本發(fā)明涉及植物提取技術領域及日用精細化學品技術領域，具體涉及一種含有植物提取物的洗護用品組合物。

背景技術：

黃花蒿（artemisiaannualinn）又叫黃蒿，是菊科蒿屬的一年生草本植物，廣泛分布在國內(nèi)各省，為中國傳統(tǒng)中草藥，在青蒿素的基礎上開發(fā)出了多種衍生物雙氫青蒿素、青蒿琥酯、蒿甲醚、蒿乙醚,均有抗瘧、抗孕、抗纖維化、抗血吸蟲、抗弓形蟲、抗心律失常和腫瘤細胞毒性等作用。目前青蒿素用于瘧疾防治的價值已被人類認識和接受，世界衛(wèi)生組織已把青蒿素的復方制劑列為國際上防治瘧疾的首選藥物。根據(jù)世衛(wèi)組織的統(tǒng)計數(shù)據(jù)，自2000年起，撒哈拉以南非洲地區(qū)約2.4億人口受益于青蒿素聯(lián)合療法，約150萬人因該療法避免了瘧疾導致的死亡。

黃花蒿的使用量巨大，提取青蒿素后的黃花蒿殘渣被大量廢棄，這些黃花蒿殘渣如何進行再利用，使其繼續(xù)發(fā)揮價值，是值得深入研究的課題。中國專利申請201210270400.5公開了一種黃花蒿和黃花蒿工業(yè)提取剩余物作為制備咖啡?？崴嵩系膽?，為黃花蒿殘渣的再利用提供了一個出路。

技術實現(xiàn)要素：

基于此，本發(fā)明所要解決的技術問題是提供一種利用提取青蒿素后剩余的黃花蒿殘渣制備的洗護用品組合物，該洗護用品組合物使用提取青蒿素后剩余的黃花蒿殘渣提取的黃酮和揮發(fā)油作為有效成分，對使用者具有顯著的抗氧化、清除自由基、美白、抑菌效果。

本發(fā)明解決上述技術問題的技術方案為：

一種利用提取青蒿素后剩余的黃花蒿殘渣制備的洗護用品組合物，含有：利用提取青蒿素后的黃花蒿殘渣制備的黃酮；依次提取青蒿素及黃酮后的黃花蒿殘渣用有機溶劑提取得到的揮發(fā)油；以及洗護用品輔料。

優(yōu)選的，所述黃酮與揮發(fā)油的質(zhì)量比為20~40：60~80。發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)，單一的黃酮或揮發(fā)油對羥自由基的清除效果都不明顯，但黃酮和揮發(fā)油混合后的效果比單一成分要好，且當混合成分比例在60~80揮發(fā)油：20%~40%黃酮時，其效果最明顯，清除效率達到高峰。

優(yōu)選的，所述黃酮與揮發(fā)油的總質(zhì)量占洗護用品組合物重量的1~1.5%。

優(yōu)選的，所述黃酮的提取方法為：

（1）將提取青蒿素后的黃花蒿殘渣在60℃烘箱中恒溫烘至恒重，放進粉碎機中粉碎，過篩，密封保存?zhèn)溆茫?/p>

（2）將步驟（1）所得殘渣粉末用乙醇溶液輔以超聲波提取，過濾后得到黃花蒿殘渣總黃酮提取液；

（3）步驟（2）所得物料濃縮去除乙醇，離心去除雜質(zhì)后取上清液，得到黃酮粗提液；

（4）步驟（3）所得黃酮粗提液采用大孔吸附樹脂柱層析法提純，得到黃酮。

進一步優(yōu)選的，步驟（2）殘渣粉末與乙醇溶液的料液比為1g:10~40ml，乙醇溶液的體積百分比為30%~60%，提取時間為20~50min，提取溫度為40~60℃，超聲功率為300w。

更進一步優(yōu)選的，步驟（2）殘渣粉末與乙醇溶液的料液比為1g:40ml，乙醇溶液的體積百分比為40%，提取時間為20min，提取溫度為60℃，超聲功率為300w。經(jīng)試驗測定，在上述條件下，總黃酮的提取率最高，可達到7.85%。

進一步的，所述揮發(fā)油的提取方法為：使用提取總黃酮后的提取青蒿素后的黃花蒿殘渣，用有機溶劑回流提取法，得到回流抽浸液，揮發(fā)濃縮、精制提純后得到揮發(fā)油。

