技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及含有有效成分化合物
lipoyunaconitine的藥物組合物及其在制備抗腫瘤藥物及功能性食品中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
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癌癥是嚴(yán)重威脅人類健康的一類疾病，我國癌癥防治形勢十分嚴(yán)峻，癌癥已成為疾病死因之首，且發(fā)病率和死亡率還在攀升，對(duì)公眾健康造成了巨大威脅。國家癌癥中心近日發(fā)布2017年度中國癌癥數(shù)據(jù)最新報(bào)告，我國每天約有1萬人確診為癌癥，相當(dāng)于平均每分鐘約有7人患癌，也就是每10秒鐘就有一人被確診為癌癥。到85歲，一個(gè)人患癌累計(jì)風(fēng)險(xiǎn)約為36％。2013年，世界新發(fā)病例數(shù)1409萬，中國約占世界的1/4。世界衛(wèi)生組織(who)在2016年“世界癌癥日”(2月4日)前發(fā)布《世界癌癥報(bào)告》，報(bào)告中提到全球癌癥負(fù)擔(dān)增加，2012年約有1400萬新發(fā)病例，預(yù)測未來二十年全球每年新增癌癥病例會(huì)上升到2200萬，同期癌癥死亡病例將從每年820萬上升到每年1300萬。隨著老齡化進(jìn)程的加快，我國癌癥發(fā)病、死亡率還將不斷上升，對(duì)國家、社會(huì)和個(gè)人將造成沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。癌癥不僅是個(gè)人健康問題，同時(shí)也是一個(gè)嚴(yán)重的社會(huì)問題。
如何預(yù)防和治療癌癥是一個(gè)世界性的難題。近20年來，我國癌癥發(fā)病率呈逐年上升趨勢，致癌因素主要包括慢性感染、不健康的生活方式、環(huán)境污染和職業(yè)暴露等。全球科研工作者努力工作，通過幾十年的基礎(chǔ)研究逐漸闡明了癌癥發(fā)生、生長和轉(zhuǎn)移過程中的關(guān)鍵信號(hào)通路，針對(duì)細(xì)胞信號(hào)通路中的關(guān)鍵蛋白作為藥物靶點(diǎn)，大量靶向藥物被開發(fā)并進(jìn)入市場。臨床上雖然有很大抗癌藥物，但沒有一種藥物能完全預(yù)防和治愈癌癥。在目前對(duì)腫瘤治療的方法中，化療是醫(yī)院常用的一種重要治療手段，能消除原發(fā)灶及轉(zhuǎn)移病灶，減少腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。雖然化療療效顯著，這種藥物本身毒性較高，在殺死癌細(xì)胞的同時(shí)也殺死正常細(xì)胞，從而降低機(jī)體的免疫功能，使本來免疫力低下的癌癥患者雪上加霜。藥物治療是另外一個(gè)重要領(lǐng)域，全球上市的抗癌藥物往往治療效果不顯著，治愈率更低。治療癌癥的方法多種多樣，目前尚未找到統(tǒng)一和公認(rèn)的治療手段和藥物。
如何預(yù)防和治療癌癥是一個(gè)世界性的難題，許多國家不惜大量投入資源對(duì)癌癥的發(fā)病、診斷、治療及預(yù)防等方面進(jìn)行深入的研究。日本近十年關(guān)于癌癥治療發(fā)生了很大的變化，契機(jī)之一是2007年實(shí)施的《癌癥基本對(duì)策法》。這一法律的內(nèi)容包括了促進(jìn)癌癥的預(yù)防、治療等各項(xiàng)規(guī)定以及推進(jìn)“全國癌癥治療均等化”的方針。所謂“全國癌癥治療均等化”是指保障在任何地方，癌患者都能獲得高質(zhì)量的適當(dāng)治療。美國于2016年啟動(dòng)癌癥“登月計(jì)劃”，其目標(biāo)是使攻克癌癥的進(jìn)度翻一番，在5年內(nèi)取得將用10年完成的進(jìn)展。美國國家癌癥探測項(xiàng)目將在2017年投資10億美元支持癌癥研究的8個(gè)領(lǐng)域。
迄今，尚未發(fā)現(xiàn)lipoyunaconitine作為有效成分在抗腫瘤方面的應(yīng)用和報(bào)道，也未發(fā)現(xiàn)該化合物在制備抗腫瘤藥物及功能性食品中應(yīng)用的報(bào)道。lipoyunaconitine屬于烏頭堿類二萜生物堿，其結(jié)構(gòu)特征為c-8位含有長鏈基團(tuán)，其獨(dú)特的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)豐富了抗癌藥物的結(jié)構(gòu)類型，為抗癌藥物的發(fā)現(xiàn)提供了一種新的類型。實(shí)驗(yàn)表明lipoyunaconitine具有較好的抗腫瘤活性具有較好的應(yīng)用前景。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
