本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種生物安全性碳量子點(diǎn)負(fù)載阿霉素復(fù)合體及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

癌癥是目前威脅人類生命健康的重要疾病之一，每年有幾百萬人死于癌癥，關(guān)于癌癥的治療是醫(yī)務(wù)工作者及科研人員不斷探索的話題。除了手術(shù)治療外，化學(xué)療法是一種重要的治療方法。針對(duì)不同類型癌癥的化療藥物種類繁多，阿霉素是一種光譜抗癌藥物，對(duì)多種腫瘤細(xì)胞具有殺傷作用，臨床上廣泛應(yīng)用于急性淋巴細(xì)胞白血病、淋巴瘤、乳腺癌、卵巢癌、肺癌、胃癌、肝癌、頭頸部鱗癌等。但由于腫瘤細(xì)胞對(duì)阿霉素的攝取途徑單一，阿霉素入核發(fā)揮作用困難，故給藥劑量足夠才能達(dá)到殺傷腫瘤細(xì)胞的目的，加之阿霉素會(huì)同時(shí)殺傷正常細(xì)胞，導(dǎo)致藥物使用過程中并發(fā)諸多不良反應(yīng)。因此新型給藥系統(tǒng)逐漸引起研究者們的廣泛關(guān)注。

納米材料體積小，成本低，化學(xué)性能穩(wěn)定，生物相容性好，安全性高，易于制備與保存，是最具有應(yīng)用價(jià)值的載藥材料之一。碳量子點(diǎn)是一種粒徑小于10nm，自帶熒光的納米材料，具有良好的水溶性，熒光穩(wěn)定性，化學(xué)惰性，生物相容性，其表面帶有諸多功能基團(tuán)及化學(xué)鍵，可以與藥物或分子通過共價(jià)鍵結(jié)合。隨著對(duì)其合成工藝的改進(jìn)，碳量子點(diǎn)的制備原料更加容易獲取、無毒無害，制備方法更加簡(jiǎn)單、節(jié)能、環(huán)保。碳量子點(diǎn)已被作為熒光探針，標(biāo)記細(xì)胞或檢測(cè)生物體內(nèi)外元素及化學(xué)物質(zhì)含量。

新型載藥系統(tǒng)應(yīng)具備負(fù)載、釋放藥物；熒光追蹤藥物釋放過程，研究藥物作用機(jī)理；靶向針對(duì)腫瘤細(xì)胞的幾大特點(diǎn)。很多納米材料，如碳納米管、氧化石墨烯、cdse/zns量子點(diǎn)、樹狀大分子等，具有較好載藥性能，但由于材料生物安全性隱患，制備工藝不夠簡(jiǎn)單，不具備體積優(yōu)勢(shì)，或不具備熒光性能等問題，無法達(dá)到載藥系統(tǒng)最好的應(yīng)用需求。因此新型載藥材料的研究成為當(dāng)務(wù)之急。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的上述不足，本發(fā)明提供了一種生物安全性碳量子點(diǎn)負(fù)載阿霉素復(fù)合體及其制備方法和應(yīng)用，可有效解決現(xiàn)有載藥系統(tǒng)存在安全隱患，制備工藝復(fù)雜等問題。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是：

一種生物安全性碳量子點(diǎn)負(fù)載阿霉素復(fù)合體，其制備方法包括以下步驟：

(1)將市售牛奶和去離子水按體積比為5-6:4-5混合，然后置于160-200℃加熱2-4h；

(2)將步驟(1)所得溶液自然冷卻至室溫，然后在10000-12000r/min條件下離心30-45min，取上清液；

(3)將步驟(2)所得上清液用0.22μm的濾膜過濾，得碳量子點(diǎn)溶液；

(4)將步驟(3)所得碳量子點(diǎn)溶液真空凍干，再加入去離子水，制成碳量子點(diǎn)水溶液；

(5)將鹽酸阿霉素粉末溶于去離子水中，制成阿霉素水溶液；

(6)將步驟(4)所得碳量子點(diǎn)水溶液、步驟(5)所得阿霉素水溶液和pbs溶液混合，制成ph＝7.4的混合溶液；其中，混合溶液中阿霉素濃度為100-150μg/ml，碳量子點(diǎn)濃度為1.5-4.5mg/ml；

(7)將步驟(6)所得混合溶液置于100-200r/min條件下，避光反應(yīng)12-24h，然后透析2-4h，除去未負(fù)載的阿霉素和碳量子點(diǎn)，得生物安全性碳量子點(diǎn)負(fù)載阿霉素復(fù)合體；其中，透析液為去離子水。

