本發(fā)明涉及清熱抗炎藥物的制備方法，尤其涉及了一種三葉青清熱抗炎顆粒的制備方法。
背景技術(shù)：
：發(fā)熱是由于發(fā)熱激活物作用于機體，進而導(dǎo)致內(nèi)生致熱原的產(chǎn)生并入腦作用于體溫調(diào)節(jié)反饋示意圖體溫調(diào)節(jié)中樞，導(dǎo)致發(fā)熱中樞介質(zhì)的釋放繼而引起調(diào)定點的改變，最終引起發(fā)熱。常見的發(fā)熱激活物有細(xì)菌、病毒、真菌、螺旋體、抗原抗體復(fù)合物及類固醇等。一定程度的體溫升高，能使人體免疫功能明顯增強，有利于清除病原體和促進疾病的痊愈。但發(fā)熱超過了一定程度或長期發(fā)熱，可影響機體的代謝過程，引起多系統(tǒng)特別是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的功能紊亂。發(fā)熱多數(shù)伴隨炎癥的產(chǎn)生，炎癥是機體對于刺激的一種防御反應(yīng)，表現(xiàn)為紅、腫、熱、痛和功能障礙。在炎癥過程中，一方面損傷因子直接或間接造成組織和細(xì)胞的破壞，另一方面通過炎癥充血和滲出反應(yīng)，以稀釋、殺傷和包圍損傷因子。三葉青(tetrastigmatishems-leyani)為葡萄科崖爬藤屬植物三葉崖爬藤。其塊根稱為蛇附子，為民間常用的中草藥，主要含黃酮類如槲皮素、山奈酚及三萜類化合物如蒲公英萜醇等化學(xué)成份，具有抗腫瘤、保肝、抗病毒、抗炎、調(diào)節(jié)免疫作用，并基本無毒。嚴(yán)余明等研究了傳統(tǒng)的水煎、飲片打粉與凍干粉三種不同工藝加工的三葉青的抗炎作用，結(jié)果表明三葉青凍干粉的抗炎作用明顯優(yōu)于水煎劑與飲片粉。原因在于水煎劑和飲片粉在加工工藝中采用較高溫度，從而使有效成份活性失活等。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)中的缺點，提供了一種可以保留有效成份活性的清熱抗炎顆粒的制備方法，其以三葉草為主要原料，制得的顆?？梢宰鳛榍鍩峥寡椎乃幬铩榱私鉀Q上述技術(shù)問題，本發(fā)明通過下述技術(shù)方案得以解決：一種清熱抗炎顆粒的制備方法，其包括以下步驟，步驟一：水煎將新鮮三葉青塊根洗凈，然后在-20～-10℃下冷凍干燥后粉碎得三葉青粗粉，取三葉青粗粉加水煎煮得煎煮液，水的添加量為三葉青粗粉重量的8～20倍，煎煮兩次，每次1～2h，過濾，合并濾液，濾渣備用；步驟二：醇提將步驟一所得的濾渣加入60～80％乙醇水浴提取兩次，60～80％乙醇的添加量為濾渣重量6～10倍，每次水浴后過濾，減壓回收乙醇，得濾液；步驟三：濃縮將步驟一、步驟二所得濾液合并，真空濃縮后得到相對密度為1.07～1.10的濃縮浸膏，將浸膏進行保溫；步驟四：減壓干燥、制粒將保溫后的浸膏在溫度為70～90℃、壓力為-0.2～-0.05mpa下進行減壓干燥，干燥后將其粉碎，加入糊精、潤濕劑，混合均勻，再以擠壓方式通過篩網(wǎng)，制成均勻的顆粒；將顆粒置于干燥機中進行干燥，溫度控制在70℃～100℃之間，干燥時間為8～15min，再用整粒機整粒。采用減壓干燥法進行干燥，能較好保留主要有效成分，縮短干燥時間，所得干燥物呈蜂窩狀，疏松易粉碎。