本發(fā)明涉及一種植物復方美白劑的制備方法，尤其涉及一種植物復方美白劑納米顆粒的制備方法，屬于化妝品技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
肌膚白皙是美麗的標準，愛美之心人皆有之，亞洲人群期望美白護膚品賦予白晰、光潔的肌膚，歐美人群則用美白產(chǎn)品減輕甚至消除黃褐斑、老年斑等色素沉積。目前，國內(nèi)外美白化妝品市場需求日漸增長，美白劑的研究開發(fā)不斷深入，并相繼應用于化妝品，推動著美容護膚化妝品的發(fā)展。
隨著當前人們健康意識的不斷提高，理性美白的觀念已成為主流，從物理性的遮蓋劑(如氧化鐵、二氧化鈦和氧化鋅等等)，向黑色素系統(tǒng)控制的生理性美白劑轉(zhuǎn)變，即利用生物制劑、中草藥提取物等，開發(fā)抑制酪氨酸酶的活性，防止黑色素形成，促使黑色素代謝，具有安全高效的祛除皮膚色斑的天然美白化妝品。
而現(xiàn)有的傳統(tǒng)的中草藥的美白復方提取物，存在著味道大、顏色深、易析出以及實際使用過程中持續(xù)時間短、效果差的問題，因而極大的限制了其在美白化妝品中的應用。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明針對現(xiàn)有中草藥美白復方提取物在美白化妝品中應用存在的不足，提供一種植物復方美白劑的納米顆粒的制備方法。
本發(fā)明解決上述技術(shù)問題的技術(shù)方案如下：
一種植物復方美白劑的納米顆粒的制備方法，包括如下步驟：
1)提取植物復方美白劑
將黃岑、桑白皮、茵陳、大棗、甘草按照重量比2：1：1：1：1混合，進行水提，得到的提取液濃縮，經(jīng)乙醇醇沉并洗脫后，將得到的沉淀真空干燥，得植物復方美白劑；
2)制備植物復方美白劑的膠體溶液
將卡拉膠0.1-0.5重量份、結(jié)冷膠0.1-0.5重量份、羥丙基甲基纖維素0.1-0.5重量份、透明質(zhì)酸鈉0.1-1重量份用甘油1-5重量份、丁二醇1-5重量份進行分散，向其中加入水20-50重量份，開啟攪拌和加熱，加熱至60-90℃后保溫5-30min，后降溫至50℃，向其中加入植物復方美白劑1-3重量份、苯氧乙醇0.5-0.8重量份，攪拌均勻，得膠體溶液；
3)制備植物復方美白劑的納米膠溶液
將步驟2)所得的膠體溶液通過高壓均質(zhì)設(shè)備，物料以1000～1500米/秒的流速噴出，通過產(chǎn)生的空穴效應、撞擊效應、剪切效應，得到均勻、細膩、納米級的膠溶液；
4)制備多孔納米顆粒
將步驟3)所得的膠溶液置于液氮中冷凍,待產(chǎn)品完全凍結(jié)后轉(zhuǎn)移至冰箱中于-18℃以下的環(huán)境中保存。
進一步，步驟1)中水提的工藝參數(shù)為：料液比1:15，溫度80℃，提取時間4h，提取次數(shù)3次。
進一步，步驟3)中所述高壓均質(zhì)設(shè)備的進料壓力控制在0.25-0.55mpa,均質(zhì)壓力控制在100-250mpa。
進一步，步驟1)中所述的攪拌速度為50-200r/min。
本發(fā)明的有益效果是：
本方法通過高壓冷凍技術(shù)對復方美白劑進行包裹和細化得到納米顆粒，使其粒徑小，且均勻分布于多孔結(jié)構(gòu)中，將其加入化妝品配方中，具有提高活性物質(zhì)的透皮吸收性、緩釋性和降低刺激性的作用。通過皮膚刺激性試驗可以有效降低原植物復方美白劑的皮膚刺激性；多孔結(jié)構(gòu)可提高活性物質(zhì)的緩釋性，在體外實驗中，可提高酪氨酸酶活性抑制率18.6％。
