本發(fā)明涉及一種用于炮制白術(shù)的枳實(shí)汁及其提取方法，屬于醫(yī)藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：枳實(shí)為蕓香科植物酸橙(CitrusaurantiumL.)及其栽培變種或甜橙(C.sinensisOsbeck)的干燥幼果，主治積滯內(nèi)停、痞滿脹痛、大便秘結(jié)、瀉痢后重?，F(xiàn)代研究表明，枳實(shí)所含化學(xué)成分復(fù)雜，主要包含揮發(fā)油、黃酮類成分以及辛弗林、乙酰去甲辛弗林、N─甲基酪胺、γ─氨基丁酸、維生素A、B、C等等。枳實(shí)既是一種藥，又可作為輔料用于炮制白術(shù)(AtractylodesmacroephalaKoidz.)。清代《握靈本草》記載了“枳實(shí)煎水漬炒”炮制白術(shù)的方法。經(jīng)枳實(shí)汁炮制后，可達(dá)到緩和白術(shù)燥性，增強(qiáng)健脾和中理氣的作用。然而，迄今為止對(duì)于枳實(shí)制白術(shù)的研究極少，此炮制方法僅見于古代文獻(xiàn)中的粗略記載，未通過(guò)現(xiàn)代手段進(jìn)行研究與剖析。作為炮制白術(shù)的輔料，枳實(shí)汁制備工藝的規(guī)范化及其質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)化對(duì)于白術(shù)炮制品藥效的發(fā)揮具有重要意義。因此，亟需提供一種穩(wěn)定可行的提取方法，以提取得到可用于炮制白術(shù)、使炮制品能夠充分發(fā)揮祛燥健脾作用的枳實(shí)汁。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一種用于炮制白術(shù)的枳實(shí)汁及其提取方法。本發(fā)明提供了一種用于炮制白術(shù)的枳實(shí)汁的提取方法，包括如下步驟：稱取枳實(shí)，加6～16倍體積量水，浸泡0～2.0h，煮沸0.5～3h，濾過(guò)，藥渣重復(fù)提取1～2次，濾過(guò)，合并濾液，濃縮，即得。進(jìn)一步地，所述枳實(shí)粒徑為0.8～8mm。進(jìn)一步地，所述枳實(shí)粒徑為2～8mm。進(jìn)一步地，浸泡時(shí)間為0～1.0h。進(jìn)一步地，每次煮沸時(shí)間為1～1.5h。進(jìn)一步地，每次提取加8～14倍體積量水。進(jìn)一步地，濃縮至1mL枳實(shí)汁對(duì)應(yīng)0.2g枳實(shí)。進(jìn)一步地，所述的制備方法包括如下步驟：稱取枳實(shí)，加12倍體積量水，浸泡0.5h，煮沸1.5h，濾過(guò)，藥渣重復(fù)提取1次，濾過(guò)，合并濾液，濃縮，即得。本發(fā)明提供了根據(jù)所述制備方法提取得到的枳實(shí)汁。本發(fā)明提供了所述的枳實(shí)汁在制備白術(shù)炮制品中的用途。枳實(shí)含有復(fù)雜的化學(xué)成分，發(fā)明人經(jīng)過(guò)前期研究，發(fā)現(xiàn)枳實(shí)提取物中辛弗林含量與枳實(shí)制白術(shù)炮制品藥效的發(fā)揮具有較強(qiáng)的相關(guān)性。因此，本發(fā)明以辛弗林作為指標(biāo)，通過(guò)考察提取過(guò)程中的各種條件參數(shù)，提供了一種穩(wěn)定可行的枳實(shí)的提取工藝。采用本發(fā)明枳實(shí)汁炮制白術(shù)后，顯著增強(qiáng)了白術(shù)的健脾作用，并能緩和其燥性。顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識(shí)和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。以下通過(guò)實(shí)施例形式的具體實(shí)施方式，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。