本發(fā)明專利涉及白藜蘆醇寡聚體Dip G在制備治療急性髓性白血病的藥物中的應(yīng)用，屬于藥學(xué)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

急性髓性白血病(acute myeloid leukemia,AML)是一種惡性血液系統(tǒng)疾病，表現(xiàn)為骨髓細(xì)胞異常增殖，正常造血細(xì)胞分化的能力受到抑制。目前AML的常規(guī)治療方法是使用細(xì)胞毒性藥物靶向迅速增殖的細(xì)胞從而控制疾病的發(fā)展，但是這種治療方法效果有限且具有較大的副作用。全反式維甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)通過促進(jìn)白血病細(xì)胞分化，在治療AML的亞型——急性早幼粒細(xì)胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)中取得了良好的療效，提出了分化療法的新觀點(diǎn)。然而，ATRA介導(dǎo)的細(xì)胞分化療法在其他類型的AML中并沒有效果。因此目前急需新型、低毒性的治療藥物，可以打破白血病細(xì)胞的分化障礙，為AML提供有效的治療方法。

Diptoindonesin G(Dip G)是白藜蘆醇(resveratrol,Rev)的非整倍體，可從熱帶植物如狹葉坡壘(Hopea chinensis)的樹皮中分離獲得或人工合成。目前尚未發(fā)現(xiàn)關(guān)于Dip G對治療AML作用的報(bào)導(dǎo)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供白藜蘆醇寡聚體Dip G在制備治療急性髓性白血病的藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)白藜蘆醇寡聚體Dip G可以通過促進(jìn)白血病細(xì)胞分化和成熟，并抑制細(xì)胞增殖，從而達(dá)到治療急性髓性白血病的作用，為急性髓性白血病提供了新的治療策略。

附圖說明

圖1為Dip G的結(jié)構(gòu)式。

圖2為Dip G對AML細(xì)胞增殖的影響。

圖3為Dip G對AML細(xì)胞形態(tài)的影響。

圖4為Dip G對AML細(xì)胞分化標(biāo)記分子CD11b和CD14表達(dá)的影響。

圖5為給予Dip G對小鼠AML異種移植模型中移植瘤生長的影響。

圖6為給予Dip G對小鼠AML異種移植模型中移植瘤重量的影響。

下面結(jié)合附圖對本發(fā)明的具體實(shí)施方式做進(jìn)一步說明。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

一.Dip G的藥理試驗(yàn)

1、細(xì)胞培養(yǎng)

人源AML細(xì)胞株HL-60、U937來自中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院血液學(xué)研究所，用RPMI 1640培養(yǎng)基(含10％FBS)培養(yǎng)于37℃、5％CO₂飽和濕度的培養(yǎng)箱中。

2、細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)

取HL-60和U937細(xì)胞種于96孔板中，每個(gè)孔種5×10³個(gè)細(xì)胞，分別用0、1.875、3.75、7.5、15μM的Dip G或50μM的Rev處理0、24、48、72、96小時(shí)后，進(jìn)行臺盼藍(lán)染色，用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器對細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。

3、細(xì)胞形態(tài)分析

在24孔板內(nèi)放上圓形蓋玻片，用HL-60和U937細(xì)胞制作細(xì)胞爬片，分別用0、3.75、7.5、15μM的Dip G或50μM的Rev處理72小時(shí)。使用瑞氏-姬姆薩染色試劑盒對細(xì)胞進(jìn)行染色，然后在光學(xué)顯微鏡下放大200倍進(jìn)行拍照。

4、流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞分化

取HL-60和U937細(xì)胞種于六孔板，分別用0、3.75、7.5、15μM的Dip G或50μM的Rev處理。72小時(shí)后收集細(xì)胞，用預(yù)冷的PBS洗滌2次，然后用100μL結(jié)合緩沖液重懸，加入CD11b和CD14的抗體后輕輕混勻，室溫避光孵育40分鐘，然后再加入500μL結(jié)合緩沖液，轉(zhuǎn)至流式管中并立即進(jìn)行流式檢測，每個(gè)樣品收集l×10⁴個(gè)細(xì)胞，使用FACScan軟件(Becton Dickinson，USA)進(jìn)行分析。

