本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體為利用RNA聚合酶I的抑制劑抑制血管損傷后再狹窄的發(fā)生。

背景技術(shù)：

冠狀動(dòng)脈硬化性心臟病(即冠心病)是嚴(yán)重危害人類健康的重要?dú)⑹?。?jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)，全世界每年約有1700萬(wàn)人死于冠心病，占疾病死亡總?cè)藬?shù)的50％以上。目前在我國(guó)冠心病的發(fā)病率呈現(xiàn)不斷上升趨勢(shì)。隨著人口不斷老化，40歲以后每增加10歲，冠心病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)就要增加1倍左右。如何有效預(yù)防治療冠心病已經(jīng)成為目前社會(huì)的重大需求。

冠心病是冠狀動(dòng)脈血管內(nèi)發(fā)生動(dòng)脈粥樣硬化病變而導(dǎo)致血血管狹窄或阻塞，造成心肌缺血、缺氧或壞死而導(dǎo)致的心臟病。對(duì)于狹窄成度嚴(yán)重(病人癥狀明顯，影響正常生活)和危險(xiǎn)性高(容易造成心肌梗塞的發(fā)生)的病變，目前臨床上廣泛采用的治療方法之一是介入治療。介入治療是通過(guò)穿刺淺表血管，將特定的心臟導(dǎo)管送入冠狀動(dòng)脈后進(jìn)行診斷與治療。介入治療依靠的主要技術(shù)包括：

(1)冠狀動(dòng)脈球囊血管成形術(shù)：即將相應(yīng)大小的球囊沿導(dǎo)管送到狹窄的節(jié)段，根據(jù)病變的特點(diǎn)用適當(dāng)?shù)膲毫蜁r(shí)間進(jìn)行擴(kuò)張，達(dá)到解除狹窄的目的。單純球囊血管成形術(shù)后容易發(fā)生冠狀動(dòng)脈急性閉塞和再狹窄。急性閉塞多見(jiàn)于術(shù)后24小時(shí)內(nèi)，發(fā)生率在3％-5％，可導(dǎo)致患者急性心肌梗死，甚至死亡。再狹窄一般發(fā)生于術(shù)后6個(gè)月內(nèi)，發(fā)生率在25％-50％，患者會(huì)再次出現(xiàn)心絞痛癥狀，需再次治療。由于以上的局限性，目前已很少單獨(dú)使用。

(2)冠狀動(dòng)脈金屬支架植入術(shù)：為克服球囊成形術(shù)的局限性，人們將用不銹鋼或合金材料制成的網(wǎng)狀金屬支架置入冠狀動(dòng)脈內(nèi)狹窄的階段支撐血管壁，維持血流通常。即便如此，術(shù)后6個(gè)月內(nèi)仍有20％-30％的血管發(fā)生再狹窄，這個(gè)過(guò)程被稱為“支架內(nèi)再狹窄”。

(3)藥物洗脫支架(drug-eluting stent)植入術(shù)：為進(jìn)一步防止支架內(nèi)再狹窄的發(fā)生，人們發(fā)明了藥物洗脫支架，即用藥物包裹金屬支架，讓藥物在局部緩慢釋放。藥物洗脫支架的使用使支架內(nèi)再狹窄發(fā)生率進(jìn)一步降低。

其中，臨床中用于支架涂層的藥物，最主要的藥理學(xué)作用是通過(guò)抑制血管平滑肌細(xì)胞的增殖，達(dá)到抑制血管再狹窄的目的。目前市場(chǎng)上主要包括以下兩類：

