本發(fā)明屬于藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及單克隆抗體c11c1在制備治療內(nèi)毒素血癥的藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

內(nèi)毒素或稱脂多糖（lipopolysaccharide，lps）是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁的主要組成成分之一，具有很強(qiáng)的致炎作用。當(dāng)機(jī)體受到創(chuàng)傷感染，革蘭氏陰性菌侵入血循環(huán)并生長(zhǎng)繁殖時(shí)，產(chǎn)生的內(nèi)毒素形成內(nèi)毒素血癥，其臨床表現(xiàn)為發(fā)燒、心動(dòng)過速、血壓下降、呼吸急促和白細(xì)胞增多。內(nèi)毒素激活炎癥細(xì)胞釋放炎癥介質(zhì)，導(dǎo)致全身炎癥反應(yīng)綜合征(sirs)、多器官功能不全綜合征(mops)甚至多臟器功能衰竭(mof)，進(jìn)而危害生命。目前內(nèi)毒素血癥的病理生理過程和發(fā)病機(jī)制仍然不清楚，缺乏有效的治療措施。面臨這一嚴(yán)重迫境，科學(xué)家的共識(shí)和挑戰(zhàn)是如何確立新的靶點(diǎn)和建立新的干預(yù)途徑。顯然，充分闡明革蘭氏陰性細(xì)菌及其表面脂多糖與宿主蛋白之間的相互作用，已成為目前亟待解決的關(guān)鍵問題，這一問題的解決對(duì)于認(rèn)識(shí)內(nèi)毒素血癥的發(fā)病機(jī)理，建立有效的新的靶向預(yù)防和治療措施，從而挽救人類生命，具有極其重要的臨床意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明公開了單克隆抗體c11c1在制備治療內(nèi)毒素血癥的藥物中的應(yīng)用，可作為新的干預(yù)內(nèi)毒素血癥的途徑，為控制內(nèi)毒素血癥確立新靶點(diǎn)和新策略，在治療內(nèi)毒素血癥的潛在價(jià)值。

為達(dá)到上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

單克隆抗體c11c1在制備治療內(nèi)毒素血癥的藥物中的應(yīng)用。

單克隆抗體c11c1在cam實(shí)驗(yàn)中能夠抑制fgf22或vegf誘導(dǎo)的新血管的形成，本發(fā)明首次公開單克隆抗體c11c1在制備治療內(nèi)毒素血癥的藥物中的應(yīng)用。

血漿高分子量激肽原（highmolecularweightkininogen，hk）由重鏈、含緩激肽(bk)肽段和輕鏈三部分組成。重鏈包括第1～3功能域，bk組成部分居于第4功能域，輕鏈包括第5、6二個(gè)功能域。單克隆抗體c11c1識(shí)別hk上第5個(gè)結(jié)構(gòu)域，有效抑制hk結(jié)合到內(nèi)皮細(xì)胞上；c11c1也降低hk的促凝活性，無(wú)論是人血漿還是小鼠血漿，加入c11c1后血漿上清中hk與lps的結(jié)合，與加入igg組相比，明顯增加，說(shuō)明c11c1抑制血漿中hk與lps的結(jié)合，從而抑制脂多糖結(jié)合蛋白的生成；c11c1在體內(nèi)與hk結(jié)合后，從而阻斷了hk與lps的結(jié)合，對(duì)lps所造成的死亡具有保護(hù)作用。

本發(fā)明還公開了單克隆抗體c11c1在制備抑制血漿高分子量激肽原與內(nèi)毒素結(jié)合藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明還公開了單克隆抗體c11c1在制備治療內(nèi)毒素導(dǎo)致的肺損傷藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明還公開了一種治療內(nèi)毒素血癥的藥物，包括單克隆抗體c11c1；還可以包括常規(guī)藥用輔料；所述常規(guī)藥用輔料包括（但不限于）ph調(diào)節(jié)劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑、增溶劑、助溶劑、乳化劑、穩(wěn)定劑、防腐劑、賦形劑、填充劑、崩解劑、粘合劑、矯味劑、矯嗅劑和潤(rùn)滑劑。所述藥物組合物可以通過注射給藥、鼻腔給藥、肺部給藥、透皮給藥、口服給藥等多種方式施用于患者。

本發(fā)明還公開了一種治療內(nèi)毒素血癥的藥物的制備方法，將單克隆抗體c11c1與常規(guī)藥用輔料混合得到。

本發(fā)明首次公開了單克隆抗體c11c1在制備治療內(nèi)毒素血癥的藥物中的應(yīng)用，c11c1抑制血漿中hk與lps的結(jié)合，從而抑制脂多糖結(jié)合蛋白的生成；c11c1在體內(nèi)與hk結(jié)合后，從而阻斷了hk與lps的結(jié)合，對(duì)lps所造成的死亡具有保護(hù)作用；可作為新的干預(yù)內(nèi)毒素血癥的途徑，為控制內(nèi)毒素血癥確立新靶點(diǎn)和新策略，在治療內(nèi)毒素血癥的潛在價(jià)值。

