本發(fā)明涉及一種抗壞血酸四異棕櫚酸酯納米顆粒的制備方法，屬于化妝品
技術(shù)領(lǐng)域：
。
背景技術(shù)：
：維生素C，也被稱為抗壞血酸，當(dāng)用于局部應(yīng)用時具有許多優(yōu)點，因此已廣泛地應(yīng)用于化妝品和局部制藥配方。維生素C作為化妝品成分具有抗氧化、美白等功效。維生素C作為真皮中原膠原之離胺酸和脯胺酸殘基的羥化作用之輔因子以刺激膠原蛋白的合成，而提高皮膚彈性、減少細(xì)紋和皺紋，維生素C作為有效的抗氧化劑，用于清除暴露于紫外線輻射的皮膚所產(chǎn)生之自由基和保護皮膚免于受紫外線所誘發(fā)之傷害，維生素C亦補充作用于皮膚的其它抗氧化維生素的維生素E，當(dāng)維生素E缺乏時，抑制表皮黑色素細(xì)胞的黑色素合成以防止色素沉淀。由于這些有益作用，維生素C有很大的潛力作為局部化妝品和醫(yī)藥配方的成分，用于治療或預(yù)防有關(guān)色素沉淀和皺紋的皮膚老化。然而，維生素C很容易被氧化變黃，因此很難在化妝品中使用。因此，人們開發(fā)出了許多更穩(wěn)定的維生素C衍生物，如維生素C磷酸酯鈉、維生素C磷酸酯鎂、維生素C葡糖苷、維生素C乙基醚、抗壞血酸四異棕櫚酸酯等，但由于穩(wěn)定性差的問題，造成其抗氧化性不佳，同時存在一定的刺激性，對維生素C在化妝品中的應(yīng)用造成極大的障礙。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明針對現(xiàn)有維生素C衍生物在化妝品中的應(yīng)用存在的不足，提供一種抗壞血酸四異棕櫚酸酯納米顆粒的制備方法。本發(fā)明解決上述技術(shù)問題的技術(shù)方案如下：一種抗壞血酸四異棕櫚酸酯納米顆粒的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：1)制備抗壞血酸四異棕櫚酸酯膠溶液將結(jié)冷膠0.1-0.5重量份、羥丙基甲基纖維素0.1-0.5重量份、透明質(zhì)酸鈉0.1-1重量份加入到甘油1-5重量份、丁二醇1-5重量份中進行分散，后向其中加入水20-50重量份，開啟攪拌和加熱，加熱至60-90℃，保溫5-30min,后降溫至50℃,后向其中加入抗壞血酸四異棕櫚酸酯1-10重量份、苯氧乙醇0.5-0.8重量份，攪拌均勻，得抗壞血酸四異棕櫚酸酯膠溶液；2)制備納米膠溶液將步驟1)中所得的膠溶液通過高壓均質(zhì)設(shè)備，物料以1000～1500米/秒的流速噴出，通過產(chǎn)生的空穴效應(yīng)、撞擊效應(yīng)、剪切效應(yīng)，得到均勻、細(xì)膩、納米級的膠溶液；3)制備多孔納米顆粒將步驟2)中得到的膠溶液置于液氮中冷凍,待產(chǎn)品完全凍結(jié)后轉(zhuǎn)移至冰箱中于-18℃以下的環(huán)境中保存。進一步，步驟2)中所述高壓均質(zhì)設(shè)備的進料壓力控制在0.25-0.55MPa,均質(zhì)壓力為100-250MPa。進一步，步驟1)中所述的攪拌速度為50-200r/min。本發(fā)明的有益效果是：本方法通過高壓冷凍技術(shù)對抗壞血酸四異棕櫚酸酯進行包裹和細(xì)化，得到的抗壞血酸四異棕櫚酸酯納米顆粒能夠顯著降低抗壞血酸四異棕櫚酸酯的刺激性，極大的提升產(chǎn)品穩(wěn)定性，進而能夠提高其抗氧化性，從而能夠起到更加優(yōu)異的抗氧化、美白的功效。