(I)蛋白激酶mTOR的抑制劑：代表藥物是依維莫斯(Everolimus)和西羅莫司(sirolimus)；

(II)微管蛋白穩(wěn)定劑：代表藥物是紫杉醇(Paclitaxel)。

上述這些藥物在細(xì)胞內(nèi)作用的生物學(xué)靶點(diǎn)不同，但都能夠有效抑制血管平滑肌細(xì)胞的增殖功能。然而，雖然藥物洗脫支架植的使用大大降低了支架內(nèi)再狹窄的發(fā)生，但并沒(méi)有完全根除相關(guān)病變的發(fā)生。臨床研究的數(shù)據(jù)顯示仍然有不到10％的血管管腔在應(yīng)用藥物洗脫支架后會(huì)發(fā)生支架內(nèi)再狹窄。而且，由于這種病變是在使用了增殖抑制劑的情況下發(fā)生的，其病理特征與非藥物洗脫支架造成的支架內(nèi)再狹窄并不完全相同。因此，發(fā)現(xiàn)新的干預(yù)治療靶點(diǎn)及新的藥物類型對(duì)進(jìn)一步提高藥物洗脫支架預(yù)防再狹窄的效能具有廣泛的應(yīng)用前景。同時(shí)，對(duì)于那些現(xiàn)有藥物不能有效抑制其生長(zhǎng)的病變，找到新的藥物類型能夠?yàn)榕R床醫(yī)生提供更多的治療選擇。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)，本申請(qǐng)人通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究意外發(fā)現(xiàn)，抑制細(xì)胞內(nèi)的核糖核酸(RNA)聚合酶I可以有效抑制平滑肌細(xì)胞增殖，并且能有效抑制球囊損傷后血管再狹窄的發(fā)生。這些結(jié)果提示，RNA聚合酶I作為預(yù)防血管再狹窄發(fā)生的新的生物學(xué)靶點(diǎn)，可以使用能夠特異性抑制RNA聚合酶I的藥物來(lái)預(yù)防或治療介入治療后血管再狹窄的發(fā)生。

因此，本發(fā)明的第一個(gè)方面，涉及RNA聚合酶I的抑制劑在制備預(yù)防或治療血管損傷后血管再狹窄的藥物或產(chǎn)品中的應(yīng)用；在制備治療血管損傷的藥物或產(chǎn)品中的應(yīng)用；在制備預(yù)防或治療動(dòng)脈粥樣硬化的藥物中的應(yīng)用；在用于制備抑制血管平滑肌細(xì)胞增殖的藥物或產(chǎn)品中的應(yīng)用，或者用于抑制血管內(nèi)膜增生的藥物或產(chǎn)品中的應(yīng)用。

進(jìn)一步的，所述血管損傷為動(dòng)脈粥樣硬化介入治療、移植后動(dòng)脈病引起的血管損傷，例如通過(guò)球囊擴(kuò)張或放入支架引起的血管損傷，或者移植后動(dòng)脈病或肺動(dòng)脈高壓引起的血管損傷。

本發(fā)明的第二個(gè)方面，涉及一種組合物，所述組合物含有RNA聚合酶I的抑制劑，所述組合物用于預(yù)防或治療血管損傷后再狹窄，或者用于預(yù)防或治療血管損傷，或者用于預(yù)防或治療動(dòng)脈粥樣硬化。

進(jìn)一步的，所述血管損傷為動(dòng)脈粥樣硬化介入治療、移植后動(dòng)脈病引起的血管損傷，例如通過(guò)球囊擴(kuò)張或放入支架引起的血管損傷，或者移植后動(dòng)脈病或肺動(dòng)脈高壓引起的血管損傷。

本發(fā)明的第三個(gè)方面，涉及藥物洗脫支架，所述藥物洗脫支架包被有RNA聚合酶I的抑制劑。所述藥物洗脫支架用于預(yù)防或治療血管損傷后再狹窄，或者用于預(yù)防或治療血管損傷，或者用于預(yù)防或治療動(dòng)脈粥樣硬化。

進(jìn)一步的，所述血管損傷為動(dòng)脈粥樣硬化介入治療、移植后動(dòng)脈病引起的血管損傷，例如通過(guò)球囊擴(kuò)張或放入支架引起的血管損傷，或者移植后動(dòng)脈病或肺動(dòng)脈高壓引起的血管損傷。

本發(fā)明的第四個(gè)方面，涉及藥物釋放球囊，所述藥物釋放球囊包被有RNA聚合酶I的抑制劑。所述藥物釋放球囊用于預(yù)防或治療血管損傷后再狹窄，或者用于預(yù)防或治療血管損傷，或者用于預(yù)防或治療動(dòng)脈粥樣硬化。

