本發(fā)明涉及藥物領域，特別是涉及一種kindlin-2蛋白作為靶點在制備治療腎炎的藥物中的應用。

背景技術：

腎炎是一種常見的腎臟病，主要發(fā)生于雙側腎臟腎小球，常表現(xiàn)為水腫、蛋白尿、血尿、腎功能下降等癥狀。隨著我國進入老齡化社會，腎病患病人群以驚人的速度在上升，發(fā)病率已高達10.8％左右。長期過勞疲憊、環(huán)境污染、藥物濫用等因素都會導致腎臟不同程度的受損，甚至發(fā)展從慢性腎臟病。而慢性腎臟病一旦發(fā)生后，將不容易治愈，長期服用藥物治療還可能會進一步加重腎臟的負擔。因此，非常迫切的需要研發(fā)新型的治療腎炎藥物。

然而，目前臨床上仍然缺乏有效的治療腎炎的藥物及治療方法。

技術實現(xiàn)要素：

基于此，有必要提供一種kindlin-2蛋白作為靶點在制備治療腎炎的藥物中的應用。

kindlin-2蛋白在制備治療腎炎的藥物中的應用，所述藥物靶向kindlin-2蛋白。

在一個實施方式中，所述藥物靶向腎小球中的kindlin-2蛋白。

在一個實施方式中，所述藥物能夠調節(jié)kindlin-2蛋白的表達量。

在一個實施方式中，所述藥物能夠提高kindlin-2蛋白的表達量。

在一個實施方式中，所述藥物能夠提高腎小球中的kindlin-2蛋白的表達量。

kindlin-2蛋白在制備治療慢性腎小球腎炎的藥物中的應用，所述藥物靶向kindlin-2蛋白。

一種治療腎炎的藥物，所述藥物能夠提高kindlin-2蛋白的表達量。

一種治療腎炎的藥物組合物，包括kindlin-2蛋白促進劑以及靶向劑，所述kindlin-2蛋白促進劑負載于所述靶向劑上，所述靶向劑靶向kindlin-2蛋白。

在一個實施方式中，所述靶向劑選自aav病毒、mirna和聚合物膠束中的至少一種。

kindlin-2蛋白在制備腎炎的檢測試劑中的應用，所述檢測試劑以kindlin-2蛋白作為腎炎的生物標記物。

實驗結果表明，將kindlin-2基因特異性敲除后，小鼠的尿蛋白含量顯著升高而血漿蛋白含量顯著降低，且腎臟腎小球的結構嚴重破壞，有明顯的腎小球硬化及間質纖維化。本研究的實驗結果提示kindlin-2蛋白可以作為治療腎炎的藥物的一個新靶點。

附圖說明

圖1為實施例1中實驗組和對照組小鼠的生長曲線圖；

圖2為實施例1中兩個月齡的實驗組和對照組小鼠的外觀；

圖3為實施例2中實驗組和對照組的小鼠的尿液中的尿蛋白的sds-page電泳結果圖；

圖4為實施例2中實驗組和對照組的小鼠的血液中的血漿蛋白的sds-page電泳結果圖；

圖5為實施例3中實驗組和對照組的白蛋白/肌酸酐比值的統(tǒng)計結果圖；

圖6為實施例3中實驗組和對照組的血漿肌酐含量的統(tǒng)計結果圖；

圖7為實施例3中8周齡的實驗組和對照組的小鼠腎臟的外觀；

圖8為實施例4中實驗組和對照組小鼠腎臟的h&e染色的結果圖；

圖9為實施例4中實驗組和對照組小鼠腎臟的pas染色的結果圖；

圖10為實施例4中實驗組和對照組小鼠腎臟的trichrome染色的結果圖；

圖11為實施例4中實驗組和對照組小鼠的腎小球纖維化的統(tǒng)計結果圖；

圖12為實施例4中實驗組和對照組小鼠的腎小球硬化的統(tǒng)計結果圖。

具體實施方式

為使本發(fā)明的上述目的、特征和優(yōu)點能夠更加明顯易懂，下面結合具體實施例及附圖對本發(fā)明的具體實施方式做詳細的說明。在下面的描述中闡述了很多具體細節(jié)以便于充分理解本發(fā)明。但是本發(fā)明能夠以很多不同于在此描述的其它方式來實施，本領域技術人員可以在不違背本發(fā)明內涵的情況下做類似改進，因此本發(fā)明不受下面公開的具體實施的限制。

