本發(fā)明涉及胡椒屬植物精油的新用途，尤其涉及胡椒屬精油在制備治療和預(yù)防阿爾茨海默病的藥物和健康產(chǎn)品中的用途。

背景技術(shù)：

阿爾茨海默病(ad)，又稱為老年癡呆癥，是一種起病隱匿的進(jìn)行性發(fā)展的神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病。臨床上以記憶障礙、失語、失用、失認(rèn)、視空間技能損害、執(zhí)行功能障礙以及人格和行為改變等全面性癡呆表現(xiàn)為特征，嚴(yán)重陰性社交、職業(yè)與生活功能，ad的病因迄今未明。近年國內(nèi)外眾多研究者從不同角度提出了各種發(fā)病假說，如膽堿能功能低下假說、炎癥和免疫假說、基因突變假說、淀粉樣蛋白假說、氧化應(yīng)激及興奮性毒性假說等。目前，全世界65歲以上人群中ad發(fā)病率為10％，80歲以上可達(dá)20％?，F(xiàn)在市場上治療藥物主要有乙酰膽堿酯酶(ache)抑制劑、改善腦血液循環(huán)和腦細(xì)胞代謝的藥物、鈣拮抗劑、激素類藥物、非甾體抗炎藥物、自由基清除劑和抗氧化劑、毒蕈堿受體激動(dòng)劑等。但是，因ad的發(fā)病機(jī)理極其復(fù)雜，目前尚無特效治療藥物。10年間，國外上市的ad創(chuàng)新藥物屈指可數(shù)。國內(nèi)迄今為止，除石杉?jí)A甲外，沒有創(chuàng)新性的ad相關(guān)疾病藥物投產(chǎn)上市。因此，目前國內(nèi)的治療ad的藥物市場被進(jìn)口藥物所占據(jù)，價(jià)格偏高，一般病人難以承受，長期服用帶來的經(jīng)濟(jì)問題，也難以解決我國ad病就醫(yī)率低的問題。同時(shí)，現(xiàn)有的藥物副作用都較大，長期服用造成較大影響。因此，非常有必要發(fā)現(xiàn)新的治療或預(yù)防ad的活性分子或活性部位。

天然精油是一類從植物的花、葉、莖、根或果實(shí)中，通過水蒸氣蒸餾法、擠壓法、冷浸法或溶劑提取法提煉萃取的揮發(fā)性芳香物質(zhì)。具有親脂性，很容易溶在油脂中，非常容易通過血腦屏障。此外，精油是由一些很小的分子所組成，這些高揮發(fā)物質(zhì)，可由鼻腔粘膜組織吸收進(jìn)入身體，將訊息直接送到腦部，通過大腦的邊緣系統(tǒng)，調(diào)節(jié)情緒和身體的生理功能。在民間，許多香料植物均有用于改善中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的作用記載。迄今，文獻(xiàn)主要報(bào)道了胡椒屬植物精油具有殺蟲、抗菌、抗氧化、驅(qū)蚊活性等生物活性，但是沒有文獻(xiàn)報(bào)道本專利中胡椒屬植物精油具有治療或預(yù)防阿爾茨海默病的報(bào)道。此外，前期沒有專利涉及本專利中胡椒屬植物精油治療或預(yù)防阿爾茨海默病的用途。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的旨在針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供胡椒屬植物精油在制備治療和預(yù)防阿爾茨海默病藥物和健康產(chǎn)品中的用途。

所述胡椒屬植物精油包括華南胡椒(piper.austrosinense)、山蔞(假蒟，p.sarmentosumroxb)、山蒟(p.hanceimaxim)、石南藤(p.wallichii)、大葉蒟(p.laetispicum)、華南蒟(p.austrosinense)、腺脈蒟(p.bavinnum)、毛蒟(p.puberulum)、蔞葉(p.betle)、斜葉蒟(p.senporeienseyamam.incontrib.fl.kainan.)、美洲樹胡椒(p.aduncum)、海南蒟(p.hainanense)、球穗胡椒(p.thomsonii(c.dc.)hook.f.)、柱葉蒟(p.boehmeriaefolium(miq.)c.dc)、黃花胡椒(p.flaviflorumc.dc.)、胡椒(p.nigruml.)、毛脈樹胡椒(p.hispidimerviumc.dc.)莖葉部位的揮發(fā)性提取物；