具體實施方式
以下結(jié)合實例對本發(fā)明的原理和特征進行描述，所舉實例只用于解釋本發(fā)明，并非用于限定本發(fā)明的范圍。
本發(fā)明所使用的植物復方美白劑是由黃岑、桑白皮、茵陳、大棗、甘草按照重量比2：1：1：1：1混合的混合物水提得到的，提取工藝為料液比1:15、溫度80℃、提取時間4h、提取次數(shù)3次。得到的提取液濃縮，分別經(jīng)過60％乙醇醇沉和80％乙醇醇沉，并用無水乙醇洗脫2次以除去其中的雜質(zhì)，最后將得到的沉淀進行真空干燥，得植物復方美白劑固體。
實施例1：
一種植物復方美白劑的納米顆粒的制備方法，包括如下步驟：
1)制備植物復方美白劑的膠體溶液
將卡拉膠0.1重量份、結(jié)冷膠0.1重量份、羥丙基甲基纖維素0.1重量份、透明質(zhì)酸鈉0.1重量份用甘油1重量份、丁二醇1重量份進行分散，向其中加入水20重量份，開啟攪拌和加熱，攪拌速度為100r/min,加熱至60℃后保溫20min，后降溫至50℃，向其中加入植物復方美白劑1重量份、苯氧乙醇0.5重量份，攪拌均勻，得膠體溶液；
2)制備植物復方美白劑的納米膠溶液
將步驟1)所得的膠體溶液通過高壓均質(zhì)設(shè)備，進料壓力控制在0.25-0.35mpa,均質(zhì)壓力控制在100-120mpa,物料以1000～1200米/秒的流速噴出，通過產(chǎn)生的空穴效應、撞擊效應、剪切效應，得到均勻、細膩、納米級的膠溶液；3)制備多孔納米顆粒
將步驟2)所得的膠溶液置于液氮中冷凍,待產(chǎn)品完全凍結(jié)后轉(zhuǎn)移至冰箱中于-18℃以下的環(huán)境中保存。
實施例2：
一種植物復方美白劑的納米顆粒的制備方法，包括如下步驟：
1)制備植物復方美白劑的膠體溶液
將卡拉膠0.5重量份、結(jié)冷膠0.4重量份、羥丙基甲基纖維素0.2重量份、透明質(zhì)酸鈉0.2重量份用甘油5重量份、丁二醇1重量份進行分散，向其中加入水35重量份，開啟攪拌和加熱，攪拌速度為150r/min,加熱至70℃后保溫15min，后降溫至50℃，向其中加入植物復方美白劑3重量份、苯氧乙醇0.8重量份，攪拌均勻，得膠體溶液；
2)制備植物復方美白劑的納米膠溶液
將步驟1)所得的膠體溶液通過高壓均質(zhì)設(shè)備，進料壓力控制在0.35-0.45mpa,均質(zhì)壓力控制在150-180mpa,物料以1200～1300米/秒的流速噴出，通過產(chǎn)生的空穴效應、撞擊效應、剪切效應，得到均勻、細膩、納米級的膠溶液；3)制備多孔納米顆粒
將步驟2)所得的膠溶液置于液氮中冷凍,待產(chǎn)品完全凍結(jié)后轉(zhuǎn)移至冰箱中于-18℃以下的環(huán)境中保存。
實施例3：
一種植物復方美白劑的納米顆粒的制備方法，包括如下步驟：
1)制備植物復方美白劑的膠體溶液
將卡拉膠0.5重量份、結(jié)冷膠0.5重量份、羥丙基甲基纖維素0.5重量份、透明質(zhì)酸鈉1重量份用甘油5重量份、丁二醇5重量份進行分散，向其中加入水50重量份，開啟攪拌和加熱，攪拌速度為50r/min,加熱至90℃后保溫5min，后降溫至50℃，向其中加入植物復方美白劑3重量份、苯氧乙醇0.8重量份，攪拌均勻，得膠體溶液；
2)制備植物復方美白劑的納米膠溶液