具體實施方式以下結(jié)合實例對本發(fā)明的原理和特征進行描述，所舉實例只用于解釋本發(fā)明，并非用于限定本發(fā)明的范圍。實施例1：一種抗壞血酸四異棕櫚酸酯納米顆粒的制備方法，包括如下步驟：1)制備抗壞血酸四異棕櫚酸酯膠溶液將結(jié)冷膠0.1重量份、羥丙基甲基纖維素0.1重量份、透明質(zhì)酸鈉0.1重量份加入到甘油1重量份、丁二醇1重量份中進行分散，后向其中加入水20重量份，開啟攪拌和加熱，加熱至70℃，保溫20min,后降溫至50℃,后向其中加入抗壞血酸四異棕櫚酸酯1重量份、苯氧乙醇0.5重量份，攪拌均勻，得抗壞血酸四異棕櫚酸酯膠溶液；2)制備納米膠溶液將步驟1)中所得的膠溶液通過高壓均質(zhì)機，進料壓力控制在0.25-0.35MPa,均質(zhì)壓力為100-120MPa,物料以1000～1200米/秒的流速噴出，通過產(chǎn)生的空穴效應(yīng)、撞擊效應(yīng)、剪切效應(yīng)，得到均勻、細(xì)膩、納米級的膠溶液；3)制備多孔納米顆粒將步驟2)中得到的膠溶液置于液氮中冷凍,待產(chǎn)品完全凍結(jié)后轉(zhuǎn)移至冰箱中于-18℃以下的環(huán)境中保存。實施例2：一種抗壞血酸四異棕櫚酸酯納米顆粒的制備方法，包括如下步驟：1)制備抗壞血酸四異棕櫚酸酯膠溶液將結(jié)冷膠0.4重量份、羥丙基甲基纖維素0.2重量份、透明質(zhì)酸鈉0.2重量份加入到甘油5重量份、丁二醇1重量份中進行分散，后向其中加入水35重量份，開啟攪拌和加熱，加熱至60℃，保溫30min,后降溫至50℃,后向其中加入抗壞血酸四異棕櫚酸酯6重量份、苯氧乙醇0.8重量份，攪拌均勻，得抗壞血酸四異棕櫚酸酯膠溶液；2)制備納米膠溶液將步驟1)中所得的膠溶液通過高壓均質(zhì)設(shè)備，進料壓力控制在0.35-0.45MPa,均質(zhì)壓力為120-130MPa,物料以1200～1300米/秒的流速噴出，通過產(chǎn)生的空穴效應(yīng)、撞擊效應(yīng)、剪切效應(yīng)，得到均勻、細(xì)膩、納米級的膠溶液；3)制備多孔納米顆粒將步驟2)中得到的膠溶液置于液氮中冷凍,待產(chǎn)品完全凍結(jié)后轉(zhuǎn)移至冰箱中于-18℃以下的環(huán)境中保存。實施例3：一種抗壞血酸四異棕櫚酸酯納米顆粒的制備方法，包括如下步驟：1)制備抗壞血酸四異棕櫚酸酯膠溶液將結(jié)冷膠0.5重量份、羥丙基甲基纖維素0.5重量份、透明質(zhì)酸鈉1重量份加入到甘油5重量份、丁二醇5重量份中進行分散，后向其中加入水50重量份，開啟攪拌和加熱，加熱至60℃，保溫30min,后降溫至50℃,后向其中加入抗壞血酸四異棕櫚酸酯10重量份、苯氧乙醇0.8重量份，攪拌均勻，得抗壞血酸四異棕櫚酸酯膠溶液；2)制備納米膠溶液將步驟1)中所得的膠溶液通過高壓均質(zhì)設(shè)備，進料壓力控制在0.45-0.55MPa,均質(zhì)壓力為180-200MPa,物料以1300～1500米/秒的流速噴出，通過產(chǎn)生的空穴效應(yīng)、撞擊效應(yīng)、剪切效應(yīng)，得到均勻、細(xì)膩、納米級的膠溶液；3)制備多孔納米顆粒將步驟2)中得到的膠溶液置于液氮中冷凍,待產(chǎn)品完全凍結(jié)后轉(zhuǎn)移至冰箱中于-18℃以下的環(huán)境中保存。