所述胡椒屬植物精油還包括華南胡椒(piper.austrosinense)、山蔞(假蒟，p.sarmentosumroxb)、山蒟(p.hanceimaxim)、石南藤(p.wallichii)、大葉蒟(p.laetispicum)、華南蒟(p.austrosinense)、腺脈蒟(p.bavinnum)、毛蒟(p.puberulum)、蔞葉(p.betle)、斜葉蒟(p.senporeienseyamam.incontrib.fl.kainan.)、美洲樹胡椒(p.aduncum)、海南蒟(p.hainanense)、球穗胡椒(p.thomsonii(c.dc.)hook.f.)、柱葉蒟(p.boehmeriaefolium(miq.)c.dc)、黃花胡椒(p.flaviflorumc.dc.)、胡椒(p.nigruml.)、毛脈樹胡椒(p.hispidimerviumc.dc.)果實(shí)部位的揮發(fā)性提取物；

所述胡椒屬植物精油還包括華南胡椒(piper.austrosinense)、山蔞(假蒟，p.sarmentosumroxb)、山蒟(p.hanceimaxim)、石南藤(p.wallichii)、大葉蒟(p.laetispicum)、華南蒟(p.austrosinense)、腺脈蒟(p.bavinnum)、毛蒟(p.puberulum)、蔞葉(p.betle)、斜葉蒟(p.senporeienseyamam.incontrib.fl.kainan.)、美洲樹胡椒(p.aduncum)、海南蒟(p.hainanense)、球穗胡椒(p.thomsonii(c.dc.)hook.f.)、柱葉蒟(p.boehmeriaefolium(miq.)c.dc)、黃花胡椒(p.flaviflorumc.dc.)、胡椒(p.nigruml.)、毛脈樹胡椒(p.hispidimerviumc.dc.)花絮部位的揮發(fā)性提取物。

所述阿爾茨海默病包括老年癡呆癥等神經(jīng)退行性疾病。

本發(fā)明所述的用途是將胡椒屬植物精油作為制備治療和/或預(yù)防阿爾茨海默病藥物或健康產(chǎn)品的有效成分，還可以加入一種或多種藥物或健康產(chǎn)品上可接受的輔料，并可將藥物制成片劑、丸劑、膠囊劑、顆粒劑、微囊片劑、混懸劑、滴丸、口服液體、注射劑、氣霧劑、栓劑、皮下給藥劑型中的任何一種。

所述健康產(chǎn)品可以為化妝品、食品、保健食品、消字號(hào)產(chǎn)品中的任何一種。

在本發(fā)明之前未發(fā)現(xiàn)上述胡椒屬植物精油具有抑制乙酰膽堿酯酶，改善和治療老年癡呆癥癥狀的報(bào)道及專利；也未發(fā)現(xiàn)上述胡椒屬植物精油治療和預(yù)防上老年癡呆癥或以其為原料制備藥物制劑或健康產(chǎn)品用于治療和預(yù)防老年癡呆癥疾病和病癥的報(bào)道及專利。

本發(fā)明中胡椒屬植物精油采用常規(guī)提取精油的方法獲得。

本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)胡椒屬植物精油在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中阿爾茨海默病中表現(xiàn)出活性的醫(yī)藥新用途。首次發(fā)現(xiàn)胡椒屬植物精油抑制乙酰膽堿酯酶活性，具有改善老年癡呆癥的作用。與目前治療阿爾茨海默病的藥物和健康產(chǎn)品相比，所述胡椒屬植物精油有抑制乙酰膽堿酯酶活性作用機(jī)制，且具有良好的脂溶性，易于通過血腦屏障，因此具有提高/改善的毒理學(xué)安全性(即毒性降低)、提高/改善的代謝穩(wěn)定，較長的半衰期和/或較小的副作用的特點(diǎn)，同時(shí)產(chǎn)生類似或提高的生物活性(藥效)。制備的藥物或健康產(chǎn)品可用于預(yù)防或治療阿爾茨海默疾病和病癥。