附圖說(shuō)明

圖1是單克隆抗體c11c1的鑒定結(jié)果圖；

圖2是人血漿中hk與lps的結(jié)合結(jié)果圖；

圖3是小鼠血漿中hk與lps的結(jié)合結(jié)果圖；

圖4是小鼠生存率結(jié)果圖；

圖5是血漿中l(wèi)ps濃度結(jié)果圖；

圖6是血漿中主要炎癥因子的含量結(jié)果圖；

圖7是小鼠肺組織的病變程度結(jié)果圖；

圖8是小鼠肺泡灌洗液中細(xì)胞數(shù)和蛋白含量以及肺泡髓過氧化物酶結(jié)果圖。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例一

附圖1為單克隆抗體c11c1的鑒定結(jié)果圖，c11c1識(shí)別hk上第5個(gè)結(jié)構(gòu)域。在體外檢測(cè)c11c1能否抑制血漿中hk與lps的結(jié)合。血漿與c11c1或igg孵育后，再與lps-polymyxinb孵育，檢測(cè)polymyxinbbeads和上清血漿中hk與lps的結(jié)合情況。附圖2、附圖3分別是人血漿、小鼠血漿中hk與lps的結(jié)合結(jié)果圖；如圖所示，無(wú)論是人血漿還是小鼠血漿，加入c11c1后血漿上清中hk與lps的結(jié)合，與加入igg組相比，明顯增加；這些結(jié)果提示c11c1抑制血漿中hk與lps的結(jié)合。

研究c11c1能否改善lps所導(dǎo)致的小鼠死亡，在野生型小鼠注射lps（25mg/kg）前后，分別注射4次c11c1（500μg/mouse）或pbs，觀察兩組小鼠的生存率，附圖4為小鼠生存率結(jié)果圖；結(jié)果發(fā)現(xiàn)，注射c11c1的小鼠，其生存率與注射pbs相比明顯提高，這一結(jié)果提示，c11c1在體內(nèi)與hk結(jié)合后，從而阻斷了hk與lps的結(jié)合，對(duì)lps所造成的死亡具有保護(hù)作用。

上述結(jié)果提示，c11c1在體內(nèi)與hk結(jié)合后，從而阻斷了hk與lps的結(jié)合，為了驗(yàn)證，從體內(nèi)檢測(cè)c11c1是否能影響lps的代謝。在野生型小鼠注射lps（5mg/kg）前后，分別注射4次c11c1（500μg/mouse）或pbs，在不同時(shí)間點(diǎn)取血，檢測(cè)血漿中l(wèi)ps濃度，結(jié)果見圖5。如圖所示，與pbs組小鼠相比，c11c1組小鼠血漿中l(wèi)ps濃度顯著降低，提示c11c1可以通過阻斷血漿中hk與lps的結(jié)合，增加lps清除率，降低其血漿中l(wèi)ps局部濃度。研究c11c1是否會(huì)影響血漿中主要炎癥因子的水平，比較pbs組小鼠和c11c1組小鼠在腹腔內(nèi)注射lps后，血漿中主要炎癥因子的含量，見附圖6，如圖所示，與pbs組小鼠相比，c11c1組小鼠血漿中tnf-α，il-1β的水平明顯降低，說(shuō)明在lps導(dǎo)致的炎癥反應(yīng)中，c11c1顯著抑制血漿中主要炎癥因子的水平。c11c1緩解內(nèi)毒素所致急性肺損傷；對(duì)小鼠肺組織進(jìn)行he染色和掃描電鏡，觀察肺組織的病變程度，結(jié)果為附圖7，如圖所示，pbs組小鼠的肺組織間質(zhì)增生明顯，纖維細(xì)胞增多，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)明顯，血管擴(kuò)張，提示炎性較強(qiáng)，而c11c1組小鼠肺損傷明顯改善。如圖所示，在掃描電鏡中可以看出，pbs組小鼠的肺組織具有明顯損傷，喪失典型的肺泡結(jié)構(gòu)，纖維蛋白大量沉積，而c11c1組小鼠的肺損傷得到一定程度的緩解。此外，還檢測(cè)了肺泡灌洗液中細(xì)胞數(shù)和蛋白含量，以及肺泡髓過氧化物酶，結(jié)果見附圖8，如圖所示，與pbs組相比，c11c1組小鼠肺泡灌洗液中總蛋白和細(xì)胞數(shù)都明顯減少，同時(shí)，c11c1組小鼠肺泡髓過氧化物酶活性也有明顯的降低。以上結(jié)果說(shuō)明c11c1可以改善內(nèi)毒素所導(dǎo)致的急性肺損傷。

技術(shù)特征：

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明屬于藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及單克隆抗體C11C1在制備治療內(nèi)毒素血癥的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明首次公開了單克隆抗體C11C1在制備治療內(nèi)毒素血癥的藥物中的應(yīng)用，C11C1抑制血漿中HK與LPS的結(jié)合，從而抑制脂多糖結(jié)合蛋白的生成；C11C1在體內(nèi)與HK結(jié)合后，從而阻斷了HK與LPS的結(jié)合，對(duì)LPS所造成的死亡具有保護(hù)作用；可作為新的干預(yù)內(nèi)毒素血癥的途徑，為控制內(nèi)毒素血癥確立新靶點(diǎn)和新策略，在治療內(nèi)毒素血癥具備潛在價(jià)值。

技術(shù)研發(fā)人員：武藝;陽(yáng)艾珍;謝展利;王波
受保護(hù)的技術(shù)使用者：蘇州大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：2017.04.17
技術(shù)公布日：2017.08.29