實施例4：一種抗壞血酸四異棕櫚酸酯納米顆粒的制備方法，包括如下步驟：1)制備抗壞血酸四異棕櫚酸酯膠溶液將結(jié)冷膠0.1重量份、羥丙基甲基纖維素0.1重量份、透明質(zhì)酸鈉0.1重量份加入到甘油5重量份、丁二醇5重量份中進行分散，后向其中加入水35重量份，開啟攪拌和加熱，加熱至90℃，保溫5min,后降溫至50℃,后向其中加入抗壞血酸四異棕櫚酸酯10重量份、苯氧乙醇0.5重量份，攪拌均勻，得抗壞血酸四異棕櫚酸酯膠溶液；2)制備納米膠溶液將步驟1)中所得的膠溶液通過高壓均質(zhì)機，進料壓力控制在0.25-0.35MPa,均質(zhì)壓力220-250MPa,物料以1400～1500米/秒的流速噴出，通過產(chǎn)生的空穴效應(yīng)、撞擊效應(yīng)、剪切效應(yīng)，得到均勻、細(xì)膩、納米級的膠溶液；3)制備多孔納米顆粒將步驟2)中得到的膠溶液置于液氮中冷凍,待產(chǎn)品完全凍結(jié)后轉(zhuǎn)移至冰箱中于-18℃以下的環(huán)境中保存。實施例5：一種抗壞血酸四異棕櫚酸酯納米顆粒的制備方法，包括如下步驟：1)制備抗壞血酸四異棕櫚酸酯膠溶液將結(jié)冷膠0.5重量份、羥丙基甲基纖維素0.5重量份、透明質(zhì)酸鈉1重量份加入到甘油1重量份、丁二醇1重量份中進行分散，后向其中加入水20重量份，開啟攪拌和加熱，加熱至75℃，保溫15min,后降溫至50℃,后向其中加入抗壞血酸四異棕櫚酸酯1重量份、苯氧乙醇0.8重量份，攪拌均勻，得抗壞血酸四異棕櫚酸酯膠溶液；2)制備納米膠溶液將步驟1)中所得的膠溶液通過高壓均質(zhì)機，進料壓力控制在0.45-0.55MPa,均質(zhì)壓力為120-130MPa,物料以1200～1500米/秒的流速噴出，通過產(chǎn)生的空穴效應(yīng)、撞擊效應(yīng)、剪切效應(yīng)，得到均勻、細(xì)膩、納米級的膠溶液；3)制備多孔納米顆粒將步驟2)中得到的膠溶液置于液氮中冷凍,待產(chǎn)品完全凍結(jié)后轉(zhuǎn)移至冰箱中于-18℃以下的環(huán)境中保存。實施例6：一種抗壞血酸四異棕櫚酸酯納米顆粒的制備方法，包括如下步驟：1)制備抗壞血酸四異棕櫚酸酯膠溶液將結(jié)冷膠0.4重量份、羥丙基甲基纖維素0.2重量份、透明質(zhì)酸鈉0.2重量份加入到甘油5重量份、丁二醇5重量份中進行分散，后向其中加入水50重量份，開啟攪拌和加熱，加熱至90℃，保溫5min,后降溫至50℃,后向其中加入抗壞血酸四異棕櫚酸酯1重量份、苯氧乙醇0.8重量份，攪拌均勻，得抗壞血酸四異棕櫚酸酯膠溶液；2)制備納米膠溶液將步驟1)中所得的膠溶液通過高壓均質(zhì)設(shè)備，進料壓力控制在0.35-0.45MPa,均質(zhì)壓力為180-200MPa,物料以1200～1500米/秒的流速噴出，通過產(chǎn)生的空穴效應(yīng)、撞擊效應(yīng)、剪切效應(yīng)，得到均勻、細(xì)膩、納米級的膠溶液；3)制備多孔納米顆粒將步驟2)中得到的膠溶液置于液氮中冷凍,待產(chǎn)品完全凍結(jié)后轉(zhuǎn)移至冰箱中于-18℃以下的環(huán)境中保存。