5、NOD/SCID小鼠AML異種移植模型建立及給藥

收集對數(shù)生長期的HL-60細(xì)胞，用預(yù)冷的PBS洗滌和重懸，使細(xì)胞濃度為1×10⁸個(gè)/mL，每只NOD/SCID小鼠在右翼部位皮下注射100μL(1×10⁷個(gè)細(xì)胞)的細(xì)胞懸液。接種兩周后，腫瘤平均大小約為50mm³，將小鼠隨機(jī)分為四組：PBS對照組、Dip G 10mg/kg組、Dip G 20mg/kg組、ATRA 5mg/kg組，每組8-10只。腹腔注射給藥，每天一次，持續(xù)12天。分組后每兩天用游標(biāo)卡尺測量腫瘤的大小。腫瘤體積計(jì)算公式：V＝0.5236×L1×(L2)²(L1是腫瘤的長度，L2是腫瘤的寬度)。第13天時(shí)脫頸處死小鼠，剝離腫瘤，稱重并拍照。

6、統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)據(jù)以mean±MED表示。各組間的比較采用Student’s t test和one-way ANOVA。所有的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析是運(yùn)用SPSS軟件(版本10.0)。*代表P<0.05，**代表P<0.01。P<0.05認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

二.Dip G的體外與體內(nèi)藥理試驗(yàn)結(jié)果及分析

如圖2所示，細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明Dip G(1.875-15μM)可以劑量且時(shí)間依賴性地抑制AML細(xì)胞株HL-60和U937的增殖，15μM的Dip G與50μM的Rev效果相當(dāng)。

如圖3所示，瑞氏-姬姆薩染色結(jié)果表明在Dip G(3.75-15μM)處理72小時(shí)后，AML細(xì)胞中胞漿/核的比例上升，染色質(zhì)凝聚增加，顯示出更加成熟的細(xì)胞形態(tài)。而ReV(50μM)的效果不明顯。提示Dip G可以促進(jìn)AML細(xì)胞的分化和成熟。

如圖4所示，流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果表明，AML細(xì)胞經(jīng)Dip G(3.75-15μM)處理72小時(shí)后，反映AML細(xì)胞分化程度的細(xì)胞表面標(biāo)記分子CD11b和CD14的表達(dá)明顯增加。進(jìn)一步證明Dip G可以促進(jìn)AML細(xì)胞的分化。

如圖5和圖6所示，在小鼠異種移植模型中，與PBS對照組相比，10mg/kg和20mg/kg的Dip G均能夠顯著抑制腫瘤的生長(*P<0.05)，在治療終點(diǎn)(給藥后第13天)其腫瘤的平均重量比PBS對照組小2倍左右(**P<0.01)。而5mg/kg的ATRA對小鼠腫瘤生長的抑制作用并不明顯。這些體內(nèi)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)說明Dip G可以有效地抑制AML的發(fā)展。

采用白藜蘆醇寡聚體Diptoindonesin G來治療急性髓性白血病，體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)Dip G能夠顯著抑制人源AML細(xì)胞株的增殖，并促進(jìn)細(xì)胞的分化與成熟。在NOD/SCID小鼠異種移植實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)給予Dip G可以顯著抑制腫瘤的生長，腫瘤的平均重量也明顯下降。DipG處理后腫瘤組織中CD11b陽性的細(xì)胞明顯增加，表明Dip G可以通過促進(jìn)AML細(xì)胞的分化，從而抑制其體內(nèi)生長。

以上結(jié)果表明Dip G可以通過抑制AML細(xì)胞的增殖，促進(jìn)AML細(xì)胞的分化與成熟，從而抑制AML的發(fā)展，可用于制備治療AML的新型藥物。