將步驟1)所得的膠體溶液通過高壓均質(zhì)設(shè)備，進料壓力控制在0.45-0.55mpa,均質(zhì)壓力控制在220-250mpa,物料以1300～1500米/秒的流速噴出，通過產(chǎn)生的空穴效應、撞擊效應、剪切效應，得到均勻、細膩、納米級的膠溶液；
3)制備多孔納米顆粒
將步驟2)所得的膠溶液置于液氮中冷凍,待產(chǎn)品完全凍結(jié)后轉(zhuǎn)移至冰箱中于-18℃以下的環(huán)境中保存。
實施例4：
一種植物復方美白劑的納米顆粒的制備方法，包括如下步驟：
1)制備植物復方美白劑的膠體溶液
將卡拉膠0.1重量份、結(jié)冷膠0.1重量份、羥丙基甲基纖維素0.1重量份、透明質(zhì)酸鈉0.1重量份用甘油5重量份、丁二醇5重量份進行分散，向其中加入水35重量份，開啟攪拌和加熱，攪拌速度為100r/min,加熱至60℃后保溫30min，后降溫至50℃，向其中加入植物復方美白劑3重量份、苯氧乙醇0.5重量份，攪拌均勻，得膠體溶液；
2)制備植物復方美白劑的納米膠溶液
將步驟1)所得的膠體溶液通過高壓均質(zhì)設(shè)備，進料壓力控制在0.25-0.35mpa,均質(zhì)壓力控制在100-120mpa,物料以1000～1200米/秒的流速噴出，通過產(chǎn)生的空穴效應、撞擊效應、剪切效應，得到均勻、細膩、納米級的膠溶液；
3)制備多孔納米顆粒
將步驟2)所得的膠溶液置于液氮中冷凍,待產(chǎn)品完全凍結(jié)后轉(zhuǎn)移至冰箱中于-18℃以下的環(huán)境中保存。
實施例5：
一種植物復方美白劑的納米顆粒的制備方法，包括如下步驟：
1)制備植物復方美白劑的膠體溶液
將卡拉膠0.5重量份、結(jié)冷膠0.5重量份、羥丙基甲基纖維素0.5重量份、透明質(zhì)酸鈉1重量份用甘油1重量份、丁二醇1重量份進行分散，向其中加入水20重量份，開啟攪拌和加熱，攪拌速度為200r/min,加熱至75℃后保溫15min，后降溫至50℃，向其中加入植物復方美白劑1重量份、苯氧乙醇0.8重量份，攪拌均勻，得膠體溶液；
2)制備植物復方美白劑的納米膠溶液
將步驟1)所得的膠體溶液通過高壓均質(zhì)設(shè)備，進料壓力控制在0.35-0.45mpa,均質(zhì)壓力控制在150-180mpa,物料以1200～1300米/秒的流速噴出，通過產(chǎn)生的空穴效應、撞擊效應、剪切效應，得到均勻、細膩、納米級的膠溶液；
3)制備多孔納米顆粒
將步驟2)所得的膠溶液置于液氮中冷凍,待產(chǎn)品完全凍結(jié)后轉(zhuǎn)移至冰箱中于-18℃以下的環(huán)境中保存。
實施例6：
一種植物復方美白劑的納米顆粒的制備方法，包括如下步驟：
1)制備植物復方美白劑的膠體溶液
將卡拉膠0.5重量份、結(jié)冷膠0.4重量份、羥丙基甲基纖維素0.2重量份、透明質(zhì)酸鈉0.2重量份用甘油5重量份、丁二醇5重量份進行分散，向其中加入水50重量份，開啟攪拌和加熱，攪拌速度為50r/min,加熱至90℃后保溫20min，后降溫至50℃，向其中加入植物復方美白劑1重量份、苯氧乙醇0.8重量份，攪拌均勻，得膠體溶液；
2)制備植物復方美白劑的納米膠溶液
將步驟1)所得的膠體溶液通過高壓均質(zhì)設(shè)備，進料壓力控制在0.35-0.45mpa,均質(zhì)壓力控制在180-200mpa,物料以1300～1500米/秒的流速噴出，通過產(chǎn)生的空穴效應、撞擊效應、剪切效應，得到均勻、細膩、納米級的膠溶液；
3)制備多孔納米顆粒
將步驟2)所得的膠溶液置于液氮中冷凍,待產(chǎn)品完全凍結(jié)后轉(zhuǎn)移至冰箱中于-18℃以下的環(huán)境中保存。