附圖說明

圖1是在乙酰膽堿酯酶抑制模型中胡椒屬植物精油的活性結(jié)果圖；

圖2是在三氯化鋁誘發(fā)斑馬魚老年癡呆癥模型中毛脈樹胡椒(p.hispidimerviumc.dc.)精油在60min內(nèi)對(duì)老年癡呆癥斑馬魚運(yùn)動(dòng)速度的影響圖；圖中#7為毛脈樹胡椒精油；

圖3是在三氯化鋁誘發(fā)斑馬魚老年癡呆癥模型中胡椒屬植物精油對(duì)斑馬魚運(yùn)動(dòng)速度恢復(fù)治療效率圖；

圖4是在三氯化鋁誘發(fā)斑馬魚老年癡呆癥模型中胡椒屬植物精油對(duì)斑馬魚速度差值恢復(fù)的治療效率。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明，但本發(fā)明保護(hù)范圍不局限于所述內(nèi)容，實(shí)施例中方法如無特殊說明的采用常規(guī)方法，使用的試劑如無特殊說明的使用常規(guī)市售試劑或按常規(guī)方法配制的試劑。

本申請發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，體內(nèi)施用本發(fā)明胡椒屬植物精油可以抑制乙酰膽堿酯酶活性，也就是說，這些藥劑或健康產(chǎn)品通過抑制乙酰膽堿酯酶活性來改善老年癡呆疾病和病癥，而不會(huì)完全抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)所有活性。接受本發(fā)明所述藥劑的對(duì)象不會(huì)被鎮(zhèn)靜、麻醉或麻痹。

許多阿爾茨海默病的病理狀態(tài)，例如記憶障礙、失語、失用、失認(rèn)、視空間技能損害、執(zhí)行功能障礙以及人格和行為改變等，至少有一種癥狀能通過抑制乙酰膽堿酯酶而得以減輕。因此，患有這種疾病的個(gè)體可接受含有本發(fā)明中涉及的胡椒屬植物精油的組合物。

本發(fā)明所述可藥用載體包括但不限于碳酸鈣、磷酸鈣、硫酸鈣、蔗糖、葡萄糖、乳糖、果糖、木糖醇、山梨醇、淀粉、淀粉糊、纖維素衍生物、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、氯化鈉、糊精、硬脂酸、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、植物油、聚乙二醇、無菌磷酸鹽緩沖鹽水、鹽水、林格氏溶液以及它們的組合。

本發(fā)明的所述口服劑型包括但不局限于固體口服劑型(如腸溶衣片、滴丸、口服片、咀嚼片、顆粒劑、粉末或膠囊)或液體口服劑型(如糖漿或酊劑)。此外，本發(fā)明中的胡椒屬植物精油還可以添加到食物和飲料中，用于口服施用。此外，本發(fā)明中的胡椒屬植物精油也可以配制成口香糖，以促進(jìn)口服遞送和吸收。

本發(fā)明所述的非口服劑型包括但不局限于通過注射或其他全身途徑給藥，所述其它全身途徑例如經(jīng)皮施用或經(jīng)粘膜施用(例如經(jīng)鼻、舌下、口含、經(jīng)陰道或直腸，通過栓劑)。其他施用途徑(例如可在獸醫(yī)應(yīng)用中使用的)包括腸內(nèi)和胃腸外遞送，包括肌肉、皮下和/或髓內(nèi)注射，以及鞘內(nèi)注射、直接腦室注射、靜脈內(nèi)注射、腹膜內(nèi)注射、鼻內(nèi)注射或眼球內(nèi)注射。

本發(fā)明涉及的胡椒屬植物精油也可與其他藥物活性成分聯(lián)用，以制備其他的新藥物組合物。

本發(fā)明的胡椒屬植物精油或其組合用以緩解上述癥狀的證實(shí)性療效和治療相關(guān)活性，是通過斑馬魚模型和乙酰膽堿酯酶模型試驗(yàn)進(jìn)行證實(shí)的。

上述本發(fā)明胡椒屬植物精油或其組合的治療作用、良好的藥物代謝參數(shù)和通常無毒性使得本發(fā)明化合物成為用于治療上述病癥的理想藥物和健康產(chǎn)品。

