本發(fā)明屬于生物醫(yī)用材料領(lǐng)域，特別是涉及一種殼聚糖-海藻酸鹽軟膠囊粒止血材料的制備方法。
背景技術(shù)：
：不可控制的大出血是戰(zhàn)爭(zhēng)、車(chē)禍及其他意外事故死亡的主要原因。開(kāi)發(fā)短時(shí)間內(nèi)止血的緊急救生止血材料，能夠有效降低出血導(dǎo)致的死亡。傳統(tǒng)的止血棉紗、繃帶等對(duì)于不規(guī)則形狀、深、窄、動(dòng)脈破裂等創(chuàng)傷的止血效果很不理想；止血粉雖然具有優(yōu)良的傷口適用性，但易進(jìn)入血液阻塞末梢動(dòng)脈流動(dòng)形成血栓。因此需要一種適用于現(xiàn)場(chǎng)和臨床急救用的，快速、安全、高效的止血材料來(lái)代替?zhèn)鹘y(tǒng)止血材料。殼聚糖是甲殼素脫乙酰后產(chǎn)生的一種天然生物多糖，迄今是自然界唯一的堿性多糖，其自然資源十分豐富。由于具有優(yōu)良的生物相容性、廣譜抗菌性、止血促傷口愈合作用，且可生物降解安全無(wú)毒，被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、生物工程等領(lǐng)域。海藻酸鹽是從海洋褐藻中提取的一種海藻多糖，無(wú)毒，有良好的生物降解性和相容性。由于其具有止血、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、抗高血脂、降低血糖、抗輻射等作用，在生物醫(yī)藥領(lǐng)域已被開(kāi)發(fā)成醫(yī)用敷料、軟骨組織工程修復(fù)、藥物緩控釋載體、蛋白質(zhì)及dna載體等材料。在與傷口滲出液接觸時(shí)，海藻酸鹽中的鈣離子可以和體液中的鈉離子發(fā)生離子交換，使它有很好的吸濕性和成膠性能。海藻酸鹽可以吸收20倍以上自己體積的液體，可以吸收傷口的滲出物，減少微生物孳生及其所可能產(chǎn)生的異味。當(dāng)海藻酸鹽材料用于接觸傷口表面時(shí)，它與傷口之間相互作用，會(huì)在傷口表面形成一層穩(wěn)定的網(wǎng)狀凝膠，可以保持一定的濕度，使傷口表面溫度保持在37℃左右，有利于肉芽組織的形成并加強(qiáng)巨噬細(xì)胞的功能，減輕疼痛并分解壞死組織，提供傷口較佳的愈合環(huán)境。在止血材料產(chǎn)品中，美國(guó)celox止血粉，hemcon止血繃帶都主要以殼聚糖為止血?jiǎng)?，英?guó)courtaulds公司在上世紀(jì)80年代就將商品名為sorbsan的海藻酸鹽纖維敷料應(yīng)用于止血領(lǐng)域，但存在著一些關(guān)鍵性的瓶頸問(wèn)題，限制了它們的廣泛應(yīng)用，特別是不規(guī)則形狀、深、窄、動(dòng)脈破裂等創(chuàng)傷的止血。2002年，quikclot沸石止血粉通過(guò)fda批準(zhǔn)用于嚴(yán)重出血?jiǎng)?chuàng)傷的急救，但在使用中quikclot止血粉存在放熱反應(yīng)會(huì)超過(guò)100℃高溫的缺陷，造成創(chuàng)面組織傷害。粉末狀止血材料很容易在脈管內(nèi)腔殘留，阻塞末梢動(dòng)脈流動(dòng)形成血栓。