本發(fā)明屬于實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種基于心率變異性作為檢測指標(biāo)的動物模型的構(gòu)建方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

心率變異性(heartratevariability,hrv)是心電圖中r-r間期的微小漲落，反映了交感神經(jīng)和副交感神經(jīng)(迷走神經(jīng))活動的緊張性和平衡性。心率變異性降低反映迷走神經(jīng)張力減弱，交感神經(jīng)張力增強(qiáng)，說明自主神經(jīng)系統(tǒng)功能下降。當(dāng)自主神經(jīng)系統(tǒng)處于機(jī)體應(yīng)激狀態(tài)時，會激活交感神經(jīng)系統(tǒng)釋放兒茶酚胺類激素，如去甲腎上腺素，腎上腺素，5-羥色胺等，伴隨著自主神經(jīng)系統(tǒng)功能增強(qiáng)，機(jī)體心率加快、汗腺分泌增加、細(xì)支氣管擴(kuò)張等。

自1965年hrv的臨床意義被認(rèn)識到以來，hrv已有肯定應(yīng)用價值的領(lǐng)域如急性心肌梗死和糖尿病，以及陣發(fā)性心律失常、心力衰竭、高血壓、冠心病等，顯示出hrv的監(jiān)測對疾病早期診斷、病中監(jiān)護(hù)和預(yù)后評估等有重大意義。目前hrv的分析方法主要有基于線性分析的時域分析、頻域分析和非線性分析這三類，前兩種分析hrv方法已經(jīng)很成熟，其中常用的時域分析法指標(biāo)包括:均值標(biāo)準(zhǔn)差(sdann)，差值均方的平方根(rmssd),pnn50(相鄰間期差值>50ms的百分比,)等，常用的頻域分析法指標(biāo)包括:總功率(tp)、高頻(hf)、超低頻(ulf)、極低頻(vlf)、低頻(lf)等，lf/hf提示交感神經(jīng)和迷走神經(jīng)張力的平衡狀態(tài)，并廣泛地應(yīng)用在臨床評價和各種生理實(shí)驗(yàn)中。hrv作為一種公認(rèn)的無創(chuàng)性定量自主神經(jīng)系統(tǒng)功能評價指標(biāo)，近年來臨床醫(yī)務(wù)工作者越來越關(guān)注hrv分析在諸如功能性消化不良、腸易激綜合征、失眠癥、抑郁癥、精神障礙、神經(jīng)官能癥等疾病的臨床意義。

脾胃為后天之本，氣血生化之源，脾的主要功能是主運(yùn)化、主升清和統(tǒng)攝血液，對于整個人體的生命活動至關(guān)重要,是一身氣機(jī)升降的樞紐，是長養(yǎng)五臟六腑之根，是一身正氣的源泉，是人體抗邪防病、愈病康復(fù)、保養(yǎng)生生之氣、延年益壽的根本。金元四大家的李杲在《脾胃論》中不僅提到“百病皆由脾胃衰而生也”,而且將脾胃與元?dú)饴?lián)系起來，元?dú)馐侨梭w健康之源，脾胃傷則元?dú)獠怀洌嗅t(yī)脾虛是一組比較集中地反映脾胃各種生理功能不足的綜合證。脾虛可導(dǎo)致臟腑虛損、氣血虛弱，從而導(dǎo)致疾病、加速衰老的進(jìn)程?！捌⒃谥緸樗肌?，脾具有思考、思慮的功能。脾氣健運(yùn)，水谷精微充足，氣血旺盛，則遇事能夠周密思考，從而協(xié)助心神正確處理事務(wù)，提升自我調(diào)節(jié)的功能?！八紓ⅰ?，一旦過渡思慮或所思不遂，就會影響氣的正常運(yùn)行，導(dǎo)致脾氣壅塞結(jié)滯，影響運(yùn)化功能，出現(xiàn)納少、腹脹、便溏、肢體倦怠、少氣懶言、消瘦等癥狀，人的自我調(diào)節(jié)能力下降。隨著現(xiàn)代社會工作節(jié)奏日益加快，臨床上具有自主神經(jīng)功能失衡的多種疾病中，往往常見伴有中醫(yī)辨證的脾虛證候，各種因素導(dǎo)致類似相關(guān)癥狀的亞健康人群臨床多見，如果有診斷脾虛證的客觀量化指標(biāo)，則可有助于診斷或鑒別診斷，或用藥后客觀地及時追蹤治療效果。