上述本發(fā)明胡椒屬植物精油或其組合的具抑制乙酰膽堿酯酶活性，能顯著對(duì)抗斑馬魚模型中化學(xué)誘導(dǎo)的老年癡呆癥狀。

實(shí)施例1：通過水蒸氣蒸餾法從胡椒屬植物中制備精油

將華南胡椒(piper.austrosinense)、山蔞(假蒟，p.sarmentosumroxb)、山蒟(p.hanceimaxim)、石南藤(p.wallichii)、大葉蒟(p.laetispicum)、腺脈蒟(p.bavinnum)、毛蒟(p.puberulum)、蔞葉(p.betle)、斜葉蒟(p.senporeienseyamam.incontrib.fl.kainan.)、美洲樹胡椒(p.aduncum)、海南蒟(p.hainanense)、球穗胡椒(p.thomsonii(c.dc.)hook.f.)、柱葉蒟(p.boehmeriaefolium(miq.)c.dc)、黃花胡椒(p.flaviflorumc.dc.)、胡椒(p.nigruml.)、毛脈樹胡椒(p.hispidimerviumc.dc.)莖葉經(jīng)小型粉碎機(jī)打碎，稱取2kg粉末置于水蒸氣蒸餾瓶中，用5倍量純凈水浸泡過夜，在揮發(fā)油提取器上回流6個(gè)小時(shí)(保持微沸)，收集所回流的液體用乙醚萃取3次，再用無水硫酸鈉干燥，揮干乙醚溶劑，得胡椒屬植物精油。

實(shí)施例2：通過二氧化碳超臨界萃取法從胡椒屬植物中制備精油

將華南胡椒(piper.austrosinense)、山蔞(假蒟，p.sarmentosumroxb)、山蒟(p.hanceimaxim)、石南藤(p.wallichii)、大葉蒟(p.laetispicum)、腺脈蒟(p.bavinnum)、毛蒟(p.puberulum)、蔞葉(p.betle)、斜葉蒟(p.senporeienseyamam.incontrib.fl.kainan.)、美洲樹胡椒(p.aduncum)、海南蒟(p.hainanense)、球穗胡椒(p.thomsonii(c.dc.)hook.f.)、柱葉蒟(p.boehmeriaefolium(miq.)c.dc)、黃花胡椒(p.flaviflorumc.dc.)、胡椒(p.nigruml.)、毛脈樹胡椒(p.hispidimerviumc.dc.)莖葉經(jīng)小型粉碎機(jī)打碎，稱取2kg粉末置于二氧化碳超臨界萃取儀中，提取，得胡椒屬植物精油。

實(shí)施例3：通過溶劑提取法從胡椒屬植物中制備精油

將華南胡椒(piper.austrosinense)、山蔞(假蒟，p.sarmentosumroxb)、山蒟(p.hanceimaxim)、石南藤(p.wallichii)、大葉蒟(p.laetispicum)、腺脈蒟(p.bavinnum)、毛蒟(p.puberulum)、蔞葉(p.betle)、斜葉蒟(p.senporeienseyamam.incontrib.fl.kainan.)、美洲樹胡椒(p.aduncum)、海南蒟(p.hainanense)、球穗胡椒(p.thomsonii(c.dc.)hook.f.)、柱葉蒟(p.boehmeriaefolium(miq.)c.dc)、黃花胡椒(p.flaviflorumc.dc.)、胡椒(p.nigruml.)、毛脈樹胡椒(p.hispidimerviumc.dc.)莖葉經(jīng)小型粉碎機(jī)打碎，稱取2kg粉末置于提取儀中，加入4倍量石油醚，冷浸提取三次，每次48小時(shí)，合并提取液，降壓回收溶劑，得胡椒屬植物精油。

實(shí)施例4：胡椒屬植物精油抑制乙酰膽堿酯酶作用的評(píng)價(jià)gc-ms分析

以實(shí)施例1制備得到的胡椒屬植物精油用正己烷溶解定容到5ml容量瓶中，用0.45μm的有機(jī)微孔濾膜過濾進(jìn)gc-ms分析。

agilenttechnologies7890b。色譜柱db-5ms石英毛細(xì)管柱db-17(30m×0.320mm×0.25um)。升溫程序:90℃-140℃(5℃/min)保持2min，140℃-200℃(1℃/min)保持5min，200℃-260℃(4℃/min)保持1min，分流比10:1，進(jìn)樣量0.8μl。進(jìn)樣口溫度250℃，檢測器溫度250℃。電子轟擊(ei)離子源，離子源溫度230℃，接口溫度250℃，溶劑延遲3min，掃描方式：全掃描，掃描質(zhì)量范圍：m/z40-550；ms分析結(jié)果如下表1。