一實施方式的kindlin-2蛋白在制備治療腎炎的藥物中的應用，其中，該藥物靶向kindlin-2蛋白。

kindlin-2蛋白是一種粘著斑蛋白，可參與整合素的激活，有研究表明其在肌肉細胞的延長上扮演重要角色。然而關于kindlin-2蛋白作為靶點治療的研究較少，目前尚未見其在腎炎方面的研究報道。而本發(fā)明的發(fā)明人經(jīng)實驗研究后意外發(fā)現(xiàn)kindlin-2蛋白的表達與腎炎存在密切的相關性。kindlin-2基因特異性敲除后，小鼠的尿蛋白含量顯著升高而血漿蛋白含量顯著降低，且腎臟腎小球的結構嚴重破壞，有明顯的腎小球硬化及間質纖維化。本研究的實驗結果為治療腎炎的藥物提供了一個新的靶點。藥物通過靶向kindlin-2蛋白，從而調劑體內kindlin-2蛋白的表達量，協(xié)助腎炎治療。

具體的，本文中所說的“治療腎炎的藥物”可以是為治療已經(jīng)確診為腎炎的病人制備的藥物，也可以是為預防腎炎而制備的藥物。

在一個實施方式的kindlin-2蛋白在制備治療腎炎的藥物中的應用中，該藥物靶向腎小球中的kindlin-2蛋白。腎小球與腎炎具有密切的關聯(lián)，通過藥物靶向腎小球中的kindlin-2蛋白，能夠進一步的增強藥物的特異性，減少副作用。

在一個實施方式的kindlin-2蛋白在制備治療腎炎的藥物中的應用中，該藥物能夠調節(jié)kindlin-2蛋白的表達量。以kindlin-2作為靶點，針對不同的患者的病情，調節(jié)體內的kindlin-2蛋白的表達量，從而使得體內的kindlin-2蛋白表達量分泌正常。

具體的，在kindlin-2蛋白在制備治療腎炎的藥物中的應用中，該藥物能夠提高kindlin-2蛋白的表達量。研究結果表明，kindlin-2基因特異性敲除后的小鼠尿蛋白含量顯著升高而血漿蛋白含量顯著降低，且腎臟腎小球的結構嚴重破壞，有明顯的腎小球硬化及間質纖維化。提示當kindlin-2蛋白分泌量降低時，腎小球的功能受損，其選擇性過濾性能減弱，從而導致尿蛋白含量顯著升高而血漿蛋白含量顯著降低等腎炎的癥狀。因此可通過藥物提高kindlin-2蛋白的表達量來提高腎小球的選擇性過濾性能，預防腎小球硬化及間質纖維化。

進一步的，在kindlin-2蛋白在制備治療腎炎的藥物中的應用中，該藥物能夠提高腎小球中的kindlin-2蛋白的表達量。通過藥物提高腎小球中的kindlin-2蛋白的表達量，增強藥物的特異性，進而提高腎小球功能，進一步預防或治療腎炎。

一實施方式的kindlin-2蛋白在制備治療慢性腎小球腎炎的藥物中的應用，其中，該藥物靶向kindlin-2蛋白。經(jīng)實驗研究后發(fā)現(xiàn)kindlin-2基因特異性敲除后，小鼠表現(xiàn)尿蛋白含量顯著升高而血漿蛋白含量顯著降低等明顯慢性腎小球腎炎的癥狀，提示kindlin-2蛋白可以作為治療慢性腎小球腎炎的藥物的一個新的靶點。