附圖說(shuō)明圖1為實(shí)驗(yàn)例2中陰性對(duì)照的專屬性試驗(yàn)HPLC圖；圖2為實(shí)驗(yàn)例2中辛弗林對(duì)照品的專屬性試驗(yàn)HPLC圖；圖3為實(shí)驗(yàn)例2中供試品的專屬性試驗(yàn)HPLC圖。具體實(shí)施方式本發(fā)明具體實(shí)施方式中使用的原料、設(shè)備均為已知產(chǎn)品，通過(guò)購(gòu)買市售產(chǎn)品獲得。實(shí)施例1本發(fā)明枳實(shí)汁的提取工藝稱取枳實(shí)100g，加1430mL水浸泡30min，煮沸1.5h，濾過(guò)，藥渣再加1200mL水煮沸1.5h，濾過(guò)，合并濾液，濃縮至500mL，即得本發(fā)明枳實(shí)汁。其中，1mL枳實(shí)汁相當(dāng)于0.2g枳實(shí)提取原料。以下通過(guò)實(shí)驗(yàn)例證明本發(fā)明的有益效果。實(shí)驗(yàn)例1本發(fā)明枳實(shí)汁的功效實(shí)驗(yàn)1.實(shí)驗(yàn)材料1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SPF級(jí)SD大鼠，體質(zhì)量170-210g，雌雄各半，由四川省人民醫(yī)院提供，動(dòng)物合格證號(hào)：川實(shí)動(dòng)管質(zhì)SCXK(川)2013-15。SPF級(jí)KM小鼠，體質(zhì)量18-22g，雄性，由四川省人民醫(yī)院提供，動(dòng)物合格證號(hào)：川實(shí)動(dòng)管質(zhì)SCXK(川)2013-15。1.2實(shí)驗(yàn)藥物及試劑陽(yáng)性藥物蒙脫石散(規(guī)格3g，廠家：四川維奧制藥有限公司，批號(hào)：151010)；生白術(shù)飲片(1603025)；枳實(shí)飲片(1603012)；大黃飲片(批號(hào)：1603058)；白術(shù)藥液自制(濃度0.5g/ml)；枳實(shí)制白術(shù)藥液自制(1％枳實(shí)制白術(shù)藥液，濃度0.5g/ml；5％枳實(shí)制白術(shù)藥液，濃度0.5g/ml；10％枳實(shí)制白術(shù)藥液，濃度0.5g/ml)；大黃藥液(自制)；藥液制備方法見以下實(shí)驗(yàn)方法部分；大鼠血清免疫球蛋白(IgG，批號(hào)：20160712)、大鼠血清免疫球蛋白(IgM，批號(hào)：20160712)，均購(gòu)于南京建成生物工程研究所；大鼠胃泌素ELISA試劑盒(GAS，批號(hào)：294r0714)、大鼠胃動(dòng)素ELISA試劑盒(MTL，批號(hào)：434r0714)均購(gòu)于天津安諾康生物技術(shù)有限公司；其余試劑均為分析純。1.3實(shí)驗(yàn)儀器手術(shù)鉗、手術(shù)剪、十萬(wàn)分之一分析天平(型號(hào)：BS323S、精度:0.001，北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)；優(yōu)普純水制造系統(tǒng)，數(shù)控超聲波清洗器(型號(hào)：DL720D，上海之信儀器有限公司)；ThermoScientific酶標(biāo)儀(型號(hào)：CD3001，上海精科儀器廠)；ThermoScientific離心機(jī)(型號(hào)：BC321，上海精科儀器廠)；ACCU-CHEK血糖測(cè)定儀(Performa，Roche，USA)；ACCU-CHEK血糖試紙(Performa，批號(hào)：474642，Roche，USA)。2.實(shí)驗(yàn)方法2.1藥液制備2.1.1大黃藥液將生大黃粉碎，用五倍體積量水浸泡30分鐘后，煎煮15分鐘，過(guò)濾，靜置，取上清液，在50℃下濃縮至1g/mL，即得。2.1.2白術(shù)液稱取生白術(shù)飲片，適當(dāng)粉碎，加八倍體積量水，浸泡半小時(shí)，回流提取兩次，每次1.5h，過(guò)濾，收集濾液，在60℃下濃縮至0.5g/mL，即得。