(xiàn)從枇杷葉中分離得到的三萜酸類化學成分具有顯著的降血糖活性。二型糖尿病是一種常見的人體代謝性紊亂疾病，中醫(yī)學中屬消渴癥范疇，一般發(fā)病原因與胰島素抵抗，高血糖癥直接相關，由于這種疾病發(fā)病周期較長，與人體自身的飲食結構和代謝水平相關，所以在發(fā)病前期的血糖控制被公認為最佳的預防治療手段。2型糖尿病是遺傳因素和環(huán)境因素共同參與和相互作用導致的復雜疾病。隨著人們消費水平的不斷提高，高熱量高糖高脂食物的攝入顯著增加，導致糖尿病的患者人群不斷增加，我國的糖尿病患者約3000萬以上，絕對患病人數(shù)居世界首位。在糖尿病的治療中，主要是通過藥物控制血糖升高和防治并發(fā)癥。中藥復方在降糖、減肥、降脂、改善胰島素抵抗方面優(yōu)于西藥聯(lián)合用藥組，二者各有所長。然而，市場上所銷售的含片品種較多，而且這些含片品嘗起來各具特色，但這些口含片一般為清咽利嗓，針對咽喉類疾病，較少針對二型糖尿病等代謝性疾病的預防和控制。此外，市場上所銷售的這些含片，大都是中藥或者藥食兩用原料的粗提取物，有效物質含量低，對人體起不到保健的作用。目前已經(jīng)開發(fā)出的兩種主要的枇杷葉保健茶，一種是以枇杷葉為原料，經(jīng)摘采、分揀、清洗、殺青、揉捻等工藝加工而成。如cn104322833a《一種枇杷葉茶的加工方法》、cn104705460a《一種枇杷葉茶及其加工方法》和cn104171169a《一種野枇杷葉茶的制備方法》中，都是以單一的枇杷葉為原料，經(jīng)加工工藝制備而成的保健茶，這些保健茶成分單一，療效和口感方面都有一定的缺陷。另一種是以枇杷葉為主要原料，復配其他藥食同源材料，如荷葉、姜片、甘草、橘皮等，經(jīng)干燥、粉碎、混合等工藝加工而成。如cn104543197a《一種含枇杷葉的涼茶及其制備方法》、cn103719311a《一種枇杷葉胃熱保健茶》和cn100366177c《一種枇杷葉保健茶》中，這些復方枇杷葉保健茶雖然添加了其他幾種材料，功效方面有所提升，但同樣存在口感欠佳的問題。技術實現(xiàn)要素：為了解決上述問題，本發(fā)明提供了一種枇杷提取物及其制備的降糖枇杷紅茶提取物口含片。本發(fā)明的枇杷提取物，制備方法不僅工藝簡單，得率高，而且使枇杷葉中的主要有效物質含量提高。本發(fā)明的枇杷提取物制備方法，提高了提取物中三萜酸類化學成分的含量，增加了所得提取物的降血糖活性；同時，本發(fā)明通過添加紅茶提取物，制成口含片劑，有利于攜帶，方便使用，由于有效藥物直接通過口腔粘膜被吸收，避免了消化道的損失，提高了藥物成份的吸收利用率；對于臨床保健等具有重要價值和貢獻，其功效全面，優(yōu)于市面同類產(chǎn)品，同時也為臨床患者提供了一種新的選擇劑型。本發(fā)明的的第一個目的是一種枇杷葉降糖提取物的制備方法，該制備方法不僅工藝簡單，得率高，而且使枇杷葉中的主要有效物質含量提高。所述枇杷葉提取物的制備方法，包括如下步驟：(1)將枇杷葉干燥粉碎；(2)使用50～95％(v/v)的乙醇進行超聲提取一次以上，料液比1:5～1:10，超聲波頻率為40～60hz，提取時間為40～60min；(3)將所得提取液離心去除沉淀后，取過濾液，減壓濃縮至含醇量≤30％(質量分數(shù))，得到低醇度濃縮液；(4)將上一步得到的濃縮液在0～10℃下靜置一段時間，去除上清液，剩余部分離心，得沉淀；(5)將上一步得到的沉淀烘干，并加入一定濃度的乙醇溶解，然后與非極性大孔樹脂拌勻、減壓干燥；(6)將上一步干燥后的大孔吸附樹脂裝入層析柱內，以8～12倍柱體積的純水進行洗脫，棄去純水洗脫液，隨后以8～12倍柱體積的40～60％乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮成流浸膏，烘干，粉碎。