進(jìn)一步地，步驟(1)中將牛奶和去離子水按體積比為5:4混合，然后置于180℃加熱2h。

進(jìn)一步地，步驟(6)中所得混合溶液中阿霉素濃度為100μg/ml，碳量子點(diǎn)濃度為3mg/ml。

上述制備的生物安全性碳量子點(diǎn)負(fù)載阿霉素復(fù)合體可作為新型載藥復(fù)合體替代單純的阿霉素，應(yīng)用于腫瘤疾病化療領(lǐng)域。

本發(fā)明提供的一種生物安全性碳量子點(diǎn)負(fù)載阿霉素復(fù)合體及其制備方法和應(yīng)用，具有以下有益效果：

(1)本發(fā)明提供的碳量子點(diǎn)載體本身合成工藝簡(jiǎn)單，原料無毒無害，廉價(jià)易得；藥物負(fù)載方法簡(jiǎn)單，條件要求較低，易于操作，可重復(fù)性高，與其他納米載藥材料相比，制備成本及實(shí)施條件更低。

(2)本發(fā)明制備的生物安全性碳量子點(diǎn)負(fù)載阿霉素復(fù)合體，具有良好的熒光穩(wěn)定性，生物安全性高，生物相容性好；碳量子點(diǎn)可以協(xié)助阿霉素通過多種途徑被細(xì)胞更好的攝取。相比其他非熒光納米材料，該復(fù)合體不僅具有良好的熒光穩(wěn)定性，而且體積和理化性能也較佳。

(3)本發(fā)明制備的生物安全性碳量子點(diǎn)負(fù)載阿霉素復(fù)合體，阿霉素負(fù)載率高，可達(dá)87％，進(jìn)而降低了載藥復(fù)合體的使用劑量，在實(shí)際應(yīng)用中更加高效便捷；同時(shí)，阿霉素的釋放具有ph敏感性，在ph＝5.0環(huán)境下釋放率最高，在ph＝7.4時(shí)釋放率最低，可以達(dá)到針對(duì)腫瘤組織或細(xì)胞給藥，減小對(duì)正常組織的破壞，減輕毒副作用。

(4)本發(fā)明制備的生物安全性碳量子點(diǎn)負(fù)載阿霉素復(fù)合體，相比單純的阿霉素，該復(fù)合體對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷效率明顯提高，對(duì)正常細(xì)胞的殺傷性明顯降低，復(fù)合體可以將阿霉素傳遞進(jìn)入腫瘤細(xì)胞細(xì)胞核，破壞腫瘤細(xì)胞核內(nèi)dna，起到殺傷作用，有助于提高癌癥的治療效率，降低化療藥物的不良反應(yīng)。

(5)復(fù)合體具有良好的熒光性能，可跟蹤細(xì)胞攝取藥物的過程，定位藥物進(jìn)入細(xì)胞的位置。

附圖說明

圖1為碳量子點(diǎn)(cds)和碳量子點(diǎn)負(fù)載阿霉素復(fù)合體(cds-dox)的透射電鏡(tem)，掃描電鏡(sem)，原子力顯微鏡(afm)圖。

圖2為碳量子點(diǎn)(cds)和生物安全性碳量子點(diǎn)負(fù)載阿霉素復(fù)合體(cds-dox)的熒光光譜圖和紫外光譜圖。

圖3為碳量子點(diǎn)(cds)和生物安全性碳量子點(diǎn)負(fù)載阿霉素復(fù)合體(cds-dox)的紅外光譜圖、x射線光子能譜圖和x射線衍射圖。

圖4為單純阿霉素(dox)和生物安全性碳量子點(diǎn)負(fù)載阿霉素復(fù)合體(cds-dox)與對(duì)腺樣囊性癌細(xì)胞和小鼠成纖維細(xì)胞殺傷性檢測(cè)結(jié)果。

圖5為生物安全性碳量子點(diǎn)負(fù)載阿霉素復(fù)合體被腺樣囊性癌細(xì)胞攝取后的共聚焦顯微鏡呈像結(jié)果。

圖6為生物安全性碳量子點(diǎn)負(fù)載阿霉素復(fù)合體作用于腺樣囊性癌細(xì)胞，48h后腫瘤細(xì)胞所處周期的結(jié)果。

圖7為不同ph環(huán)境下，碳量子點(diǎn)負(fù)載阿霉素復(fù)合體中阿霉素的釋放率。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