優(yōu)選的，所述揮發(fā)油的提取方法為：使用提取總黃酮后的提取青蒿素后的黃花蒿殘渣，按料液比1g：10ml的比例加入正己烷，放入恒溫攪拌器中，接上回流冷凝管，調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)速為60r/s，溫度為75℃，回流提取3小時，將回流浸液抽濾收集，重復提取黃花蒿殘渣，回流抽浸液混合后進行揮發(fā)濃縮，并用無水乙醇溶解，密封放置在-20℃冰箱中過夜，次日抽濾除去析出物，收集乙醇浸液，減壓蒸餾除去乙醇，得到墨綠色的揮發(fā)油。

所述洗護用品組合物為沐浴露。也可以是潤膚露、洗面奶、面霜、爽膚水、精華液等產(chǎn)品。所用的洗護用品組合物輔料為化妝品領常規(guī)技術，因此不做詳細說明。

本發(fā)明具有如下有益效果：

本發(fā)明利用提取完青蒿素后的黃花蒿殘渣來制備洗護用品組合物，實現(xiàn)了對該資源的再生利用。該洗護用品組合物使用提取青蒿素后剩余的黃花蒿殘渣提取的黃酮和揮發(fā)油作為有效成分，對使用者具有顯著的抗氧化、清除自由基、美白、抑菌效果。

附圖說明

圖1為用提取青蒿素剩余的黃花蒿提取的黃酮對羥自由基的清除率折線圖。

圖2為用提取青蒿素剩余的黃花蒿提取的黃酮的過氧化值曲線圖。

圖3為用提取青蒿素剩余的黃花蒿提取的黃酮的酪氨酸酶的抑制效果曲線圖。

圖4為本發(fā)明所得揮發(fā)油的抑菌效果圖。

圖5為對實施例制備的沐浴露對羥自由基的清除率曲線圖。

圖6為實施例制備的沐浴露對酪氨酸酶的抑制率曲線圖。

具體實施方式

下面結合附圖和實施例對本發(fā)明進行詳細的說明。

實施例

一種利用提取青蒿素后剩余的黃花蒿殘渣制備的沐浴露，含有利用提取青蒿素后的黃花蒿殘渣制備的黃酮、依次提取青蒿素及總黃酮后的黃花蒿殘渣用有機溶劑提取得到的揮發(fā)油、以及洗護用品輔料。

其中，黃酮的提取方法為：

1）將提取青蒿素后的黃花蒿殘渣在60℃烘箱中恒溫烘至恒重，放進粉碎機中粉碎，并過40目篩，密封保存?zhèn)溆谩?/p>

2）精確稱量上述殘渣粉末，按料液比1g：40ml加入體積份數(shù)為40%的乙醇，提取20min，恒溫水浴60℃，300w超聲輔助重復提取兩次，兩次提取液混合、過濾，得到黃花蒿殘渣總黃酮提取液。

3）將黃花蒿殘渣總黃酮提取液在60℃恒溫磁力攪拌器中濃縮，150r/min，直到完全除去乙醇為止（參照加入乙醇的體積分數(shù)和體積，或直到聞不到酒精味），在3000r/min下離心10min,取上清液于50ml容量瓶中，沉淀加適量蒸餾水洗滌溶解，再次離心，上清液為黃酮粗提液。經(jīng)nano2-al(no3)3-naoh法測定，黃酮粗提液的提取率達到7.85%。

4）步驟3）所得黃酮粗提液采用大孔吸附樹脂柱層析法提純，得到黃酮。

對所得到的黃酮純化物的抗氧化性能進行如下測定：

對羥自由基的清除

參照fenton反應的方法建立反應體系（fe2++h2o2→fe+oh-+·oh）模型，產(chǎn)生·oh，但由于·oh具有很高的反應活性，存活時間短，若在反應體系中加入水楊酸，就能有效地捕捉·oh，并產(chǎn)生有色產(chǎn)物，該產(chǎn)物在510nm處有強吸收，若在此反應體系中加入具有清除·oh功能的被測物，便會與水楊酸競爭·oh，從而使有色產(chǎn)物生成量減少，采用固定反應時間法，在相同體積的反應體系加入一系列濃度梯度的待測液，以待測液空白組，在510nm處測量不同的吸光值。