在本發(fā)明的一種實施方式中，所述步驟(1)中是粉碎至60～120目。在本發(fā)明的一種實施方式中，所述步驟(2)的50～95％乙醇進行超聲提取，是先采用50％～60％的乙醇提取25～30min，過濾或離心得到提取液，然后在采用75％～95％的乙醇進行提取，合并提取液。在本發(fā)明的一種實施方式中，所述步驟(4)是靜置24～72h；所述離心是在1000～3000轉/分鐘下離心沉降10～30分鐘。在本發(fā)明的一種實施方式中，所述步驟(5)是采用30～50℃的95％的乙醇，按照3:1體積比溶解。在本發(fā)明的一種實施方式中，所述步驟(5)中非極性大孔樹脂的添加質量與沉淀質量相同；所述減壓是在≤50℃下進行。在本發(fā)明的一種實施方式中，所述步驟(6)加入純水洗脫的洗脫流速為30～100ml/min；加入乙醇洗脫的洗脫速度為20～50ml/min。本發(fā)明的第二個目的是提供一種對α-淀粉酶和α-葡糖苷酶具有抑制作用的提取物，所述提取物即為本發(fā)明的枇杷葉提取物。本發(fā)明的第三個目的是提供一種具有預防或緩解糖尿病的植物藥口含片，所述口含片，按照重量份數(shù)計，含有枇杷葉提取物15～25份、紅茶提取物10～20份、微晶纖維素50～70份，甘露醇0.5～1份，硬脂酸鎂0.5～1份，阿斯巴甜0.5～1份，檸檬酸1～5份。所述紅茶提取物的制備方法與枇杷葉提取物制備方法，僅原料不同，其他工藝和步驟一致。在本發(fā)明的一種實施方式中，所述口含片的制備，是將原料按照配比混合后，經(jīng)制粒和壓片工序得成品。在本發(fā)明的一種實施方式中，所述口含片的制備，是將原料按照配比混合后，以95％乙醇作為粘合劑，將混合物制粒，隨后在45-55℃的條件下干燥1小時，用20目篩整粒，通過壓片機制成直徑1～2cm的口含片。本發(fā)明的優(yōu)點和效果：(1)本發(fā)明通過對工藝進行改進，有效提高了枇杷葉提取物中總三萜酸含量，尤其是齊墩果酸和熊果酸的含量。本發(fā)明采用超聲乙醇提取的方式，可以在常溫下進行提取，有效提高了有益成分含量并防止了有益成分的降解流失。(2)本發(fā)明的枇杷葉提取物還具有明顯的α-淀粉酶和α-葡糖苷酶抑制作用。(3)將本發(fā)明的枇杷葉提取物用于制備口含片，不僅能夠治療消渴癥狀，還能起到調節(jié)血糖的作用。本發(fā)明的口含片選用藥食兩用食材，配方講究，提取、濃縮其有效成分，制成口含片劑，有利于攜帶，方便使用，由于有效藥物直接通過口腔粘膜被吸收，避免了消化道的損失，提高了藥物成份的吸收利用率；對于臨床保健等具有重要價值和貢獻，其功效全面，優(yōu)于市面同類產(chǎn)品，同時也為臨床患者提供了一種新的選擇劑型。附圖說明圖1為本發(fā)明方法制備的枇杷葉總三萜酸樣品的hplc圖，其中保留時間為31.5min、33.5min對應的組分分別為齊墩果酸、熊果酸。具體實施方案下面是對本發(fā)明進行具體描述。實施例1：枇杷葉提取物的制備枇杷葉提取物的制備方法(1)將枇杷葉干燥粉碎；(2)先采用50％的乙醇超聲提取25min，離心得到提取液，然后再采用75％的乙醇進行超聲提取15min；其中超聲提取的料液比1:10、超聲波頻率為45hz；(3)合并提取液，將所得提取液離心去除沉淀后，減壓濃縮至含醇量≤30％的低醇度濃縮液；(4)低醇度濃縮液在0℃的溫度下，存放24小時，去除上清液，將沉淀部分3000轉/分鐘下離心沉降10分鐘，得沉淀；(5)沉淀烘干后，加入30℃的95％乙醇(1:1)溶解，并且加入與沉淀質量1:1的非極性大孔吸附樹脂，拌勻，并且40℃下減壓干燥；(6)將吸附了枇杷提取物的大孔吸附樹脂裝入層析柱內，并且加入10倍柱體積的純水進行洗脫，流速為30ml/min，棄去純水洗脫液，隨后加入10倍柱體積的50％乙醇洗脫，洗脫速度為20ml/min，收集洗脫液，濃縮成流浸膏，烘干，粉碎。