2.1.31％枳實(shí)制白術(shù)液炮制：取生白術(shù)藥材，加入枳實(shí)汁50mL(枳實(shí)汁的制備工藝同實(shí)施例1)，對(duì)應(yīng)的枳實(shí)提取原料為白術(shù)藥材重量的1％，浸泡24h，不時(shí)翻動(dòng)，直至汁盡藥透，于藥材溫度為110℃炒制6min，取出，于40℃烘箱烘制24h，即得枳實(shí)制白術(shù)炮制品。稱取枳實(shí)制白術(shù)(1:100)飲片，適當(dāng)粉碎，加八倍體積量水，浸泡半小時(shí)，回流提取兩次，每次1.5h，過(guò)濾，收集濾液，在60℃下濃縮至0.5g/mL，即得炮制品提取液。2.1.45％枳實(shí)制白術(shù)液炮制：取生白術(shù)藥材，加入枳實(shí)汁50mL(枳實(shí)汁的制備工藝同實(shí)施例1)，對(duì)應(yīng)的枳實(shí)藥材用量為白術(shù)的5％，浸泡24h，不時(shí)翻動(dòng)，直至汁盡藥透，于藥材溫度為110℃炒制6min，取出。于40℃烘箱烘制24h。即得。稱取枳實(shí)制白術(shù)(5:100)飲片，適當(dāng)粉碎，加八倍體積量水，浸泡半小時(shí)，回流提取兩次，每次1.5h，過(guò)濾，收集濾液，在60℃下濃縮至0.5g/mL，即得。2.1.510％枳實(shí)制白術(shù)液炮制：取生白術(shù)藥材，加入枳實(shí)汁50mL(枳實(shí)汁的制備工藝同實(shí)施例1)，對(duì)應(yīng)的枳實(shí)藥材用量為白術(shù)的10％，浸泡24h，不時(shí)翻動(dòng)，直至汁盡藥透，于藥材溫度為110℃炒制6min，取出。于40℃烘箱烘制24h。即得。稱取枳實(shí)制白術(shù)(10:100)飲片，適當(dāng)粉碎，加八倍體積量水，浸泡半小時(shí)，回流提取兩次，每次1.5h，過(guò)濾，收集濾液，在60℃下濃縮至0.5g/mL，即得。2.2動(dòng)物分組小鼠：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物適應(yīng)性飼養(yǎng)3天后，按體質(zhì)量分層隨機(jī)分為正常組、白術(shù)組、1％枳實(shí)制白術(shù)組、5％枳實(shí)制白術(shù)組、10％枳實(shí)制白術(shù)組，每組12只；大鼠：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物適應(yīng)性飼養(yǎng)3天后，按體質(zhì)量分層隨機(jī)分為正常組、模型組、陽(yáng)性藥組、白術(shù)組、1％枳實(shí)制白術(shù)組、5％枳實(shí)制白術(shù)組、10％枳實(shí)制白術(shù)組，每組10只。2.3動(dòng)物給藥方法小鼠：在各組水瓶中精密加入200ml水，每日清晨，正常組灌胃等量生理鹽水，其余各組灌胃相應(yīng)藥液0.3ml/只，正常進(jìn)食24小時(shí)后測(cè)量水瓶中的剩余水量，計(jì)算出每只小白鼠的平均飲水量，連續(xù)7天；大鼠：分組后，正常組灌胃生理鹽水4mL，其余各組灌胃大黃藥液4ml，上下午各1次，共9d。第10d稱重后，正常組、模型組上午灌胃等量生理鹽水，陽(yáng)性組、白術(shù)組、1％枳實(shí)制白術(shù)組、5％枳實(shí)制白術(shù)組、10％枳實(shí)制白術(shù)組上午灌胃相應(yīng)的藥液4ml，下午正常組灌胃等量生理鹽水，其余各組均灌胃等量的100％生大黃液，連續(xù)10天。大鼠生化指標(biāo)測(cè)定：最后一次給藥后進(jìn)食12h，測(cè)定大鼠血糖水平；腹股動(dòng)脈取血后，脫頸處死，剖腹取脾臟、胃組織，用濾紙吸干脾臟組織液，稱重，計(jì)算脾臟指數(shù)，取全血3500r/min離心10min后取上清液，用ThermoScientific酶標(biāo)儀測(cè)定血清中血清蛋白IgG、IgM水平，取部分胃組織勻漿，3500r/min離心10min后取上清液，用ThermoScientific酶標(biāo)儀測(cè)定胃組織中胃泌素、胃動(dòng)素水平。