本發(fā)明涉及一種酶復合保護劑及其制備方法，更具體地說，本發(fā)明涉及一種超氧化物歧化酶復合保護劑及其制備方法。
背景技術：
已知超氧化物歧化酶是生物體內存在的抗氧化金屬酶，具有催化超氧陰離子自由基歧化生成氧和過氧化氫的功能，在機體氧化與抗氧化平衡中起到了重要作用。
超氧化物歧化酶為純天然的生物活性物質，對人體無毒副作用，屬酸性蛋白酶，活性和催化效率與其含量和所處環(huán)境的理化因素有關。超氧化物歧化酶活性在常溫下穩(wěn)定性差，生物半衰期短，在自然環(huán)境下會隨著時間的推移慢慢減小，從而限制了其在臨床應用。
cn104586766a公開了一種酶活性穩(wěn)定的超氧化物歧化酶制劑，該方法提供的超氧化物歧化酶制劑中含有超氧化物歧化酶、醇類溶劑、乳化劑和油，借助乳化劑的作用，使分散于醇類溶劑中的超氧化物歧化酶被包裹于油相內，由此獲得單相、透明的超氧化物歧化酶油包醇制劑，從而避免了超氧化物歧化酶的降解，增強了超氧化物歧化酶的穩(wěn)定性，利于其發(fā)揮活性功能。
cn1245831公開了一種超氧化物歧化酶耐高溫、不失活的制備方法，該方法是在提取的固體粉末狀超氧化物歧化酶中加入2-8％固體狀保護劑，將它們按上述比例混勻后再進行凍干處理，可保證超氧化物歧化酶酶活力的穩(wěn)定性，并擴充了產品開發(fā)和應用范圍，相對保證了含超氧化物歧化酶的產品在高溫工藝中及常溫儲存下不易變質。
但是，存在以下問題：(1)采用油包醇制劑或者固體狀保護劑不能同時提高超氧化物歧化酶活性和穩(wěn)定性，大大限制了超氧化物歧化酶的應用；(2)制備工藝不夠簡單，成本較高。
技術實現要素：
為了解決現有技術所存在的上述問題，本發(fā)明的目的在于提供一種超氧化物歧化酶復合保護劑，該復合保護劑可以同時提高超氧化物歧化酶活性和穩(wěn)定性。
本發(fā)明的另一個目的在于提供一種制備超氧化物歧化酶復合保護劑的方法。該方法工藝過程簡單，成本低廉。
本發(fā)明技術方案如下：
方案一
一種超氧化物歧化酶復合保護劑的制備方法，其特征在于，由以下步驟制備：
(1)將帶正電氨基酸和葡萄糖以摩爾比1:1溶于超純水中，制成0.6mol/l溶液，并將其置于沸水浴中加熱1小時，冷卻后得反應產物原液；
(2)將34.2～57.5g增效劑、上述步驟(1)所得反應產物原液65ml,溶于超純水中，搖勻，并定容至1l，得到滅菌前的復合保護劑；
(3)將上述步驟(2)所得物在121℃滅菌20min得超氧化物歧化酶復合保護劑。
本發(fā)明上述技術方案的進一步優(yōu)選方案如下：所述帶正電氨基酸選自賴氨酸、精氨酸或組氨酸中的一種。
本發(fā)明上述技術方案的進一步優(yōu)選方案如下：所述增效劑包括乳糖30g～37g，所述乳糖的作用是進一步提高超氧化物歧化酶穩(wěn)定性。
本發(fā)明上述技術方案的進一步優(yōu)選方案如下：所述增效劑還包括氯化鈣10g～13g，所述氯化鈣的作用是進一步提高超氧化物歧化酶穩(wěn)定性。
本發(fā)明上述技術方案的進一步優(yōu)選方案如下：所述增效劑還包括蘆薈多糖0.1g～0.3g和/或聚乙二醇0.05g～0.2g，所述蘆薈多糖和聚乙二醇的作用是使超氧化物歧化酶使用時在皮膚形成薄膜，促進傷口愈合。
本發(fā)明上述技術方案的進一步優(yōu)選方案如下：所述增效劑還包括山梨酸鉀5g～7g，所述山梨酸鉀能起抑菌作用。
本發(fā)明上述技術方案的進一步優(yōu)選方案如下：所述增效劑由乳糖30g～37g、氯化鈣10g～13g、蘆薈多糖0.1g～0.3g、聚乙二醇0.05g～0.2g和山梨酸鉀5g～7g組成。
本發(fā)明上述技術方案的進一步優(yōu)選方案如下：所述增效劑由乳糖34.2g、氯化鈣11.1g、蘆薈多糖0.2g、聚乙二醇0.1g和山梨酸鉀6g組成。
方案二
一種根據方案一任意一項所述的一種超氧化物歧化酶復合保護劑的制備方法制備得到的超氧化物歧化酶復合保護劑。
與現有技術相比而言，本發(fā)明具有以下優(yōu)點：