實施例7：一種抗壞血酸四異棕櫚酸酯納米顆粒的制備方法，包括如下步驟：1)制備抗壞血酸四異棕櫚酸酯膠溶液將結(jié)冷膠0.1重量份、羥丙基甲基纖維素0.1重量份、透明質(zhì)酸鈉0.1重量份加入到甘油5重量份、丁二醇1重量份中進行分散，后向其中加入水50重量份，開啟攪拌和加熱，加熱至90℃，保溫5min,后降溫至50℃,后向其中加入抗壞血酸四異棕櫚酸酯10重量份、苯氧乙醇0.5重量份，攪拌均勻，得抗壞血酸四異棕櫚酸酯膠溶液；2)制備納米膠溶液將步驟1)中所得的膠溶液通過高壓均質(zhì)設(shè)備，進料壓力控制在0.25-0.35MPa,均質(zhì)壓力為100-120MPa,物料以1200～1500米/秒的流速噴出，通過產(chǎn)生的空穴效應(yīng)、撞擊效應(yīng)、剪切效應(yīng)，得到均勻、細(xì)膩、納米級的膠溶液；3)制備多孔納米顆粒將步驟2)中得到的膠溶液置于液氮中冷凍,待產(chǎn)品完全凍結(jié)后轉(zhuǎn)移至冰箱中于-18℃以下的環(huán)境中保存。實施例8：一種抗壞血酸四異棕櫚酸酯納米顆粒的制備方法，包括如下步驟：1)制備抗壞血酸四異棕櫚酸酯膠溶液將結(jié)冷膠0.3重量份、羥丙基甲基纖維素0.3重量份、透明質(zhì)酸鈉0.2重量份加入到甘油1重量份、丁二醇1重量份中進行分散，后向其中加入水20重量份，開啟攪拌和加熱，加熱至60℃，保溫30min,后降溫至50℃,后向其中加入抗壞血酸四異棕櫚酸酯6重量份、苯氧乙醇0.8重量份，攪拌均勻，得抗壞血酸四異棕櫚酸酯膠溶液；2)制備納米膠溶液將步驟1)中所得的膠溶液通過高壓均質(zhì)設(shè)備，進料壓力控制在0.35-0.45MPa,均質(zhì)壓力為180-200MPa,物料以1200～1500米/秒的流速噴出，通過產(chǎn)生的空穴效應(yīng)、撞擊效應(yīng)、剪切效應(yīng)，得到均勻、細(xì)膩、納米級的膠溶液；3)制備多孔納米顆粒將步驟2)中得到的膠溶液置于液氮中冷凍,待產(chǎn)品完全凍結(jié)后轉(zhuǎn)移至冰箱中于-18℃以下的環(huán)境中保存。為了驗證本發(fā)明的制備方法得到的納米顆粒的技術(shù)效果，我們進行了如下測試：一、安全性測試1.1試驗材料斑試器：北京北醫(yī)投資管理有限公司生產(chǎn)，圓形，直徑12mm。斑試物：5wt％的抗壞血酸四異棕櫚酸酯溶液、5wt％的實施例2所得的抗壞血酸四異棕櫚酸酯納米固體溶液。1.2實驗人群和測試時間有效受試者共計30人，具體性別構(gòu)成和年齡構(gòu)成隨機確定(符合2007《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》納入、排除標(biāo)準(zhǔn)。1.3實驗方法按受試者入選標(biāo)準(zhǔn)選擇受試人員，人數(shù)為30例。選用合格斑貼材料，將樣品放入斑試器內(nèi)(樣品用量為0.020g-0.025g)，對照孔為空白(不置任何物質(zhì))。將樣品和空白對照均貼于受試者的前臂曲側(cè)，用手掌輕壓使之均勻地貼敷于皮膚上，持續(xù)24h。去除斑貼器后間隔30min,待壓痕消失后觀察皮膚反應(yīng)。斑貼試驗后24h和48h分別再觀察一次，觀察皮膚反應(yīng)。皮膚不良反應(yīng)分級標(biāo)準(zhǔn)見表1：表1：皮膚不良反應(yīng)分級1.4結(jié)果解釋：皮膚封閉型斑貼試驗結(jié)果解釋：30例受試者中出現(xiàn)1級皮膚不良反應(yīng)的人數(shù)多于5例，或2級皮膚不良反應(yīng)的人數(shù)多于2例，或出現(xiàn)任何1例3級或3級以上皮膚不良反應(yīng)時，判定受試物對人體有不良反應(yīng)。