本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種人參組合物，還涉及組合物在防治血管瘤或淋巴癌中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
人參屬五加科人參屬植物，主產(chǎn)地包括中國東北、朝鮮、日本及俄羅斯東部。我國最早的醫(yī)藥名著《神農(nóng)本草經(jīng)》中已有關(guān)于人參藥用的記載?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證明，人參具有抗腫瘤、調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)、調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)、抗溶血等多方面的藥理活性。
人參皂苷為五加科人參屬植物(包括人參、西洋參、三七等)的主要藥效成分，具有增強(qiáng)免疫力、抗疲勞、抗腫瘤、抗缺氧、抗衰老、降血糖等多種作用。人參皂苷主要包括原人參二醇型人參皂苷rb1、rb2、rb3、rc、rg3、rd等和原人參三醇型人參皂苷re、rg1、rg2等。其中，原人參二醇型人參皂苷和原人參三醇型人參皂苷中包含了含量相對較低的稀有人參皂苷rh1、rh2、rh3、rg3、rg5、rg6、rk1、rk3、rh4、f4等。稀有人參皂苷是由含量相對較高的人參皂苷(比如人參皂苷re、rc)脫去部分糖基或改變側(cè)鏈結(jié)構(gòu)而得到的次級人參皂苷，它在五加科人參屬植物中的含量極低或不存在。目前，人參皂苷的制備方法主要是化學(xué)方法，包括溫和酸水解法、堿裂解法、生物轉(zhuǎn)化法酶法和微生物轉(zhuǎn)化法等。
近來，稀有人參皂苷生物活性方面的相關(guān)研究取得了巨大的進(jìn)展。研究發(fā)現(xiàn)，稀有人參皂苷比天然存在的含量相對較高的人參皂苷(如人參皂苷re、rc)在抗腫瘤、增強(qiáng)免疫力、抗疲勞和清除自由基方面的生物活性更高。
人參皂苷rb2是原人參二醇型人參皂苷的一種，在生曬參、紅參中均有存在。其對中樞神經(jīng)系統(tǒng)有一定的抑制作用，同時(shí)能抑制部分dna、蛋白質(zhì)的合成，也有一定的抗疲勞效果。
人參皂苷rg3是稀有人參皂苷的一種，屬于四環(huán)三萜皂苷，分子式為c42h72o13，分子量為785.03。研究表明，人參皂苷rg3具有抑制腫瘤細(xì)胞生長和誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的作用。為推廣人參皂苷rg3的臨床使用，研究人員采用各種方法分離純化人參皂苷rg3，目前市場上已出現(xiàn)成熟的分離純化工藝。
人參皂苷rg5最初由紅參分離得到，屬于原人參二醇型皂苷，也是一種稀有人參皂苷，在白參或鮮參中含量極少。國內(nèi)對人參皂苷rg5的研究較少，其藥理活性的研究主要涉及皮炎、肺部炎癥、改善記憶力、抗腫瘤等方面，但迄今為止還沒有報(bào)道表明人參皂苷rg5對某種具體疾病的藥理活性比較突出。
血管樣病變是嬰幼兒最為常見的良性腫瘤病癥。根據(jù)腫瘤內(nèi)皮細(xì)胞的增殖特點(diǎn)，將血管樣病變分為血管瘤和血管畸形。血管瘤一般在嬰幼兒出生時(shí)或出生后一周左右出現(xiàn)，增長速度快，部分個(gè)體伴隨成長會出現(xiàn)血管瘤減少的情況，但仍有50％以上患者受血管瘤疾病的困擾。血管瘤的傳統(tǒng)治療方法包括手術(shù)切除、放射治療、激光治療、硬化劑治療和激素治療等，但這些方法對特殊部位、大面積或多區(qū)域的血管瘤病癥治療效果不佳。