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析：數(shù)據(jù)采用“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”(x±s)表示，采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行分析，組間比較采用twowayANOVA，posthocTtest在每個(gè)組樣本量相同的情況下采用tukey'sttest，樣本量不等采用LSD-Ttest；方差不齊的情況下，組間比較采用Brown-Forsythe的修正值。3.結(jié)果3.1小鼠體重結(jié)果表1小鼠體重(g)變化表注：與正常組比較：*P<0.05；與白術(shù)組比較：△P<0.05實(shí)驗(yàn)結(jié)果：與正常組相比，白術(shù)組體重有上升趨勢(shì)，但兩組間無(wú)顯著性差異(P>0.05)；與正常組相比，枳實(shí)制白術(shù)三個(gè)實(shí)驗(yàn)組均有顯著上升(P<0.05)；與白術(shù)組相比，枳實(shí)制白術(shù)三個(gè)實(shí)驗(yàn)組均有顯著上升。以上結(jié)果表明，生白術(shù)的健脾作用不強(qiáng)，給藥后小鼠體重未見明顯提升；經(jīng)本發(fā)明枳實(shí)汁炮制后，白術(shù)提升體重的效果顯著增強(qiáng)，表明根據(jù)本發(fā)明提取工藝制備的枳實(shí)汁確能增強(qiáng)白術(shù)健脾強(qiáng)胃的功效。3.2小鼠飲水量結(jié)果表2小鼠平均每只每天飲水量(mL)注：與正常組比較：*P<0.05；與白術(shù)組比較：△P<0.05實(shí)驗(yàn)結(jié)果：與正常組相比，白術(shù)組小鼠飲水量第3天后顯著上升(P<0.05)；與正常組相比，枳實(shí)制白術(shù)三個(gè)實(shí)驗(yàn)組飲水量均無(wú)明顯變化；與白術(shù)組相比，枳實(shí)制白術(shù)三個(gè)實(shí)驗(yàn)組飲水量均顯著下降(P<0.05)。以上結(jié)果表明，生白術(shù)燥性較強(qiáng)；經(jīng)本發(fā)明枳實(shí)汁炮制后，小鼠飲水量顯著降低，表明根據(jù)本發(fā)明提取工藝制備的枳實(shí)汁確有抑制白術(shù)燥性的功效。3.3大鼠體重結(jié)果表3大鼠體重(g)變化表注：與正常組比較：*P<0.05；與白術(shù)組比較：△P<0.05實(shí)驗(yàn)結(jié)果：第5天，與正常組相比，其余組體重顯著下降(P<0.05)，與白術(shù)組相比，枳實(shí)制白術(shù)組體重顯著上升(P<0.05)；第9天，與正常組相比，其余組體重顯著下降(P<0.05)，與白術(shù)組相比，枳實(shí)制白術(shù)組體重顯著上升(P<0.05)；第15天，與白術(shù)相比，枳實(shí)制白術(shù)組體重顯著上升(P>0.05)；第19天，與白術(shù)組相比，枳實(shí)制白術(shù)組體重顯著上升(P<0.05)。3.4大鼠血糖和脾臟指數(shù)結(jié)果大鼠血糖和脾臟指數(shù)測(cè)定結(jié)果如下表4，脾臟指數(shù)＝脾臟重量/體重*100％。表4大鼠血糖及脾臟指數(shù)測(cè)定結(jié)果表注：與模型組比較：*P<0.05；與白術(shù)組比較：△P<0.05實(shí)驗(yàn)結(jié)果：大鼠血糖，與模型組相比，其余組顯著下降(P<0.05)；脾臟指數(shù)，與模型組相比，其余組顯著上升(P<0.05)，與白術(shù)相比，枳實(shí)制白術(shù)組顯著上升(P<0.05)。3.5大鼠血清免疫球蛋白IgG、IgM測(cè)定結(jié)果表5大鼠免疫球蛋白IgG和IgM測(cè)定結(jié)果表注：與模型組比較：*P<0.05；與白術(shù)組比較：△P<0.05實(shí)驗(yàn)結(jié)果：大鼠血清免疫球蛋白IgG，與模型組相比，其余組顯著上升(P<0.05)，與白術(shù)相比，枳實(shí)制白術(shù)組顯著上升(P<0.05)；大鼠血清免疫球蛋白IgM，與模型組相比，其余組顯著上升(P<0.05)，與白術(shù)相比，枳實(shí)制白術(shù)組顯著上升(P<0.05)。