表1：

實(shí)施例5：胡椒屬植物精油抑制乙酰膽堿酯酶作用的評(píng)價(jià)

以實(shí)施例1制備得到的胡椒屬植物精油分別進(jìn)行活性測試：

取nah2po4·2h2o3.121g加水溶解，定溶至100ml得到0.2mol/l的nah2po4；na2hpo4·12h2o71.64g加水溶解，定溶至1000ml得到0.2mol/l的na2hpo4。取上述配制的26.5mlnah2po4和473.5mlna2hpo4充分混合后，得到0.2mol/lph＝8.0的pbs，再將此溶液稀釋1倍得到0.1mol/lph＝8.0的pbs；b.取上述配制的39mlnah2po4和61mlna2hpo4充分混合后，得到0.2mol/lph＝7.0的pbs，再將此溶液稀釋1倍，得到0.1mol/lph＝7.0pbs。

先用ph＝8.0的pbs配制成1000u/ml乙酰膽堿酯酶(ache)的母液，再稀釋成4u/ml的儲(chǔ)備液-80℃保存，實(shí)驗(yàn)時(shí)再將儲(chǔ)備液稀釋成0.4u/ml的乙酰膽堿酯酶液。準(zhǔn)確稱取8.8mgatci(碘化硫代乙酰膽堿)，溶于去離子水中，定溶至50ml，4℃放置(現(xiàn)配現(xiàn)用)；0.6mmol/ldtnb[5,5'-二硫代雙(2-硝基苯甲酸)]的配制：準(zhǔn)確稱取11.9mgdtnb和0.75gnahco3溶于ph＝7.0的pbs中，定溶至50ml，避光保存(現(xiàn)配現(xiàn)用)。陽性藥加蘭他敏用色譜級(jí)甲醇配成10mg/ml的初始濃度，待測物用色譜級(jí)甲醇配成100mg/ml的初始濃度。實(shí)驗(yàn)時(shí)陽性對(duì)照和待測物均稀釋為5個(gè)濃度(陽性對(duì)照：100，10，1，0.1，0.01mg/ml；待測物：100，50，25，12.5，6.25mg/ml)，每個(gè)濃度做3組平行實(shí)驗(yàn)。分別分為如下幾個(gè)組測試：實(shí)驗(yàn)組：40μlpbs(ph＝8.0)，10μl待測物，10μl0.4u/ml的ache溶液，20μl0.6mmol/ldtnb依次加入96孔板中，37℃預(yù)孵10min,然后再加20μl0.6mmol/latci于37℃恒溫反應(yīng)30min，然后再加50μl無水乙醇終止反應(yīng)。實(shí)驗(yàn)控制組：40μlpbs(ph＝8.0)，10μl待測物，10μlpbs(ph＝8.0),20μl0.6mmol/ldtnb依次加入96孔板中，37℃預(yù)孵10min，然后再加20μl0.6mmol/latci于37℃恒溫反應(yīng)30min，然后再加50μl無水乙醇終止反應(yīng)?？瞻捉M：40μlpbs(ph＝8.0)，10μl甲醇，10μl0.4u/ml的ache溶液，20μl0.6mmol/ldtnb依次加入96孔板中，37℃預(yù)孵10min，然后再加20μl0.6mmol/latci于37℃恒溫反應(yīng)30min，然后再加50μl無水乙醇終止反應(yīng)?？瞻讓?duì)照組：40μlpbs(ph＝8.0)，10μl甲醇，pbs(ph＝8.0)，20μl0.6mmol/ldtnb依次加入96孔板中，37℃預(yù)孵10min，然后再加20μl0.6mmol/latci于37℃恒溫反應(yīng)30min，然后再加50μl無水乙醇終止反應(yīng)。