進(jìn)一步的，所述血管損傷為動(dòng)脈粥樣硬化介入治療、移植后動(dòng)脈病引起的血管損傷，例如通過(guò)球囊擴(kuò)張或放入支架引起的血管損傷，或者移植后動(dòng)脈病或肺動(dòng)脈高壓引起的血管損傷。

本發(fā)明的第四個(gè)方面，涉及一種檢測(cè)RNA聚合酶I表達(dá)水平或功能活性，或者檢測(cè)其抑制劑抑制效率的試劑在制備試劑盒中的應(yīng)用，所述試劑盒用于診斷血管損傷后的再狹窄和血管平滑肌細(xì)胞增生性的血管疾病。

本發(fā)明的第五個(gè)方面，涉及一種試劑盒，所述試劑盒包括檢測(cè)RNA聚合酶I表達(dá)水平或功能活性，或者檢測(cè)其抑制劑抑制效率的試劑，所述試劑盒用于診斷血管損傷后的再狹窄和血管平滑肌細(xì)胞增生性的血管疾病。

本發(fā)明的第六個(gè)方面，涉及一種篩選預(yù)防或者治療血管介入治療后血管再狹窄的藥物的方法，所述方法包括：

(1)將待測(cè)物質(zhì)加入含有RNA聚合酶I的體系中；

(2)測(cè)定所述待測(cè)物質(zhì)是否特異性抑制RNA聚合酶I的表達(dá)，其中，與未加入待測(cè)物質(zhì)的實(shí)驗(yàn)相比，能夠特異性抑制RNA聚合酶I表達(dá)的物質(zhì)作為預(yù)防或者治療血管介入治療后血管再狹窄的候選藥物。

根據(jù)本發(fā)明上述任一方面的應(yīng)用、組合物、藥物洗脫支架、藥物釋放球囊、試劑盒、方法，其中所述的RNA聚合酶I的抑制劑可以是能夠特異抑制RNA聚合酶I表達(dá)的任何物質(zhì)；包括是在細(xì)胞中特異抑制RNA聚合酶I表達(dá)的物質(zhì)，也可以是與RNA聚合酶I具有特異性相互作用。

優(yōu)選的，所述RNA聚合酶I抑制劑可選自RNA聚合酶I的小干擾RNA、硫代核苷或者硫代核苷的類似物或衍生物、放線菌素D或者放線菌素D的類似物或衍生物、CX-5461或者CX-5461的類似物或衍生物、BMH-21或者BMH-21的類似物或衍生物；

進(jìn)一步優(yōu)選的，所述RNA聚合酶I抑制劑為CX-5461。CX-5461是美國(guó)Cylene Pharmaceuticals公司近期開(kāi)發(fā)出來(lái)的新藥，是RNA聚合酶I的特異性抑制劑。目前CX-5461的主要用途是抗腫瘤，正在進(jìn)行臨床研究階段。而申請(qǐng)人在實(shí)驗(yàn)大鼠的球囊損傷后血管再狹窄模型上證實(shí)血管外局部應(yīng)用CX-5461干預(yù)后顯著抑制了血管再狹窄的程度，而對(duì)正常血管壁細(xì)胞沒(méi)有明顯毒性作用。

需要說(shuō)明的是，在本發(fā)明中，所述的血管再狹窄是指在局部血管發(fā)生損傷時(shí)，所作出的導(dǎo)致血管管腔再狹窄的普遍性生物學(xué)反應(yīng)。這里主要指醫(yī)源性損傷引起的血管再狹窄，損傷過(guò)程主要由動(dòng)脈重塑和內(nèi)膜增生組成。

本發(fā)明的有益效果：針對(duì)臨床上出現(xiàn)的應(yīng)用藥物洗脫支架后發(fā)生支架內(nèi)再狹窄的病人，這些血管病變組織很可能對(duì)所用藥物已產(chǎn)生耐受性或抵抗性。RNA聚合酶I的抑制劑其所作用的生物靶點(diǎn)與當(dāng)前使用的兩類涂層藥物不同，因此為臨床醫(yī)生提供了一個(gè)全新的治療選擇。與傳統(tǒng)的治療血管再狹窄的藥物相比，我們發(fā)明的新方法作用于新的生物學(xué)靶點(diǎn)，因此在開(kāi)發(fā)新型藥物洗脫支架的領(lǐng)域中可能具有廣泛的應(yīng)用前景。

