本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種荸薺皮抗癌提取物及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

荸薺(eleochairistoberosa)，又名馬蹄(waterchestnut)，是莎草科荸薺屬多年水生草本植物荸薺的地下球莖，我國長江流域以南各省均有栽培。馬蹄不僅汁多味甜，營養(yǎng)豐富，而且有良好的藥用價值，自古有“地下雪梨”和“江南人參”的美譽(yù)。祖國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)認(rèn)為，馬蹄性寒味甘，有清熱、化痰、消積等功效，能治療黃疽、熱淋、痞積、目赤、咽喉腫痛等癥，乃藥中佳品?！吨兴幋筠o典》記載，馬蹄的活性組分富集于馬蹄的果皮與果肉之間的部位。

但是，迄今為止，從未報道過荸薺的抗癌作用相關(guān)研究。惡性腫瘤是嚴(yán)重威脅人類健康的常見病和多發(fā)病，據(jù)世界衛(wèi)生組織報告，全球50多億人口中，每年新診斷的腫瘤患者約為900萬人，因腫瘤而死亡者達(dá)700萬人，占總病死率的近20％。在腫瘤治療中，傳統(tǒng)的放，化療在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時，也造成機(jī)體骨髓抑制和免疫功能低下，毒副作用大。天然藥物無論在減輕臨床癥狀，提高生存質(zhì)量，防止復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，延長生存期，還是在與放化療配合增效減毒方面都有很好的效果。本申請研究團(tuán)隊在尋找中草藥抗癌活性成分的過程中，發(fā)現(xiàn)荸薺皮提取物具有良好的抗腫瘤活性。這為后期這種植物提取物的抗癌或輔助治療作用研究奠定了一定的基礎(chǔ)。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種制備工藝簡單的荸薺皮抗癌提取物的制備方法，所得的荸薺皮抗癌提取物抗癌活性好，為荸薺在抗癌藥物研究中的應(yīng)用奠定了一定的基礎(chǔ)。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

一種荸薺皮抗癌提取物的制備方法，包括以下步驟：

(1)將荸薺皮浸入乙醇溶液中，超聲提取，過濾；

(2)將步驟(1)得到的提取液經(jīng)過減壓蒸餾，所得的濃縮物干燥后得到荸薺皮抗癌提取物。

優(yōu)選地，所述步驟(1)還包括：將濾渣浸入乙醇溶液中，超聲，過濾；重復(fù)濾渣浸沒-超聲-過濾過程多次，合并濾液得到提取液。

優(yōu)選地，所述步驟(1)中，所述荸薺皮為干燥后的荸薺皮，所述乙醇溶液的質(zhì)量濃度為95％，所述干燥后的荸薺皮與乙醇溶液的質(zhì)量比為1∶5。

優(yōu)選地，所述步驟(1)中，所述超聲功率為100w，時間為1h。

優(yōu)選地，所述步驟(2)中，所述減壓蒸餾的真空度0.04～0.06mpa，溫度為43℃～48℃。

優(yōu)選地，所述步驟(2)中，減壓蒸餾至無醇味，結(jié)束減壓蒸餾，得到所述濃縮物。

優(yōu)選地，濾渣浸沒-超聲-過濾過程的重復(fù)次數(shù)為3次。

作為一個總的發(fā)明構(gòu)思，本發(fā)明還提供一種荸薺皮抗癌提取物，所述荸薺皮抗癌提取物由上述的制備方法所制得，所述荸薺皮抗癌提取物的主要活性成分為黃酮類化合物。

優(yōu)選地，所述黃酮類化合物包括木犀草素、槲皮素和香葉木素。

作為一個總的發(fā)明構(gòu)思，本發(fā)明還提供一種上述的制備方法所制得的荸薺皮抗癌提取物在制備抗癌藥物中的應(yīng)用。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點在于：

本發(fā)明荸薺皮抗癌提取物的制備工藝簡單實用，制得的提取物抗癌活性好；實驗結(jié)果顯示：荸薺皮提取物對hela，a549，hct-116，colo205細(xì)胞具有一定的抑制作用，且對hela，hct-116，colo205細(xì)胞抑制的作用更明顯，為后期這種植物提取物的抗癌或輔助治療作用研究奠定了一定的基礎(chǔ)。

附圖說明

圖1為不同濃度的荸薺皮抗癌提取物與陽性藥物氟尿嘧啶對人惡性結(jié)腸癌細(xì)胞系hct-116，colo205細(xì)胞生長的抑制對照圖；其中，(a)圖為對hct-116細(xì)胞生長的抑制率，(b)圖為對colo205細(xì)胞生長的抑制率。

圖2為不同濃度的荸薺皮抗癌提取物與陽性藥物氟尿嘧啶對人宮頸癌細(xì)胞系hela細(xì)胞生長的抑制對照圖。

圖3為不同濃度的荸薺皮抗癌提取物與陽性藥物氟尿嘧啶對人非小細(xì)胞肺癌a549細(xì)胞生長的抑制對照圖。

具體實施方式

以下結(jié)合具體優(yōu)選的實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步描述，但并不因此而限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。