一種生物安全性碳量子點(diǎn)負(fù)載阿霉素復(fù)合體，其制備方法包括以下步驟：

(1)將市售牛奶和去離子水按體積比為5:4混合，然后置于180℃加熱2h；

(2)將步驟(1)所得溶液自然冷卻至室溫，然后在12000r/min條件下離心30min，取上清液；

(3)將步驟(2)所得上清液用0.22μm的濾膜過濾，得碳量子點(diǎn)溶液；

(4)將步驟(3)所得碳量子點(diǎn)溶液真空凍干，再加入去離子水，制成12mg/ml的水溶液；

(5)將鹽酸阿霉素粉末溶于去離子水中，制成400μg/ml的水溶液；

(6)將步驟(4)所得碳量子點(diǎn)水溶液、步驟(5)所得阿霉素水溶液和pbs溶液按體積比為1:1:2混合，制成ph＝7.4的混合溶液；

(7)將步驟(6)所得混合溶液置于200r/min條件下，避光反應(yīng)24h，然后用mwco＝1000da的透析袋透析2h(透析液為去離子水)，除去未負(fù)載的阿霉素和碳量子點(diǎn)，得生物安全性碳量子點(diǎn)負(fù)載阿霉素復(fù)合體。

碳量子點(diǎn)(cds)和上述制備的生物安全性碳量子點(diǎn)負(fù)載阿霉素復(fù)合體(cds-dox)的電鏡圖如圖1所示，圖1-1和1-2分別為cds和cds-dox的透射電鏡tem圖，圖1-3和1-4分別為cds和cds-dox的掃描電鏡sem圖，圖1-5和1-6分別為cds和cds-dox的原子力顯微鏡afm圖。由圖1可知，單純碳量子點(diǎn)的粒徑在5-10nm，高度在1.5nm左右，而負(fù)載了阿霉素之后，載藥復(fù)合體粒徑、高度和形貌均發(fā)生了變化，說明該方法成功的將阿霉素負(fù)載到碳量子點(diǎn)表面。

碳量子點(diǎn)(cds)和生物安全性碳量子點(diǎn)負(fù)載阿霉素復(fù)合體(cds-dox)的熒光光譜圖和紫外光譜圖見圖2；其中，圖2-1為熒光光譜圖，圖2-2和2-3(圖2-2的部分放大圖)為紫外光譜圖。由圖2可知，合成的生物安全性碳量子點(diǎn)負(fù)載阿霉素復(fù)合體波峰發(fā)生了移動(dòng)，且表現(xiàn)為藍(lán)移即波峰向波數(shù)減小方向移動(dòng)，此現(xiàn)象說明生物安全性碳量子點(diǎn)負(fù)載阿霉素復(fù)合體合成成功。

碳量子點(diǎn)(cds)和生物安全性碳量子點(diǎn)負(fù)載阿霉素復(fù)合體(cds-dox)的紅外光譜圖、x射線光子能譜圖和x射線衍射圖見圖3；其中，圖3-1為紅外光譜圖，圖3-2、3-3、3-4和3-5為x射線光子能譜圖，圖3-6為x射線衍射圖。紅外光譜圖表明，生物安全性碳量子點(diǎn)負(fù)載阿霉素復(fù)合體具備碳量子點(diǎn)及阿霉素的特征峰，但是波峰強(qiáng)度及位置發(fā)生了一定的變化，同時(shí)相比阿霉素有新的特征峰形成。這表明生物安全性碳量子點(diǎn)負(fù)載阿霉素復(fù)合體的成功合成。x射線光子能譜圖表明，生物安全性碳量子點(diǎn)負(fù)載阿霉素復(fù)合體主要由c、n、o構(gòu)成，三種元素的分譜圖顯示了載藥復(fù)合體中存在的化學(xué)鍵，c＝c-n、c-n鍵的存在可以間接證明生物安全性碳量子點(diǎn)負(fù)載阿霉素復(fù)合體的成功合成。x射線衍射圖表明，碳量子點(diǎn)、阿霉素、生物安全性碳量子點(diǎn)負(fù)載阿霉素復(fù)合體均只有一個(gè)寬大柔和的衍射峰，說明三種物質(zhì)均為非晶體。