淋巴癌是淋巴結(jié)或淋巴組織的惡性腫瘤，通常的治療方法為放療、化療。但這些方法的治療周期長、有毒副作用，給患者帶來了極大的痛苦。
目前尚需一種能有效治療血管瘤或淋巴癌的藥物。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明提供了一種包含0.31-0.94重量份人參皂苷rb2、1重量份人參皂苷rg3和0.63-1重量份人參皂苷rg5的組合物。并且，在此基礎(chǔ)上，本發(fā)明還提供了該組合物在防治血管瘤或淋巴癌中的應(yīng)用。
本發(fā)明第一方面涉及一種組合物，其包含選自人參皂苷rb2、人參皂苷rg3和人參皂苷rg5中的至少一種，和/或包含植物提取物；其中，所述植物提取物包含選自人參皂苷rb2、人參皂苷rg3和人參皂苷rg5中的至少一種；
并且，所述組合物包含：
人參皂苷rb20.31-0.94重量份
人參皂苷rg31重量份
人參皂苷rg50.63-1重量份。
本發(fā)明第一方面的一個(gè)實(shí)施方式中，人參皂苷rb2為0.42-0.9重量份，優(yōu)選為0.5-0.85重量份。
本發(fā)明第一方面的一個(gè)實(shí)施方式中，人參皂苷rb2為0.35重量份、0.38重量份、0.40重量份、0.44重量份、0.47重量份、0.49重量份、0.51重量份、0.52重量份、0.54重量份、0.65重量份、0.67重量份、0.68重量份、0.69重量份、0.72重量份、0.75重量份、0.77重量份、0.78重量份、0.80重量份、0.81重量份、0.82重量份、0.84重量份、0.86重量份、0.90重量份、0.91重量份、0.93重量份或0.94重量份。
本發(fā)明第一方面的一個(gè)實(shí)施方式中，人參皂苷rg5為0.7-0.97重量份，優(yōu)選為0.7-0.93重量份。
本發(fā)明第一方面的一個(gè)實(shí)施方式中，人參皂苷rg5為0.65重量份、0.68重量份、0.7重量份、0.72重量份、0.75重量份、0.77重量份、0.78重量份、0.80重量份、0.81重量份、0.83重量份、0.85重量份、0.87重量份、0.88重量份、0.89重量份、0.90重量份、0.91重量份、0.92重量份、0.93重量份、0.94重量份、0.95重量份、0.96重量份、0.97重量份、0.98重量份或0.99重量份。
本發(fā)明第一方面的一個(gè)實(shí)施方式中，組合物包含人參皂苷rb2、人參皂苷rg3和人參皂苷rg5，和/或包含植物提取物；其中，所述植物提取物包含選自人參皂苷rb2、人參皂苷rg3和人參皂苷rg5中的至少一種。
本發(fā)明第一方面的一個(gè)實(shí)施方式中，組合物包含人參皂苷rb2、人參皂苷rg3和人參皂苷rg5。
本發(fā)明第一方面的一個(gè)實(shí)施方式中，組合物的活性成分由人參皂苷rb2、人參皂苷rg3和人參皂苷rg5組成。
本發(fā)明第一方面的一個(gè)實(shí)施方式中，組合物包含植物提取物。
本發(fā)明第一方面的一個(gè)實(shí)施方式中，組合物的活性成分為植物提取物。
本發(fā)明第一方面的一個(gè)實(shí)施方式中，組合物的活性成分為人參提取物，優(yōu)選為紅參提取物或西洋參提取物。
本發(fā)明第一方面的一個(gè)實(shí)施方式中，組合物包含植物提取物和選自人參皂苷rb2、人參皂苷rg3和人參皂苷rg5中的至少一種。
本發(fā)明第一方面的一個(gè)實(shí)施方式中，組合物的活性成分由植物提取物和選自人參皂苷rb2、人參皂苷rg3和人參皂苷rg5中的至少一種組成。