具體實(shí)施方式

應(yīng)該指出，以下詳細(xì)說(shuō)明都是例示性的，旨在對(duì)本申請(qǐng)?zhí)峁┻M(jìn)一步的說(shuō)明。除非另有指明，本文使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)具有與本申請(qǐng)所屬技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通常理解的相同含義。

需要注意的是，這里所使用的術(shù)語(yǔ)僅是為了描述具體實(shí)施方式，而非意圖限制根據(jù)本申請(qǐng)的示例性實(shí)施方式。如在這里所使用的，除非上下文另外明確指出，否則單數(shù)形式也意圖包括復(fù)數(shù)形式，此外，還應(yīng)當(dāng)理解的是，當(dāng)在本說(shuō)明書(shū)中使用術(shù)語(yǔ)“包含”或“包括”時(shí)，其指明存在特征、步驟、操作、器件、組件或它們的組合。

需要說(shuō)明的是，本發(fā)明中，所述的血管再狹窄是指在局部血管發(fā)生損傷時(shí)，所作出的導(dǎo)致血管管腔再狹窄的普遍性生物學(xué)反應(yīng)。這里主要指醫(yī)源性損傷引起的血管再狹窄，損傷過(guò)程主要由動(dòng)脈重塑和內(nèi)膜增生組成。

正如背景技術(shù)所介紹的，臨床中用于支架涂層的藥物，最主要的藥理學(xué)作用是通過(guò)抑制血管平滑肌細(xì)胞的增殖，達(dá)到抑制血管再狹窄的目的。然而，雖然藥物洗脫支架植的使用大大降低了支架內(nèi)再狹窄的發(fā)生，但并沒(méi)有完全根除相關(guān)病變的發(fā)生。臨床研究的數(shù)據(jù)顯示仍然有不到10％的血管管腔在應(yīng)用藥物洗脫支架后會(huì)發(fā)生支架內(nèi)再狹窄。而且，由于這種病變是在使用了增殖抑制劑的情況下發(fā)生的，其病理特征與非藥物洗脫支架造成的支架內(nèi)再狹窄并不完全相同。因此，發(fā)現(xiàn)新的干預(yù)治療靶點(diǎn)及新的藥物類型對(duì)進(jìn)一步提高藥物洗脫支架預(yù)防再狹窄的效能具有廣泛的應(yīng)用前景。同時(shí)，對(duì)于那些現(xiàn)有藥物不能有效抑制其生長(zhǎng)的病變，找到新的藥物類型能夠?yàn)榕R床醫(yī)生提供更多的治療選擇。

有鑒于此，本申請(qǐng)的一種典型的實(shí)施方式中，提供一種RNA聚合酶I的抑制劑在制備預(yù)防或治療血管損傷后血管再狹窄的藥物或產(chǎn)品中的應(yīng)用；在制備治療血管損傷的藥物或產(chǎn)品中的應(yīng)用；在制備預(yù)防或治療動(dòng)脈粥樣硬化的藥物中的應(yīng)用；在用于制備抑制血管平滑肌細(xì)胞增殖的藥物或產(chǎn)品中的應(yīng)用，或者用于抑制血管內(nèi)膜增生的藥物或產(chǎn)品中的應(yīng)用。

其中，所述血管損傷為動(dòng)脈粥樣硬化介入治療、移植后動(dòng)脈病引起的血管損傷，例如通過(guò)球囊擴(kuò)張或放入支架引起的血管損傷，或者移植后動(dòng)脈病或肺動(dòng)脈高壓引起的血管損傷。

本發(fā)明的又一典型實(shí)施方式中，涉及一種組合物，所述組合物含有RNA聚合酶I的抑制劑，所述組合物用于預(yù)防或治療血管損傷后再狹窄，或者用于預(yù)防或治療血管損傷，或者用于預(yù)防或治療動(dòng)脈粥樣硬化。

其中，所述血管損傷為動(dòng)脈粥樣硬化介入治療、移植后動(dòng)脈病引起的血管損傷，例如通過(guò)球囊擴(kuò)張或放入支架引起的血管損傷，或者移植后動(dòng)脈病或肺動(dòng)脈高壓引起的血管損傷。