實施例7：
一種植物復方美白劑的納米顆粒的制備方法，包括如下步驟：
1)制備植物復方美白劑的膠體溶液
將卡拉膠0.1重量份、結(jié)冷膠0.1重量份、羥丙基甲基纖維素0.1重量份、透明質(zhì)酸鈉0.1重量份用甘油1重量份、丁二醇5重量份進行分散，向其中加入水50重量份，開啟攪拌和加熱，攪拌速度為150r/min,加熱至75℃后保溫15min，后降溫至50℃，向其中加入植物復方美白劑3重量份、苯氧乙醇0.5重量份，攪拌均勻，得膠體溶液；
2)制備植物復方美白劑的納米膠溶液
將步驟1)所得的膠體溶液通過高壓均質(zhì)設(shè)備，進料壓力控制在0.45-0.55mpa,均質(zhì)壓力控制在220-250mpa,物料以1400～1500米/秒的流速噴出，通過產(chǎn)生的空穴效應、撞擊效應、剪切效應，得到均勻、細膩、納米級的膠溶液；
3)制備多孔納米顆粒
將步驟2)所得的膠溶液置于液氮中冷凍,待產(chǎn)品完全凍結(jié)后轉(zhuǎn)移至冰箱中于-18℃以下的環(huán)境中保存。
實施例8：
一種植物復方美白劑的納米顆粒的制備方法，包括如下步驟：
1)制備植物復方美白劑的膠體溶液
將卡拉膠0.5重量份、結(jié)冷膠0.3重量份、羥丙基甲基纖維素0.3重量份、透明質(zhì)酸鈉0.2重量份用甘油1重量份、丁二醇1重量份進行分散，向其中加入水20重量份，開啟攪拌和加熱，攪拌速度為200r/min,加熱至90℃后保溫5min，后降溫至50℃，向其中加入植物復方美白劑1重量份、苯氧乙醇0.8重量份，攪拌均勻，得膠體溶液；
2)制備植物復方美白劑的納米膠溶液
將步驟1)所得的膠體溶液通過高壓均質(zhì)設(shè)備，進料壓力控制在0.25-0.35mpa,均質(zhì)壓力控制在100-120mpa,物料以1000～1200米/秒的流速噴出，通過產(chǎn)生的空穴效應、撞擊效應、剪切效應，得到均勻、細膩、納米級的膠溶液；
3)制備多孔納米顆粒
將步驟2)所得的膠溶液置于液氮中冷凍,待產(chǎn)品完全凍結(jié)后轉(zhuǎn)移至冰箱中于-18℃以下的環(huán)境中保存。
為了驗證本發(fā)明的制備方法得到的納米固體的技術(shù)效果，我們進行了如下測試：
一、安全性測試
1.1試驗材料
斑試器：北京北醫(yī)投資管理有限公司生產(chǎn)，圓形，直徑12mm。
斑試物：5wt％的抗壞血酸四異棕櫚酸酯溶液、5wt％的實施例2所得的抗壞血酸四異棕櫚酸酯納米固體溶液。
1.2實驗人群和測試時間
有效受試者共計30人，具體性別構(gòu)成和年齡構(gòu)成隨機確定(符合2007《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》納入、排除標準。
1.3實驗方法
按受試者入選標準選擇受試人員，人數(shù)為30例。選用合格斑貼材料，將樣品放入斑試器內(nèi)(樣品用量為0.020g-0.025g)，對照孔為空白(不置任何物質(zhì))。將樣品和空白對照均貼于受試者的前臂曲側(cè)，用手掌輕壓使之均勻地貼敷于皮膚上，持續(xù)24h。去除斑貼器后間隔30min,待壓痕消失后觀察皮膚反應。斑貼試驗后24h和48h分別再觀察一次，觀察皮膚反應。皮膚不良反應分級標準見表1：
表1：皮膚不良反應分級
1.4結(jié)果解釋：