實(shí)施例2

一種生物安全性碳量子點(diǎn)負(fù)載阿霉素復(fù)合體，其制備方法包括以下步驟：

(1)將市售牛奶和去離子水按體積比為1:1混合，然后置于180℃加熱2h；

(2)將步驟(1)所得溶液自然冷卻至室溫，然后在12000r/min條件下離心45min，取上清液；

(3)將步驟(2)所得上清液用0.22μm的濾膜過濾，得碳量子點(diǎn)溶液；

(4)將步驟(3)所得碳量子點(diǎn)溶液真空凍干，再加入去離子水，制成12mg/ml的水溶液；

(5)將鹽酸阿霉素粉末溶于去離子水中，制成400μg/ml的水溶液；

(6)將步驟(4)所得碳量子點(diǎn)水溶液、步驟(5)所得阿霉素水溶液和pbs溶液按體積比為1:2:5混合，制成ph＝7.4的混合溶液；

(7)將步驟(6)所得混合溶液置于200r/min條件下，避光反應(yīng)24h，制得。

該方法制得的產(chǎn)品與實(shí)施例1相比，溶液偏紅，阿霉素剩余較多。

實(shí)施例3

一種生物安全性碳量子點(diǎn)負(fù)載阿霉素復(fù)合體，其制備方法包括以下步驟：

(1)將市售牛奶和去離子水按體積比為5:4混合，然后置于180℃加熱2h；

(2)將步驟(1)所得溶液自然冷卻至室溫，然后在12000r/min條件下離心30min，取上清液；

(3)將步驟(2)所得上清液用0.22μm的濾膜過濾，得碳量子點(diǎn)溶液；

(4)將步驟(3)所得碳量子點(diǎn)溶液真空凍干，再加入去離子水，制成12mg/ml的水溶液；

(5)將鹽酸阿霉素粉末溶于去離子水中，制成400μg/ml的水溶液；

(6)將步驟(4)所得碳量子點(diǎn)水溶液、步驟(5)所得阿霉素水溶液和pbs溶液按體積比為3:2:3混合，制成ph＝7.4的混合溶液；

(7)將步驟(6)所得混合溶液置于200r/min條件下，避光反應(yīng)24h，制得。

該方法制得的產(chǎn)品與實(shí)施例1相比，溶液偏黃，阿霉素剩余較多。

實(shí)施例4

一種生物安全性碳量子點(diǎn)負(fù)載阿霉素復(fù)合體，其制備方法包括以下步驟：

(1)將市售牛奶和去離子水按體積比為5:4混合，然后置于180℃加熱3h；

(2)將步驟(1)所得溶液自然冷卻至室溫，然后在12000r/min條件下離心30min，取上清液；

(3)將步驟(2)所得上清液用0.22μm的濾膜過濾，得碳量子點(diǎn)溶液；

(4)將步驟(3)所得碳量子點(diǎn)溶液真空凍干，再加入去離子水，制成12mg/ml的水溶液；

(5)將鹽酸阿霉素粉末溶于去離子水中，制成400μg/ml的水溶液；

(6)將步驟(4)所得碳量子點(diǎn)水溶液、步驟(5)所得阿霉素水溶液和pbs溶液按體積比為1:1:2混合，制成ph＝7.4的混合溶液；

(7)將步驟(6)所得混合溶液置于200r/min條件下，避光反應(yīng)12h，制得。

該方法制得的產(chǎn)品與實(shí)施例1外觀一致。

實(shí)驗(yàn)例

采用實(shí)施例1制得的生物安全性碳量子點(diǎn)負(fù)載阿霉素復(fù)合體進(jìn)行如下實(shí)驗(yàn)：

1、本發(fā)明產(chǎn)品對(duì)腺樣囊性癌細(xì)胞和小鼠成纖維細(xì)胞的殺傷性實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)過程：

(1)將腺樣囊性癌細(xì)胞、小鼠成纖維細(xì)胞分別接種于96孔板，并加入200μl含10％胎牛血清的rpmi培養(yǎng)基，在含有5％co2的37℃恒溫孵箱中孵育24h，細(xì)胞貼壁；

(2)接著向步驟(1)所得細(xì)胞中分別加入5μl阿霉素、碳量子點(diǎn)負(fù)載阿霉素的復(fù)合體(使得血清中的阿霉素濃度均為1.5μm)，共同孵育24h、48h、72h，同時(shí)設(shè)置不加藥物的空白對(duì)照組(以pbs替代)；