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本發(fā)明的目的在于提供一種抗腫瘤的藥物組合物，其中含有具有抗腫瘤的化合物lipoyunaconitine及藥用載體和/或賦形劑，提供該化合物及其藥物組合物在制備抗腫瘤的藥物以及功能性食品中的應(yīng)用。
為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，本發(fā)明提供了如下的技術(shù)方案：
一種藥物組合物，含有式(a)所示的化合物lipoyunaconitine及可藥用載體或賦形劑，
如所述的藥物組合物，該藥物組合物中含有0.5-90％的有效成分lipoyunaconitine，其余為藥物學(xué)和藥劑學(xué)上可接受的，對(duì)人和動(dòng)物無毒的藥用輔料或載體。
本發(fā)明同時(shí)提供所述的藥物組合物在制備治療宮頸癌、肺腺癌的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明還提供式(a)所示的化合物lipoyunaconitine在制備治療腫瘤的藥物中的應(yīng)用，
以及，化合物lipoyunaconitine在制備治療宮頸癌、肺腺癌的藥物中的應(yīng)用。
和，化合物lipoyunaconitine在制備抗腫瘤的功能性食品中的應(yīng)用。
本發(fā)明另外還提供了化合物lipoyunaconitine的制備方法，該方法包括如下步驟：滇北烏頭干燥塊根粉碎后，用90％的乙醇回流提取3次，每次2小時(shí)，回收溶劑至浸膏狀，用2.0％hcl5l溶解并過濾，濾液用chcl3萃取2次，酸水液用25％nh3.h2o調(diào)至ph為9，用chcl3萃取3次，得總生物堿粗提物150g；粗提物經(jīng)硅膠柱色譜，用40:1:1～15:8:1的石油醚-丙酮-二乙胺進(jìn)行梯度洗脫，經(jīng)tlc檢查后合并得4個(gè)流份，其中一個(gè)流份fr2經(jīng)硅膠柱色譜，石油醚-丙酮-二乙胺,15:2:1，氧化鋁柱色譜，石油醚-乙酸乙酯,1:1和sephadexlh-20柱色譜，chcl3-meoh,1:1，純化得到lipoyunaconitine。
本發(fā)明化合物作為藥物時(shí)，可直接使用，或者以藥物組合物的形式使用。該藥物組合物中含有0.1-99％的lipoyunaconitine，優(yōu)選為0.5-90％的有效成分lipoyunaconitine，其余為藥物學(xué)和藥劑學(xué)上可接受的，對(duì)人和動(dòng)物無毒的藥用輔料或載體。
所述的藥用載體為一種或多種固體、半固體和/或液體稀釋劑，填料以及藥物制品輔料。本發(fā)明的藥物組合物以單位體重服用量的形式使用。本發(fā)明的藥物可經(jīng)注射(肌注和靜注)和口服兩種形式給藥，功能性食品以口服形式給藥。
目前，癌癥的危害已是一個(gè)嚴(yán)重的醫(yī)學(xué)和社會(huì)問題，人人“談癌色變”，世界各國政府和科研人員對(duì)癌癥的預(yù)防和治療給予極大關(guān)注，目前在預(yù)防和治療方面尚缺乏較好的藥物，在藥物方面未取得較大進(jìn)展。
lipoyunaconitine為二萜生物堿類物質(zhì)，二萜生物堿類物質(zhì)在抗癌活性方面未取得積極進(jìn)展。lipoyunaconitine結(jié)構(gòu)為c-8位含有長鏈基團(tuán)的結(jié)構(gòu)特征，其獨(dú)特的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)豐富了抗癌藥物的結(jié)構(gòu)類型，為抗癌藥物的發(fā)現(xiàn)提供了一種新的類型。本試驗(yàn)通過人宮頸癌細(xì)胞(hela)和人肺腺癌細(xì)胞(a549)細(xì)胞株體外給藥實(shí)驗(yàn)，40umol/l的抑制率分別為92.61％和64.07％，表明lipoyunaconitine具有較好的體外抗腫瘤活性，在預(yù)防和治療腫瘤方面具有較好的應(yīng)用前景。
具體實(shí)施方式：
下面的實(shí)施例可更詳細(xì)地說明本發(fā)明，但不以任何形式限制本發(fā)明。
