本發(fā)明屬于高分子藥物載體領域，具體涉及一種順鉑-醛基化透明質(zhì)酸納米復合物及其制備方法。
背景技術(shù)：
順鉑是一種廣譜抗癌藥物，由于其四周有2個氯原子和2個氨分子，具有雙官能團烷化劑的性質(zhì)。在人體內(nèi)，氯可被水解下來，形成活潑的帶正電的水化分子，當順鉑進入細胞體內(nèi)后，經(jīng)過水解，一個氯緩慢被水分子取代，形成了高度活潑的鉑絡合離子[ptcl(h2o)(nh3)2]+，其中的水分子很容易脫離，使鉑與dna堿基一個位點（鳥嘌呤或者腺嘌呤堿基的n7原子）發(fā)生配位。然后進一步水解掉另一個氯原子，順鉑與dna的另一條單鏈內(nèi)兩點或雙鏈發(fā)生交叉聯(lián)結(jié)。順鉑和dna的結(jié)合物然后被結(jié)構(gòu)域蛋白基團（hmg）發(fā)生緊密聯(lián)接，導致dna鏈糾纏，無法修復，最后使細胞發(fā)生凋亡。順鉑在臨床上多以注射劑使用，但其在體內(nèi)很快與蛋白質(zhì)結(jié)合而失效，且順鉑半衰期長，體內(nèi)存在嚴重的腎毒性、神經(jīng)毒性、骨髓抑制等毒性和不良反應，臨床應用受到限制。為了提高順鉑的治療效果、降低藥物毒副作用及靶向性輸送藥物到腫瘤組織，研究人員進行了很多有關高分子材料作為順鉑藥物載體的研究，例如微球，微膠囊，脂質(zhì)體，納米粒子和水凝膠等。其中，納米粒因其具有優(yōu)益的尺寸優(yōu)勢、良好的生物相容性、生物可降解性、靶向性等優(yōu)點備受關注。其中，具有靶向作用的納米粒由于其進入人體后可隨血液循環(huán)靶向到達病灶部位而不需要外科手術(shù)，減輕患者的痛苦，方便快捷等優(yōu)點越來越受到科研工作者的關注。
透明質(zhì)酸是廣泛分布在軟結(jié)締組織細胞外基質(zhì)中的主要蛋白多糖，具有良好的生物相容性和生物降解性，在臨床醫(yī)學中具有廣泛的應用。研究發(fā)現(xiàn)，透明質(zhì)酸與某些實體腫瘤和轉(zhuǎn)移淋巴細胞表面存在的大量cd44受體親和力很強。透明質(zhì)酸作為抗腫瘤藥物的靶向載體，可將較小的藥物分子黏附在透明質(zhì)酸的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)中或者將藥物分子接枝到透明質(zhì)酸類藥物載體上，自組裝形成納米粒。由于透明質(zhì)酸納米粒具有良好的尺寸效應及隨血液循環(huán)的能力，且能與腫瘤細胞表面的cd44受體靶向結(jié)合，使更多的藥物分子進入腫瘤組織，增加了抗腫瘤藥在腫瘤和淋巴結(jié)中的吸收和滯留時間，從而提高藥物的療效，降低了藥物的毒副作用。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的旨在提供一種順鉑-醛基化透明質(zhì)酸納米復合物及其制備方法。本發(fā)明所需原料簡單，制備工藝純熟，制備周期短，易于操作，不需要昂貴的儀器，且制備的納米復合物尺寸適中、生物相容性好、載藥量大、具有良好的主動靶向作用。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
醛基化透明質(zhì)酸的制備：將透明質(zhì)酸溶于雙蒸水中，加入高碘酸鈉，避光反應6h使其氧化。反應完成后，加入乙二醇反應30min，以終止氧化反應。然后將溶液轉(zhuǎn)移至透析袋（mwco3500）中，在室溫條件下透析3d，每隔6h換一次水，隨后冷凍干燥3d，即得醛基化透明質(zhì)酸。其中，透明質(zhì)酸與雙蒸水的質(zhì)量比為：1:100，透明質(zhì)酸的重復單元與高碘酸鈉的摩爾比為：1:2，乙二醇與高碘酸鈉的摩爾比為：1:1。