脾虛包括脾氣虛、脾陽虛、脾陰虛及脾虛兼證等多種證型。脾虛動物模型的建立推動了與脾虛相關(guān)的現(xiàn)代醫(yī)藥實(shí)驗(yàn)研究。利血平脾虛證動物模型為采用副交感神經(jīng)功能亢進(jìn)法建立的脾虛模型，不僅應(yīng)用多和適應(yīng)范圍廣，而且可靠性和重現(xiàn)性強(qiáng)，具有簡便、經(jīng)濟(jì)、易行的特點(diǎn)。副交感神經(jīng)功能亢進(jìn)法原理：利血平主要影響節(jié)后交感神經(jīng)末梢遞質(zhì)去甲腎上腺素的儲存和釋放，并能降低腦內(nèi)和外周神經(jīng)中單胺類遞質(zhì){如去甲腎上腺素、腎上腺素、5-羥色胺等}的含量，從而降低交感神經(jīng)的功能，使副交感神經(jīng)功能相對或絕對亢進(jìn)，同時又引起腹瀉而耗氣。適量利血平制成的脾虛模型與臨床上患者自主神經(jīng)功能紊亂相一致。

抑郁癥是一組以情感障礙為突出表現(xiàn)的心理疾病，表現(xiàn)為一種持久的抑郁狀態(tài),伴情緒低落、軀體不適和睡眠障礙等癥狀。目前關(guān)于抗抑郁藥物作用機(jī)理的認(rèn)識，包括單胺類神經(jīng)遞質(zhì)及其受體、細(xì)胞信號傳導(dǎo)通路中的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子、各種神經(jīng)肽、神經(jīng)營養(yǎng)因子、nmda受體、hpa軸和hpt軸、炎癥細(xì)胞因子等。

腹腔注射利血平構(gòu)建抑郁癥模型已被廣泛應(yīng)用。對利血平引起的行為和生理變化的拮抗是最早發(fā)展的抑郁癥動物模型。利血平為受體阻斷劑，主要抑制囊泡膜胺泵對兒茶酚胺類神經(jīng)遞質(zhì)的主動攝取過程，使囊泡內(nèi)貯存的神經(jīng)遞質(zhì)遂漸耗竭，當(dāng)神經(jīng)遞質(zhì)排空后，必須等待新的囊泡形成，才能恢復(fù)神經(jīng)功能，并且神經(jīng)遞質(zhì)的合成需要一定時間，神經(jīng)遞質(zhì)排空后再加大劑量也沒有神經(jīng)遞質(zhì)釋放。而留在囊泡外神經(jīng)遞質(zhì)，易被單胺氧化酶降解，從而使兒茶酚胺類神經(jīng)遞質(zhì)如ne、e、5-ht耗竭，引起行為和生理上的變化。從模型構(gòu)建的機(jī)理來說，利血平脾虛證動物模型與利血平抑郁癥動物模型都是與利血平耗竭兒茶酚胺類神經(jīng)遞質(zhì)有關(guān)，都涉及到自主神經(jīng)調(diào)節(jié)作用。

因此，hrv的變化，作為一個無創(chuàng)性定量評價指標(biāo)，利用利血平誘導(dǎo)的動物模型，能很好地反映出脾虛證或抑郁癥建模是否成功。但是現(xiàn)有的技術(shù)中均沒有該技術(shù)的提出和記載。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為解決上述問題，本發(fā)明提供了一種基于心率變異性作為檢測指標(biāo)的動物模型的構(gòu)建方法及其應(yīng)用。