本發(fā)明第一方面的一個(gè)實(shí)施方式中，組合物的活性成分由人參提取物和選自人參皂苷rb2、人參皂苷rg3和人參皂苷rg5中的至少一種組成。
本發(fā)明第一方面的一個(gè)實(shí)施方式中，組合物的活性成分由西洋參提取物和選自人參皂苷rb2、人參皂苷rg3和人參皂苷rg5中的至少一種組成。
本發(fā)明第一方面的一個(gè)實(shí)施方式中，組合物的活性成分由三七提取物、人參皂苷rb2和人參皂苷rg5組成。
本發(fā)明第一方面的一個(gè)實(shí)施方式中，組合物還包含一種或多種藥學(xué)上可接受的輔料。
本發(fā)明第一方面的一個(gè)實(shí)施方式中，組合物由人參皂苷rb2、人參皂苷rg3、人參皂苷rg5及任選的藥學(xué)上可接受的輔料混合制得。
本發(fā)明第一方面的一個(gè)實(shí)施方式中，組合物通過向植物提取物中添加任選的藥學(xué)上可接受的輔料制得。
本發(fā)明第一方面的一個(gè)實(shí)施方式中，組合物由植物提取物及任選的藥學(xué)上可接受的輔料混合制得。
本發(fā)明第一方面的一個(gè)實(shí)施方式中，組合物通過向植物提取物中添加選自人參皂苷rb2、人參皂苷rg3和人參皂苷rg5中的至少一種以及任選的藥學(xué)上可接受的輔料制得。
本發(fā)明第一方面的一個(gè)實(shí)施方式中，組合物由植物提取物、選自人參皂苷rb2、人參皂苷rg3和人參皂苷rg5中的至少一種及任選的藥學(xué)上可接受的輔料混合制得。
本發(fā)明第一方面的一個(gè)實(shí)施方式中，所述植物提取物為五加科人參屬植物提取物，優(yōu)選為人參提取物(例如人參提取物或西洋參提取物)或三七提取物。
本發(fā)明第一方面的一個(gè)實(shí)施方式中，五加科人參屬植物提取物通過常規(guī)提取方法制備得到。
本發(fā)明第一方面的一個(gè)實(shí)施方式中，人參提取物或三七提取物通過常規(guī)提取方法制備得到。
本發(fā)明第一方面的一個(gè)實(shí)施方式中，紅參提取物或西洋參提取物通過常規(guī)提取方法制備得到。
本發(fā)明第一方面的一個(gè)實(shí)施方式中，組合物為藥物組合物；
優(yōu)選地，所述藥物組合物的劑型為口服液劑、片劑、膠囊劑、沖劑、膏劑、散劑或注射劑。
本發(fā)明第一方面的一個(gè)實(shí)施方式中，組合物為食品或化妝品；
優(yōu)選地，所述食品為保健食品。
本發(fā)明第二方面涉及本發(fā)明第一方面中任一所述組合物在制備預(yù)防和/或治療血管瘤或淋巴癌的藥物中的用途。
本發(fā)明第二方面的一個(gè)實(shí)施方式中，所述淋巴癌為t細(xì)胞淋巴瘤或b細(xì)胞淋巴瘤。
本發(fā)明第二方面的一個(gè)實(shí)施方式中，所述藥物的劑型為口服液劑、片劑、膠囊劑、沖劑、膏劑、散劑或注射劑。
本發(fā)明還涉及第一方面任一所述組合物在制備對于抗血管瘤或抗淋巴癌有輔助作用的食品中的用途。
本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，所述食品為保健食品。
本發(fā)明第三方面涉及本發(fā)明第一方面任一所述組合物在制備可改善皮膚光滑度、透亮性及修復(fù)皮膚損傷的化妝品中的用途。
本發(fā)明第四方面涉及本發(fā)明第一方面中任一所述組合物在制備抑制血管瘤細(xì)胞或淋巴瘤細(xì)胞的生長和/或增殖的藥物或食品中的用途；
優(yōu)選地，所述淋巴瘤細(xì)胞為t細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞或b細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞；