本發(fā)明的又一典型實(shí)施方式中，涉及藥物洗脫支架，所述藥物洗脫支架包被有RNA聚合酶I的抑制劑。所述藥物洗脫支架用于預(yù)防或治療血管損傷后再狹窄，或者用于預(yù)防或治療血管損傷，或者用于預(yù)防或治療動(dòng)脈粥樣硬化。

其中，所述血管損傷為動(dòng)脈粥樣硬化介入治療、移植后動(dòng)脈病引起的血管損傷，例如通過(guò)球囊擴(kuò)張或放入支架引起的血管損傷，或者移植后動(dòng)脈病或肺動(dòng)脈高壓引起的血管損傷。

本發(fā)明的又一典型實(shí)施方式中，涉及藥物釋放球囊，所述藥物釋放球囊包被有RNA聚合酶I的抑制劑。所述藥物釋放球囊用于預(yù)防或治療血管損傷后再狹窄，或者用于預(yù)防或治療血管損傷，或者用于預(yù)防或治療動(dòng)脈粥樣硬化。

其中，所述血管損傷為動(dòng)脈粥樣硬化介入治療、移植后動(dòng)脈病引起的血管損傷，例如通過(guò)球囊擴(kuò)張或放入支架引起的血管損傷，或者移植后動(dòng)脈病或肺動(dòng)脈高壓引起的血管損傷。

本發(fā)明的又一典型實(shí)施方式中，涉及一種檢測(cè)RNA聚合酶I表達(dá)水平或功能活性，或者檢測(cè)其抑制劑抑制效率的試劑在制備試劑盒中的應(yīng)用，所述試劑盒用于診斷血管損傷后的再狹窄和血管平滑肌細(xì)胞增生性的血管疾病。

本發(fā)明的又一典型實(shí)施方式中，涉及一種試劑盒，所述試劑盒包括檢測(cè)RNA聚合酶I表達(dá)水平或功能活性，或者檢測(cè)其抑制劑抑制效率的試劑，所述試劑盒用于診斷血管損傷后的再狹窄和血管平滑肌細(xì)胞增生性的血管疾病。

本發(fā)明的又一典型實(shí)施方式中，涉及一種篩選預(yù)防或者治療血管介入治療后血管再狹窄的藥物的方法，所述方法包括：

(1)將待測(cè)物質(zhì)加入含有RNA聚合酶I的體系中；

(2)測(cè)定所述待測(cè)物質(zhì)是否特異性抑制RNA聚合酶I的表達(dá)，其中，與未加入待測(cè)物質(zhì)的實(shí)驗(yàn)相比，能夠特異性抑制RNA聚合酶I表達(dá)的物質(zhì)作為預(yù)防或者治療血管介入治療后血管再狹窄的候選藥物。

根據(jù)本發(fā)明上述任一方面的應(yīng)用、組合物、藥物洗脫支架、藥物釋放球囊、試劑盒、方法，其中所述的RNA聚合酶I的抑制劑可以是能夠特異抑制RNA聚合酶I表達(dá)的任何物質(zhì)；包括是在細(xì)胞中特異抑制RNA聚合酶I表達(dá)的物質(zhì)，也可以是與RNA聚合酶I具有特異性相互作用的物質(zhì)。

本發(fā)明的又一典型實(shí)施方式中，所述RNA聚合酶I抑制劑可選自RNA聚合酶I的小干擾RNA、硫代核苷或者硫代核苷的類似物或衍生物、放線菌素D或者放線菌素D的類似物或衍生物、CX-5461或者CX-5461的類似物或衍生物、BMH-21或者BMH-21的類似物或衍生物。

本發(fā)明的又一典型實(shí)施方式中，所述RNA聚合酶I抑制劑為CX-5461。CX-5461是美國(guó)Cylene Pharmaceuticals公司近期開(kāi)發(fā)出來(lái)的新藥，是RNA聚合酶I的特異性抑制劑。目前CX-5461的主要用途是抗腫瘤，正在進(jìn)行臨床研究階段。而申請(qǐng)人在實(shí)驗(yàn)大鼠的球囊損傷后血管再狹窄模型上證實(shí)血管外局部應(yīng)用CX-5461干預(yù)后顯著抑制了血管再狹窄的程度，而對(duì)正常血管壁細(xì)胞沒(méi)有明顯毒性作用。