順鉑-醛基化透明質(zhì)酸納米復合物的制備：將順鉑和醛基化透明質(zhì)酸在37℃分別溶于雙蒸水中，配成2mg/ml的順鉑溶液和10mg/ml的醛基化透明質(zhì)酸溶液。在37℃超聲作用下，將上述順鉑溶液逐滴滴加到醛基化透明質(zhì)酸溶液中，然后室溫攪拌2d，即可形成順鉑-醛基化透明質(zhì)酸納米復合物。將所得納米復合物溶液置于透析袋（mwco2000）中透析6h除去未反應的順鉑，之后進行預凍，再轉(zhuǎn)入真空冷凍干燥箱中冷凍干燥3d，即得干燥的順鉑-醛基化透明質(zhì)酸納米復合物，其粒徑為170-200nm。所述醛基化透明質(zhì)酸與順鉑質(zhì)量比為：1:0.1-0.5。
本發(fā)明的顯著優(yōu)點在于：本發(fā)明所制備的順鉑-醛基化透明質(zhì)酸納米復合物，順鉑是通過與醛基化透明質(zhì)酸上的醛基和羧基發(fā)生席夫堿反應或離子配位反應，形成以亞胺鍵或配位鍵連接的順鉑透明質(zhì)酸復合物，復合物再通過自組裝形成順鉑-醛基化透明質(zhì)酸納米復合物。通過此種方式的納米復合物，用于靜脈注射給藥時，順鉑以穩(wěn)定方式負載，具有一定的緩釋效果，不易發(fā)生突釋，且納米復合物中透明質(zhì)酸對腫瘤細胞具有靶向作用，減少了順鉑在正常組織的聚集，更多的作用于腫瘤部位，達到在腫瘤治療中高效減毒的目的。
附圖說明
圖1是順鉑-醛基化透明質(zhì)酸納米復合物載藥體系掃描電鏡圖（醛基化透明質(zhì)酸與順鉑的質(zhì)量比為1:0.4）。
具體實施方式
以下結(jié)合具體實施例對本發(fā)明做進一步說明，但本發(fā)明不僅僅限于這些實施例。
實施例1
1）取1.000g透明質(zhì)酸于100ml雙蒸水中，磁力攪拌充分溶解；
2）稱取0.563g氧化劑高碘酸鈉加入步驟1）得到的溶液中，避光反應6h；
3）在步驟2）得到的溶液中加入0.163g乙二醇反應30min，以終止氧化反應；
4）將步驟3）得到的溶液置于mwco3500的透析袋中于室溫下透析3d，期間每隔6h換一次水；
5）將步驟4）透析后得到的溶液真空冷凍干燥3d得到醛基化透明質(zhì)酸固體；
6）稱取1.000g醛基化透明質(zhì)酸，加入100ml雙蒸水中，于37℃溶解得到醛基化透明質(zhì)酸溶液；
7）稱取100mg順鉑，加入50ml雙蒸水中，于37℃充分溶解得到順鉑溶液；
8）超聲作用下將步驟7）得到的順鉑溶液逐滴滴加至步驟6）得到的醛基化透明質(zhì)酸溶液之后轉(zhuǎn)移至磁力攪拌器上室溫攪拌2d；
9）將步驟8）制得的順鉑-醛基化透明質(zhì)酸納米復合物轉(zhuǎn)移至mwco2000透析袋中避光透析6h；
10）將步驟9）中透析后的納米復合物轉(zhuǎn)移至玻璃皿中進行預凍，再轉(zhuǎn)入真空干燥箱中冷凍干燥3d，得到干燥的順鉑-醛基化透明質(zhì)酸納米復合物固體。
實施例2
1）取1.000g透明質(zhì)酸于100ml雙蒸水中，磁力攪拌充分溶解；
2）稱取0.563g氧化劑高碘酸鈉加入步驟1）得到的溶液中，避光反應6h；
3）在步驟2）得到的溶液中加入0.163g乙二醇反應30min，以終止氧化反應；
4）將步驟3）得到的溶液置于mwco3500的透析袋中于室溫下透析3d，期間每隔6h換一次水；
5）將步驟4）透析后的得到溶液真空冷凍干燥3d得到醛基化透明質(zhì)酸固體；
6）稱取1.000g醛基化透明質(zhì)酸，加入100ml雙蒸水中，于37℃溶解得到醛基化透明質(zhì)酸溶液；
7）稱取200mg順鉑，加入100ml雙蒸水中，于37℃充分溶解得到順鉑溶液；
8）超聲作用下將步驟7）得到的順鉑溶液逐滴滴加至步驟6）得到的醛基化透明質(zhì)酸溶液之后轉(zhuǎn)移至磁力攪拌器上室溫攪拌2d；
9）將步驟8）制得的順鉑-醛基化透明質(zhì)酸納米復合物轉(zhuǎn)移至mwco2000透析袋中避光透析6h；
10）將步驟9）中透析后的納米復合物轉(zhuǎn)移至玻璃皿中進行預凍，再轉(zhuǎn)入真空干燥箱中冷凍干燥3d，得到干燥的順鉑-醛基化透明質(zhì)酸納米復合物固體。