實(shí)施例1：
lipoyunaconitine的制備：
12kg滇北烏頭干燥塊根粉碎后，用90％的乙醇回流提取3次，每次2小時(shí)，回收溶劑至浸膏狀。用2.0％hcl(5l)溶解并過濾，濾液用chcl3萃取2次，酸水液用25％nh3.h2o調(diào)至ph為9，用chcl3萃取3次，得總生物堿粗提物150g。粗提物經(jīng)硅膠柱色譜，用石油醚-丙酮-二乙胺(40:1:1～15:8:1)進(jìn)行梯度洗脫，經(jīng)tlc檢查后合并得4個(gè)流份。fr2(35g)經(jīng)硅膠柱色譜(石油醚-丙酮-二乙胺,15:2:1)，氧化鋁柱色譜(石油醚-乙酸乙酯,1:1)和sephadexlh-20柱色譜(chcl3-meoh,1:1)，純化得到lipoyunaconitine(1.5g)。
lipoyunaconitine的結(jié)構(gòu)鑒定：
儀器：質(zhì)譜(ms)用vgautopec-3000型質(zhì)譜儀測定；核磁共振譜{1h-、13c-nmr(dept)}用brukeram-400型和drx-500型超導(dǎo)核磁共振波譜儀測定，以tms(四甲基硅烷)為內(nèi)標(biāo)。
結(jié)構(gòu)：如化學(xué)式
分子式：c51h77no11
分子量：879
實(shí)施例2：
1.受試藥物
lipoyunaconitine(分子量：879)，體外抗腫瘤活性篩選時(shí)以dmso溶解配制成40mmol/l母液，-20℃保存，實(shí)驗(yàn)時(shí)以rpmi-1640培養(yǎng)基梯度稀釋至終濃度為40umol/l、20umol/l、10umol/l、5umol/l、2.5umol/l、1.25umol/l。
2.實(shí)驗(yàn)方法
lipoyunaconitine對(duì)人宮頸癌細(xì)胞(hela)和人肺腺癌細(xì)胞(a549)抗腫瘤活性測定
采用mtt法測定lipoyunaconitine的體外抗腫瘤活性。收集對(duì)數(shù)生長期sgc-7901、a549、h22、hela，用含10％fbs的rpmi1640培養(yǎng)基調(diào)整細(xì)胞懸液濃度至5×104/ml，接種于96孔板中，每孔100μl細(xì)胞懸液，置于5％co2、37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h使細(xì)胞貼壁完全。次日，配置lipoyunaconitine受試藥共6個(gè)濃度梯度(40μmol/l、20μmol/l、10μmol/l、5μmol/l、2.5μmol/l、1.25μmol/l)每個(gè)濃度3個(gè)復(fù)孔，同時(shí)設(shè)置正常對(duì)照組(100μl細(xì)胞懸液+100μlrpmi1640培養(yǎng)基)。作用48h后，每孔加入20μl5mg/ml的mtt，繼續(xù)培養(yǎng)4h，于3000rpm離心10min，吸棄培養(yǎng)液，加入150μldmso終止反應(yīng)，于振蕩器振蕩10min，酶標(biāo)儀570nm波長測定吸光度，并計(jì)算細(xì)胞增殖抑制率，結(jié)果見表1-2。
2.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
本試驗(yàn)通過人宮頸癌細(xì)胞(hela)和人肺腺癌細(xì)胞(a549)細(xì)胞株體外給藥實(shí)驗(yàn)，表明lipoyunaconitine具有較好的體外抗腫瘤活性。見表1和表2。
表1lipoyunaconitine對(duì)hela細(xì)胞增殖的影響(n＝3)
表2lipoyunaconitine對(duì)a549細(xì)胞增殖的影響(n＝3)
實(shí)施例3：
將lipoyunaconitine溶于無菌注射用水，使溶解，再經(jīng)無菌漏斗抽濾，精濾，灌封，滅菌，制成注射液。
實(shí)施例4：
將lipoyunaconitine按其與賦形劑重量比4:1的比例混合均勻，制粒，壓片。
實(shí)施例5：
將lipoyunaconitine按其與賦形劑重量比8:1的比例混合均勻，制粒，壓片。
實(shí)施例6：
將lipoyunaconitine按其與賦形劑重量比3:1的比例混合均勻，制粒，制成膠囊劑。
實(shí)施例7：
將lipoyunaconitine按其與賦形劑重量比6:1的比例混合均勻，制粒，制成膠囊劑。
實(shí)施例8：
將lipoyunaconitine按常規(guī)口服液的制法制成口服液。