3.6大鼠胃組織胃動(dòng)素、胃泌素測(cè)定結(jié)果胃動(dòng)素(MTL)是由氨基酸組成的多肽，其分泌細(xì)胞集中分布于十二指腸和近端空腸粘膜窩內(nèi)，在胃竇及下部小腸粘膜有少量存在，也存在于神經(jīng)組織中。MTL主要功能是影響胃及腸道的動(dòng)力，具有腸道“清道夫”的功效。胃動(dòng)素水平升高，腸道蠕動(dòng)加速，使腸內(nèi)容物通過(guò)加快，臨床表現(xiàn)為腹痛、腹瀉等癥狀。胃泌素主要是由人體內(nèi)細(xì)胞分泌的一種消化道激素，細(xì)胞以胃竇部最多,十二指腸次之，主要刺激壁細(xì)胞分泌鹽酸，還能刺激胰液和膽汁的分泌，也有輕微地刺激主細(xì)胞分泌胃蛋白酶原等作用。表6大鼠胃動(dòng)素、胃泌素測(cè)定結(jié)果表注：與模型組比較：*P<0.05；與白術(shù)組比較：△P<0.05實(shí)驗(yàn)結(jié)果：大鼠胃組織胃動(dòng)素，與模型組相比，其余組顯著下降(P<0.05)；大鼠胃組織胃泌素，與模型組相比，其余組顯著上升(P<0.05)，與白術(shù)相比，枳實(shí)制白術(shù)組顯著上升(P<0.05)。綜合以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果，與正常組相比，模型組大鼠體重、飲食量、自主活動(dòng)量顯著下降，大便不成形，泄瀉癥狀明顯，血糖水平升高，血清免疫球蛋白IgG、IgM水平顯著下降，胃動(dòng)素水平顯著上升，胃泌素水平顯著下降，綜合以上辯證認(rèn)為大鼠符合“脾虛泄瀉”的中醫(yī)模型。給予經(jīng)本發(fā)明枳實(shí)汁炮制的白術(shù)后，大鼠的上述指標(biāo)均有顯著變化，且脾虛泄瀉癥狀較生白術(shù)給藥組有顯著改善，表明經(jīng)炮制后明顯增強(qiáng)了白術(shù)的健脾功效。實(shí)驗(yàn)例2提取工藝中各條件參數(shù)對(duì)辛弗林轉(zhuǎn)移率的影響1儀器與材料Agilent1260型高效液相色譜儀，Agilent公司；BT25S型1/10萬(wàn)電子分析天平，北京賽多利科學(xué)儀器有限公司；JA2003型1/1000電子分析天平，上海良平儀器儀表有限公司；BT25S電子天平，賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司。乙腈、甲醇均為色譜級(jí)，F(xiàn)isherScientific公司；水為超純水，其他試劑均為分析純(成都市科龍化工試劑)。枳實(shí)藥材，批號(hào)1603012，購(gòu)自四川科倫藥業(yè)股份有限公司，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室盧先明教授鑒定為蕓香科植物酸橙(CitrusaurantiumL.)及其栽培變種或甜橙(C.sinensisOsbeck)的干燥幼果。辛弗林對(duì)照品購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所(供含量測(cè)定用，批號(hào)110727-201107)。2方法與結(jié)果2.1辛弗林的定量測(cè)定2.1.1色譜條件Agilentextend-C18色譜柱(250mm×4.6mm，5μm)；流動(dòng)相為甲醇-磷酸二氫鉀溶液(取磷酸二氫鉀0.6g，十二烷基磺酸鈉l.0g，冰醋酸1ml，加水溶解并稀釋至1000ml)(45：55)為流動(dòng)相；體積流量1mL/min；柱溫室溫；檢測(cè)波長(zhǎng)275nm，進(jìn)樣量10μL。2.1.2對(duì)照品溶液的制備精密稱取辛弗林對(duì)照品12.74mg，置于25mL容量瓶中，加適量水溶解，搖勻，超聲30min，冷卻，加水至刻度，搖勻，即得辛弗林對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密吸取4.6mL置10mL容量瓶中，加水至刻度,搖勻，即得辛弗林對(duì)照品溶液。