用酶標(biāo)儀在412nm處檢測波長，計(jì)算抑制率公式如下：

結(jié)果表明(表2和圖1)所有測試的胡椒精油在100mg/ml濃度下均顯示抑制乙酰膽堿酯酶的作用，其中華南胡椒(piper.austrosinense)、山蒟(p.hanceimaxim)、石南藤(p.wallichii)、大葉蒟(p.laetispicum)、腺脈蒟(p.bavinnum)、蔞葉(p.betle)、斜葉蒟(p.senporeienseyamam.incontrib.fl.kainan.)、美洲樹胡椒(p.aduncum)、海南蒟(p.hainanense)、柱葉蒟(p.boehmeriaefolium(miq.)c.dc)、黃花胡椒(p.flaviflorumc.dc.)、胡椒(p.nigruml.)、毛脈樹胡椒(p.hispidimerviumc.dc.)顯示顯著抑制乙酰膽堿酯酶的作用，與陽性對(duì)照加蘭他敏相當(dāng)。

表2胡椒精油抑制乙酰膽堿酯酶的作用

實(shí)施例6：胡椒屬植物精油體內(nèi)抗老年癡呆癥作用的評(píng)價(jià)(小鼠三氯化鋁化學(xué)誘導(dǎo)模型)

以實(shí)施例1制備得到的胡椒屬植物精油分別進(jìn)行活性測試：

實(shí)驗(yàn)用的斑馬魚幼魚為斑馬魚種魚所產(chǎn)胚胎自然孵育而成。養(yǎng)魚用水水質(zhì)：每1l反滲透水中加入200mg速溶海鹽，電導(dǎo)率為480～510μs/cm；ph為6.9～7.2；硬度為53.7～71.6mg/lcaco3。實(shí)驗(yàn)完成后，用0.25mg/ml的三卡因甲磺酸對(duì)各個(gè)發(fā)育階段的斑馬魚進(jìn)行麻醉處死。麻醉處死的操作步驟符合美國獸醫(yī)協(xié)會(huì)(avma)對(duì)動(dòng)物麻醉處死的規(guī)范要求。

本研究共設(shè)置5組實(shí)驗(yàn)，每組實(shí)驗(yàn)包括1個(gè)空白對(duì)照組、1個(gè)溶劑對(duì)照組、1個(gè)老年癡呆模型組、1個(gè)陽性對(duì)照組(多奈哌齊)、3-5個(gè)待測化合物組。待測化合物的初篩濃度為30μm，若出現(xiàn)死亡或畸形，則選取10μm進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。三氯化鋁處理的斑馬魚為老年癡呆模型組；三氯化鋁與多奈哌齊共同處理的斑馬魚為陽性對(duì)照組；三氯化鋁與待測化合物共同處理的斑馬魚為待測化合物組；0.1％的二甲亞砜處理的斑馬魚為陰性對(duì)照組(溶劑對(duì)照組)；未處理的斑馬魚為空白對(duì)照組，每個(gè)實(shí)驗(yàn)組均處理30尾斑馬魚。利用行為分析儀記錄60min內(nèi)斑馬魚的運(yùn)動(dòng)軌跡，通過光暗周期性變化，黑暗10min，光照10min，60min分為三個(gè)光暗周期，然后對(duì)斑馬魚的運(yùn)動(dòng)速度(運(yùn)動(dòng)功能障礙)、明暗周期速度變化(反應(yīng)能力)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

活性測試結(jié)果符合質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)：①整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中所有實(shí)驗(yàn)組均未出現(xiàn)斑馬魚死亡或畸形；②模型組和溶劑對(duì)照組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.001)；③所有實(shí)驗(yàn)中空白對(duì)照組與溶劑對(duì)照組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05)；④陽性對(duì)照組(多奈哌齊，dpz)與模型組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.05)。

對(duì)老年癡呆癥斑馬魚運(yùn)動(dòng)功能障礙的恢復(fù)作用

所有實(shí)驗(yàn)老年癡呆模型組斑馬魚運(yùn)動(dòng)速度顯著下降，與溶劑對(duì)照組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.001)；陽性藥(多奈哌齊)組斑馬魚運(yùn)動(dòng)速度顯著回升，與模型組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01或p<0.001)。斑馬魚在60min明暗周期內(nèi)，其運(yùn)動(dòng)速度具有規(guī)律性、周期性和穩(wěn)定性。實(shí)施例1制備得到的所有胡椒屬植物精油處理后的老年癡呆癥斑馬魚的運(yùn)動(dòng)速度與模型組相比顯著提高(p<0.05,p<0.01或p<0.001)，顯著恢復(fù)老年癡呆癥斑馬魚的運(yùn)動(dòng)速度。