woundstat止血?jiǎng)┯?008年獲得美國(guó)fda認(rèn)可并在同年大量應(yīng)用于軍隊(duì)，但后來(lái)發(fā)現(xiàn)存在進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng)引起末梢血栓的風(fēng)險(xiǎn)，基于生物安全考慮，美軍2009年已宣布禁止永遠(yuǎn)使用woundstat。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，提供一種能快速止血的同時(shí)，兼?zhèn)淞己玫纳锖徒M織相容性，并解決顆粒物易殘留帶來(lái)的生物安全隱患的殼聚糖-海藻酸鹽軟膠囊粒止血材料的制備方法。本發(fā)明的上述目的通過(guò)以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)：一種殼聚糖-海藻酸鹽軟膠囊粒止血材料的制備方法，包括如下步驟：s1.分別制備殼聚糖溶液和乙酰丙酮鈣溶液，溶劑為1%~3%（v/v）醋酸水溶液，將殼聚糖溶液和乙酰丙酮鈣溶液混合，攪勻，即得含乙酰丙酮鈣的殼聚糖溶液；s2.將海藻酸鈉水溶液進(jìn)行渦旋震蕩，震蕩的轉(zhuǎn)速800~1500轉(zhuǎn)/min，利用針頭將上述含乙酰丙酮鈣的殼聚糖溶液注射到海藻酸鈉水溶液中，靜電成囊，原位交聯(lián)0.5~1.5h；s3.分出軟膠囊，洗滌，純凈水透析24h后于500~800w條件下微波干燥，即得軟膠囊粒。本發(fā)明交聯(lián)劑為乙酰丙酮鈣，替代了傳統(tǒng)有毒交聯(lián)劑，提高了材料安全性；替代了傳統(tǒng)的鈣鹽，由于離解鈣離子濃度適中，可以在材料成囊的同時(shí)發(fā)生原位交聯(lián)，原位交聯(lián)時(shí)采用漩渦震蕩，交聯(lián)更加均勻化，提高了溶脹性能；采用微波干燥，替代了傳統(tǒng)的熱風(fēng)干燥等方法，獲得顆粒態(tài)的膠囊粒，具備優(yōu)良的傷口適應(yīng)性，特別適用于深、窄和不規(guī)則的創(chuàng)傷止血。優(yōu)選地，s3所述洗滌是指先后分別用丙酮和50%乙醇水溶液洗滌軟膠囊3次以上。優(yōu)選地，上述方法制備獲得的殼聚糖-海藻酸鹽軟膠囊粒止血材料包括以下重量百分比組分：55%~70%殼聚糖；28%~42%海藻酸鈉；1%~4%乙酰丙酮鈣。優(yōu)選地，所述軟膠囊粒干燥狀態(tài)時(shí)呈顆粒狀，平均粒徑為0.8~2mm，溶脹后為近似球形或橢圓形的軟膠囊，體積增大至原來(lái)的8~15倍。更優(yōu)選地，所述軟膠囊粒干燥狀態(tài)為顆粒，平均粒徑為1.0~1.6mm，溶脹后為近似球形或橢圓形的軟膠囊，體積增大至原來(lái)的11~15倍。優(yōu)選地，上述方法中，所述殼聚糖分子量為100~250kda、脫乙酰度75%~95%；所述海藻酸鈉為食品級(jí)或醫(yī)藥級(jí)，粘度為400~1000mpa·s。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果：本發(fā)明制備方法中交聯(lián)劑采用乙酰丙酮鈣，替代了傳統(tǒng)有毒交聯(lián)劑，提高了材料安全性；替代了傳統(tǒng)的鈣鹽，由于乙酰丙酮鈣離解鈣離子濃度適中，可以在材料成囊的同時(shí)發(fā)生原位交聯(lián)，原位交聯(lián)時(shí)采用漩渦震蕩，交聯(lián)更加均勻化，提高了溶脹性能；采用微波干燥，替代了傳統(tǒng)的熱風(fēng)干燥等方法，獲得顆粒態(tài)的膠囊粒，具備優(yōu)良的傷口適應(yīng)性，特別適用于深、窄和不規(guī)則的創(chuàng)傷止血。