1.5實驗結(jié)果試驗結(jié)果見表2、3、4。表2去除斑試器0.5小時觀察結(jié)果表3去除斑試器24小時觀察結(jié)果表4去除斑試器48小時觀察結(jié)果實驗結(jié)果表明：此次斑貼試驗結(jié)果，根據(jù)2007《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》的要求，判定5wt％的抗壞血酸四異棕櫚酸酯溶液對人體皮膚有不良反應(yīng)，5wt％的抗壞血酸四異棕櫚酸酯納米固體溶液對人體無不良反應(yīng)。二、穩(wěn)定性測試2.1.耐熱穩(wěn)定性考察實驗實驗方法為將實施例3所得的10wt％抗壞血酸四異棕櫚酸酯納米固體溶液與10wt％抗壞血酸四異棕櫚酸酯溶液各100克，放入100克透明塑料瓶(醫(yī)藥級)中，密封，放入60度烘箱中，觀察隨時間變化樣品的變色情況，判定二者的耐熱穩(wěn)定性差異，具體結(jié)果見表5。表5耐熱穩(wěn)定性考察實驗實驗結(jié)果表明：10wt％抗壞血酸四異棕櫚酸酯溶液在耐熱第5天的時候，出現(xiàn)變黃現(xiàn)象，且隨著耐熱時間的加長顏色逐漸加深，穩(wěn)定性隨時間延長逐漸變差，10wt％抗壞血酸四異棕櫚酸酯納米固體溶液在第15天出現(xiàn)淡黃色，時間比10wt％抗壞血酸四異棕櫚酸酯溶液晚10天，說明經(jīng)高壓冷凍技術(shù)制備的活性物，耐熱穩(wěn)定性得到大幅提升。2.2光照穩(wěn)定性考察實驗實驗方法為將10wt％抗壞血酸四異棕櫚酸酯納米固體溶液與10wt％抗壞血酸四異棕櫚酸酯溶液各100克，放入100克透明塑料瓶(醫(yī)藥級)中，密封，放入陽光照射下的實驗臺上，觀察隨時間變化樣品的變色情況，判定二者的耐熱穩(wěn)定性差異，具體結(jié)果見表6。表6耐光照穩(wěn)定性考察實驗實驗結(jié)果表明：10wt％抗壞血酸四異棕櫚酸酯溶液在耐熱第5天的時候，出現(xiàn)變黃現(xiàn)象，且隨著耐熱時間的加長顏色逐漸加深，穩(wěn)定性隨時間延長逐漸變差，10wt％抗壞血酸四異棕櫚酸酯納米固體溶液在第20天出現(xiàn)淡黃色，時間比10wt％抗壞血酸四異棕櫚酸酯溶液晚15天，說明經(jīng)高壓冷凍技術(shù)制備的活性物，耐熱穩(wěn)定性得到大幅提升。三、功效性3.1抗氧化性實驗對包裹前后的樣品進行對DPPH自由基清除率的測定，分兩組進行對比測試，一組為抗壞血酸四異棕櫚酸酯(0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％)五種不同質(zhì)量濃度，一組為實施例4所得的抗壞血酸四異棕櫚酸酯納米固體(0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％)五種不同質(zhì)量濃度。具體實驗步驟為取每種樣品取2mL，加2mL×10-4mol/LDPPH混勻，于室溫條件下避光反應(yīng)20min，4000r/min離心10min，取上清液在517nm波長處測定吸光度Ai?？瞻捉M以等體積95％乙醇溶液代替DPPH溶液，對照組以等體積去離子水代替樣品溶液，將2mL95％乙醇和等體積去離子水混合用于調(diào)零。按照公式測定樣品清除率。