優(yōu)選地，所述藥物的劑型為口服液劑、片劑、膠囊劑、沖劑、膏劑、散劑或注射劑；
優(yōu)選地，所述食品為保健食品。
本發(fā)明另一方面還涉及一種預(yù)防和/或治療血管瘤或淋巴癌的方法，包括給予有需求的受試者以有效量的本發(fā)明第一方面任一所述組合物的步驟；
優(yōu)選地，所述淋巴癌為t細(xì)胞淋巴瘤或b細(xì)胞淋巴瘤。
本發(fā)明又一方面還涉及一種抑制血管瘤細(xì)胞或淋巴瘤細(xì)胞生長和/或增殖的方法，包括使血管瘤細(xì)胞或淋巴瘤細(xì)胞接觸有效量的本發(fā)明第一方面任一所述組合物的步驟；
優(yōu)選地，所述血管瘤細(xì)胞為血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞。
優(yōu)選地，所述淋巴瘤細(xì)胞為t細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞或b細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞。
本發(fā)明中，如無特別說明：
術(shù)語“保健品”同保健食品，是指聲稱具有特定保健功能或者以補(bǔ)充維生素、礦物質(zhì)為目的的食品，即適宜于特定人群食用，具有調(diào)節(jié)機(jī)體功能，不以治療疾病為目的，并且對人體不產(chǎn)生任何急性、亞急性或者慢性危害的食品。
術(shù)語“t細(xì)胞淋巴瘤”是指起源于t細(xì)胞的淋巴瘤，分為胸腺前性(淋巴母細(xì)胞淋巴瘤)和胸腺后性(周圍性，包括皮膚t細(xì)胞淋巴瘤，常見者為蕈樣霉菌病，侵及末梢血液者稱為sezary綜合征)。
術(shù)語“b細(xì)胞淋巴瘤”是指起源于b細(xì)胞的腫瘤。根據(jù)臨床行為的不同，b細(xì)胞淋巴瘤分為惰性淋巴瘤和侵襲性淋巴瘤。惰性淋巴瘤通常發(fā)展緩慢，可保持多年疾病穩(wěn)定及長期生存，但無法治愈。侵襲性淋巴瘤通常需要較強(qiáng)烈的治療方法，但有治愈的可能。
本發(fā)明取得的有益效果：
1、本發(fā)明組合物能顯著抑制血管瘤(細(xì)胞)的生長和/或增殖，并且，本發(fā)明組合物對淋巴瘤細(xì)胞(尤其是t細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞)的生長和/或增殖也有顯著的抑制效果。
2、本發(fā)明組合物對防治血管瘤或淋巴癌病癥有明顯效果。
具體實(shí)施方式
以下的實(shí)施例和對比例中所使用的材料包括：
人參皂苷rb2：購買自成都曼思特生物科技有限公司，純度≥98％；
人參皂苷rg3：購買自成都曼思特生物科技有限公司，純度≥98％；
人參皂苷rg5：購買自成都曼思特生物科技有限公司，純度≥98％。
實(shí)施例1
將9.5g人參皂苷rb2、11.6g人參皂苷rg3、10.5g人參皂苷rg5與5g淀粉混合均勻，得到組合物1。
實(shí)施例2
將9.5g人參皂苷rb2、11.69g人參皂苷rg3、10.52g人參皂苷rg5與5g淀粉混合均勻，得到組合物2。
實(shí)施例3
將10.1g人參皂苷rb2、13.13g人參皂苷rg3、11.55g人參皂苷rg5與5g淀粉混合均勻，得到組合物3。
實(shí)施例4
將9.35g人參皂苷rb2、18.25g人參皂苷rg3、15.2g人參皂苷rg5與7.2g淀粉混合均勻，得到組合物4。
對比例1