制備工藝簡(jiǎn)單，易于工業(yè)化生產(chǎn)。具體實(shí)施方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步解釋說(shuō)明，其描述較為具體和詳細(xì)，但并不能因此而理解為對(duì)本發(fā)明專(zhuān)利范圍的限制，但凡采用等同替換或等效變換的形式所獲得的技術(shù)方案，均應(yīng)包括在本發(fā)明權(quán)利要求的保護(hù)范圍之內(nèi)。實(shí)施例1殼聚糖-海藻酸鹽軟膠囊粒止血材料的制備方法，包括以下步驟：s1.用200毫升3%（v/v）醋酸水溶液溶解5.7g殼聚糖（分子量250kda、脫乙酰度75%），制備殼聚糖溶液；用20毫升3%（v/v）醋酸水溶液溶解0.1g乙酰丙酮鈣，制備乙酰丙酮鈣溶液；將上述二者溶液混合，攪勻，即得含乙酰丙酮鈣的殼聚糖溶液；用100毫升純凈水溶解4.2g海藻酸鈉（食品級(jí)，粘度600mpa·s），制得海藻酸鈉水溶液；s2.將海藻酸鈉水溶液置于漩渦混合器上震蕩，轉(zhuǎn)速1000轉(zhuǎn)/min，采用7號(hào)針頭將上述含乙酰丙酮鈣的殼聚糖溶液注射到海藻酸鈉水溶液中，靜電成囊，原位交聯(lián)1h；s3.分出軟膠囊，先后分別用丙酮和50%乙醇水溶液洗滌，純凈水透析24h，500w微波干燥即得。該軟膠囊粒止血材料干燥狀態(tài)為顆粒，平均粒徑為1.6mm，可迅速吸水溶脹，溶脹后為近似球形或橢圓形的軟膠囊，體積為原來(lái)的13倍。實(shí)施例2殼聚糖-海藻酸鹽軟膠囊粒止血材料的制備方法，包括以下步驟：s1.用200毫升2%（v/v）醋酸水溶液溶解6.0g殼聚糖（分子量200kda、脫乙酰度80%），制備殼聚糖溶液；用20毫升2%（v/v）醋酸水溶液溶解0.3g乙酰丙酮鈣，制備乙酰丙酮鈣溶液；將上述二者溶液混合，攪勻，即得含乙酰丙酮鈣的殼聚糖溶液；用100毫升純凈水溶解3.7g海藻酸鈉（醫(yī)藥級(jí)，粘度800mpa·s），制得海藻酸鈉水溶液；s2.將海藻酸鈉水溶液置于漩渦混合器上震蕩，轉(zhuǎn)速800轉(zhuǎn)/min，采用7號(hào)針頭將上述含乙酰丙酮鈣的殼聚糖溶液注射到海藻酸鈉水溶液中，靜電成囊，原位交聯(lián)0.5h；s3.分出軟膠囊，先后分別用丙酮和50%乙醇水溶液洗滌，純凈水透析24h，600w微波干燥即得。該軟膠囊粒止血材料干燥狀態(tài)為顆粒，平均粒徑為1.2mm，可迅速吸水溶脹，溶脹后為近似球形或橢圓形的軟膠囊，體積為原來(lái)的11倍。實(shí)施例3殼聚糖-海藻酸鹽軟膠囊粒止血材料的制備方法，包括以下步驟：s1.用200毫升2%（v/v）醋酸水溶液溶解6.3g殼聚糖（分子量150kda、脫乙酰度85%），制備殼聚糖溶液；用20毫升2%（v/v）醋酸水溶液溶解0.2g乙酰丙酮鈣，制備乙酰丙酮鈣溶液；將上述二者溶液混合，攪勻，即得含乙酰丙酮鈣的殼聚糖溶液；用100毫升純凈水溶解3.5g海藻酸鈉（醫(yī)藥級(jí)，粘度800mpa·s），制得海藻酸鈉水溶液；s2.將海藻酸鈉水溶液置于漩渦混合器上震蕩，轉(zhuǎn)速1200轉(zhuǎn)/min，采用7號(hào)針頭將上述含乙酰丙酮鈣的殼聚糖溶液注射到海藻酸鈉水溶液中，靜電成囊，原位交聯(lián)1h；s3.