技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明涉及化學(xué)藥物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種鹽酸氨溴索藥物及其制藥新用途。

技術(shù)背景：

鹽酸氨溴索，化學(xué)名稱為：反式-4-[(2-氨基-3,5-二溴芐基)氨基]環(huán)己醇鹽酸鹽，分子式為c13h18br2n2o·hcl，結(jié)構(gòu)式如下：

鹽酸氨溴索為白色至微黃色結(jié)晶性粉末；幾乎無(wú)臭?？纱龠M(jìn)呼吸道內(nèi)部粘稠分泌物的排除及減少粘液的滯留，因而顯著促進(jìn)排痰。適用于伴有痰液分泌不正常及排痰功能不良的急性、慢性呼吸系統(tǒng)疾病。

鹽酸氨溴索為祛痰藥，有良好的黏痰溶解作用及潤(rùn)滑呼吸道作用，可促進(jìn)肺表面活性物質(zhì)的分泌、呼吸液的分泌和纖毛運(yùn)動(dòng)等。用于急慢性呼吸道疾病、支氣管分泌異常等的治療。鹽酸氨溴索還可用于治療支氣管肺炎、慢性阻塞性肺病、毛細(xì)支氣管炎、分泌性中耳炎、慢性支氣管炎等疾病。

發(fā)明人在臨床診療實(shí)踐中偶然發(fā)現(xiàn)，對(duì)糖尿病腎病患者，尤其是糖尿病腎病腎臟肥大患者給予鹽酸氨溴索治療，取得了非常顯著療效。

在進(jìn)行規(guī)范、科學(xué)、嚴(yán)謹(jǐn)?shù)呐R床試驗(yàn)與藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)后，得到了本發(fā)明的技術(shù)方案。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
：

本發(fā)明的目的是提供一種鹽酸氨溴索藥物及其制備方法。

本發(fā)明的另一目的是提供鹽酸氨溴索藥物在制備治療糖尿病、糖尿病腦病、糖尿病腎病、心肌炎、病毒性心肌炎藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明的目的是通過以下方式實(shí)現(xiàn)的：

一種鹽酸氨溴索藥物，該藥物為鹽酸氨溴索口服溶液，其制備方法為：取鹽酸氨溴索3g，加入三氯蔗糖0.4g，甜菊素0.7g，枸櫞酸0.22g，枸櫞酸鈉0.16g，薄荷腦0.1g，乙醇7.5ml，菠蘿香精0.1ml，加純化水加至1000ml，混勻、過濾、灌裝、滅菌、燈檢得鹽酸氨溴索口服溶液。

一種鹽酸氨溴索藥物在制備治療糖尿病藥物中的應(yīng)用，該鹽酸氨溴索藥物為鹽酸氨溴索口服溶液，其制備方法為：取鹽酸氨溴索3g，加入三氯蔗糖0.4g，甜菊素0.7g，枸櫞酸0.22g，枸櫞酸鈉0.16g，薄荷腦0.1g，乙醇7.5ml，菠蘿香精0.1ml，加純化水加至1000ml，混勻、過濾、灌裝、滅菌、燈檢得鹽酸氨溴索口服溶液。

一種鹽酸氨溴索藥物在制備治療糖尿病腦病藥物中的應(yīng)用，該鹽酸氨溴索藥物為鹽酸氨溴索口服溶液，其制備方法為：取鹽酸氨溴索3g，加入三氯蔗糖0.4g，甜菊素0.7g，枸櫞酸0.22g，枸櫞酸鈉0.16g，薄荷腦0.1g，乙醇7.5ml，菠蘿香精0.1ml，加純化水加至1000ml，混勻、過濾、灌裝、滅菌、燈檢得鹽酸氨溴索口服溶液。

一種鹽酸氨溴索藥物在制備治療糖尿病腎病藥物中的應(yīng)用，該鹽酸氨溴索藥物為鹽酸氨溴索口服溶液，其制備方法為：取鹽酸氨溴索3g，加入三氯蔗糖0.4g，甜菊素0.7g，枸櫞酸0.22g，枸櫞酸鈉0.16g，薄荷腦0.1g，乙醇7.5ml，菠蘿香精0.1ml，加純化水加至1000ml，混勻、過濾、灌裝、滅菌、燈檢得鹽酸氨溴索口服溶液。