實施例2：枇杷葉提取物的制備與實施例1相比，僅僅是步驟(2)不同。本實施例中，步驟(2)具體是：使用50％乙醇進行超聲提取，料液比1:10，超聲波頻率為45hz，提取時間為40min。實施例3：枇杷葉提取物的制備與實施例1相比，僅僅是步驟(2)不同。本實施例中，步驟(2)具體是：先采用50％的乙醇超聲提取25min，離心得到提取液，然后再采用75％的乙醇進行超聲提取15min；其中超聲提取的料液比1:10、超聲波頻率為25hz。實施例4：枇杷葉提取物的制備枇杷葉提取物的制備方法(1)將枇杷葉干燥粉碎；(2)使用95％乙醇進行超聲提取，料液比1:5，超聲波頻率為40hz，提取時間為60min；(3)合并提取液，將所得提取液離心去除沉淀后，減壓濃縮至含醇量≤30％的低醇度濃縮液；(4)低醇度濃縮液在10℃的溫度下，存放72小時，去除上清液，將沉淀部分1000轉/分鐘下離心沉降30分鐘，得沉淀；(5)沉淀烘干后，加入50℃的95％乙醇(1:1)溶解，并且加入與沉淀質量1:1的非極性大孔吸附樹脂，拌勻，并且在50℃下減壓干燥；(6)將吸附了枇杷提取物的大孔吸附樹脂裝入層析柱內，并且加入10倍柱體積的純水進行洗脫，流速為100ml/min，棄去純水洗脫液，隨后加入10倍柱體積的50％乙醇洗脫，洗脫速度為50ml/min，收集洗脫液，濃縮成流浸膏，烘干，粉碎。實施例5：枇杷葉提取物的制備枇杷葉提取物的制備方法(1)將枇杷葉干燥粉碎；(2)使用75％乙醇進行超聲提取，料液比1:8，超聲波頻率為55hz，提取時間為50min；(3)合并提取液，將所得提取液離心去除沉淀后，減壓濃縮至含醇量≤30％的低醇度濃縮液；(4)低醇度濃縮液在4℃的溫度下，存放48小時，去除上清液，將沉淀部分2000轉/分鐘下離心沉降22分鐘，得沉淀；(5)沉淀烘干后，加入45℃的95％乙醇(1:1)溶解，并且加入與沉淀質量1:1的非極性大孔吸附樹脂，拌勻，并且在50℃下減壓干燥；(6)將吸附了枇杷提取物的大孔吸附樹脂裝入層析柱內，并且加入10倍柱體積的純水進行洗脫，流速為60ml/min，棄去純水洗脫液，隨后加入10倍柱體積的50％乙醇洗脫，洗脫速度為40ml/min，收集洗脫液，濃縮成流浸膏，烘干，粉碎。對實施例1-5的方法得到的枇杷葉提取物進行檢測，結果如表1所示。如圖1所示，為采用高效液相色譜方法(hplc)檢測各有效成分的含量，色譜條件為：色譜柱固定相碳十八烷基硅膠，流動相甲醇-水—冰醋酸-三乙胺(90:10:0.03:0.06)，流速1ml/min，檢測波長215nm。按此方法檢測齊墩果酸、熊果酸的保留時間分別為31.5min、33.5min(見圖1)。表1枇杷葉提取物中主要三萜酸含量組別齊墩果酸(mg/g)熊果酸(mg/g)實施例1200182實施例2182143實施例3163162實施例4154125實施例5103171由此可見，按照本發(fā)明方法，可以得到齊墩果酸、熊果酸等有益成分含量非常高的提取物，經(jīng)過大孔吸附樹脂分離純化后，每1g提取物中齊墩果酸含量、熊果酸含量都高達200mg左右。實施例6：提取方法對枇杷葉中熊果酸和齊墩果酸提取效果的影響對照1：省略實施例1中的步驟(4)至步驟(6)，將步驟(3)得到的低醇度濃縮液直接濃縮成流浸膏、烘干、粉碎。結果顯示，得到的提取物中齊墩果酸含量僅32mg/g。對照2：將實施例1中的采用95％的乙醇進行超聲提取的提取時間延長至35min，其他條件不變，結果顯示，得到的提取物中熊果酸含量98mg/g，齊墩果酸82mg/g。對照3：(1)超聲提?。簩㈣凌巳~干燥粉碎，先采用50％的乙醇超聲提取25min，離心得到提取液，然后再采用75％的乙醇進行超聲提取15min；其中超聲提取的料液比1:10、超聲波頻率為45hz。(2)索氏提?。