分出軟膠囊，先后分別用丙酮和50%乙醇水溶液洗滌，純凈水透析24h，600w微波干燥即得。該軟膠囊粒止血材料干燥狀態(tài)為顆粒，平均粒徑為1.0mm，可迅速吸水溶脹，溶脹后為近似球形或橢圓形的軟膠囊，體積為原來(lái)的15倍。實(shí)施例4殼聚糖-海藻酸鹽軟膠囊粒止血材料的制備方法，包括以下步驟：s1.用200毫升1%（v/v）醋酸水溶液溶解5.5g殼聚糖（分子量100kda、脫乙酰度95%），制備殼聚糖溶液；用20毫升1%（v/v）醋酸水溶液溶解0.4g乙酰丙酮鈣，制備乙酰丙酮鈣溶液；將上述二者溶液混合，攪勻，即得含乙酰丙酮鈣的殼聚糖溶液；用100毫升純凈水溶解4.1g海藻酸鈉（醫(yī)藥級(jí)，粘度1000mpa·s），制得海藻酸鈉水溶液；s2.將海藻酸鈉水溶液置于漩渦混合器上震蕩，轉(zhuǎn)速1500轉(zhuǎn)/min，采用7號(hào)針頭將上述含乙酰丙酮鈣的殼聚糖溶液注射到海藻酸鈉水溶液中，靜電成囊，原位交聯(lián)1h；s3.分出軟膠囊，先后分別用丙酮和50%乙醇水溶液洗滌，純凈水透析24h，700w微波干燥即得。該軟膠囊粒止血材料干燥狀態(tài)為顆粒，平均粒徑為2.2mm，可迅速吸水溶脹，溶脹后為近似球形或橢圓形的軟膠囊，體積為原來(lái)的8倍。實(shí)施例5殼聚糖-海藻酸鹽軟膠囊粒止血材料的制備方法，包括以下步驟：s1.用200毫升1%（v/v）醋酸水溶液溶解7.0g殼聚糖（分子量150kda、脫乙酰度85%），制備殼聚糖溶液；用20毫升1%（v/v）醋酸水溶液溶解0.2g乙酰丙酮鈣，制備乙酰丙酮鈣溶液；將上述二者溶液混合，攪勻，即得含乙酰丙酮鈣的殼聚糖溶液；用100毫升純凈水溶解2.8g海藻酸鈉（食品級(jí)，粘度400mpa·s），制得海藻酸鈉水溶液；s2.將海藻酸鈉水溶液置于漩渦混合器上震蕩，轉(zhuǎn)速900轉(zhuǎn)/min，采用7號(hào)針頭將上述含乙酰丙酮鈣的殼聚糖溶液注射到海藻酸鈉水溶液中，靜電成囊，原位交聯(lián)1.5h；s3.分出軟膠囊，先后分別用丙酮和50%乙醇水溶液洗滌，純凈水透析24h，800w微波干燥即得。該軟膠囊粒止血材料干燥狀態(tài)為顆粒，平均粒徑為0.8mm，可迅速吸水溶脹，溶脹后為近似球形或橢圓形的軟膠囊，體積為原來(lái)的10倍。對(duì)比例1殼聚糖-海藻酸鹽軟膠囊粒止血材料的制備方法，包括以下步驟：s1.用200毫升1%（v/v）醋酸水溶液溶解7.0g殼聚糖（分子量150kda、脫乙酰度85%），制備殼聚糖溶液；用20毫升1%（v/v）醋酸水溶液溶解0.2g氯化鈣，制備氯化鈣溶液；將上述二者溶液混合，攪勻，即得含氯化鈣的殼聚糖溶液；用100毫升純凈水溶解2.8g海藻酸鈉（食品級(jí)，粘度400mpa·s），制得海藻酸鈉水溶液；s2.將海藻酸鈉水溶液置于漩渦混合器上震蕩，轉(zhuǎn)速900轉(zhuǎn)/min，采用7號(hào)針頭將上述含乙酰丙酮鈣的殼聚糖溶液注射到海藻酸鈉水溶液中，靜電成囊，原位交聯(lián)1.5h；s3.分出軟膠囊，先后分別用丙酮和50%乙醇水溶液洗滌，純凈水透析24h，800w微波干燥即得。該軟膠囊粒止血材料干燥狀態(tài)為顆粒，平均粒徑為1.0mm，可吸水溶脹，溶脹后為近似球形或橢圓形的軟膠囊，體積為原來(lái)的3倍。對(duì)比例2殼聚糖-海藻酸鹽軟膠囊粒止血材料的制備方法，包括以下步驟：s1.