本發(fā)明屬于一種從纖毛婆婆納中分離純化有效成分的方法，具體是分離純化總環(huán)烯醚萜苷的方法。

背景技術(shù)：

纖毛婆婆納(veronicaciliatafisch.)是玄參科草本植物長果婆婆納屬一年生草本植物，藏語學(xué)名“帕夏嘎”，廣泛用于藏藥處方中，目前分布于中國、蒙古、中亞和西伯利亞等地區(qū)，其全草可入藥，具有清熱解毒、祛風(fēng)利濕等功效，主治肝炎、膽囊炎、風(fēng)濕痛、蕁麻疹等。

研究表明纖毛婆婆納含有大量環(huán)烯醚萜苷類化合物，環(huán)烯醚萜苷具有廣泛的生物活性，如抗菌、抗炎、抗腫瘤、保肝利膽、抗氧化、對心血管系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)都有作用，其中，梓苷、verproside和胡黃連苷等在體外抗癌實(shí)驗(yàn)對hepg2肝癌細(xì)胞展現(xiàn)出良好的抗癌活性，總環(huán)烯醚萜苷對ccl4致小鼠急性肝損傷和醋氨酚致小鼠肝損傷具有良好的保肝活性，因此制備高純度的環(huán)烯醚萜苷類成分顯得尤為重要。

目前只有少數(shù)文獻(xiàn)關(guān)于纖毛婆婆納環(huán)烯醚萜苷類成分的提取分離純化研究，但是由于其提取工藝路線復(fù)雜，不適合快速分離和制備出高含量的環(huán)烯醚萜苷類成分。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為了解決前述問題，本發(fā)明提供了一種新的纖毛婆婆納中環(huán)烯醚萜苷類化合物的分離純化方法，該方法操作簡便，能耗低，產(chǎn)品純度高，適于工業(yè)化生產(chǎn)。

本發(fā)明提供了一種從纖毛婆婆納中分離純化總環(huán)烯醚萜苷的方法，包括以下步驟：

(1)取纖毛婆婆納粉末，采用水飽和正丁醇提取，得提取液；

(2)水洗，減壓回收正丁醇相，得總環(huán)烯醚萜苷粗提物，溶于水，得水溶液；

(3)采用乙酸乙酯萃取，得萃取后的水溶液，減壓回收水相，得總環(huán)烯醚萜苷。

步驟(1)中，所述纖毛婆婆納為玄參科草本植物長果婆婆納屬纖毛婆婆納(veronicaciliatafisch.)的干燥全草。

步驟(1)中，所述纖毛婆婆納干燥全草經(jīng)粉碎過40目篩。

步驟(1)中，所述水飽和正丁醇的用量為纖毛婆婆納粉末的6～10倍v/w。

步驟(1)中，提取的次數(shù)為3次，每次12～48h。

步驟(2)中，水洗采用的水的量為步驟(1)所得提取液的1/5～5倍；水洗的次數(shù)為2-5次。

步驟(3)中，乙酸乙酯的用量為步驟(2)所得水溶液的1/5～5倍；萃取的次數(shù)為2-8次。

本發(fā)明還提供了前述方法制備得到的總環(huán)烯醚萜苷。

其中，所述總環(huán)烯醚萜苷的純度不低于95％。優(yōu)選地，其純度為95.26～98.07％。

在實(shí)驗(yàn)中，當(dāng)采用乙酸乙酯進(jìn)行環(huán)烯醚萜苷提取時(shí)，效果不佳，雜質(zhì)過多，色素含量高，需要進(jìn)行多次水洗和乙酸乙酯萃取以去除雜質(zhì)和色素，從而降低了總環(huán)烯醚萜苷的得率。而水飽和正丁醇不但能保證提取物雜質(zhì)含量較少，而且對環(huán)烯醚萜苷提取效率高。因此，為達(dá)到上述目的，本發(fā)明中采用水飽和正丁醇進(jìn)行提取。

本發(fā)明方法可以制備得到高純度的總環(huán)烯醚萜苷，并且制備方法的得率高，操作簡便，能耗低，適于工業(yè)化生產(chǎn)，應(yīng)用前景優(yōu)良。

顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識(shí)和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。

以下通過實(shí)施例形式的具體實(shí)施方式，對本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。

具體實(shí)施方式

本實(shí)施例所用纖毛婆婆納產(chǎn)地為中國西藏，由西藏藏藥廠提供。藥品與試劑均購自成都科龍化工試劑廠。

總環(huán)烯醚萜苷的純度由uplc-pda檢測，色譜條件為：

色譜分析采用watersacquityuplctm系統(tǒng)，配備有柱溫箱、四元溶劑管理器、自動(dòng)進(jìn)樣器、pda檢測器。色譜柱為hsst3column(100×2.1mm,1.7μm)，柱溫為40℃，樣品溫度為25℃，流速為0.5ml/min，進(jìn)樣量設(shè)置為1μl，pda檢測器波長設(shè)置為260nm，empower軟件用于數(shù)據(jù)分析。流動(dòng)相a為0.1％甲酸加0.25mmol甲酸銨水溶液，b為乙腈，梯度設(shè)置為：0-0.8min，10％–25％b；0.8-2.4min，25％–35％b；2.4-2.8min，35％–95％b；2.8-4.8min，95％b；4.81-8min10％b。