悍鬯榈母稍锱讶~中加甲醇75ml，冷浸15min，于索氏抽提器中60℃抽提2h，經(jīng)旋轉蒸發(fā)儀濃縮后，用甲醇移液至10ml容量瓶中，并定容，搖勻。用移液槍吸取4ml樣液于5ml離心管中離心(8000r/min，5min)。經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾，備用。(3)回流提?。悍鬯榈母稍锱讶~中加甲醇75ml，冷浸15min，于回流提取裝置中60℃提取2h，經(jīng)旋轉蒸發(fā)儀濃縮后，用甲醇移液至10ml容量瓶中，并定容，搖勻。用移液槍吸取4ml樣液于5ml離心管中離心(8000r/min，5min)。經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾，備用。將上述3種方法制得的樣品，用rp-hplc法以設定好的色譜條件，進樣20μl進行測量，結果顯示，索氏提取、回流提取得到的齊墩果酸在總三萜酸中的占比僅分別為超聲提取的8％左右、5％左右，得到的熊果酸在總三萜酸中的占比僅分別為超聲提取的9％左右、4％左右見下表。實施例7：枇杷葉提取物的降血糖作用實施例1和3得到的枇杷葉提取物對高血糖小鼠空腹血糖的影響實驗方法：取正常雄性sd大鼠(150～220g)30只，隨機分為3組，其中一組為正常飼料組，另一組為高脂高糖飼料組，另一組為高脂高糖飼料+枇杷提取物組。對于枇杷提取物干預組，按10ml/kg體重經(jīng)口給予枇杷葉提取物(其中實施例1的枇杷葉提取物240mg/kg、實施例3的300mg/kg)、每天給藥1次，連續(xù)28d。末次給藥時，各組禁食4h后給藥，再繼續(xù)禁食2h。大鼠眼眶后靜脈叢取血，分離血清，以葡萄糖氧化酶法測定血糖。結果：如表2所示，與正常組相比，枇杷葉提取物240mg/kg或300mg/kg都顯著地降低了高血糖大鼠的空腹血糖(p＜0.01)，且高脂高糖組大鼠血糖顯著高于正常組大鼠血糖，證明高血糖模型成功(p＜0.01)。表2枇杷提取物對sd高血糖大鼠空腹血糖的影響(x±sd)組別ldl-c(mmol/l)tg(mmol/l)空腹血糖(mmol/l)正常組0.81±0.190.76±0.155.46±0.45高脂高糖組1.53±0.231.71±0.337.96±0.98枇杷提取物干預組0.83±0.180.93±0.144.98±1.15實施例8：降糖枇杷紅茶提取物口含片按照重量份數(shù)計，取實施例1制備的枇杷葉提取物15份、紅茶提取物20份、微晶纖維素50份，甘露醇1份，硬脂酸鎂1份，阿斯巴甜0.5份，檸檬酸1份。其中，紅茶提取物的制備方法與實施例1的枇杷葉提取物制備方法相比，僅原料不同(所用原料紅茶為祁門紅茶)，其他工藝和步驟一致。將上述原料按照配比混合后，以95％乙醇作為粘合劑，將混合物制粒，隨后在55℃的條件下干燥1小時，用20目篩整粒，通過壓片機制成直徑2cm的口含片。用常溫超高壓技術殺菌10分鐘，即得成品。實施例9：降糖枇杷紅茶提取物口含片按照重量份數(shù)計，取實施例1制備的枇杷葉提取物25份、紅茶提取物10份、微晶纖維素70份，甘露醇0.5份，硬脂酸鎂0.5份，阿斯巴甜1份，檸檬酸5份。其中，紅茶提取物的制備方法與實施例1的枇杷葉提取物制備方法相比，僅原料不同(所用原料紅茶為祁門紅茶)，其他工藝和步驟一致。將上述原料按照配比混合后，以95％乙醇作為粘合劑，將混合物制粒，隨后在45℃的條件下干燥1小時，用20目篩整粒，通過壓片機制成直徑1cm的口含片。用常溫超高壓技術殺菌5分鐘，即得成品。雖然本發(fā)明已以較佳實施例公開如上，但其并非用以限定本發(fā)明，任何熟悉此技術的人，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍內，都可做各種的改動與修飾，因此本發(fā)明的保護范圍應該以權利要求書所界定的為準。當前第1頁12