為了使得本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠更加清楚地了解本申請(qǐng)的技術(shù)方案，以下將結(jié)合具體的實(shí)施例詳細(xì)說(shuō)明本申請(qǐng)的技術(shù)方案。

實(shí)施例1大鼠頸總動(dòng)脈球囊損傷術(shù)

1.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)過(guò)程

(1)材料與設(shè)備：健康雄性Wistar大鼠，眼科剪，眼科鑷，手術(shù)剪，輔料鑷，手術(shù)縫合線，縫合針，止血鉗，持針器，1.25mm球囊(Medtronic公司)，大鼠手術(shù)臺(tái)，棉球，紗布?jí)K，注射器，碘酒棉球，酒精棉球。

(2)術(shù)前準(zhǔn)備1)：手術(shù)器械和敷料：均經(jīng)過(guò)121℃，30min高壓滅菌，球囊采取75％酒精浸泡消毒。2)麻醉用藥：麻醉選擇10％水合氯醛，劑量為0.35ml/100g體重，給藥途徑為腹腔注射。3)自制拉鉤：將訂書(shū)釘一端和橡皮筋鉤在一起并固定，訂書(shū)釘另一端做45度彎曲，用于鉤掛組織，將橡皮筋另一端以圖釘固定在手術(shù)臺(tái)上，可以任意調(diào)節(jié)圖釘位置而改變牽拉的力度。

(3).手術(shù)過(guò)程1)把大鼠麻醉后固定在手術(shù)臺(tái)上，根據(jù)頸動(dòng)脈皮下走行剃毛，縱向切開(kāi)皮膚。2)用彎止血鉗鈍性分離組織，并以止血鉗拉開(kāi)皮層和基層，使頸總動(dòng)脈以及頸內(nèi)外動(dòng)脈分叉處充分暴露，改用顯微鑷分離，分離長(zhǎng)度大約1.5-2cm，分離時(shí)動(dòng)作要輕柔，不得用刀剪等銳利器械，以防損傷血管和神經(jīng)，特別在分離神經(jīng)時(shí)動(dòng)作不僅要輕，而且不能大幅度牽拉，以避免對(duì)大鼠產(chǎn)生較大的刺激。3)結(jié)扎頸外動(dòng)脈：選擇4-0號(hào)手術(shù)縫合線做結(jié)扎。先在頸外動(dòng)脈近心端穿一根手術(shù)線備用。結(jié)扎頸外動(dòng)脈的遠(yuǎn)心端。活結(jié)結(jié)扎頸內(nèi)動(dòng)脈。4)提起頸總動(dòng)脈近心端的備線，向心方向輕輕牽拉，以阻斷動(dòng)脈血流為止，然后用止血鉗夾住備線兩端，以止血鉗的重力固定備線位置，使股動(dòng)脈血流保持被阻斷狀態(tài)。5)球囊選擇直徑為1.25mm，長(zhǎng)度為10mm。6)提起頸外動(dòng)脈遠(yuǎn)心端打結(jié)的縫合線，用眼科剪在兩根結(jié)扎線之間，向心方向剪一“V”型口，注意不要把頸外動(dòng)脈剪斷，剪開(kāi)部分不要超過(guò)頸外動(dòng)脈直徑的1/2。7)“V”型口剪好后，迅速將球囊尖端插入頸外動(dòng)脈，將提前穿好的近心端備線以活結(jié)固定球囊和頸外動(dòng)脈，然后將頸總動(dòng)脈結(jié)扎線略放開(kāi)，稍稍恢復(fù)血流。再以左手提起頸外動(dòng)脈遠(yuǎn)心端的結(jié)扎線，右手稍稍用力向前推進(jìn)球囊進(jìn)入頸總動(dòng)脈，遇阻力則稍稍反向牽拉，重新向心插入，直至球囊進(jìn)入約3cm。8)向注入氣體，壓力為8kpa，使球囊膨大，然后向后牽拉球囊末端，大約拉出1cm左右，減小壓力放出氣體，再重新向心插入球囊，再次注入氣體，重復(fù)上述步驟，如此反復(fù)2-3次。9)最后把球囊中的氣體放出，然后緩慢拉出球囊，并及時(shí)拉緊近心端的備線，結(jié)扎頸外動(dòng)脈近心端。解開(kāi)頸總動(dòng)脈、頸內(nèi)動(dòng)脈結(jié)扎線，恢復(fù)血流。10)剪斷結(jié)扎點(diǎn)多余的縫合線，用敷料鑷輕輕使血管，肌肉恢復(fù)原位，縫合皮層。

