本發(fā)明涉及一種注射針的制備方法，尤其是涉及一種用于睪丸輸出管注射的注射針制備方法。
背景技術：
轉基因小鼠已是醫(yī)學和生命科學研究重要的研究工具。原核顯微注射法制備轉基因小鼠是傳統(tǒng)經(jīng)典方法，但是其操作比較繁瑣，技術要求高。精子介導法制備轉基因小鼠是一種新思路，該方法成本低、操作簡便、周期短。睪丸注射是精子介導制備轉基因小鼠的重要方法。目前，利用該方法已成功制備了小鼠、大鼠及兔等實驗動物。通過睪丸注射法，可以有效地解決當前制備轉基因小鼠操作復雜、成本高和效率低等問題，將會推動轉基因動物在人類疾病建模的應用。另外，睪丸注射也是曲細精管內干細胞移植的重要方法，為研究精子發(fā)生過程和男性不育發(fā)治療提供了新思路。
睪丸輸出管注射是睪丸注射的重要方法。該注射方法是將外源基因通過游離的、韌性強的輸出小管注射到睪丸曲細精管內，進而轉染生精細胞建立轉基因精子。該注射方法操作簡便可靠，而且不需要昂貴的儀器就能完成，只需要玻璃針就可以完成注射。注射針的質量對注射效率影響非常大。好的注射針不但能提高注射效率，還能減少輸出管的損傷，提高制備轉基因動物的成功率。所以，注射針的制備非常重要，但是目前還沒有成熟的制備睪丸輸出管注射針的方法。
技術實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術的不足，提供一種制備方法簡單、獨特，而且用本方法制成的注射針非常容易插入睪丸輸出管，樣品滲漏少，提高注射效率，還能減少輸出管的損傷，提高制備轉基因動物的成功率、減少或避免動物死亡的一種用于睪丸輸出管注射的注射針制備方法。
本發(fā)明通過如下方式實現(xiàn)：
一種用于睪丸輸出管注射的注射針制備方法，其特征在于：該方法為將外徑為1mm的薄玻璃管，首先用sutterp-1000拉針儀拉制成內徑為1-3um的注射針，再用mf-900煅針儀將針尖在5um處切斷，用eg-400磨針儀磨制針尖角度為30度，最后用mf-900煅針儀將斜面拉尖即可；
所述薄玻璃管是外徑為1mm，內徑為0.58mm，長10cm，內徑含玻璃絲的玻璃管；
所述拉針儀具體參數(shù)如下：heat：ramp+30；pull：10；velocit：120；time：0；pressure：200；
所述針尖的磨制為將針內徑5μm部位與玻璃珠剛好接觸，踩下腳控開關加熱，當看到玻璃針與玻璃珠剛好粘在一起時，松開腳控開關，玻璃珠即可斷開玻璃管的尖端，得到內徑在5μm的平口針，將得到的平口針再用eg-400磨針儀將針尖磨制成30度的斜面，將注射針固定在持針器上，并調整持針器與磨石的夾角為30度，磨削速度選擇為1000r/min，顯微鏡下仔細觀察，直到磨制出30度斜面，且邊緣整齊；
所述針尖的拉尖為用mf-900將注射針頭的斜面做成1-2μm的尖頭，將上述注射針安裝在煅針儀上，調節(jié)針尖位于玻璃珠上方，踩下腳控開關，當發(fā)現(xiàn)針尖端有粘在玻璃珠的跡象時，快速拉開玻璃針，并松開腳控開關。
本發(fā)明具有如下效果：
1)方法簡單獨特：本發(fā)明提供的方法為該方法為將外徑為1mm的薄玻璃管，首先用sutterp-1000拉針儀拉制成內徑為1-3um的注射針，再用mf-900煅針儀將針尖在5um處切斷，用eg-400磨針儀磨制針尖角度為30度，最后用mf-900煅針儀將斜面拉尖即可。
2)提高注射成功率高，進而減少或避免動物的死亡：動物的睪丸輸出管有一定的韌性和游離性，普通注射針需要反復穿刺才能刺入睪丸輸出管，對輸出管造成嚴重損傷，導致樣品滲漏，嚴重時會導致注射失敗和動物死亡。
本技術：
提供的方法將針尖磨制成30度的斜面，并將斜面拉尖，可以一次性刺入睪丸輸出管，大大減少對輸出管的損傷和樣品滲漏，提高注射成功率高，進而減少或避免動物的死亡。
3)制備方法簡單、成本低，有利于商業(yè)化生產(chǎn)：目前，國內外還未見有同類產(chǎn)品的生產(chǎn)制造。本方法不需要特殊材料，而且原材料玻璃管來源方便，只需要幾分錢，成本低。另外，本方法使用儀器制備注射針，并提供了儀器的所有制備參數(shù)，保證了制備針的一致性，有利于商業(yè)化生產(chǎn)。
具體實施方式
一種用于睪丸輸出管注射的注射針制備方法，該方法為如下步驟：
a.玻璃管的選擇：選擇外徑為1mm，內徑為0.58mm，長10cm的薄玻璃管，玻璃管內徑應含細玻璃絲，可以通過毛吸作用使液體充滿注射針管。玻璃管應注意防塵，避免用手直接觸摸玻璃管，也不要用帶有滑石粉的手套操作玻璃管。
b.玻璃管的拉制：用sutterp-1000拉針儀將上述玻璃管拉制成內徑為1-3um的注射針。拉針儀具體參數(shù)如下：heat：ramp+30；pull：10；velocit：120；time：0；pressure：200。
c.針尖的磨制：先用mf-900煅針儀將針尖在5um處切斷。將針內徑5μm部位與玻璃珠剛好接觸。踩下腳控開關加熱，當看到玻璃針與玻璃珠剛好粘在一起時，松開腳控開光，玻璃珠即可斷開玻璃管的尖端，得到內徑在5μm的平口針。將得到的平口針再用eg-400磨針儀將針尖磨制成30度的斜面。將注射針固定在持針器上，并調整持針器與磨石的夾角為30度。磨削速度選擇為1000r/min,太快或太慢均不利于針的制備。顯微鏡下仔細觀察，直到磨制出30度斜面，且邊緣整齊。
d.針尖的拉尖：用mf-900將注射針頭的斜面做成1-2μm的尖頭。將上述注射針安裝在煅針儀上，調節(jié)針尖位于玻璃珠上方，踩下腳控開關，當發(fā)現(xiàn)針尖端有粘在玻璃珠的跡象時，快速拉開玻璃針，并松開腳控開關。拉尖的針非常鋒利，有利于刺入游離的輸出管。
本發(fā)明提供的注射針應為一次產(chǎn)品，而且注射針如果有玻璃碎片，應淘汰。在睪丸輸出管注射時，應平行進針，緩慢增加注射壓力，使注射樣品逐漸充滿曲精細管。用本方法制成的注射針非常容易插入睪丸輸出管，樣品滲漏少，注射成功率高，而且可以大大減少對輸出管的損失，減少或避免動物的死亡。