實施例1：

一種本發(fā)明的荸薺皮抗癌提取物的制備方法，包括以下步驟：

(1)將40g干燥后荸薺皮浸入200g質(zhì)量百分比濃度95％的乙醇溶液中超聲提取，超聲時間1h，超聲功率100w，過濾，濾渣中再添加200g乙醇溶液超聲提取1h，重復(fù)提取3次后，合并濾液得到提取液；

(2)提取液在45℃、真空度0.05mpa條件下減壓蒸餾濃縮至無醇味；所得的濃縮物干燥后得到荸薺皮抗癌提取物。

實施例2：

本發(fā)明的荸薺皮抗癌提取物對人惡性結(jié)腸癌細(xì)胞系hct-116和colon205增殖生長的影響

試驗中用到的細(xì)胞株，試劑以及儀器來源為：

人惡性結(jié)腸癌細(xì)胞系hct-116，colon205，rpmi1640培養(yǎng)基(美國gibico公司)，胎牛血清(天津市灝陽生物制品科技有限公司)，胰蛋白酶(美國sigma公司)，dmso(分析純，amresco)，青霉素(sigma)，鏈霉素(sigma)，mtt(amresco)，96孔板，co2培養(yǎng)箱(日本sanyo公司)，96孔板酶標(biāo)儀bio-rad680(美國bio-rad公司)，生物操作臺(吳江市綠島凈化設(shè)備廠)。

(1)腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)方法

采用以下條件對人惡性結(jié)腸癌細(xì)胞系hct-116，colon205細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)：基礎(chǔ)培養(yǎng)基為質(zhì)量分?jǐn)?shù)為89％的rpmi1640+10％fbs(胎牛血清)+1％雙抗青鏈霉素，培養(yǎng)條件為37℃，5％co2濃度及飽和濕度；當(dāng)細(xì)胞生長至對數(shù)期時，用胰蛋白酶消化細(xì)胞，洗滌吹散細(xì)胞，以每孔1×10⁴個細(xì)胞100μl接種于96孔板，以備mtt實驗。

(2)細(xì)胞增殖實驗(mtt法)

將處于對數(shù)生長期的人惡性結(jié)腸癌細(xì)胞系hct-116，colon205細(xì)胞，鋪板于96孔板，每組設(shè)3個平行孔。其中三組分別加入100μl濃度為50μg/ml、100μg/ml和300μg/ml的荸薺皮抗癌提取物溶液作為實驗組，荸薺皮抗癌提取物溶液中的荸薺皮抗癌提取物為實施例1制備的荸薺皮抗癌提取物。其中三組分別加入與實驗組等體積的50μg/ml、100μg/ml和300μg/ml的陽性藥物氟尿嘧啶(5-fu)溶液作為對照組。另設(shè)空白組。分別處理24h后，采用mtt法檢測癌細(xì)胞增殖抑制率，增殖抑制率(％)＝(1-實驗組od值/對照組od值)×100％；癌細(xì)胞增殖抑制率實驗結(jié)果如圖1所示，從圖1中可以看出：低濃度荸薺提取物(50μg/ml)對細(xì)胞抑制增殖作用不明顯，較高濃度(100μg/ml、300μg/ml)荸薺對hct-116及colo205細(xì)胞有明顯的抑制增殖作用，且呈量效關(guān)系，特別對colo205細(xì)胞抑制率高于陽性藥物氟尿嘧啶(5-fu)。

實施例3：

本發(fā)明的荸薺皮抗癌提取物對人宮頸癌細(xì)胞系hela細(xì)胞增殖生長的影響

本實施例的(1)腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)方法和(2)細(xì)胞增殖實驗與實施例2基本相同，其不同點僅在于：腫瘤細(xì)胞為人宮頸癌細(xì)胞系hela細(xì)胞。癌細(xì)胞增殖抑制率實驗結(jié)果如圖2所示。

結(jié)果表明低濃度荸薺提取物(50μg/ml)對細(xì)胞抑制增殖作用不明顯，較高濃度(100μg/ml、300μg/ml)荸薺對hela細(xì)胞有明顯的抑制增殖作用，且呈量效關(guān)系。

實施例4：

本發(fā)明的荸薺皮抗癌提取物對人非小細(xì)胞肺癌a549細(xì)胞增殖生長的影響

本實施例的(1)腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)方法和(2)細(xì)胞增殖實驗與實施例2基本相同，其不同點僅在于：腫瘤細(xì)胞為人非小細(xì)胞肺癌a549細(xì)胞。癌細(xì)胞增殖抑制率實驗結(jié)果如圖3所示。

結(jié)果表明荸薺提取物對人非小細(xì)胞肺癌a549細(xì)胞的增殖具有一定的抑制作用。

以上結(jié)果表明荸薺提取物具有較好的抗癌生物活性，可以利用于抗癌制劑。

最后有必要在此說明的是：以上實施例只用于對本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步詳細(xì)地說明，不能理解為對本發(fā)明保護(hù)范圍的限制，本領(lǐng)域的技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容作出的一些非本質(zhì)的改進(jìn)和調(diào)整均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。最后有必要在此說明的是：以上實施例只用于對本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步詳細(xì)地說明，不能理解為對本發(fā)明保護(hù)范圍的限制，本領(lǐng)域的技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容作出的一些非本質(zhì)的改進(jìn)和調(diào)整均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。