一種基于心率變異性的動物模型的構(gòu)建方法，所述構(gòu)建方法是以心率變異性作為檢測指標(biāo)、通過利血平誘導(dǎo)而形成的。

進(jìn)一步地，在實(shí)驗(yàn)動物皮下注射0.01～10mg/kg.d的利血平，每天一次，連續(xù)3～60天，觀察心率變異值。

進(jìn)一步地，所述在實(shí)驗(yàn)動物皮下注射利血平期間每日口服灌胃動物番瀉葉、芒硝、大黃或大承氣湯中至少一種的生藥浸煎液。

優(yōu)選地，所述生藥浸煎液每1ml含1g廣豆根、旋覆花、檳榔中至少一種，口服灌胃劑量為每100g體重灌0.2-4.0ml。

更優(yōu)選地，所述生藥浸煎液的ph值為2≤ph＜7。

更優(yōu)選地，所述生藥浸煎液的溫度為4℃。

進(jìn)一步地，在實(shí)驗(yàn)動物靜脈一次性注射利血平0.01～10mg/kg.d，觀察心率變異值。

優(yōu)選地，所述實(shí)驗(yàn)動物為小鼠、大鼠、驢、兔。

基于心率變異性的動物模型的應(yīng)用，所述動物模型可以用于脾虛癥的建模。

進(jìn)一步地，所述動物模型可以用于抑郁癥的建模。

本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)：

本發(fā)明提出了利用利血平誘導(dǎo)構(gòu)建基于心率變異性作為檢測指標(biāo)的動物模型方法，該構(gòu)建無創(chuàng)，低成本，周期短，可重復(fù)，不僅可以模擬脾虛癥、抑郁癥的部分病理生理變化，作為一種新的醫(yī)藥研究手段來探討相關(guān)分子機(jī)理機(jī)制和建立藥物篩選平臺，而且還具有中、西醫(yī)理論融合特色，為臨床研究相關(guān)疾病發(fā)病機(jī)制、診斷治療相關(guān)疾病以及篩選、研究治療相關(guān)疾病藥物創(chuàng)造條件，具有好的應(yīng)用前景。

附圖說明

圖1為實(shí)施例1構(gòu)建的基于心率變異性顯著變化的利血平誘導(dǎo)的模型大鼠造模后hrv值(n＝6)：實(shí)驗(yàn)組與正常對照組(心率變異性部分指標(biāo))相比，p﹤0.01；

圖2為實(shí)施例2構(gòu)建的基于心率變異性顯著變化的利血平誘導(dǎo)的模型大鼠造模后hrv值(n＝6)：實(shí)驗(yàn)組與正常對照組(心率變異性部分指標(biāo))相比，p﹤0.01。

具體實(shí)施方法

以下通過對本發(fā)明具體實(shí)施方式的描述說明但不限制本發(fā)明。

實(shí)施例1

1.造模方法和分組

實(shí)驗(yàn)動物sd大鼠，體重180±20g，由華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供。將動物隨機(jī)分為為1個模型組和1個正常對照組。模型組每只動物皮下注射利血平0.2mg/kg·d，連續(xù)11天。

2、檢測指標(biāo)及檢測方法

末次給藥后次日麻醉，利用多道生理信號采集處理系統(tǒng)檢測hrv值。

3.統(tǒng)計學(xué)處理方法

數(shù)據(jù)的處理采用excel統(tǒng)計分析，各組數(shù)據(jù)比較運(yùn)用方差分析。

4.結(jié)果

圖1為正常組大鼠麻醉后、利血平脾虛模型組大鼠麻醉后、腎上腺雙側(cè)摘除大鼠麻醉后尾靜脈注射一定劑量利血平前后的sdann值、rmssd值(心率變異性部分指標(biāo))對比(n＝6)：實(shí)驗(yàn)組與正常對照組(心率變異性部分指標(biāo))相比，p﹤0.01。

實(shí)施例2

1.造模方法和分組

實(shí)驗(yàn)動物sd大鼠，體重180±20g，由華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供。正常大鼠麻醉后，利用多道生理信號采集處理系統(tǒng)檢測hrv值。之后尾靜脈一次性注射利血平1.0mg/kg·d后檢測hrv值。對比靜脈注射利血平前后hrv值。

2、檢測指標(biāo)及檢測方法同實(shí)施例1

3、統(tǒng)計學(xué)處理方法同實(shí)施例1

4、結(jié)果

圖2為正常大鼠麻醉后尾靜脈注射利血平前后的sdann值、rmssd值、tinn值(心率變異性部分指標(biāo))對比(n＝6)：實(shí)驗(yàn)組與正常對照組(心率變異性部分指標(biāo))相比，p﹤0.01。

本發(fā)明提出了利用利血平誘導(dǎo)的、基于心率變異性作為檢測指標(biāo)的動物模型構(gòu)建方法，該構(gòu)建無創(chuàng)，低成本，周期短，可重復(fù)，不僅可以模擬脾虛癥、抑郁癥的部分病理生理變化，作為一種新的醫(yī)藥研究手段來探討相關(guān)分子機(jī)理機(jī)制和建立藥物篩選平臺，而且還具有中、西醫(yī)理論融合特色，為臨床研究相關(guān)疾病發(fā)病機(jī)制、診斷治療相關(guān)疾病以及篩選、研究治療相關(guān)疾病藥物創(chuàng)造條件，具有好的應(yīng)用前景。