計算公式為SA(％)＝1-(Ai－Aj)/A0×100％A0:DPPH·與溶劑混合液的吸光度Ai:DPPH·與樣品反應(yīng)后的吸光度Aj:樣品與溶劑混合液的吸光度具體測試結(jié)果見表7表7DPPH·自由基的清除作用比較實驗結(jié)果表明：在(0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％)的添加濃度下抗壞血酸棕櫚酸酯納米固體較抗壞血酸四異棕櫚酸酯的抗氧化性能有顯著提高，說明經(jīng)高壓冷凍技術(shù)制備的活性物，抗氧化性能得到大幅提升。3.2美白性能3.2.1儀器：分光光度計、微量移液器(1mL)、電子天平、容量瓶(10mL、50mL、250mL)、水浴恒溫箱、燒杯和量筒若干。3.2.2樣品：馬鈴薯、L-酪氨酸、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、去離子水3.2.3試劑配制：磷酸鹽緩沖溶液(pH＝6.8)：先分別配制0.2mol/L的磷酸二氫鈉和0.2mol/L的磷酸氫二鈉。0.2mol/L磷酸二氫鈉：稱取71.6gNa2HPO4-12H2O，溶于1000mL去離子水；0.2mol/L磷酸氫二鈉：稱取31.2gNaH2PO4-2H2O，溶于1000mL去離子水；取51mL磷酸二氫鈉+49mL磷酸氫二鈉即得0.2mol/L、pH＝6.8的磷酸緩沖液。L-酪氨酸溶液：稱取L-酪氨酸25.6g，用磷酸緩沖液定容于50mL容量瓶中，即得L-酪氨酸溶液。酪氨酸酶溶液：將馬鈴薯洗凈，于4℃預(yù)冷4h左右。去皮，切成約1.0cm3丁狀，于-20℃冷凍過夜。稱重，按1：1(W:V)的比例加入4℃預(yù)冷的磷酸鈉緩沖液，用組織搗碎機制成勻漿，3層紗布過濾，濾液于4000r/min離心10min，上清液即為所得的酪氨酸酶粗酶液，4℃保存，2h內(nèi)用完?？箟难崴漠愖貦八狨ナ茉囈旱呐渲疲簩⒖箟难崴漠愖貦八狨ニ涑?mg/mL的溶液并用甲醇稀釋到1mg/mL?？箟难崴漠愖貦八狨ゼ{米固體受試液的配制：將抗壞血酸四異棕櫚酸酯納米固體配成5mg/mL的溶液并用甲醇稀釋到1mg/mL。3.2.4實驗方法按照表8所示向試管中依次加入磷酸鹽緩沖液、樣品溶液、酪氨酸溶液，于35℃水浴10分鐘。然后加入酪氨酸酶液，混勻，再在35℃下孵育30min，迅速轉(zhuǎn)移至比色皿中，在475nm處測定吸光度。表8待測液的組成樣品A組B組C組D組1mg/mL樣品溶液1mL1mLpH6.8磷酸鹽緩沖液1mL1mL1mL1mL0.15％L-酪氨酸溶液1mL1mL酪氨酸酶溶液1mL1mL利用各組吸光度,通過計算得出酪氨酸酶抑制率,其計算公式如下:A:未加樣品的加酶混合液所測的吸光度A(a)；B:未加樣品亦未加酶的混合液所測的吸光度A(b)；C:加樣品和酶的混合液所測的吸光度A(c)；D:加樣品而未加酶的混合液所測的吸光度A(d)。3.2.5實驗結(jié)果通過上述檢測方法,對2種受試液進行檢測,得出二者的抑制率，具體見表9：表9兩種受試液的抑制率比較實驗結(jié)果表明：抗壞血酸四異棕櫚酸酯納米固體較抗壞血酸四異棕櫚酸酯的抑制酪氨酸酶的能力有顯著提高，酪氨酸酶抑制率越高，皮膚中生成的黑色素就越少，美白效果就會越好，說明經(jīng)高壓冷凍技術(shù)制備的活性物，美白性能得到大幅提升。以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。當(dāng)前第1頁1 2 3