用200毫升1%（v/v）醋酸水溶液溶解7.0g殼聚糖（分子量150kda、脫乙酰度85%），制備殼聚糖水溶液；用20毫升1%（v/v）醋酸水溶液溶解0.2g乙酰丙酮鈣，制備乙酰丙酮鈣水溶液；將上述二者溶液混合，攪勻，即得含乙酰丙酮鈣的殼聚糖水溶液；用100毫升純凈水溶解2.8g海藻酸鈉（食品級(jí)，粘度400mpa·s），制得海藻酸鈉水溶液；s2.將海藻酸鈉水溶液置于磁力攪拌器上，轉(zhuǎn)速900轉(zhuǎn)/min，采用7號(hào)針頭將上述含乙酰丙酮鈣的殼聚糖溶液注射到海藻酸鈉水溶液中，靜電成囊，原位交聯(lián)1.5h；s3.分出軟膠囊，先后分別用丙酮和50%乙醇水溶液洗滌，純凈水透析24h，800w微波干燥即得。該軟膠囊粒止血材料干燥狀態(tài)為顆粒，平均粒徑為3.5mm，可吸水溶脹，溶脹后為形狀不規(guī)則的凝膠塊，體積為原來(lái)的4倍。對(duì)比例3殼聚糖-海藻酸鹽軟膠囊粒止血材料的制備方法，包括以下步驟：s1.用200毫升1%（v/v）醋酸水溶液溶解7.0g殼聚糖（分子量150kda、脫乙酰度85%），制備殼聚糖水溶液；用20毫升1%（v/v）醋酸水溶液溶解0.2g乙酰丙酮鈣，制備乙酰丙酮鈣水溶液；將上述二者溶液混合，攪勻，即得含乙酰丙酮鈣的殼聚糖水溶液；用100毫升純凈水溶解2.8g海藻酸鈉（食品級(jí)，粘度400mpa·s），制得海藻酸鈉水溶液；s2.將海藻酸鈉水溶液置于漩渦混合器上震蕩，轉(zhuǎn)速900轉(zhuǎn)/min，采用7號(hào)針頭將上述含乙酰丙酮鈣的殼聚糖溶液注射到海藻酸鈉水溶液中，靜電成囊，原位交聯(lián)1.5h；s3.分出軟膠囊，先后分別用丙酮和50%乙醇水溶液洗滌，純凈水透析24h，鼓風(fēng)80℃干燥即得。該軟膠囊止血材料干燥狀態(tài)為膜狀，可吸水溶脹，溶脹后為近似球形或橢圓形的軟膠囊。體外凝血實(shí)驗(yàn)：自新西蘭兔耳緣靜脈取血于真空采血管中（含有枸櫞酸鈉抗凝劑，3.8%枸櫞酸鈉∶血=1∶9），備用；取潔凈透明的塑料試管，分別加入50mg上述實(shí)施例和對(duì)比例中的樣品，輕搖試管使樣品盡量鋪開(kāi)?？瞻自嚬茏麝幮詫?duì)照，云南白藥粉作陽(yáng)性對(duì)照，每樣品設(shè)三支試管做平行試驗(yàn)。依次將1ml新鮮抗凝兔血加入上述試管中，平穩(wěn)地移入37℃水浴中，開(kāi)始計(jì)時(shí)；每隔30s將每組試管緩慢傾斜一次（角度小于30°），直至試管緩慢倒置血液不流動(dòng)為止，按停秒表，記下該組凝血時(shí)間，時(shí)間超30分鐘記作“不凝血”，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以“x±s”表示，結(jié)果見(jiàn)下表。表1凝血實(shí)驗(yàn)結(jié)果樣品形態(tài)凝血時(shí)間（s）空白對(duì)照——不凝血云南白藥粉末256±4實(shí)施例1顆粒208±3實(shí)施例2顆粒224±5實(shí)施例3顆粒172±3實(shí)施例4顆粒231±3實(shí)施例5顆粒247±4對(duì)比例1顆粒511±5對(duì)比例2顆粒463±3對(duì)比例3膜狀417±6從表1中可看出，實(shí)施例制備的殼聚糖-海藻酸鹽軟膠囊粒止血材料凝血活性高，比云南白藥的凝血時(shí)間要短，且粒徑大不會(huì)進(jìn)入血液，解決了云南白藥等顆粒物易殘留帶來(lái)的生物安全隱患，且安全無(wú)毒。當(dāng)前第1頁(yè)12