本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物提取純化技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種五味子總木脂素的制備方法。
背景技術(shù)：
五味子為木蘭科植物五味子(schisandrachinesnsis(turcz.)baill)的干燥成熟果實。五味子性溫，具有收斂固澀，益氣生津，補腎寧心的功效。研究表明，五味子含有多種木脂素成分：五味子素(schizandrin)、五味子甲素(schizandrina)、五味子乙素(schizandrinb)、五味子醇甲、醇乙(schizandrola，b)、五味子丙素(schizandrinc)等。木脂素成分是五味子中主要保肝有效成分，這類成分在護肝藥品、保健食品開發(fā)方面有廣泛應(yīng)用，對其提取制備工藝有必要進一步進行研究。
在現(xiàn)有的提取方法中，工藝相對比較復(fù)雜，成本較高，不利于工業(yè)化生產(chǎn)。申請?zhí)枮?00910264455.3(申請日：2009.12.23，公開號：cn101757111，公開日：2010.6.30)的中國專利公開了以一種五味子總木脂素的制備方法。工藝步驟包括將南五味子粉碎，加入80-95％乙醇，回流提取2-3次，每次1.5-2小時。提取液加溶劑0.2-0.5％活性炭，攪拌脫色1-2小時，脫色液泵入硅膠中壓柱，以石油醚-丙酮混合液分段洗脫，用45-50℃丙酮結(jié)晶3-5次，干燥得到產(chǎn)品。該方法操作步驟較多，并且需要中壓柱，成本較高。申請?zhí)枮?01010119871(申請日：2010.2.24，公告號：cn101744886a，公開日：2012.7.4)公開了一種高純度五味子總木脂素的提取方法,包括以下步驟：(1)將五味子果實用水浸泡；浸泡后的五味子果實過濾,濾渣烘干粉碎，備用；(2)粉碎后的濾渣采用超臨界co2進行萃取。該方法由于應(yīng)用超臨界co2成本較高，并且產(chǎn)量很小，不能滿足工業(yè)化生產(chǎn)需要。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是提供一種五味子總木脂素的制備方法，解決了現(xiàn)有方法中存在的步驟多、成本高、產(chǎn)量小的問題。
本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是，一種五味子總木脂素的制備方法，具體步驟如下：
步驟1，提取
五味子粉碎后加入乙醇提取2-3次，合并提取液經(jīng)真空減壓濃縮，回收乙醇，直至濃縮液中無乙醇氣味為止；
步驟2，大孔樹脂層析
將步驟1得到的濃縮液用大孔樹脂d101柱層析，分別采用不同濃度的乙醇水沖洗，并收集沖洗后的部分乙醇水，合并后濃縮，得到浸膏；
步驟3，硅膠層析柱上樣
將步驟2得到的浸膏用甲醇溶解后與硅膠混合，攪拌均勻分散，干燥后加入裝填有硅膠的層析柱；
步驟4，層析柱洗脫
將步驟3中的層析柱分別用不同體積比的石油醚-丙酮混合液沖洗，并收集沖洗后的部分石油醚-丙酮混合液，濃縮，得到總木脂素。
本發(fā)明的特點還在于：
步驟1中乙醇的添加量為五味子質(zhì)量的3-5倍、乙醇濃度為70％。
步驟1中每次提取是在50℃下提取2-3小時。
步驟2具體為：將步驟1得到的濃縮液用大孔樹脂d101柱層析，分別采用濃度為0、20-25％、50-55％、80-85％的乙醇水沖洗，收集沖洗后的濃度為20-25％和50-55％乙醇水，合并，濃縮，得到浸膏。
步驟4具體為：將步驟3中的層析柱分別用體積比為1︰0、5.0-5.3︰1、3.0-3.2︰1、2.0-2.2︰1的石油醚-丙酮混合液沖洗，并收集沖洗后的體積比為3.0-3.2︰1和2.0-2.2︰1的石油醚-丙酮混合液，合并，濃縮，得到總木脂素。
本發(fā)明的有益效果是，本發(fā)明五味子總木脂素的制備方法，只需要通過乙醇提取，大孔樹脂乙醇水洗脫，再經(jīng)過硅膠柱層析3個步驟就能得到純度大于60％總木脂素，其工藝流程簡單，便于操作。使用的分離純化材料為大孔樹脂和硅膠，其中用量較大的大孔樹脂可以回收多次使用，硅膠用量較少，并且分離純化過程中使用的有機溶劑可以回收多次使用，所以本發(fā)明的總木脂素純化工藝操作成本較低。另外，本發(fā)明得到的總木脂素純度可以達到60％，相對純度較高。
具體實施方式
下面結(jié)合具體實施方式對本發(fā)明進行詳細說明。
本發(fā)明五味子總木脂素的制備方法，具體步驟如下：
步驟1，提取
五味子粉碎后加入其質(zhì)量3-5倍、濃度為70％的乙醇，在50℃下提取2-3小時，提取2-3次，合并提取液經(jīng)真空減壓濃縮，回收乙醇，直至濃縮液中無乙醇氣味為止；