(1)本發(fā)明提供的超氧化物歧化酶復合保護劑不僅使酶活提高了20％，而且穩(wěn)定性大大增加，常溫儲存期增加了近一倍；
(2)本發(fā)明提供的超氧化物歧化酶復合保護劑具有促進傷口愈合和抑菌效果；
(3)本發(fā)明提供的超氧化物歧化酶復合保護劑的制備方法僅僅包括水浴加熱、物理混合、滅菌等常規(guī)簡單步驟，不需要凍干等復雜高能耗的步驟，成本較低。
具體實施方式
下面結合具體的實施方式對本發(fā)明作進一步的描述。
1.根據本發(fā)明提出的超氧化物歧化酶復合保護劑及其制備方法可選因素較多，可以設計出多種實施例，因此具體的實施例僅作為本發(fā)明的具體實現方式的示例性說明，而不構成對本發(fā)明范圍的限制。為了具體的描述本發(fā)明，有助于本領域的技術人員進一步理解本發(fā)明，選擇以下實施例進行示例性說明。應當指出的是，對本領域的普通技術人員來說，在不脫離本發(fā)明構思的前提下，還可以做出若干變形和改進。這些都屬于本發(fā)明的保護范圍。
實施例1
一種超氧化物歧化酶復合保護劑的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
(1)將帶正電氨基酸(精氨酸)和葡萄糖以摩爾比1:1溶于超純水中，制成0.6mol/l溶液，并將其置于沸水浴中加熱1小時，冷卻后得反應產物原液；
(2)將增效劑(乳糖34.2g)、上述步驟(1)所得反應產物原液65ml,溶于超純水中，搖勻，并定容至1l，得到滅菌前的復合保護劑；
(3)將上述步驟(2)所得物在121℃滅菌20min得樣品1。
實施例2
一種超氧化物歧化酶復合保護劑的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
(1)將帶正電氨基酸(精氨酸)和葡萄糖以摩爾比1:1溶于超純水中，制成0.6mol/l溶液，并將其置于沸水浴中加熱1小時，冷卻后得反應產物原液；
(2)將增效劑(乳糖34.2g、氯化鈣11.1g)、上述步驟(1)所得反應產物原液65ml,溶于超純水中，搖勻，并定容至1l，得到滅菌前的復合保護劑；
(3)將上述步驟(2)所得物在121℃滅菌20min得樣品2。
實施例3
一種超氧化物歧化酶復合保護劑的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
(1)將帶正電氨基酸(精氨酸)和葡萄糖以摩爾比1:1溶于超純水中，制成0.6mol/l溶液，并將其置于沸水浴中加熱1小時，冷卻后得反應產物原液；
(2)將增效劑(乳糖34.2g、蘆薈多糖0.2g)，上述步驟(1)所得反應產物原液65ml,溶于超純水中，搖勻，并定容至1l，得到滅菌前的復合保護劑；
(3)將上述步驟(2)所得物在121℃滅菌20min得樣品3。
實施例4
一種超氧化物歧化酶復合保護劑的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
(1)將帶正電氨基酸(精氨酸)和葡萄糖以摩爾比1:1溶于超純水中，制成0.6mol/l溶液，并將其置于沸水浴中加熱1小時，冷卻后得反應產物原液；
(2)將增效劑(乳糖34.2g、聚乙二醇0.1g)，上述步驟(1)所得反應產物原液65ml,溶于超純水中，搖勻，并定容至1l，得到滅菌前的復合保護劑；
(3)將上述步驟(2)所得物在121℃滅菌20min得樣品4。
實施例5
一種超氧化物歧化酶復合保護劑的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
(1)將帶正電氨基酸(精氨酸)和葡萄糖以摩爾比1:1溶于超純水中，制成0.6mol/l溶液，并將其置于沸水浴中加熱1小時，冷卻后得反應產物原液；
(2)將增效劑(乳糖34.2g、蘆薈多糖0.2g、聚乙二醇0.1g)，上述步驟(1)所得反應產物原液65ml,溶于超純水中，搖勻，并定容至1l，得到滅菌前的復合保護劑；
(3)將上述步驟(2)所得物在121℃滅菌20min得樣品5。
實施例6