進一步的，kindlin-2蛋白在制備治療慢性腎小球腎炎的藥物中的應用中，該藥物可以靶向腎小球中的kindlin-2蛋白。

在一個實施方式中，該藥物具體為可以靶向腎小球足細胞中的kindlin-2蛋白。

在一個實施方式中，該藥物能夠提高kindlin-2蛋白的表達量。具體為能夠提高慢性腎小球中的kindlin-2蛋白的表達量。

綜上，研究結果表明，kindlin-2蛋白的表達量與腎炎存在密切的相關性。kindlin-2蛋白可以作為制備治療腎炎的藥物的一個新靶點，在制備預防或治療腎炎特別是慢性腎小球腎炎的藥物中的應用中具有良好的應用前景。

此外，本申請還提供一實施方式的治療腎炎的藥物，其中，該藥物能夠提高kindlin-2蛋白的表達量。

在一個實施方式中，該治療腎炎的藥物靶向腎小球中的kindlin-2蛋白，并能夠提高腎小球中的kindlin-2蛋白的表達量。

上述藥物以kindlin-2蛋白作為治療靶點，通過提高kindlin-2蛋白的表達量從而治療腎炎。研究結果顯示，當kindlin-2基因特異性敲除后，kindlin-2蛋白表達量下降，小鼠的尿蛋白含量顯著升高而血漿蛋白含量顯著降低，且腎臟腎小球的結構嚴重破壞，有明顯的腎小球硬化及間質纖維化。因此可通過藥物提高kindlin-2蛋白的表達量來預防腎小球硬化及間質纖維化，提高腎小球的功能，從而治療腎炎。

進一步的，本申請還提供一實施方式治療腎炎的藥物組合物，該組合物包括kindlin-2蛋白促進劑以及靶向劑，kindlin-2蛋白促進劑負載于靶向劑上，靶向劑靶向kindlin-2蛋白。

其中，kindlin-2蛋白促進劑為能夠提高kindlin-2蛋白表達量的藥物或試劑，靶向劑為能夠靶向kindlin-2蛋白。kindlin-2蛋白促進劑可以通過化學鍵連接或包覆等物理方式負載于靶向劑上。

在一個實施方式中，靶向劑可以選自aav病毒(adeno-associatedvirus，腺相關病毒)、mirna(microrna)和聚合物膠束中的至少一種。

具體的，aav病毒、mirna或聚合物膠束作為載體將kindlin-2蛋白促進劑攜帶至體內特定的部位，kindlin-2蛋白促進劑釋放促進體內kindlin-2蛋白的表達，從而提高kindlin-2蛋白的表達量，預防腎小球硬化及間質纖維化，提高腎小球的功能，從而預防或治療腎炎。

在一個實施方式中，aav病毒上還可以攜帶表達kindlin-2蛋白的基因，從而在體內表達kindlin-2蛋白，提高kindlin-2蛋白的表達量。

上述治療腎炎的藥物組合物，包括kindlin-2蛋白促進劑以及靶向劑，兩者協(xié)同作用，提高kindlin-2蛋白的表達量，進而預防或治療腎炎。

此外，本申請還提供一實施方式的kindlin-2蛋白在制備腎炎的檢測試劑中的應用，其中，該檢測試劑以kindlin-2蛋白作為腎炎的生物標記物。

通過研究表明，kindlin-2蛋白的表達量與腎炎存在密切的相關性，因此kindlin-2蛋白可作為腎炎的生物標記物。具體地，檢測試劑可以通過kindlin-2蛋白的表達量來判定腎炎的病情。

綜上，經(jīng)實驗研究后意外發(fā)現(xiàn)kindlin-2蛋白與腎炎存在密切的相關性。基因特異性敲除后，kindlin-2蛋白表達量下降，小鼠的尿蛋白含量顯著升高而血漿蛋白含量顯著降低，且腎臟腎小球的結構嚴重破壞，有明顯的腎小球硬化及間質纖維化。實驗結果提示kindlin-2蛋白可以作為治療腎炎的一個新靶點。kindlin-2蛋白在制備治療腎炎的藥物或者制備腎炎的檢測試劑中具有良好的應用前景。