所述的鹽酸氨溴索在制備治療糖尿病腎病腎臟肥大藥物中的應(yīng)用。

一種鹽酸氨溴索藥物在制備治療心肌炎藥物中的應(yīng)用，該鹽酸氨溴索藥物為鹽酸氨溴索口服溶液，其制備方法為：取鹽酸氨溴索3g，加入三氯蔗糖0.4g，甜菊素0.7g，枸櫞酸0.22g，枸櫞酸鈉0.16g，薄荷腦0.1g，乙醇7.5ml，菠蘿香精0.1ml，加純化水加至1000ml，混勻、過濾、灌裝、滅菌、燈檢得鹽酸氨溴索口服溶液。

所述的鹽酸氨溴索藥物在制備治療病毒性心肌炎藥物中的應(yīng)用。

附圖說明：

圖1為正常大鼠腎臟病理切片

圖2為糖尿病腎病大鼠模型組12周病理切片

圖3為糖尿病腎病大鼠治療組12周病理切片

具體實(shí)施方式：

實(shí)施例1：鹽酸氨溴索治療糖尿病腎病大鼠的藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)研究

1材料與方法

1.1試劑與儀器

鏈脲佐菌素(stz)由北京索萊寶科技有限公司生產(chǎn)；尿液檢測(cè)四聯(lián)試劑帶，由安徽深藍(lán)醫(yī)療科技股份有限公司生產(chǎn)；考馬斯亮藍(lán)試劑(cbb)，由北京索萊寶科技有限公司生產(chǎn)；金屬代謝籠，由蘇州馮氏實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)備有限公司生產(chǎn)；755型紫外可見分光光度計(jì)，由上海奧析科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn)；血糖儀，由北京怡成生物電子技術(shù)股份有限公司生產(chǎn)。鹽酸氨溴索口服溶液：取鹽酸氨溴索3g，加入三氯蔗糖0.4g，甜菊素0.7g，枸櫞酸0.22g，枸櫞酸鈉0.16g，薄荷腦0.1g，乙醇7.5ml，菠蘿香精0.1ml，加純化水加至1000ml，混勻、過濾、灌裝、滅菌、燈檢得鹽酸氨溴索口服溶液，由黑龍江中桂制藥有限公司生產(chǎn)，規(guī)格5ml:15mg。

1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

成年雄性wislar大鼠30只，spf級(jí)，體重200±20g，購(gòu)自黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物中心提供。動(dòng)物合格證號(hào)：醫(yī)動(dòng)字第1024－03號(hào)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均預(yù)先飼養(yǎng)24小時(shí)，適應(yīng)實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)條件。所有動(dòng)物用高壓伺料喂養(yǎng)，隨意飲水，攝食，室溫控制在25℃左右，自然采光。

1.3動(dòng)物模型制作與分組

將30只大鼠隨機(jī)分為3組，正常組、模型治療組和模型非治療組，每組10只。模型組大鼠實(shí)驗(yàn)前禁食12h(不禁水)。將鏈脲佐菌素溶于ph4.2枸櫞酸緩沖液中，按50mg/kg一次性腹腔內(nèi)注射，每日監(jiān)測(cè)尿糖，3d后動(dòng)物的血糖濃度大于16.7mmol/l，尿糖陽(yáng)性，確定為糖尿病模型形成。治療組給予鹽酸氨溴索口服溶液0.5mg/kg，灌胃，每日2次，共治療4周。糖尿病成模3周后尿蛋白明顯增加，糖尿病腎病模型成立。在實(shí)驗(yàn)期間大鼠均表現(xiàn)為多飲、多食、多尿、消瘦等癥狀。正常組給予等體積的枸櫞酸緩沖液。

1.4標(biāo)本采集與檢測(cè)