作為優(yōu)選，三葉青為野生三葉青。作為優(yōu)選，步驟三中保溫的溫度為40～60℃，保溫時間為1～3h。作為優(yōu)選，保溫的溫度為50℃。作為優(yōu)選，減壓干燥時間為2～4h。作為優(yōu)選，減壓干燥時的溫度為80℃，壓力為-0.1mpa。作為優(yōu)選，潤濕劑為乙醇。本發(fā)明由于采用了以上技術(shù)方案，具有顯著的技術(shù)效果：三葉草主要含黃酮類如槲皮素、山奈酚及三萜類化合物如蒲公英萜醇等化學(xué)成份，具有抗腫瘤、保肝、抗病毒、抗炎、調(diào)節(jié)免疫作用，而且基本無毒。本發(fā)明采用水煎、醇提、濃縮、減壓干燥及制粒等制備步驟，能避免現(xiàn)有技術(shù)中因較高溫度而使有效成份活性失活的缺點，而且采用減壓干燥法進行干燥，能較好保留主要有效成分，縮短干燥時間，所得干燥物呈蜂窩狀，疏松易粉碎；采用本方法制得的顆粒，不僅清熱抗炎效果佳，同時還能提高免疫力。具體實施方式下面實施例是對本發(fā)明進一步詳細(xì)描述，但不是限制本發(fā)明的范圍。實施例1清熱抗炎顆粒的制備方法，包括以下步驟，步驟一：水煎將新鮮三葉青塊根洗凈，然后在-20～-10℃下冷凍干燥2h后粉碎得三葉青粗粉，取300g三葉青粗粉加水煎煮得煎煮液，水的添加量為三葉青粗粉重量的8倍，煎煮兩次，第一次煎煮1h，第二次煎煮1.5h，煎煮后過濾，合并濾液，濾渣備用；步驟二：醇提將步驟一所得的濾渣加入60％乙醇水浴提取兩次，60％乙醇的添加量為濾渣重量8倍，每次水浴后過濾，減壓回收乙醇，得濾液；步驟三：濃縮將步驟一、步驟二所得濾液合并，真空濃縮后得到相對密度為1.07～1.10(50℃熱測)的濃縮浸膏，將浸膏在50℃下進行保溫，保溫時間為2h；步驟四：減壓干燥、制粒將保溫后的浸膏在溫度為80℃、壓力為-0.1mpa下進行減壓干燥，干燥時間為2h，干燥后將其粉碎，加入糊精，混合均勻，糊精的加入量為浸膏干燥后質(zhì)量的16.7％，以95％乙醇作潤濕劑，再以擠壓方式通過22目篩網(wǎng)，制成均勻的顆粒；將顆粒置于高效沸騰干燥機中進行干燥，干燥溫度為70℃，干燥時間為13min，再用快速整粒機整粒。實施例2清熱抗炎顆粒的制備方法，包括以下步驟，步驟一：水煎將新鮮三葉青塊根洗凈，然后在-20～-10℃下冷凍干燥1h后粉碎得三葉青粗粉，取400g三葉青粗粉加水煎煮得煎煮液，水的添加量為三葉青粗粉重量的13倍，煎煮兩次，第一次煎煮2h，第二次煎煮2h，煎煮后過濾，合并濾液，濾渣備用；步驟二：醇提將步驟一所得的濾渣加入70％乙醇水浴提取兩次，60％乙醇的添加量為濾渣重量8倍，每次水浴后過濾，減壓回收乙醇，得濾液；步驟三：濃縮將步驟一、步驟二所得濾液合并，真空濃縮后得到相對密度為1.07～1.10(50℃熱測)的濃縮浸膏，將浸膏在50℃下進行保溫，保溫時間為1h；步驟四：減壓干燥、制粒將保溫后的浸膏在溫度為80℃、壓力為-0.1mpa下進行減壓干燥，干燥時間為4h，干燥后將其粉碎，加入糊精，混合均勻，糊精的加入量為浸膏干燥后質(zhì)量的15％，以95％乙醇作潤濕劑，再以擠壓方式通過22目篩網(wǎng)，制成均勻的顆粒；將顆粒置于高效沸騰干燥機中進行干燥，干燥溫度為90℃，干燥時間為10min，再用快速整粒機整粒。