步驟2，大孔樹脂層析
將步驟1得到的濃縮液用大孔樹脂d101柱層析，分別采用濃度為0、20-25％、50-55％、80-85％的乙醇水沖洗，收集沖洗后的濃度為20-25％和50-55％乙醇水，合并，濃縮，得到浸膏；
步驟3，硅膠層析柱上樣
步驟2得到的浸膏用甲醇溶解后與硅膠混合，攪拌均勻分散，干燥后加入裝填有硅膠的層析柱；
步驟4，層析柱洗脫
將步驟3中的層析柱分別用體積比為1︰0、5.0-5.3︰1、3.0-3.2︰1、2.0-2.2︰1的石油醚-丙酮混合液沖洗，并收集沖洗后的體積比為3.0-3.2︰1和2.0-2.2︰1的石油醚-丙酮混合液，合并，濃縮，得到總木脂素。
本發(fā)明五味子總木脂素的制備方法只需要通過乙醇提取，大孔樹脂乙醇水洗脫，再經(jīng)過硅膠柱層析3個步驟就能得到純度大于60％總木脂素，其工藝流程簡單，便于操作。使用的分離純化材料為大孔樹脂和硅膠，其中用量較大的大孔樹脂可以回收多次使用，硅膠用量較少，并且分離純化過程中使用的有機溶劑可以回收多次使用，所以本發(fā)明的總木脂素純化工藝操作成本較低。另外，本發(fā)明得到的總木脂素純度可以達到60％，相對純度較高。
實施例1
步驟1，提取
五味子粉碎后加入其質(zhì)量3倍、濃度為70％的乙醇，在50℃下提取32小時，提取2次，合并提取液經(jīng)真空減壓濃縮，回收乙醇，直至濃縮液中無乙醇氣味為止；
步驟2，大孔樹脂層析
將步驟1得到的濃縮液用大孔樹脂d101柱層析，分別采用濃度為0、20％、50％、80％的乙醇水沖洗，收集沖洗后的濃度為20％和50％乙醇水，合并，濃縮，得到浸膏；
步驟3，硅膠層析柱上樣
步驟2得到的浸膏用甲醇溶解后與硅膠混合，攪拌均勻分散，干燥后加入裝填有硅膠的層析柱；
步驟4，層析柱洗脫
將步驟3中的層析柱分別用體積比為1︰0、5.0︰1、3.0︰1、2.0︰1的石油醚-丙酮混合液沖洗，并收集沖洗后的體積比為3.0︰1和2.0︰1的石油醚-丙酮混合液，合并，濃縮，得到總木脂素。
采用紫外分光光度法測定實施例1的得到的總木脂素的純度
1、對照品溶液的制備
山奈酚對照品溶液制備精密稱取山奈酚對照品1.01mg，置于10ml量瓶中，加甲醇至刻度，精密移取0.5ml溶液置于10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度既得。
2、供試品溶液的制備
取總木脂素粉末(過4號篩)約0.4g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70％甲醇40ml，稱重，超聲(功率120w，頻率40khz)45min，放冷，再次稱重，用70％甲醇補足減失重，搖勻，濾過，精密吸取續(xù)濾液1ml，置于25ml量瓶中，加70％甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
3、總木脂素含量測定
制備的供試品溶液以甲醇為空白對照，在292，392nm處測定吸光度，并計算其含量(n＝3)。
測得其總木脂素純度為63％。
實施例2
步驟1，提取
五味子粉碎后加入其質(zhì)量4倍、濃度為70％的乙醇，在50℃下提取2小時，提取3次，合并提取液經(jīng)真空減壓濃縮，回收乙醇，直至濃縮液中無乙醇氣味為止；
步驟2，大孔樹脂層析
將步驟1得到的濃縮液用大孔樹脂d101柱層析，分別采用濃度為0、22％、55％、82％的乙醇水沖洗，收集沖洗后的濃度為22％和55％乙醇水，合并，濃縮，得到浸膏；
步驟3，硅膠層析柱上樣
步驟2得到的浸膏用甲醇溶解后與硅膠混合，攪拌均勻分散，干燥后加入裝填有硅膠的層析柱；
步驟4，層析柱洗脫
將步驟3中的層析柱分別用體積比為1︰0、5.2︰1、3.1︰1、2.1︰1的石油醚-丙酮混合液沖洗，并收集沖洗后的體積比為3.1︰1和2.1︰1的石油醚-丙酮混合液，合并，濃縮，得到總木脂素。
實施例3
步驟1，提取
五味子粉碎后加入其質(zhì)量5倍、濃度為70％的乙醇，在50℃下提取2.5小時，提取2次，合并提取液經(jīng)真空減壓濃縮，回收乙醇，直至濃縮液中無乙醇氣味為止；
步驟2，大孔樹脂層析
將步驟1得到的濃縮液用大孔樹脂d101柱層析，分別采用濃度為0、25％、53％、85％的乙醇水沖洗，收集沖洗后的濃度為25％和53％乙醇水，合并，濃縮，得到浸膏；
步驟3，硅膠層析柱上樣
步驟2得到的浸膏用甲醇溶解后與硅膠混合，攪拌均勻分散，干燥后加入裝填有硅膠的層析柱；
步驟4，層析柱洗脫
將步驟3中的層析柱分別用體積比為1︰0、5.3︰1、3.2︰1、2.2︰1的石油醚-丙酮混合液沖洗，并收集沖洗后的體積比為3.2︰1和2.2︰1的石油醚-丙酮混合液，合并，濃縮，得到總木脂素。