(3)孵育結(jié)束，除去培養(yǎng)基，加入含有10％cck-8檢測(cè)液但不含胎牛血清的rpmi培養(yǎng)基，孵育1.5h；

(4)在450nm激發(fā)波長(zhǎng)下進(jìn)行cck-8檢測(cè)，得出od值，計(jì)算出細(xì)胞存活率，用spss軟件對(duì)組間的差異進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

殺傷實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖4，其中圖4-1為阿霉素(dox)與碳量子點(diǎn)負(fù)載阿霉素復(fù)合體(cds-dox)對(duì)腺樣囊性癌細(xì)胞的殺傷性結(jié)果圖；圖4-2為阿霉素(dox)與碳量子點(diǎn)負(fù)載阿霉素復(fù)合體(cds-dox)對(duì)小鼠成纖維細(xì)胞的殺傷性結(jié)果圖。

由圖4可知，碳量子點(diǎn)負(fù)載阿霉素的復(fù)合體對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用強(qiáng)于單純的阿霉素，對(duì)正常細(xì)胞的殺傷性弱于單純阿霉素。分析原因，推測(cè)碳量子點(diǎn)負(fù)載阿霉素后可以幫助阿霉素進(jìn)入腫瘤細(xì)胞核，提高阿霉素的殺傷效率；而阿霉素本身對(duì)正常細(xì)胞的殺傷性就要低于腫瘤細(xì)胞，量子點(diǎn)負(fù)載阿霉素后，阿霉素在正常細(xì)胞中的釋放率低，釋放緩慢，因而殺傷性進(jìn)一步降低。

2、細(xì)胞核染色實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)過程：

(1)將腺樣囊性癌細(xì)胞接種于直徑為35nm的培養(yǎng)皿中，并加入2ml含10％胎牛血清的rpmi培養(yǎng)基，在含有5％co2的37℃恒溫孵箱中孵育24h，細(xì)胞貼壁；

(2)加入100μl碳量子點(diǎn)(cds)、阿霉素(dox)、碳量子點(diǎn)負(fù)載阿霉素的復(fù)合體(cds-dox)(使得血清中的碳量子點(diǎn)濃度為300μg/ml，阿霉素濃度均為3.5μm)分別與腺樣囊性癌細(xì)胞共同孵育4h；

(3)去除培養(yǎng)基并用pbs洗滌，用4％的多聚甲醛固定15min，pbs洗滌去除多聚甲醛；

(4)將與碳量子點(diǎn)(cds)共同孵育的實(shí)驗(yàn)組加入1ml6μm的dii細(xì)胞膜染色劑，在搖床中染色15min，pbs洗滌3次；再加入1ml1μg/ml的dapi細(xì)胞核染色劑，在搖床中染色15min，pbs洗滌除去dapi染色劑，加入10％的甘油封片待檢；

(5)將與單純阿霉素(dox)共同孵育的實(shí)驗(yàn)組加入1ml6μm的dio細(xì)胞膜染色劑，在搖床中染色15min，pbs洗滌3次；再加入1ml1μg/ml的dapi細(xì)胞核染色劑，在搖床中染色15min，pbs洗滌除去dapi染色劑，加入10％的甘油封片待檢；

(6)將與碳量子點(diǎn)負(fù)載阿霉素的復(fù)合體(cds-dox)共同孵育的實(shí)驗(yàn)組加入加入1ml1μg/ml的dapi細(xì)胞核染色劑，在搖床中染色15min，pbs洗滌除去dapi染色劑，加入10％的甘油封片待檢；

(7)在共聚焦顯微鏡下觀察細(xì)胞染色情況。

3組細(xì)胞與腺樣囊性癌細(xì)胞共同孵育4h后，其共聚焦顯微鏡呈像結(jié)果圖見圖5。

由圖5可知，單純的碳量子點(diǎn)可以進(jìn)入細(xì)胞，主要分布于細(xì)胞質(zhì)中；單純阿霉素可以進(jìn)入細(xì)胞，存在于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中，在核膜處有聚集；碳量子點(diǎn)負(fù)載阿霉素組，進(jìn)入細(xì)胞核的阿霉素明顯增多，并且主要集中于細(xì)胞核。這也證明了圖4實(shí)驗(yàn)結(jié)果，碳量子點(diǎn)負(fù)載阿霉素的復(fù)合體，通過作用于細(xì)胞核提高對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷效率。

3、碳量子點(diǎn)負(fù)載阿霉素復(fù)合體對(duì)腺樣囊性癌細(xì)胞周期影響的實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)過程：