以下為具體實施例。

實施例中采用藥物和儀器如非特別說明，均為本領域常規(guī)選擇。實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件，例如文獻、書本中所述的條件或者試劑盒生產廠家推薦的方法實現(xiàn)。

未特別說明，以下實施例中wt表示野生型對照小鼠，cko表示腎小球足細胞的kindlin-2特異性敲除后的小鼠。實驗用小鼠由美國拉什大學提供，均為雄性鼠。

實施例1

敲除kindlin-2基因對小鼠生長曲線的影響

采用基因敲除技術特異性敲除小鼠腎小球足細胞的kindlin-2，敲除后提取相應組織的總rna，然后進行實時qpcr定量分析，通過測定相應組織中總rna與甘油醛-3-磷酸脫氫酶(gapdh)的比值判斷基因敲除是否為特異性的。結果顯示cko小鼠的kindlin-2的敲除是特異的，僅限于腎臟，其他組織例如肝臟、胰島、心臟、肺等與正常組無明顯差異。實驗組和對照組均從小鼠出生后一周開始量體重，每組12只鼠，每周一次，連續(xù)稱量8周，作圖，結果如圖1，動物生長曲線顯示cko小鼠生長比對照組緩慢。兩個月齡的對照小鼠(wt)和kindlin-2特異敲除小鼠(cko)的外觀如圖2，顯示cko小鼠的體型明顯變小。

以上結果表明，腎小球足細胞中的kindlin-2對小鼠的生長具有重要的影響。

實施例2

敲除kindlin-2基因對小鼠尿蛋白以及血漿蛋白含量的影響

小鼠尿蛋白含量實驗

分別收集實驗組和對照組的小鼠的尿液中的尿蛋白，取相同體積進行上樣并進行sds-page蛋白質電泳實驗，得到的電泳結果如圖3所示，其中圖3中從左往右的電泳樣品如下，第1泳道為laoder(蛋白marker)，第2泳道為bsa樣品(牛血清白蛋白，作為實驗參照品)，第3泳道為1周后wt型的小鼠的尿蛋白，第4泳道為1周后cko型的小鼠的尿蛋白，第5泳道為2周后wt型的小鼠的尿蛋白，第6泳道為2周后cko型的小鼠的尿蛋白，第7泳道為1個月后wt型的小鼠的尿蛋白，第8泳道為1個月后cko型的小鼠的尿蛋白，第9泳道為2個月后wt型的小鼠的尿蛋白，第10泳道為2個月后cko型的小鼠的尿蛋白。從圖3中可以看出，敲除kindlin-2基因后，隨著時間的推移，cko小鼠尿蛋白的含量顯著升高。

小鼠血漿蛋白含量實驗

分別收集實驗組和對照組的小鼠的血液中的血漿蛋白，取相同體積進行上樣并進行sds-page蛋白質電泳實驗，得到的電泳結果如圖4所示，其中圖4中從左往右的電泳樣品如下，第1泳道為laoder(蛋白marker)，第2泳道為bsa樣品(牛血清白蛋白，作為實驗參照品)，第3泳道為1周后wt型的小鼠的血漿蛋白，第4泳道為1周后cko型的小鼠的血漿蛋白，第5泳道為2周后wt型的小鼠的血漿蛋白，第6泳道為2周后cko型的小鼠的血漿蛋白，第7泳道為1個月后wt型的小鼠的血漿蛋白，第8泳道為1個月后cko型的小鼠的血漿蛋白，第9泳道為2個月后wt型的小鼠的血漿蛋白，第10泳道為2個月后cko型的小鼠的血漿蛋白。從圖4中可以看出，敲除kindlin-2基因后，隨著時間的推移，cko小鼠尿蛋白的含量顯著降低。