一種超氧化物歧化酶復合保護劑的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
(1)將帶正電氨基酸(精氨酸)和葡萄糖以摩爾比1:1溶于超純水中，制成0.6mol/l溶液，并將其置于沸水浴中加熱1小時，冷卻后得反應產物原液；
(2)將增效劑(乳糖34.2g、山梨酸鉀6g)，上述步驟(1)所得反應產物原液65ml,溶于超純水中，搖勻，并定容至1l，得到滅菌前的復合保護劑；
(3)將上述步驟(2)所得物在121℃滅菌20min得樣品6。
實施例7
一種超氧化物歧化酶復合保護劑的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
(1)將帶正電氨基酸(精氨酸)和葡萄糖以摩爾比1:1溶于超純水中，制成0.6mol/l溶液，并將其置于沸水浴中加熱1小時，冷卻后得反應產物原液；
(2)將增效劑(乳糖34.2g、氯化鈣11.1g、蘆薈多糖0.2g、聚乙二醇0.1g)，上述步驟(1)所得反應產物原液65ml,溶于超純水中，搖勻，并定容至1l，得到滅菌前的復合保護劑；
(3)將上述步驟(2)所得物在121℃滅菌20min得樣品7。
實施例8
一種超氧化物歧化酶復合保護劑的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
(1)將帶正電氨基酸(精氨酸)和葡萄糖以摩爾比1:1溶于超純水中，制成0.6mol/l溶液，并將其置于沸水浴中加熱1小時，冷卻后得反應產物原液；
(2)將增效劑(乳糖30g、氯化鈣10g、蘆薈多糖0.1g、聚乙二醇0.05g、山梨酸鉀5g)，上述步驟(1)所得反應產物原液65ml,溶于超純水中，搖勻，并定容至1l，得到滅菌前的復合保護劑；
(3)將上述步驟(2)所得物在121℃滅菌20min得樣品8。
實施例9
一種超氧化物歧化酶復合保護劑的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
(1)將帶正電氨基酸(精氨酸)和葡萄糖以摩爾比1:1溶于超純水中，制成0.6mol/l溶液，并將其置于沸水浴中加熱1小時，冷卻后得反應產物原液；
(2)將增效劑(乳糖34.2g、氯化鈣11.1g、蘆薈多糖0.2g、聚乙二醇0.1g、山梨酸鉀6g)，上述步驟(1)所得反應產物原液65ml,溶于超純水中，搖勻，并定容至1l，得到滅菌前的復合保護劑；
(3)將上述步驟(2)所得物在121℃滅菌20min得樣品9。
實施例10
一種超氧化物歧化酶復合保護劑的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
(1)將帶正電氨基酸(精氨酸)和葡萄糖以摩爾比1:1溶于超純水中，制成0.6mol/l溶液，并將其置于沸水浴中加熱1小時，冷卻后得反應產物原液；
(2)將增效劑(乳糖37g、氯化鈣13g、蘆薈多糖0.3g、聚乙二醇0.2g、山梨酸鉀7g)，上述步驟(1)所得反應產物原液65ml,溶于超純水中，搖勻，并定容至1l，得到滅菌前的復合保護劑；
(3)將上述步驟(2)所得物在121℃滅菌20min得樣品10。
實施例11
本實例與實施例9的區(qū)別在于用賴氨酸代替精氨酸，制得樣品11。
實施例12
本實例與實施例9的區(qū)別在于用組氨酸代替精氨酸，制得樣品12。
對比實施例1
以滅菌后的超純水作為對照1。
對比實施例2
(1)將帶正電氨基酸(精氨酸)和葡萄糖以摩爾比1:1溶于超純水中，制成0.6mol/l溶液，并將其置于沸水浴中加熱1小時，冷卻后得反應產物原液；
(2)將上述步驟(1)所得反應產物原液65ml,溶于超純水中，搖勻，并定容至1l，得到滅菌前的復合保護劑；
(3)將上述步驟(2)所得物在121℃滅菌20min得對照2。
實施效果的評價
取超氧化物歧化酶(酶活力4500u/mg)10mg,溶解在20ml樣品或對照中。
1、酶活性的測定：采用鄰苯三酚自氧化測定法。
2、溫度加速法測定其酶活損失10％時的常溫貯存期。
表1實施效果評價