取若干10ml離心管，依次加入0.3ml9mmol/lfeso4溶液,0.3ml9mmol/l水楊酸-乙醇溶液，不同濃度的樣品液，混勻，加入0.3ml8.8mmol/lh2o2溶液。將離心管置于37℃恒溫水浴箱中反應30min，流水冷卻，各管分別加入蒸饋水，使體系最終體積為5ml，3000r/min離心10min,取上清液于下510nm處測定吸光值a0、ax及ax0，重復3次測定。其對輕基自由基的清除率按以下公式計算：

清除率=[1-（ax-ax0)/a0]×100%

清除率公式中:a0為空白樣液吸光值（不加樣液）；ax為待測樣品液吸光值；ax0為本底吸光值（只加樣液）。

實驗記錄表

清除率=[1-（ax-ax0)/a0]×100%

清除率公式中:a0為空白樣液吸光值（不加樣液）；ax為待測樣品液吸光值；ax0為本底吸光值（只加樣液）。

由圖1的折線圖可知，黃花蒿殘渣總黃酮純化物對羥基自由基(·oh)具有清除能力，但總體清除效果低于檸檬酸及抗壞血酸，當黃花蒿殘渣總黃酮純化物質(zhì)量濃度由0.2g/l提高到1g/l，羥基自由基的清除效率提高較快；當質(zhì)量濃度大于1g/l時，清除效率無明顯變化。

對油脂的抗氧化性

在無水酸性條件下，油脂中的過氧化物使i-定量氧化成i2，i2與i-結合生成易溶于水的i3-，利用i3-的顏色與標準碘液進行比較定量。在353nm波長下,i2含量(ρ)在0～100mg/l內(nèi)與吸光度(a)有良好的線性關系，總黃酮提取物對油脂的抗氧化性采用國際上通用的烘箱強化貯存法:用適量質(zhì)量濃度的黃酮純化液加到液狀油脂中，充分攪拌，在恒溫箱中貯存，以不加任何抗氧化劑作對照組，不同時間取樣測定油脂的過氧化值。并分別用抗壞血酸和檸檬酸溶液按上述方法測定過氧化值,比較各種抗氧化劑的抗氧化能力。

碘含量標準曲線的制作

在一系列干燥10ml比色管中，分別加入4ml的氯仿—冰醋酸溶液，0.12ml碘化鉀飽和堿液,加一管混勻一管.然后加3ml蒸餾水，再分加入碘標準液0.0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml。然后加蒸餾水至刻度，加塞搖勻，靜置約5-10min，待分層后，取上清液移入1cm的石英比色皿中,以零管作參比,在353nm波長下測其吸光度,根據(jù)所對應的濃度作標準曲線。

標準曲線方程：y=234x+0.6609，r2=0.9886,y為i2含量。

具體實驗步驟為

1.在100ml三角瓶中加入24ml按v(油)∶v(黃酮純化液)=5∶1配比的混合液。在40℃烘箱中反應，間隔60min取待測樣品0.1ml于干燥15ml比色管中，加入氯仿－冰醋酸溶液4ml，混合攪勻，加入ki飽和堿液0.12ml，輕搖30s，置暗處3min。

2.然后加蒸餾水至刻度，加塞、顛倒，混勻2～3次，靜置約5～10min，待水相澄清后，取上清液于1cm石英比色皿中，在353nm處以空白作參比，讀取各管的吸光度a并計算出碘生成量，按公式計算過氧化值(pov/%)。

pov/%=（i2含量(μg)/樣品量0.086g)）×100

結果記錄表

過氧化值曲線圖參見圖2。從圖2可看出，添加黃酮后，過氧化值均有不同程度的下降，說明黃酮對油脂的氧化均有不同程度的抑制作用。而1g/l的黃酮對動物油脂的抗氧化性顯著高于檸檬酸和抗壞血酸。