2.血管周圍局部緩釋治療：

(1)Pluronic F127凝膠制備：稱取5克Pluronic F127加入20毫升無(wú)菌的生理鹽水中，4℃攪拌過(guò)夜，配置成25％溶液。

(2)配置cx-5461(分子量513.6)儲(chǔ)存液：秤取5毫克藥物加入到3.5毫升二甲基黃砜(DMSO)中，37℃超聲水浴振蕩過(guò)夜，得2.8毫摩爾(mM)濃度的CX-5461儲(chǔ)存溶液。儲(chǔ)存溶液分裝后可于零下80℃冷凍保存6個(gè)月。

(3)配置藥物緩釋凝膠：將0.25微升和5微升CX-5461儲(chǔ)存液加入到1毫升冷的Pluronic F127凝膠中混勻，分別得到含0.7微摩爾(mM)和14微摩爾(mM)藥物濃度的凝膠溶液。Pluronic F127凝膠在4℃是呈粘稠溶液狀態(tài)，體溫條件下凝固成固體凝膠。

(4)手術(shù)后局部施用凝膠：球囊損傷手術(shù)后，將200微升含有不同藥物濃度的凝膠均勻地滴注到暴露的血管表面和周圍，待凝膠凝固后進(jìn)行皮膚縫合。用含有5微升/毫升DMSO的凝膠作為對(duì)照試驗(yàn)組。

3.血管內(nèi)膜病變的測(cè)量

手術(shù)后14天將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物注射過(guò)量麻藥安樂(lè)死，分離并取出頸動(dòng)脈，在生理鹽水中沖洗干凈后，用4％多聚甲醛浸泡固定，經(jīng)脫水后包埋于石蠟塊中進(jìn)行組織病理切片。切片用蘇木素-伊紅染色。形態(tài)學(xué)測(cè)量使用普通光學(xué)顯微鏡觀察，隨機(jī)選擇不同部位照相，圖像文件用Image-Pro Plus 5.0軟件(Media Cybernetics公司)進(jìn)行分析。管腔狹窄病變程度用兩個(gè)指標(biāo)來(lái)衡量：內(nèi)膜總面積和內(nèi)膜面積與中膜面積的比值。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)：計(jì)算平均值加減標(biāo)準(zhǔn)差，然后用單因素方差分析比較各組間的差異。統(tǒng)計(jì)軟件使用Graphpad Prism。

4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果及討論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。由結(jié)果可見(jiàn)，局部應(yīng)用RNA聚合酶I抑制劑CX-5461治療后，球囊損傷造成的血管內(nèi)膜增生程度明顯受到抑制，而且這種作用呈藥物劑量依賴性。損傷后血管內(nèi)膜增生，占據(jù)管腔位置，是導(dǎo)致血管再狹窄發(fā)生的直接原因。目前臨床使用的藥物涂層支架都是利用藥物抑制內(nèi)膜增生達(dá)到防止再狹窄發(fā)生的目的。我們的實(shí)驗(yàn)證明CX-5461能夠有效抑制內(nèi)膜增生及血管平滑肌細(xì)胞增生，表明CX-5461有預(yù)防血管再狹窄發(fā)生的藥理作用。

表1：局部應(yīng)用CX-5461治療對(duì)大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷后內(nèi)膜增生程度的影響

每組動(dòng)物數(shù)5-8只。*表示統(tǒng)計(jì)學(xué)分析有顯著性意義。

以上所述僅為本申請(qǐng)的優(yōu)選實(shí)施例而已，并不用于限制本申請(qǐng)，對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，本申請(qǐng)可以有各種更改和變化。凡在本申請(qǐng)的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本申請(qǐng)的保護(hù)范圍之內(nèi)。