實施例3
1）取1.000g透明質(zhì)酸于100ml雙蒸水中，磁力攪拌充分溶解；
2）稱取0.563g氧化劑高碘酸鈉加入步驟1）得到的溶液中，避光反應7h；
3）在步驟2）得到的溶液中加入0.163g乙二醇反應30min，以終止氧化反應；
4）將步驟3）得到的溶液置于mwco3500的透析袋中于室溫下透析3d，期間每隔6h換一次水；
5）將步驟4）透析后的得到溶液真空冷凍干燥3d得到醛基化透明質(zhì)酸固體；
6）稱取1.000g醛基化透明質(zhì)酸，加入100ml雙蒸水中，于37℃溶解得到醛基化透明質(zhì)酸溶液；
7）稱取300mg順鉑，加入150ml雙蒸水中，于37℃充分溶解得到順鉑溶液；
8）超聲作用下將步驟7）得到的順鉑溶液逐滴滴加至步驟6）得到的醛基化透明質(zhì)酸溶液之后轉(zhuǎn)移至磁力攪拌器上室溫攪拌2d；
9）將步驟8）制得的順鉑-醛基化透明質(zhì)酸納米復合物轉(zhuǎn)移至mwco2000透析袋中避光透析6h；
10）將步驟9）中透析后的納米復合物轉(zhuǎn)移至玻璃皿中進行預凍，再轉(zhuǎn)入真空干燥箱中冷凍干燥3d，得到干燥的順鉑-醛基化透明質(zhì)酸納米復合物固體。
實施例4
1）取1.000g透明質(zhì)酸于100ml雙蒸水中，磁力攪拌充分溶解；
2）稱取0.563g氧化劑高碘酸鈉加入步驟1）得到的溶液中，避光反應6h；
3）在步驟2）得到的溶液中加入0.163g乙二醇反應30min，以終止氧化反應；
4）將步驟3）得到的溶液置于mwco3500的透析袋中于室溫下透析3d，期間每隔6h換一次水；
5）將步驟4）透析后的得到溶液真空冷凍干燥3d得到醛基化透明質(zhì)酸固體；
6）稱取1.000g醛基化透明質(zhì)酸，加入100ml雙蒸水中，于37℃溶解得到醛基化透明質(zhì)酸溶液；
7）稱取400mg順鉑，加入200ml雙蒸水中，于37℃充分溶解得到順鉑溶液；
8）超聲作用下將步驟7）得到的順鉑溶液逐滴滴加至步驟6）得到的醛基化透明質(zhì)酸溶液之后轉(zhuǎn)移至磁力攪拌器上室溫攪拌2d；
9）將步驟8）制得的順鉑-醛基化透明質(zhì)酸納米復合物轉(zhuǎn)移至mwco2000透析袋中避光透析6h；
10）將步驟9）中透析后的納米復合物轉(zhuǎn)移至玻璃皿中進行預凍，再轉(zhuǎn)入真空干燥箱中冷凍干燥3d，得到干燥的順鉑-醛基化透明質(zhì)酸納米復合物固體。
實施例5
1）取1.000g透明質(zhì)酸于100ml雙蒸水中，磁力攪拌充分溶解；
2）稱取0.563g氧化劑高碘酸鈉加入步驟1）得到的溶液中，避光反應6h；
3）在步驟2）得到的溶液中加入0.163g乙二醇反應30min，以終止氧化反應；
4）將步驟3）得到的溶液置于mwco3500的透析袋中于室溫下透析3d，期間每隔6h換一次水；
5）將步驟4）透析后的得到溶液真空冷凍干燥3d得到醛基化透明質(zhì)酸固體；
6）稱取1.000g醛基化透明質(zhì)酸，加入100ml雙蒸水中，于37℃溶解得到醛基化透明質(zhì)酸溶液；
7）稱取500mg順鉑，加入250ml雙蒸水中，于37℃充分溶解得到順鉑溶液；
8）超聲作用下將步驟7）得到的順鉑溶液逐滴滴加至步驟6）得到的醛基化透明質(zhì)酸溶液之后轉(zhuǎn)移至磁力攪拌器上室溫攪拌2d；
9）將步驟8）制得的順鉑-醛基化透明質(zhì)酸納米復合物轉(zhuǎn)移至mwco2000透析袋中避光透析6h；
10）將步驟9）中透析后的納米復合物轉(zhuǎn)移至玻璃皿中進行預凍，再轉(zhuǎn)入真空干燥箱中冷凍干燥3d，得到干燥的順鉑-醛基化透明質(zhì)酸納米復合物固體。
以上所述僅為本發(fā)明的制備方法，凡依本發(fā)明申請專利范圍所做的均等變化與修飾，皆應屬本發(fā)明的涵蓋范圍。