對酪氨酸酶活力的抑制效果（即美白作用）

黑色素（melanin）主要由人體皮膚表皮基底層的黑色素細胞（melanocyte）產(chǎn)生，它能減少紫外線對皮膚的傷害。然而，黑色素在基底層的異常蓄積會造成色素沉著過度引起黑斑病、雀斑、老年斑等，影響人們的生活質(zhì)量。隨著對黑色素生物合成研究的不斷深入，研究者發(fā)現(xiàn)酪氨酸酶在黑色素生物合成中扮演重要角色，它是酪氨酸和多巴向黑色素轉(zhuǎn)變過程中的主要限速酶，它的過量表達是導致色素沉著過度的主要原因。因此，抑制酪氨酸酶的活性可以阻斷黑色素的生物合成反應鏈，減少黑色素的生成，實現(xiàn)美白的效果。本實驗通過測定酪氨酸酶（mt）催化l-多巴（l-dopa）產(chǎn)生的多巴醌(在475nm處有特征吸收峰)的含量，來評價黃花蒿殘渣的黃酮粗提取物以及其他抗氧化劑對酪氨酸酶的抑制作用。

實驗儀器：紫外分光光度計

實驗試劑

10.0mg/ml的母液：取100.0mg的黃酮純化液、檸檬酸和vc，分別用蒸餾水定容至10ml容量瓶中，配制成10.0mg/ml的母液。用時用磷酸緩沖溶液稀釋成0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/ml。

0.2mol/l磷酸鹽緩沖液(pbs）,ph6.8：取2.84g磷酸氫二鈉于小燒杯中，加少量蒸餾水溶解，與100ml容量瓶中定容，制成0.2mol/l的磷酸氫二鈉溶液。同理取2.6g磷酸二氫鈉配成0.2mol/l的磷酸二氫鈉溶液。取49ml0.2mol/l的磷酸氫二鈉溶液與51ml0.2mol/l的磷酸二氫鈉溶液混合，調(diào)節(jié)ph6.8。

1.0mg/mll－多巴溶液：稱量10mgl-多巴，用0.2mol/l磷酸鹽緩沖液定容至10ml容量瓶中，配制成1.0mg/ml的l－多巴溶液。

186u/ml酪氨酸酶：稱取適量酶制劑，用0.2mol/l磷酸鹽緩沖液配制成186u/ml。

實驗操作表

在10ml干燥的比色管中，按表中依次加入各種試劑，在475nm處測量每一次中的4組吸光值數(shù)據(jù)，分別為a1、a2、a3、a4。

以每分鐘a475增加0.001為1個酶活力單位，酶促反應的速度用每分鐘a475增加值來表示。從混合均勻開始測量，每30秒測定一次，測到7min，當a475趨于穩(wěn)定時，其數(shù)值就是該組的a475。按如下兩式計算相對酶活力和酶抑制率。

相對酶活力r=[（a3－a4）/（a1－a2）]×100%

酶抑制率r=（1-r）×100%

圖3為絡氨酸酶的抑制效果曲線圖，由圖3可知，黃花蒿黃酮對酪氨酸酶活性具有一定的抑制效果，當其濃度在0.2~0.4mg/ml時，隨著濃度的增加，抑制效果越明顯，且大于檸檬酸及抗壞血酸，當濃度大于0.4mg/ml時，抑制效果不斷下降，但始終高于檸檬酸。

揮發(fā)油的提取方法為：

將上述步驟2）提取總黃酮后的黃花蒿殘渣粉按1g:10ml的料液比加入正己烷，放入恒溫攪拌器中，接上回流冷凝管，調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)速為60r/s，溫度為75℃，回流提取3小時。將回流浸液抽濾收集，重復提取黃花蒿殘渣，回流抽浸液混合后進行揮發(fā)濃縮。揮發(fā)完正己烷得到的揮發(fā)油粗品含有較多的雜質(zhì)，如油脂、蠟質(zhì)、葉綠素等一并被提取出來溶解在揮發(fā)油中，需進一步精制提純，將揮發(fā)油粗品用無水乙醇溶解，密封放置在-20℃冰箱中過夜，次日抽濾除去析出物，收集乙醇浸液，減壓蒸餾除去乙醇，得到墨綠色的揮發(fā)油（未除去葉綠素）。

對所得揮發(fā)油的抑菌效果進行測試：

（1）按配方配置菌種的相應的液體和固體培養(yǎng)基，用移液槍吸取5ml/支裝入試管，在121℃高壓蒸汽滅菌鍋滅菌20min，冷卻后放進恒溫培養(yǎng)箱，細菌37℃，真菌28℃，培養(yǎng)兩到三天，觀察是否完全滅菌。

（2）接種：將少量金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、鏈球菌在無菌條件下接種至裝有牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)液的試管，白色念珠菌接種于土豆培養(yǎng)基，青霉菌接種于查氏培養(yǎng)基。每種細菌接種2支試管，輕微振蕩試管搖勻。置于適宜的恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)，使其充分進行增殖，備用。