實施例3清熱抗炎顆粒的制備方法，包括以下步驟，步驟一：水煎將新鮮三葉青塊根洗凈，然后在-20～-10℃下冷凍干燥2h后粉碎得三葉青粗粉，取325g三葉青粗粉加水煎煮得煎煮液，水的添加量為三葉青粗粉重量的20倍，煎煮兩次，第一次煎煮1.5h，第二次煎煮1h，煎煮后過濾，合并濾液，濾渣備用；步驟二：醇提將步驟一所得的濾渣加入80％乙醇水浴提取兩次，60％乙醇的添加量為濾渣重量8倍，每次水浴后過濾，減壓回收乙醇，得濾液；步驟三：濃縮將步驟一、步驟二所得濾液合并，真空濃縮后得到相對密度為1.07～1.10(50℃熱測)的濃縮浸膏，將浸膏在50℃下進行保溫，保溫時間為3h；步驟四：減壓干燥、制粒將保溫后的浸膏在溫度為80℃、壓力為-0.1mpa下進行減壓干燥，干燥時間為2.8h，干燥后將其粉碎，加入糊精，混合均勻，糊精的加入量為浸膏干燥后質(zhì)量的17％，以95％乙醇作潤濕劑，再以擠壓方式通過22目篩網(wǎng)，制成均勻的顆粒；將顆粒置于高效沸騰干燥機中進行干燥，干燥溫度為100℃，干燥時間為8min，再用快速整粒機整粒。實施例4清熱抗炎顆粒的制備方法，包括以下步驟，步驟一：水煎將新鮮三葉青塊根洗凈，然后在-20～-10℃下冷凍干燥2h后粉碎得三葉青粗粉，取360g三葉青粗粉加水煎煮得煎煮液，水的添加量為三葉青粗粉重量的16倍，煎煮兩次，第一次煎煮1h，第二次煎煮1.2h，煎煮后過濾，合并濾液，濾渣備用；步驟二：醇提將步驟一所得的濾渣加入74％乙醇水浴提取兩次，60％乙醇的添加量為濾渣重量8倍，每次水浴后過濾，減壓回收乙醇，得濾液；步驟三：濃縮將步驟一、步驟二所得濾液合并，真空濃縮后得到相對密度為1.07～1.10(50℃熱測)的濃縮浸膏，將浸膏在50℃下進行保溫，保溫時間為2.3h；步驟四：減壓干燥、制粒將保溫后的浸膏在溫度為80℃、壓力為-0.1mpa下進行減壓干燥，干燥時間為4h，干燥后將其粉碎，加入糊精，混合均勻，糊精的加入量為浸膏干燥后質(zhì)量的17.4％，以95％乙醇作潤濕劑，再以擠壓方式通過22目篩網(wǎng)，制成均勻的顆粒；將顆粒置于高效沸騰干燥機中進行干燥，干燥溫度為80℃之間，干燥時間為15min，再用快速整粒機整粒。以下通過具體藥效學(xué)試驗證明本發(fā)明的有益成果。1、清熱藥效評價健康新西蘭家兔，雌雄兼用，體重1.8～2.4kg，試驗前1～2天進行體溫預(yù)選，選用體溫在38.0～39.0℃之間，3小時內(nèi)體溫變化<0.3℃的40只用于實驗。按基礎(chǔ)體溫搭配分成6組，每組8只，分別灌胃給予蒸餾水(對照組)、阿司匹林(24mg/kg，陽性對照組)、細(xì)菌內(nèi)毒素(24mg/kg，模型組)、三葉青顆粒低劑量(12.5mg/kg，三葉青低劑量組)、三葉青顆粒中劑量(25mg/kg，三葉青中劑量組)和三葉青顆粒高劑量(50mg/kg，三葉青高劑量組)，給藥后立即耳緣靜脈注射50u/kg的細(xì)菌內(nèi)毒素生理鹽水溶液，用wry電腦熱原測溫儀觀察注射內(nèi)毒素后6h內(nèi)的溫度變化，每隔30min記錄1次體溫；以各時段的升溫值以及最大升溫值作指標(biāo)比較各組對內(nèi)毒素所致發(fā)熱家兔體溫的影響。三葉青低劑量組、三葉青中劑量組及三葉青高劑量組所用顆粒為實施例1或?qū)嵤├?或?qū)嵤├?或?qū)嵤├?所得顆粒。