表3老年癡呆癥斑馬魚運(yùn)動(dòng)速度的治療效率

圖2為毛脈樹胡椒(p.hispidimerviumc.dc.)精油在60min內(nèi)對(duì)ad斑馬魚運(yùn)動(dòng)速度的影響圖；從圖中可看出毛脈樹胡椒(p.hispidimerviumc.dc.)精油能顯著影響ad斑馬魚運(yùn)動(dòng)速度；

圖3為三氯化鋁誘發(fā)斑馬魚老年癡呆癥模型中胡椒屬植物精油對(duì)斑馬魚運(yùn)動(dòng)速度恢復(fù)治療效率圖；從圖中可看出胡椒屬植物精油能有效恢復(fù)ad斑馬魚運(yùn)動(dòng)速度。

對(duì)老年癡呆癥斑馬魚反應(yīng)能力的影響

所有實(shí)驗(yàn)中，老年癡呆模型組斑馬魚反應(yīng)能力下降(明暗周期速度差值顯著下降)，與溶劑對(duì)照組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.001)；陽性藥(dpz)組斑馬魚反應(yīng)能力部分恢復(fù)(明暗周期速度差值顯著回升)，與模型組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05或p<0.001)。實(shí)施例1制備得到的總皂苷、分組皂苷和單體皂苷處理后可以不同程度的恢復(fù)ad斑馬魚的反應(yīng)速度(明暗周期速度差值顯著回升)，與模型組相比，統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著或極顯著(p<0.05,p<0.01或p<0.001)。

表4老年癡呆癥斑馬魚反應(yīng)能力的治療效率

圖4為三氯化鋁誘發(fā)斑馬魚老年癡呆癥模型中胡椒屬植物精油對(duì)斑馬魚速度差值恢復(fù)的治療效率，從圖中可看出胡椒屬植物精油能有效改善ad斑馬魚的反應(yīng)能力。

實(shí)施例7：

分別以實(shí)施例2、3制備得到的胡椒屬植物精油進(jìn)行活性測試，測試方法與實(shí)施例6相同，結(jié)果均表明，本發(fā)明制備得到的胡椒屬植物精油能顯著改善三氯化鋁誘導(dǎo)老年癡呆癥斑馬魚的運(yùn)動(dòng)能力和反應(yīng)能力。

實(shí)施例8：胡椒屬植物精油片劑的制備

胡椒屬植物精油10ml,藥用淀粉100g，混合均勻，用適量乙醇作為粘合劑制粒，干燥，經(jīng)整粒機(jī)整粒，壓片，每片0.30g，口服，每次1-2片，每日兩次。

實(shí)施例9：胡椒屬植物精油膠囊劑的制備

胡椒屬植物精油10ml,藥用淀粉100g，混合均勻，用適量乙醇作為粘合劑制粒，干燥，經(jīng)整粒機(jī)整粒，裝膠囊，每粒0.30g，口服，每次1-2粒，每日兩次。

實(shí)施例10：胡椒屬植物精油顆粒劑的制備

胡椒屬植物精油10ml,藥用淀粉100g，糖粉500g，混合均勻，用適量乙醇作為粘合劑制粒，干燥，經(jīng)整粒機(jī)整粒，分裝即得，口服，每次5g，每日兩次

實(shí)施例11：胡椒屬植物精油飲料的制備

胡椒屬植物精油100ml,食用純凈水1000ml，糖粉500g，適當(dāng)穩(wěn)定劑和調(diào)香劑，混合均勻，分裝即得，口服，每次10ml，每日兩次。

實(shí)施例12：胡椒屬植物精油吸入制劑的制備

胡椒屬植物精油100ml,甜杏仁油1000ml，適當(dāng)穩(wěn)定劑和調(diào)香劑，混合均勻，分裝即得，吸入，每次10ml，每日兩次。