將2.71g人參皂苷rb2、9.00g人參皂苷rg3、5.42g人參皂苷rg5與5g淀粉混合均勻，得到組合物a。
對比例2
將10.75g人參皂苷rb2、11.23g人參皂苷rg3、11.47g人參皂苷rg5與5g淀粉混合均勻，得到組合物b。
測試?yán)?：血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞的抑制實(shí)驗(yàn)
(1)實(shí)驗(yàn)試劑及設(shè)備：
磷酸鹽緩沖液(pbs緩沖液)：購買自北京酷來搏科技有限公司，貨號為sl1238-500ml；
0.05％胰蛋白酶：購買自杭州沃森生物技術(shù)有限公司，貨號為25300054；
中性蛋白酶ⅱ(dispaseⅱ)：購買自北京酷來搏科技有限公司，貨號為cd4691-500mg；
0.1％牛血清白蛋白(0.1％bsa)：購買自賽默飛世爾科技公司，貨號為10099158；
dmem細(xì)胞培養(yǎng)液:購買自北京索萊寶科技有限公司，貨號為sh30021；
0.2％ⅰ型膠原酶：購買自sigma-aldrich，worthington原裝ls004196；
500ng/ml纖維粘連蛋白：購買自上海翊圣生物科技有限公司，貨號為40105es08；
胎牛血清培養(yǎng)液(fbs培養(yǎng)液)：購買自上海哈靈生物科技有限公司，貨號為hl150410b；
0.25％胰蛋白酶-edta：購買自北京智杰方遠(yuǎn)科技有限公司，貨號為091689649；
0.25％胰酶：購買自上海邦景實(shí)業(yè)有限公司，不含酚紅；
內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基(egm-2mv)：購買自北京聯(lián)立信生物技術(shù)有限公司，貨號為lonzacc-3202；
nubalb/c-nu裸鼠：購自南京鵬晟生物科技發(fā)展有限公司；
培養(yǎng)箱：購買自上海一恒科學(xué)儀器有限公司，型號為dhp-9012；
二氧化碳恒溫孵育箱：購買自上海一恒科學(xué)儀器有限公司，型號為bpn-40rhp；
振蕩器：購買自上海一恒科學(xué)儀器有限公司，型號為thz-98a。
(2)實(shí)驗(yàn)方法：
將手術(shù)室切除的新鮮人血管瘤在無菌條件下放入含青霉素/鏈霉素雙抗及含10％胎牛血清培養(yǎng)液的pbs緩沖液中，在1小時(shí)之內(nèi)快速轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞培養(yǎng)室中。用pbs緩沖液沖掉人血管瘤上的血凝塊和壞死組織，繼續(xù)沖洗，直至沖洗液顏色清亮且無組織脫落為止。去除血管瘤上的皮膚及脂肪組織，保留瘤體并剪成1-2mm3的組織塊。用37℃0.25％胰蛋白酶-edta消化10分鐘，使組織塊變?nèi)彳洠偌尤雈bs培養(yǎng)液中止消化。將消化后的組織塊剪成約1mm3塊狀，接種在事先用1％明膠包被的透氣培養(yǎng)瓶內(nèi)。培養(yǎng)瓶在培養(yǎng)箱內(nèi)倒置10分鐘，然后加入約0.5mlegm-2mv，在37℃5％co2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)3小時(shí)，之后輕緩翻瓶，24小時(shí)后向培養(yǎng)瓶中緩慢補(bǔ)充2mlegm-2mv，繼續(xù)培養(yǎng)，3天后更換培養(yǎng)基。接種一周后，用倒置相差顯微鏡觀察，確認(rèn)內(nèi)皮細(xì)胞島，觀察細(xì)胞從組織塊周圍爬出的情況。10天左右于鏡下可見組織塊周圍細(xì)胞密集，滴加0.25％胰酶通過差速消化法對血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞純化。