表1解熱作用實驗結(jié)果與對照組比較**p<0.01；與模型組比較##p<0.01。2、抗炎藥效評價2.1對二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響雄性icr小鼠50只，體重25～30g，按體重搭配平均分為5組，每組10只；分別灌胃給予蒸餾水(對照組)、阿司匹林(0.27mg/kg，阿司匹林組)、三葉青顆粒低劑量(1.5mg/kg，三葉青低劑量組)、三葉青顆粒中劑量(3.0mg/kg，三葉青中劑量組)和三葉青顆粒高劑量(6.0mg/kg，三葉青高劑量組)；每日2次，連續(xù)5d；末次給藥后30min，小鼠右耳涂以二甲苯0.05ml/只致炎，左耳作對照；15min后脫頸臼處死，沿耳廓基線剪下雙耳，用6mm角膜環(huán)鉆在左右耳相同位置沖下耳片，在電子分析天平上稱重(精確到0.1mg)，右耳重量減去左耳重量之差值(單位:mg)即為腫脹度，計算各組平均腫脹度并求出腫脹抑制率(％)，腫脹抑制率(％)＝[(空白對照組腫脹度-給藥組腫脹度)/空白對照組腫脹度]×100％，見表2。表2顯示三葉青顆粒明顯減少二甲苯所致小鼠耳廓腫脹，腫脹抑制率30.29％～61％,劑量關(guān)系明確。三葉青低劑量組、三葉青中劑量組及三葉青高劑量組所用顆粒為實施例1或?qū)嵤├?或?qū)嵤├?或?qū)嵤├?所得顆粒。表2三葉青顆粒對小鼠耳腫脹的影響與對照組比較**p<0.01,*p<0.05。2.2對小鼠碳粒廓清指數(shù)和吞噬指數(shù)的影響雄性icr小鼠50只，體重25～30g，按體重搭配平均分為5組，每組10只；分別灌胃給予蒸餾水(正常組)、氫化可的松(50mg/kg，模型組)、三葉青顆粒低劑量(1.5mg/kg，三葉青低劑量組)、三葉青顆粒中劑量(3.0mg/kg，三葉青中劑量組)和三葉青顆粒高劑量(6.0mg/kg，三葉青高劑量組)；每日2次，連續(xù)5d。除了正常組外，其余各組在灌胃給藥的同時，皮下注射氫化可的松50mg/kg，1次/d，連續(xù)6d造成免疫低下陽性對照。于末次給藥后0.5h，各組小鼠尾靜脈注射20％印度墨汁5ul/g，于1min和5min分別眼眶取血，測廓清指數(shù)k，將小鼠處死，取肝臟和腎臟，計算吞噬指數(shù)ɑ。三葉青低劑量組、三葉青中劑量組及三葉青高劑量組所用顆粒為實施例1或?qū)嵤├?或?qū)嵤├?或?qū)嵤├?所得顆粒。表3三葉青顆粒對小鼠碳粒廊清指數(shù)和吞噬指數(shù)的影響組別kɑ正常組0.064±0.0078.16±0.83模型組0.021±0.0034##4.31±0.454##三葉青低劑量組0.034±0.004*5.70±0.63*三葉青中劑量組0.047±0.007**6.64±0.41**三葉青高劑量組0.596±0.002**7.95±0.82**與對照組比較**p<0.01；與模型組比較##p<0.01。表3結(jié)果表明，三葉青顆粒各劑量組與模型組比較，碳粒廓清指數(shù)和吞噬指數(shù)明顯升高，有顯著差異，且隨著劑量的增加，效果越明顯，說明三葉青顆粒不僅具有明顯的抗炎作用，而且還能提高小鼠的免疫力?？傊陨纤鰞H為本發(fā)明的較佳實施例，凡依本發(fā)明申請專利范圍所作的均等變化與修飾，皆應(yīng)屬本發(fā)明專利的涵蓋范圍。當(dāng)前第1頁12