將大鼠放入洗凈的金屬代謝籠內(nèi)，于治療前后收集各組大鼠24h尿標(biāo)本，留尿期間禁食，不禁水，記錄尿量后取4ml，2000r/min離心10min，去除沉渣并于－20℃冰箱保存待測(cè)。尿蛋白用考馬斯亮藍(lán)法檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，用乙醚麻醉大鼠，摘眼球取血，用于血糖、血肌酐、尿素氮的檢測(cè)。血糖用血糖儀及血糖試紙檢測(cè)，腎功能采用beckman自動(dòng)生化儀檢測(cè)。

1.5腎臟病理學(xué)檢測(cè)

麻醉大鼠取血后，立即取出腎臟，去除包膜，稱重，10％福爾馬林固定，酒精逐級(jí)脫水，二甲苯透明，石蠟包埋。切片厚做常規(guī)he染色與pas染色，光鏡觀察。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用spss10.0軟件處理數(shù)據(jù)，所有數(shù)據(jù)以均值標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較用t檢驗(yàn)。

2結(jié)果

2.1在治療前后各組大鼠尿蛋白含量的變化

糖尿病模型成立4周后，大鼠尿蛋白增加，經(jīng)鹽酸氨溴索口服溶液治療后，尿蛋白減少，與治療前相比較，差異有顯著意義(p<0.05)。而未治療組尿蛋白有增多的趨勢(shì)，但差異無(wú)顯著意義(p>0.05)，見表1。

表1各組大鼠治療前后尿蛋白的變化

注：與治療前比較，*p<0.05；與治療前比較，#p>0.05。

2.2治療后各組大鼠血清、血生化指標(biāo)以及腎重/體重的變化

模型組血糖明顯高于正常組(p<0.01)，但血肌酐、尿素氮差異無(wú)明顯意義(p>0.05)，治療組給予鹽酸氨溴索口服溶液治療后，腎重/體重指數(shù)明顯低于非治療組(p<0.05)，與正常組差異無(wú)明顯意義(p>0.05)，說明鹽酸氨溴索口服溶液可以減輕糖尿病腎病大鼠的腎臟肥大，見表2。

表2治療后血糖、血尿素氮、肌酐以及腎重/體重變化

與正常組比較，*p<0.05，**p<0.01。

2.3鹽酸氨溴索口服溶液對(duì)糖尿病腎病大鼠腎組織形態(tài)學(xué)的影響

光鏡下he染色可以見到正常組大鼠細(xì)胞外基質(zhì)與系膜細(xì)胞分布正常，毛細(xì)血管腔開放，見附圖1，而非治療組的細(xì)胞外基質(zhì)增多，系統(tǒng)細(xì)胞增生，同時(shí)毛細(xì)血管部分塌陷，見附圖2。治療組細(xì)胞外基質(zhì)輕度增多，系膜細(xì)胞增生亦減輕。腎小球基底膜增厚減輕，見附圖3，說明鹽酸氨溴索口服溶液在一定程度上可以減輕腎小球肥大，從而對(duì)糖尿病腎病有一定的治療作用。

3結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)表明，鹽酸氨溴索口服溶液能夠減少糖尿病腎病大鼠的尿蛋白排泄，降低腎重/體重指數(shù)，病理資料證實(shí)模型治療組細(xì)胞外基質(zhì)積聚減少，系膜擴(kuò)張以及系膜細(xì)胞增生減輕，說明鹽酸氨溴索口服溶液對(duì)治療糖尿病腎病腎臟肥大有一定作用。

實(shí)施例2：鹽酸氨溴索口服溶液對(duì)糖尿病腦病大鼠的藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)研究