將培養(yǎng)的人血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞用pbs緩沖液洗滌2次，用0.25％胰酶消化后濃集制成細(xì)胞懸浮液，密度為107個(gè)/ml。在4℃下，將細(xì)胞懸浮液與基質(zhì)膠以3:2的重量比混合制成注射液。用注射液在nubalb/c-nu裸鼠的右下肢腋下皮下注射500μl，在注射后的第3天、第5天分別追加注射200μl。
當(dāng)裸鼠右下肢腋下部位的血管瘤長徑達(dá)14-15mm、短徑達(dá)7-11mm并不在繼續(xù)擴(kuò)大生長時(shí)，將裸鼠處死，解剖，獲得新鮮血管瘤標(biāo)本，在無菌條件下剪去雜物，將瘤體組織修剪成1cm3塊狀，加入2.4u/mldispaseⅱ，置于4℃消化過夜。吸去dispaseⅱ，用pbs緩沖液沖洗3遍，置于50ml離心管中，加入無血清dmem細(xì)胞培養(yǎng)液配制的0.2％ⅰ型膠原酶，37℃震蕩消化2-3小時(shí)，過濾，以2000r/min的轉(zhuǎn)速離心5分鐘，棄去上清液，加入0.2g0.1％牛血清白蛋白和20mlpbs緩沖液重懸，再以2000r/min轉(zhuǎn)速離心5分鐘，棄去上清液，細(xì)胞沉淀用4ml含0.1％bsa的pbs緩沖液重懸，細(xì)胞計(jì)數(shù)備用。
按照免疫磁珠與細(xì)胞比為5:1，吸取cd31置于15ml離心管中，加入5ml含0.1％bsa的pbs緩沖液，洗滌3遍。加入上述細(xì)胞懸液混合并在4℃輕搖30分鐘，分離得到cd31陽性細(xì)胞，用pbs緩沖液離洗，細(xì)胞用egm-2mv重懸，接種于500ng/ml纖維粘連蛋白鋪底的6孔板中，37℃，5％co2培養(yǎng)，培養(yǎng)24分鐘后，用pbs緩沖液清洗，加入新的egm-2mv培養(yǎng)，使用0.05％胰蛋白酶消化，傳代。顯微鏡下觀察細(xì)胞處于對數(shù)生長期時(shí)，用0.05％胰蛋白酶消化，制備細(xì)胞懸液，細(xì)胞數(shù)量為1.6×107個(gè)/ml。
實(shí)驗(yàn)用balb/cnu/nu裸鼠70只，鼠齡6-7周，體重15-18g/只。將裸鼠分為7組，每組10只，雌雄比例1:1，分別記為對照組、組合物1組、組合物2組、組合物3組、組合物4組、組合物a組和組合物b組。將制得的細(xì)胞懸液接種于裸鼠背部皮下，0.3ml/只，當(dāng)血管瘤細(xì)胞增長至直徑達(dá)0.8cm時(shí)開始給藥。其中，對照組每次給每只小鼠用0.5ml生理鹽水灌胃；組合物組取150g組合物，用水稀釋至75ml，每次給每只小鼠灌胃0.5ml。每隔兩天給藥一次，共計(jì)30天。每10天用游標(biāo)卡尺測量一次瘤體最大徑a和最小徑b，根據(jù)公式v＝π/6×a×b2估算瘤體的體積(v)。停藥5天后，處死小鼠，取下瘤體稱重，按照如下的公式計(jì)算血管瘤抑制率。
血管瘤抑制率＝(1-組合物組平均瘤重/對照組平均瘤重)×100％
(3)實(shí)驗(yàn)結(jié)果：見表1。
表1
由表1可知，本發(fā)明組合物給藥后，血管瘤的體積和重量顯著低于對照組(p＜0.05)，說明本發(fā)明組合物對血管瘤細(xì)胞的生長和增殖有明顯抑制作用。
本發(fā)明組合物給藥后的血管瘤體積和重量遠(yuǎn)低于組合物a-b給藥后的血管瘤體積和重量，這說明與組合物a-b相比，本發(fā)明組合物對血管瘤細(xì)胞的生長和增殖的抑制效果更顯著。