皮膚封閉型斑貼試驗結(jié)果解釋：30例受試者中出現(xiàn)1級皮膚不良反應的人數(shù)多于5例，或2級皮膚不良反應的人數(shù)多于2例，或出現(xiàn)任何1例3級或3級以上皮膚不良反應時，判定受試物對人體有不良反應。
1.5實驗結(jié)果
試驗結(jié)果見表2、3、4。
表2去除斑試器0.5小時觀察結(jié)果
表3去除斑試器24小時觀察結(jié)果
表4去除斑試器48小時觀察結(jié)果
實驗結(jié)果表明：此次斑貼試驗結(jié)果，根據(jù)2007《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》的要求，判定5wt％的抗壞血酸四異棕櫚酸酯溶液對人體皮膚有不良反應，5wt％的抗壞血酸四異棕櫚酸酯納米固體溶液對人體無不良反應。
二、酪氨酸酶抑制率實驗
2.1儀器：分光光度計、微量移液器(1ml)、電子天平、容量瓶(10ml、50ml、250ml)、水浴恒溫箱、燒杯和量筒若干。
2.2樣品：馬鈴薯、l-酪氨酸、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、去離子水
2.3試劑配制：
磷酸鹽緩沖溶液(ph＝6.8)：先分別配制0.2mol/l的磷酸二氫鈉和0.2mol/l的磷酸氫二鈉。
0.2mol/l磷酸二氫鈉：稱取71.6gna2hpo4-12h2o，溶于1000ml去離子水；
0.2mol/l磷酸氫二鈉：稱取31.2gnah2po4-2h2o，溶于1000ml去離子水；取51ml磷酸二氫鈉+49ml磷酸氫二鈉即得0.2mol/l、ph＝6.8的磷酸緩沖液。
l-酪氨酸溶液：稱取l-酪氨酸25.6g，用磷酸緩沖液定容于50ml容量瓶中，即得l-酪氨酸溶液。
酪氨酸酶溶液：將馬鈴薯洗凈，于4℃預冷4h左右。去皮，切成約1.0cm3丁狀，于-20℃冷凍過夜。稱重，按1：1(w:v)的比例加入4℃預冷的磷酸鈉緩沖液，用組織搗碎機制成勻漿，3層紗布過濾，濾液于4000r/min離心10min，上清液即為所得的酪氨酸酶粗酶液，4℃保存，2h內(nèi)用完。
植物復方美白劑受試液的配制：將植物復方美白劑配成5mg/ml的溶液并用甲醇稀釋到1mg/ml。
植物復方美白劑納米顆粒受試液的配制：將實施例3的植物復方美白劑納米顆粒配成5mg/ml的溶液并用甲醇稀釋到1mg/ml。
2.4實驗方法
按照表5所示向試管中依次加入磷酸鹽緩沖溶液、樣品溶液、酪氨酸溶液，于35℃水浴10分鐘。然后加入酪氨酸酶液，混勻，再在35℃下孵育30min，迅速轉(zhuǎn)移至比色皿中，在475nm處測定吸光度。
表5：待測液的組成
利用各組吸光度,通過計算得出酪氨酸酶抑制率,其計算公式如下:
a:未加樣品的加酶混合液所測的吸光度a(a)；
b:未加樣品亦未加酶的混合液所測的吸光度a(b)；
c:加樣品和酶的混合液所測的吸光度a(c)；
d:加樣品而未加酶的混合液所測的吸光度a(d)。
利用各組吸光度,通過計算得出酪氨酸酶抑制率,其計算公式如下:
2.5實驗結(jié)果
通過上述檢測方法,對2種受試液進行檢測,得出二者的抑制率，具體見表6：
表6：兩種受試液的抑制率比較
實驗結(jié)果表明：植物復方美白劑納米顆粒較植物復方美白劑的抑制酪氨酸酶的能力有顯著提高。酪氨酸酶抑制率越高，皮膚中生成的黑色素就越少，美白效果就會越好，此結(jié)果進一步說明經(jīng)高壓冷凍技術(shù)制備的活性物，美白性能得到大幅提升。
以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。