糖尿病是一組由多病因引起的以慢性高血糖為特征的終身性代謝性疾病。長(zhǎng)期血糖增高，大血管、微血管受損并危及心、腦、腎、周圍神經(jīng)、眼睛、足等，據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)，糖尿病并發(fā)癥高達(dá)100多種，是目前已知并發(fā)癥最多的一種疾病，常見的有糖尿病腎病、糖尿病性視網(wǎng)膜病變、與糖尿病相關(guān)的葡萄膜炎、糖尿病性白內(nèi)障、糖尿病足、糖尿病腦病、糖尿病心血管并發(fā)癥、糖尿病性腦血管病、糖尿病神經(jīng)病變等等。糖尿病死亡者有一半以上是心腦血管所致，10％是腎病變所致。因糖尿病截肢的患者是非糖尿病的10～20倍。臨床數(shù)據(jù)顯示，糖尿病發(fā)病后10年左右，將有30％～40％的患者至少會(huì)發(fā)生一種并發(fā)癥，且并發(fā)癥一旦產(chǎn)生，藥物治療很難逆轉(zhuǎn)，因此強(qiáng)調(diào)盡早預(yù)防糖尿病并發(fā)癥。鹽酸氨溴索口服溶液可以治療糖尿病腎病，那么預(yù)測(cè)其對(duì)糖尿病腦病也會(huì)有一定的治療效果。發(fā)明人對(duì)鹽酸氨溴索口服溶液治療糖尿病腦病進(jìn)行藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)研究，探究其治療效果。

1材料和方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及試劑

健康雄性8周齡sd大鼠，體質(zhì)量200～250g，購(gòu)自黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物中心提供。動(dòng)物合格證號(hào)：醫(yī)動(dòng)字第1024－03號(hào)。水迷宮程序自動(dòng)控制儀，由合肥四海儀器科技有限公司生產(chǎn)；鏈脲佐菌素(stz)，由北京索萊寶科技有限公司生產(chǎn)；鹽酸氨溴索口服溶液：取鹽酸氨溴索3g，加入三氯蔗糖0.4g，甜菊素0.7g，枸櫞酸0.22g，枸櫞酸鈉0.16g，薄荷腦0.1g，乙醇7.5ml，菠蘿香精0.1ml，加純化水加至1000ml，混勻、過濾、灌裝、滅菌、燈檢得鹽酸氨溴索口服溶液，由黑龍江中桂制藥有限公司生產(chǎn)，規(guī)格5ml:15mg。

1.2糖尿病大鼠模型的建立和分組

大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，禁食12h，以ph為4.5的0.1mol/l枸櫞酸鈉緩沖液稀釋stz后，避光并快速以60mg/kg量一次性腹腔注射建立糖尿病大鼠模型。3d后，造模大鼠隔夜禁食不禁飲8h以上，取大鼠尾靜脈血檢測(cè)空腹血糖值，將空腹血糖>18mmol/l的大鼠定為糖尿病大鼠，剔除血糖未達(dá)標(biāo)者。建模成功一周后，將糖尿病大鼠隨機(jī)分為糖尿病腦病組和鹽酸氨溴索口服溶液治療組，每組10只；正常大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組和鹽酸氨溴索口服溶液對(duì)照組，每組10只。鹽酸氨溴索口服溶液治療組、鹽酸氨溴索口服溶液對(duì)照組給予鹽酸氨溴索口服溶液10mg/(kg·d)灌胃，正常對(duì)照組給以同等劑量生理鹽水灌胃，持續(xù)14周。在實(shí)驗(yàn)過程中，每周檢測(cè)各組大鼠體質(zhì)量和血糖值。

1.3morris水迷宮實(shí)驗(yàn)

第14周時(shí)，采用morris水迷宮觀察大鼠認(rèn)知功能變化。morris水迷宮為一直徑200cm的圓形水池，內(nèi)置有一可移動(dòng)位置的圓形站臺(tái)(直徑15cm)，站臺(tái)位于水下2cm，水溫恒定在(25±2)℃。水迷宮實(shí)驗(yàn)一共6d，第1天為水迷宮環(huán)境適應(yīng)期。第2～5天為實(shí)驗(yàn)訓(xùn)練期，記錄從放入點(diǎn)到站臺(tái)所用的時(shí)間即逃避潛伏期，每次測(cè)試時(shí)間為120s，若未找到站臺(tái)將大鼠引至站臺(tái)并使其停留10～15s以記憶站臺(tái)位置。第6天為空間搜索實(shí)驗(yàn)，撤離站臺(tái)，每次測(cè)試時(shí)間為60s，記錄每只大鼠在站臺(tái)所在位置的平臺(tái)穿越次數(shù)及在目的象限內(nèi)的徘徊時(shí)間。