2.1.3供試品溶液的制備精密量取枳實(shí)提取液5mL，置于10mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻，過(guò)0.45μm微孔濾膜，備用。2.1.4專屬性考察分別配制空白溶劑、對(duì)照品溶液、供試品溶液，按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果見圖1～3。在該分析條件，辛弗林色譜峰理論塔板數(shù)大于5000，與其他組分的色譜峰分離良好，且無(wú)陰性干擾。結(jié)果表明，本方法具有較好的專屬性。2.1.5線性關(guān)系考察分別準(zhǔn)確移取“2.1.2”項(xiàng)對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，用甲醇稀釋，制得辛弗林濃度分別為509.6、305.76、234.416、178.36、101.92、30.576ug/mL的混合對(duì)照品溶液，進(jìn)樣10μL測(cè)定。以對(duì)照品濃度(ug/mL)為橫坐標(biāo)(X)，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)(Y)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，經(jīng)線性回歸，回歸方程為Y＝4.53X－0.9649，r＝0.99999，對(duì)照品辛弗林濃度在30.576～509.6μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。2.2辛弗林的轉(zhuǎn)移率測(cè)定依據(jù)“2.1”項(xiàng)測(cè)得枳實(shí)汁中辛弗林的含量，按照轉(zhuǎn)移率＝(辛弗林含量×枳實(shí)汁體積/取樣量中辛弗林質(zhì)量)*100％的公式計(jì)算辛弗林轉(zhuǎn)化率。以下實(shí)驗(yàn)中對(duì)藥材的提取，均采用煎煮法進(jìn)行。3實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.1、枳實(shí)粒度對(duì)辛弗林轉(zhuǎn)移率的影響分別稱取枳實(shí)飲片、枳實(shí)粗顆粒(2-8mm)、枳實(shí)細(xì)粉(0.8-2mm)3份，每份100g，加8倍體積量水，提取兩次，每次1.5h，合并濾液。提取液經(jīng)HPLC檢測(cè)，計(jì)算辛弗林轉(zhuǎn)移率，結(jié)果見下表：表7枳實(shí)粒度對(duì)枳實(shí)提取液中辛弗林轉(zhuǎn)移率的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，枳實(shí)的粒度對(duì)辛弗林轉(zhuǎn)移率產(chǎn)生明顯影響，當(dāng)枳實(shí)粒度為2-8mm時(shí)辛弗林轉(zhuǎn)移率達(dá)到最高值。3.2、浸泡時(shí)間對(duì)辛弗林轉(zhuǎn)移率的影響分別取枳實(shí)粗顆粒(2-8mm)5份，每份100g，加8倍體積量水，分別浸泡0、0.5、1.0、1.5、2.0h后，提取兩次，每次1.5h，合并濾液。提取液經(jīng)HPLC檢測(cè)，計(jì)算辛弗林轉(zhuǎn)移率，結(jié)果見下表：表8浸泡時(shí)間對(duì)枳實(shí)提取液中辛弗林轉(zhuǎn)移率的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，隨著浸泡時(shí)間的增加，辛弗林的轉(zhuǎn)移率先增加后減小，浸泡時(shí)間為0～1.0h時(shí)，辛弗林的轉(zhuǎn)移率均能達(dá)到77％以上；其中，浸泡時(shí)間為0.5h時(shí)辛弗林的轉(zhuǎn)移率達(dá)到最高。3.3、提取次數(shù)對(duì)辛弗林轉(zhuǎn)移率的影響分別取枳實(shí)粗顆粒5份，每份100g，加8倍體積量水，浸泡0.5h后，分別提取1、2、3次，每次1.5h，合并濾液。