以上結果表明，kindlin-2基因特異性敲除后，小鼠的尿蛋白含量顯著升高而血漿蛋白含量顯著降低，提示kindlin-2蛋白與腎炎存在密切的相關性。

實施例3

進一步采用elisa檢測試劑盒分別對不同時期的實驗組和對照組的小鼠的尿白蛋白、肌酸酐和血漿肌酐進行檢測，以白蛋白/肌酸酐作為縱坐標結果如圖5所示，以血漿肌酐作為縱坐標結果如圖6所示。以上結果可以看出在不同時間點，cko小鼠尿白蛋白與肌酸酐的比值明顯升高，cko小鼠的血漿肌酐含量也顯著增加。分別取8周齡的實驗組和對照組的小鼠的腎臟，結果如圖7所示，cko小鼠的腎臟顏色明顯變淺，變小，形狀不規(guī)則。

以上結果進一步表明，kindlin-2基因特異性敲除后，cko小鼠尿白蛋白與肌酸酐的比值明顯升高，血漿肌酐含量也顯著增加，腎臟出現(xiàn)損傷，提示kindlin-2蛋白的缺乏與腎炎存在密切的相關性。

實施例4

將兩個月齡的實驗組和對照組的小鼠腎臟石蠟包埋切片，分別用h&e染色、pas染色以及trichrome染色，并在激光共聚焦顯微鏡下觀察。

h&e染色結果如圖8所示，其中圖8中(a)圖表示1周wt型小鼠的染色結果，(b)圖表示1周cko型小鼠的染色結果，(c)圖表示2周wt型小鼠的染色結果，(d)圖表示2周cko型小鼠的染色結果，(e)圖表示4周wt型小鼠的染色結果，(f)圖表示4周cko型小鼠的染色結果，(g)圖表示8周wt型小鼠的染色結果，(h)圖表示8周cko型小鼠的染色結果。

pas染色結果如圖9所示，其中圖9中(a)圖表示1周wt型小鼠的染色結果，(b)圖表示1周cko型小鼠的染色結果，(c)圖表示2周wt型小鼠的染色結果，(d)圖表示2周cko型小鼠的染色結果，(e)圖表示4周wt型小鼠的染色結果，(f)圖表示4周cko型小鼠的染色結果，(g)圖表示8周wt型小鼠的染色結果，(h)圖表示8周cko型小鼠的染色結果。

trichrome染色結果如圖10所示，其中圖10中(a)圖表示1周wt型小鼠的染色結果，(b)圖表示1周cko型小鼠的染色結果，(c)圖表示2周wt型小鼠的染色結果，(d)圖表示2周cko型小鼠的染色結果，(e)圖表示4周wt型小鼠的染色結果，(f)圖表示4周cko型小鼠的染色結果，(g)圖表示8周wt型小鼠的染色結果，(h)圖表示8周cko型小鼠的染色結果。

進一步的，分別對2周、4周、8周的實驗組和對照組小鼠的腎小球纖維化和硬化得分進行統(tǒng)計，結果如分別如圖11和圖12，得分越高表示腎小球纖維化或硬化越嚴重，wt型小鼠幾乎無腎小球纖維化和硬化發(fā)生，而kindlin-2敲除后小鼠(cko型小鼠)腎小球纖維化和硬化較嚴重。

以上結果表明，隨著時間的推移，kindlin-2敲除后小鼠的腎臟腎小球結構嚴重破壞，有明顯的腎小球硬化及間質纖維化。

以上所述實施例僅表達了本發(fā)明的幾種實施方式，其描述較為具體和詳細，但并不能因此而理解為對發(fā)明專利范圍的限制。應當指出的是，對于本領域的普通技術人員來說，在不脫離本發(fā)明構思的前提下，還可以做出若干變形和改進，這些都屬于本發(fā)明的保護范圍。因此，本發(fā)明專利的保護范圍應以所附權利要求為準。