1.4心臟灌注及標(biāo)本采集

水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，從每組隨機(jī)抽取1只大鼠，用10％水合氯醒3ml/kg腹腔注射進(jìn)行麻醉，固定并剪開胸腔暴露心臟，分離心包膜后，灌注針插入左心室并固定，同時(shí)剪開右心房。先用生理鹽水快速?zèng)_洗，再用4％多聚甲醛進(jìn)行緩慢灌注。待大鼠體內(nèi)充分固定后，剪開顱骨，將整個(gè)大腦完整移至4％多聚甲醛中浸泡3d等待包埋用于h-e染色。其余的大鼠斷頭取腦，置于冰上快速分離出海馬，放入凍存管儲(chǔ)存在-120c用于蛋白質(zhì)印跡分析。

1.5h-e染色

將石蠟包埋的組織以冠狀位固定后行連續(xù)切片，將含有海馬組織的切片粘貼到經(jīng)3-氨丙基-3-甲氧基硅烷(apes)處理過的載玻片上并置于60～65℃烤箱中烤片30～60min。切片脫蠟至水，蘇木精溶液浸染，沖洗多余染液，而后用梯度乙醇脫水，最后封片。光學(xué)顯微鏡下觀察大鼠海馬組織ca1區(qū)神經(jīng)元形態(tài)及其病理改變。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有數(shù)值采用spss10.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)用(形式表示，運(yùn)用多因素及單因素方差分析比較組間差異。檢驗(yàn)水準(zhǔn)(a)為0.05。

2結(jié)果

2.1各組大鼠的一般情況

糖尿病大鼠出現(xiàn)明顯的多飲、多尿、多食癥狀，大鼠毛色灰黃，精神萎靡，鼠尾出現(xiàn)不同程度的潰爛以及斷尾現(xiàn)象。實(shí)驗(yàn)2個(gè)月時(shí)，糖尿病大鼠因感染出現(xiàn)腹瀉和皮下膿腫，經(jīng)抗生素腹腔注射治療后，感染癥狀得以控制。糖尿病大鼠行動(dòng)遲緩，自主行動(dòng)減少，出現(xiàn)易激惹或?qū)ν饨绱碳し磻?yīng)淡漠等行為表現(xiàn)。實(shí)驗(yàn)期間，糖尿病大鼠血糖值保持在(27±6)mmol/l，同時(shí)正常大鼠血糖值保持在(6±2)mmol/l。

2.2水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果

大鼠血糖值持續(xù)升高3個(gè)月以后，在水迷宮實(shí)驗(yàn)訓(xùn)練期間，糖尿病腦病組和鹽酸氨溴索口服溶液治療組逃避潛伏期較正常對(duì)照組明顯增加(p<0.01)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3。

水迷宮正式實(shí)驗(yàn)期間，糖尿病腦病組和鹽酸氨溴索口服溶液治療組平臺(tái)穿越次數(shù)和在目的象限內(nèi)的徘徊時(shí)間均較正常對(duì)照組明顯減少(p<0.01)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表4。

表3各組大鼠水迷宮實(shí)驗(yàn)逃避潛伏期的比較

注：與正常對(duì)照比較，**p<0.01；

表4各組大鼠水迷宮空間搜索實(shí)驗(yàn)平臺(tái)穿越次數(shù)和目的象限徘徊時(shí)間n＝6，

注：與正常對(duì)照比較，**p<0.01；

3結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，鹽酸氨溴索口服溶液連續(xù)給藥14周后觀察到鹽酸氨溴索口服溶液治療組大鼠認(rèn)知功能障礙沒有得到明顯改善，表明鹽酸氨溴索口服溶液對(duì)糖尿病大鼠都大腦沒有明顯的保護(hù)作用，不能有效治療糖尿病腦病。