（3）用打孔器將干凈的濾紙制成直徑為0.5cm的小圓紙片，干熱滅菌后，浸于不同濃度的揮發(fā)油提取液中，使其充分吸收，備用。

（4）在超凈臺里用移液槍吸取0.5ml轉(zhuǎn)接后生長良好的菌懸液，注入相應的菌平板，涂布均勻。將浸泡處理過的濾紙片瀝干，貼在上述含菌平板上，每個平板貼3片相同黃花蒿揮發(fā)油質(zhì)量濃度的濾紙片。以丙酮作為空白對照，重復實驗2次。置于培養(yǎng)箱中，細菌37℃培養(yǎng)24h，真菌28℃培養(yǎng)48h。取出量取抑菌圈直徑。分析抑菌效果。

揮發(fā)油的抑菌效果圖參見圖4，由圖4可知，黃花蒿殘渣揮發(fā)油對實驗所選取的5種菌均有一定的抑制效果。其中對青霉菌的抑制效果最佳，且隨著濃度的增加，效果越好；對其他4種菌的抑制效果變化不明顯。

沐浴露的配制：

設置黃花蒿殘渣提取的黃酮及其揮發(fā)油的添加范圍為0.5%~2%，取1%、1.5%、2%三個梯度抗氧化實驗。其中，黃花蒿殘渣提取的黃酮及其揮發(fā)油配比如下：

三個梯度的揮發(fā)油油+黃酮的質(zhì)量如下：

按比例為c12：c14=2：1稱量7.5g混合脂肪酸，置于小燒杯中，將2.3g氫氧化鉀溶解成50%的水溶液，備用配制時將混合脂肪酸與一定量的去離子水混合后，加熱至80℃，加人50%氫氧化鉀溶液進行皂化反應。待充分反應后加入上述三個梯度的有效成分，加入蒸餾水至50ml，充分混勻后備用。對其穩(wěn)定性、抗氧化性，以及其活性效果的檢測，來確定沐浴露的最佳配方，和美白效果進行測定，確定其最佳配方。

穩(wěn)定性測定

將上述沐浴露用保鮮膜密封置于0℃和50℃恒溫箱中，每隔兩天觀察其沉淀及分層情況，根據(jù)沉淀及分層情況出現(xiàn)的時間來判定其穩(wěn)定性，連續(xù)觀察10天。

穩(wěn)定性記錄表

羥自由基的清除效果

記錄表（對照組已調(diào)零）

各實驗組對羥自由基的清除率曲線圖參見圖5，由圖5可知，單種有效成分黃酮或揮發(fā)油對羥自由基的清除效果都不明顯，但混合成分的效果普遍比單一成分要好。且當混合成分比例在60%~80%揮發(fā)油，20%~40%黃酮時，其效果最明顯，清除效率達到高峰。

美白效果

實驗操作表

在10ml干燥的比色管中，按表中依次加入各種試劑，在475nm處測量每一次中的4組吸光值數(shù)據(jù)，分別為a1、a2、a3、a4。

以每分鐘a475增加0.001為1個酶活力單位，酶促反應的速度用每分鐘a475增加值來表示。從混合均勻開始測量，每30秒測定一次，測到7min，當a475趨于穩(wěn)定時，其數(shù)值就是該組的a475。按如下兩式計算相對酶活力和酶抑制率。

相對酶活力r=[（a3－a4）/（a1－a2）]×100%

酶抑制率r=（1-r）×100%

記錄表（a4對照已調(diào)零）

各實驗組對酪氨酸酶的抑制率曲線圖參見圖6，如圖6所示，單種有效成分黃酮或揮發(fā)油對酪氨酸酶的抑制效果都不明顯，但混合成分的效果明顯比單一成分要好。且當混合成分比例在40%~60%時，其效果最明顯，清除效率達到高峰。

以上所述實施例僅表達了本發(fā)明的具體實施方式，其描述較為具體和詳細，但并不能因此而理解為對發(fā)明專利范圍的限制。應當指出的是，對于本領域的普通技術人員來說，在不脫離本發(fā)明構思的前提下，還可以做出若干變形和改進，這些都屬于本發(fā)明的保護范圍。因此，本發(fā)明專利的保護范圍應以所附權利要求為準。