測試?yán)?：t淋巴瘤細(xì)胞株jurkat細(xì)胞的抑制實(shí)驗(yàn)
(1)實(shí)驗(yàn)材料及儀器：
人類t淋巴瘤細(xì)胞株jurkat細(xì)胞：購買自中國科學(xué)院上海細(xì)胞生物研究所細(xì)胞庫。細(xì)胞培養(yǎng)在500ml含10％胎牛血清(購買自杭州四季青生物工程材料有限公司)的rpmi-1640培養(yǎng)基中，于37℃含5％co2的飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，當(dāng)細(xì)胞達(dá)到對數(shù)生長期時(shí)，備用；
rpmi1640培養(yǎng)基：購買自美國貝克曼庫爾特有限公司；
mtt：購買自上海歌凡生物科技有限公司，貨號為gm01-500t；
培養(yǎng)箱：同測試?yán)?。
振蕩器：同測試?yán)?。
酶標(biāo)儀：購買自bmglabtech，型號為spectrostarnano。
(2)實(shí)驗(yàn)方法：
將2個(gè)96孔培養(yǎng)板分為8組，記為空白組、陰性對照組、組合物1組、組合物2組、組合物3組、組合物4組、組合物a組和組合物b組。其中，空白組每孔添加200μlrpmi1640培養(yǎng)基，設(shè)3個(gè)平行樣；陰性對照組每孔接種100μl人類t淋巴瘤細(xì)胞株jurkat細(xì)胞(1.5×105個(gè)/ml)并添加200μlrpmi1640培養(yǎng)基，設(shè)3個(gè)平行樣；組合物組每孔接種100μl人類t淋巴瘤細(xì)胞株jurkat細(xì)胞(1.5×105個(gè)/ml)并添加200μlrpmi1640培養(yǎng)基，然后將各組合物配制成5個(gè)梯度濃度的稀釋液，每孔添加200μl稀釋液，每種組合物的每一濃度設(shè)3個(gè)平行樣。將2個(gè)96孔板置于37℃含5％co2的飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12小時(shí)，結(jié)束后，向孔中加mtt液20μl，繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)，然后轉(zhuǎn)移至離心管中以3000r/min的轉(zhuǎn)速離心8分鐘，棄去上清液，再加入200μldmso，振蕩10分鐘，置于酶標(biāo)儀中于490nm處測定od值，按下式計(jì)算各組合物對t淋巴瘤細(xì)胞株jurkat細(xì)胞的抑制率。
細(xì)胞抑制率＝100％×(od陰性對照組-od組合物)/(od陰性對照組-od空白組)
(3)實(shí)驗(yàn)結(jié)果：見表2。
表2
由表2可知，與組合物a-b相比，本發(fā)明組合物對t淋巴瘤細(xì)胞株jurkat細(xì)胞生長和/或增殖的抑制作用更強(qiáng)。尤其是，當(dāng)組合物稀釋液的濃度達(dá)200-300μg/ml時(shí)，本發(fā)明組合物對t淋巴瘤細(xì)胞株jurkat細(xì)胞的抑制率遠(yuǎn)超過50％，其抑制作用明顯高于組合物a-b。
顯然，上述實(shí)施例僅僅是為清楚地說明所作的舉例，而并非對實(shí)施方式的限定。對于所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在上述說明的基礎(chǔ)上還可以做出其它不同形式的變化或變動。這里無需也無法對所有的實(shí)施方式予以窮舉。而由此所引伸出的顯而易見的變化或變動仍處于本發(fā)明創(chuàng)造的保護(hù)范圍之中。