(1)將小鼠成纖維細(xì)胞、腺樣囊性癌細(xì)胞分別接種于直徑為35nm的培養(yǎng)皿中，并加入2ml含10％胎牛血清的rpmi培養(yǎng)基，在含有5％co2的37℃恒溫孵箱中孵育24h，細(xì)胞貼壁；

(2)加入100μlpbs、碳量子點(diǎn)(cds)、單純阿霉素(dox)、碳量子點(diǎn)負(fù)載阿霉素的復(fù)合體(cds-dox)(使得血清中的碳量子點(diǎn)濃度為200μg/ml，阿霉素濃度均為1.5μm)分別與小鼠成纖維細(xì)胞、腺樣囊性癌細(xì)胞共同孵育48h；

(3)孵育結(jié)束后，離心并用pbs重懸洗滌，得到細(xì)胞沉淀，用100μl的1×annexinvbinding溶液重懸,接著加入5μlannexinv-fitc和5μl的propidiumiodide(pi)染色劑，避光染色15min；

(4)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)分析各組細(xì)胞所處的細(xì)胞周期。

pbs、碳量子點(diǎn)(cds)、單純阿霉素(dox)、碳量子點(diǎn)負(fù)載阿霉素的復(fù)合體(cds-dox)分別與小鼠成纖維細(xì)胞、腺樣囊性癌細(xì)胞共同孵育48h后，各組細(xì)胞所處周期結(jié)果見圖6；其中圖6-1、6-2、6-3和6-4分別為小鼠成纖維細(xì)胞(l929)中加入pbs、cds、dox和cds-dox的結(jié)果圖；6-5、6-6、6-7和6-8分別為腺樣囊性癌細(xì)胞(acc-2)中加入pbs、cds、dox和cds-dox的結(jié)果圖。

由圖6可知，小鼠成纖維細(xì)胞(l929)中，單純阿霉素組活細(xì)胞比例約為80％，碳量子點(diǎn)負(fù)載阿霉素組活細(xì)胞比例率約為86％，略高于單純阿霉素組。

腺樣囊性癌細(xì)胞(acc-2)中，單純阿霉素組活細(xì)胞比率約為49％，碳量子點(diǎn)負(fù)載阿霉素組活細(xì)胞比例率約為10％，復(fù)合體對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷性明顯提高；單純阿霉素組死亡細(xì)胞約為46％，處于凋亡晚期的細(xì)胞比率約為5％，二者比約為9：1，而碳量子點(diǎn)負(fù)載阿霉素組死亡細(xì)胞約為68％，處于凋亡晚期的細(xì)胞比率約為21％，二者比約為3：1，凋亡比例明顯提高。結(jié)果說明碳量子點(diǎn)負(fù)載阿霉素殺傷腫瘤細(xì)胞的機(jī)制可能為促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡。

4、阿霉素的釋放實(shí)驗(yàn)

體外用pbs溶液模擬體內(nèi)環(huán)境，分別設(shè)置ph＝5.0、ph＝6.8和ph＝7.4三個(gè)組，代表腫瘤細(xì)胞胞漿、腫瘤組織液和正常組織環(huán)境。將制備得到的碳量子點(diǎn)負(fù)載阿霉素復(fù)合體在以上三種ph環(huán)境下透析，通過測(cè)量透析袋外溶液的熒光強(qiáng)度，并利用阿霉素?zé)晒鈴?qiáng)度與濃度曲線，算出阿霉素的釋放量(透析出的阿霉素量)，即可得到阿霉素的釋放率，即未負(fù)載的阿霉素(a0)，從而推算出阿霉素的負(fù)載率(dle)。

計(jì)算公式如下：

dle＝(a1-a0)/a1

a1為制備步驟(6)中所使用的阿霉素總量。

通過計(jì)算可得阿霉素負(fù)載率為87％。

不同ph環(huán)境下，碳量子點(diǎn)負(fù)載阿霉素復(fù)合體中阿霉素的釋放率結(jié)果見圖7。由圖7可知，阿霉素負(fù)載率較高，藥物釋放有ph敏感性，在ph5.0環(huán)境下釋放率最高，在ph7.4時(shí)釋放率最低，可以達(dá)到針對(duì)腫瘤組織或細(xì)胞給藥，減小對(duì)正常組織的副作用；復(fù)合體具有一定的緩釋作用，10h后釋放逐漸趨于平穩(wěn)，監(jiān)測(cè)至72h仍在緩慢釋放。