提取液經(jīng)HPLC檢測(cè)，計(jì)算辛弗林轉(zhuǎn)移率，結(jié)果見下表：表9提取次數(shù)對(duì)枳實(shí)提取液中辛弗林轉(zhuǎn)移率的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，提取次數(shù)對(duì)枳實(shí)汁提取過(guò)程影響顯著，結(jié)合實(shí)際生產(chǎn)，提取2次為最佳。3.4、提取時(shí)間對(duì)辛弗林轉(zhuǎn)移率的影響分別取枳實(shí)粗顆粒5份，每份100g，加8倍體積量水，浸泡0.5h后，提取2次，分別每次提取0.5h、1h、1.5h、2h、2.5h、3h，合并濾液。提取液經(jīng)HPLC檢測(cè)，計(jì)算辛弗林轉(zhuǎn)移率，結(jié)果見下表：表10提取時(shí)間對(duì)枳實(shí)提取液中辛弗林轉(zhuǎn)移率的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，隨著提取時(shí)間的增長(zhǎng)，辛弗林的轉(zhuǎn)移率先增加再減少，提取時(shí)間為1～1.5h時(shí)，辛弗林的轉(zhuǎn)移率均能達(dá)到80％以上；其中，提取時(shí)間為1.5h時(shí)辛弗林的提取率最高。3.5、溶媒量對(duì)辛弗林轉(zhuǎn)移率的影響分別稱取枳實(shí)粗顆粒5份，每份100g，分別加6倍、8倍、10倍、12倍、14倍、16倍體積量水，浸泡0.5h后，提取2次，每次提取1.5h，合并濾液。提取液經(jīng)HPLC檢測(cè)，計(jì)算辛弗林轉(zhuǎn)移率，結(jié)果見下表：表11溶媒量對(duì)枳實(shí)提取液中辛弗林轉(zhuǎn)移率的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，溶媒量對(duì)辛弗林轉(zhuǎn)移率的影響顯著，當(dāng)溶媒量為8～14倍時(shí)，辛弗林的轉(zhuǎn)移率均能達(dá)到80％以上；其中，溶媒量為8倍時(shí)辛弗林的轉(zhuǎn)移率達(dá)到最高值。3.6、各提取參數(shù)對(duì)辛弗林轉(zhuǎn)移率產(chǎn)生的綜合影響分別稱取枳實(shí)粗顆粒9份，每份100g，浸泡0.5h后分別按下表所示條件參數(shù)進(jìn)行提取，合并濾液。提取液經(jīng)HPLC檢測(cè)，計(jì)算辛弗林轉(zhuǎn)移率，結(jié)果見下表：表12各提取參數(shù)對(duì)枳實(shí)提取液中辛弗林轉(zhuǎn)移率的影響編號(hào)提取次數(shù)提取時(shí)間溶媒量辛弗林轉(zhuǎn)移率(％)111855.282211.51063.7523121270.5094211085.721521.51287.515622880.3017311287.854831.5882.5649321083.7491021.51290.390實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，最佳提取條件為：取枳實(shí)粗顆粒，加入12倍量水，浸泡30min，提取次數(shù)為兩次，每次提取時(shí)間1.5h。實(shí)驗(yàn)例3本發(fā)明提取工藝的驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)選取3批枳實(shí)飲片，均根據(jù)實(shí)驗(yàn)例2所述最優(yōu)提取工藝進(jìn)行驗(yàn)證，分別按照“2.1”“2.2”測(cè)定辛弗林的轉(zhuǎn)移率，辛弗林轉(zhuǎn)移率分別為89.08％、90.39％、89.75％，RSD為0.65％。驗(yàn)證結(jié)果說(shuō)明本發(fā)明工藝條件穩(wěn)定可行。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3