實(shí)施例1：一種從纖毛婆婆納中分離純化總環(huán)烯醚萜苷的方法

1、制備方法

(1)取干燥粉碎的纖毛婆婆納粉末(過40目篩的粉末)，水飽和正丁醇作為提取溶劑，料液比為1:8，室溫浸提，每次24h，一共三次，合并提取液，得水飽和正丁醇提取液；

(2)進(jìn)行水洗，水與步驟(1)所得提取液的體積比為1:1，水洗次數(shù)為3次，減壓回收正丁醇相，得固體殘留物(為總環(huán)烯醚萜苷粗提物)，溶于80倍水(每1g固體殘留物溶于80ml得水中)中，得水溶液；

(3)進(jìn)行乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯與步驟(2)所得水溶液的體積比為1:1，萃取次數(shù)為5次，減壓回收水相，得到總環(huán)烯醚萜苷。

2、檢測

經(jīng)過檢測，本發(fā)明方法的總環(huán)烯醚萜苷得率為4.5％，經(jīng)uplc-pda分析總環(huán)烯醚萜苷的純度達(dá)98.07％。

實(shí)施例2：一種從纖毛婆婆納中分離純化總環(huán)烯醚萜苷的方法

1、制備方法

(1)取干燥粉碎的纖毛婆婆納粉末(過40目篩的粉末)，水飽和正丁醇作為提取溶劑，料液比為1:6，室溫浸提，每次48h，一共三次，合并提取液，得水飽和正丁醇提取液；

(2)進(jìn)行水洗，水與步驟(1)所得提取液的體積比為1:5，水洗次數(shù)為5次，減壓回收正丁醇相，得固體殘留物(為總環(huán)烯醚萜苷粗提物)，溶于80倍水(每1g固體殘留物溶于80ml得水中)中，得水溶液；

(3)進(jìn)行乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯與步驟(2)所得水溶液的體積比為1:5，萃取次數(shù)為8次，減壓回收水相，得到總環(huán)烯醚萜苷。

2、檢測

經(jīng)過檢測，本發(fā)明方法的總環(huán)烯醚萜苷得率為5.3％，經(jīng)uplc-pda分析純度達(dá)95.26％。

實(shí)施例3：一種從纖毛婆婆納中分離純化總環(huán)烯醚萜苷的方法

1、制備方法

(1)取干燥粉碎的纖毛婆婆納粉末(過40目篩的粉末)，水飽和正丁醇作為提取溶劑，料液比為1:10，室溫浸提，每次12h，一共三次，合并提取液，得水飽和正丁醇提取液；

(2)進(jìn)行水洗，水與步驟(1)所得提取液的體積比為5:1，水洗次數(shù)為2次，減壓回收正丁醇相，得固體殘留物(為總環(huán)烯醚萜苷粗提物)，溶于80倍水(每1g固體殘留物溶于80ml得水中)中，得水溶液；

(3)進(jìn)行乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯與步驟(2)所得水溶液的體積比為5:1，萃取次數(shù)為2次，減壓回收水相，得到總環(huán)烯醚萜苷。

2、檢測

經(jīng)過檢測，本發(fā)明方法的總環(huán)烯醚萜苷得率為4.9％，經(jīng)uplc-pda分析純度達(dá)96.74％。

對比例：一種從纖毛婆婆納中分離純化總環(huán)烯醚萜苷的方法

1、制備方法

(1)取干燥粉碎的纖毛婆婆納粉末(過40目篩的粉末)，乙酸乙酯作為提取溶劑，料液比為1:8，室溫浸提，每次24h，一共三次，合并提取液，得水飽和正丁醇提取液；

(2)進(jìn)行水洗，水與步驟(1)所得提取液的體積比為1:1，水洗次數(shù)為6次，減壓回收正丁醇相，得固體殘留物(為總環(huán)烯醚萜苷粗提物)，溶于80倍水(每1g固體殘留物溶于80ml得水中)中，得水溶液；

(3)進(jìn)行乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯與步驟(2)所得水溶液的體積比為1:1，萃取次數(shù)為10次，減壓回收水相，得到總環(huán)烯醚萜苷。

2、檢測

經(jīng)過檢測，本發(fā)明方法的總環(huán)烯醚萜苷得率為2.8％。

綜上，本發(fā)明方法可以制備得到高純度的總環(huán)烯醚萜苷，并且得率高，操作簡便，能耗低，適于工業(yè)化生產(chǎn)，應(yīng)用前景優(yōu)良。