本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種大麥若葉提取物及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

大麥為禾本科大麥屬單子葉植物，是一種藥食同源植物。大麥麥苗中含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，目前，以麥苗為原料制成的食品已風(fēng)靡多個國家。大麥若葉為大麥生長到20-30公分的幼苗，此時期的幼苗葉片所含營養(yǎng)物質(zhì)最為豐富，研究表明，大麥若葉中的物質(zhì)具有抗氧化的作用，能夠清除自由基，保護人體免受自由基的損傷。

自由基又稱游離基，是具有非偶電子的基團或原子，自由基可通過電子轉(zhuǎn)移、加成、脫氫等多種方式與生物體內(nèi)的多糖、氨基酸、蛋白質(zhì)、核酸、脂類等物質(zhì)相互作用，造成這些物質(zhì)氧化性損傷，進一步使細胞壞死或突變。

如何提供一種可清除自由基的純天然物質(zhì)，是自由基清除領(lǐng)域亟待解決的問題之一。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明主要解決的技術(shù)問題是提供一種大麥若葉提取物及其制備方法和應(yīng)用，可制備出純天然的大麥若葉提取物，該提取物具有自由基清除功能。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種大麥若葉提取物的制備方法，包括以下步驟：將大麥若葉進行干燥，并粉碎至60-80目，獲得大麥若葉干粉；取大麥若葉干粉，加入蒸餾水，混合均勻，將混合后的液體置于超聲波細胞粉碎機中超聲波處理2-4min，其中，超聲波頻率為25-40khz，大麥若葉干粉與蒸餾水的料液比為1g:10-20ml；在超聲波處理后的液體中加入2-3倍體積的無水乙醇，而后進行微波處理，微波功率為500-700w，微波時間為4-6min；將微波處理后的液體放置2-3h，進行離心，獲取上清液，對該上清液進行真空干燥，獲得大麥若葉提取物。

其中，大麥若葉干粉為70目。

其中，超聲波處理時間為3min、頻率為35khz。

其中，大麥若葉干粉與蒸餾水的料液比為1g:15ml。

其中，超聲波處理后的液體與無水乙醇的體積比為1:2.5。

其中，微波處理時間為5min、微波功率為600w。

其中，利用蒸餾水對獲得的大麥若葉提取物進行溶解，而后上大孔吸附樹脂柱，以蒸餾水洗至流出液無色后，再以75-85%的乙醇洗脫，洗脫液的洗脫量為3-4bv，收集洗脫液，對洗脫液進行干燥，獲得純化的大麥若葉提取物。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種上述制備方法制備得到的大麥若葉提取物。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種大麥若葉提取物作為清除自由基藥物或保健品的應(yīng)用。具體地，大麥若葉提取物作為清除自由基藥物或保健品的劑型為片劑、膠囊劑、顆粒劑或散劑。

本發(fā)明的有益效果是：區(qū)別于現(xiàn)有技術(shù)的情況，本發(fā)明的大麥若葉提取物的制備方法包括以下步驟：將大麥若葉進行干燥，并粉碎至60-80目，獲得大麥若葉干粉；取大麥若葉干粉，加入蒸餾水，混合均勻，將混合后的液體置于超聲波細胞粉碎機中超聲波處理2-4min，其中，超聲波頻率為25-40khz，大麥若葉干粉與蒸餾水的料液比為1g:10-20ml；在超聲波處理后的液體中加入2-3倍體積的無水乙醇，而后進行微波處理，微波功率為500-700w，微波時間為4-6min；將微波處理后的液體放置2-3h，進行離心，獲取上清液，對該上清液進行真空干燥，獲得大麥若葉提取物。上述方法制備的大麥若葉提取物為純天然物質(zhì)，可對自由基進行清除。上述制備方法具有以下特點：簡單、易操作；由于對大麥若葉細胞通過超聲波、微波充分破碎，可更好地對大麥若葉中的物質(zhì)進行提取，且可減少提取時間、提高提取效率；制備出的大麥若葉提取物具有較高的提取率，且無毒、無害；利用大孔吸附樹脂柱可制備出更純的大麥若葉提取物。

具體實施方式

實施例1

大麥若葉提取物的制備方法包括以下步驟：將大麥若葉進行干燥，并粉碎至70目，獲得大麥若葉干粉；取大麥若葉干粉，加入蒸餾水，混合均勻，將混合后的液體置于超聲波細胞粉碎機中超聲波處理3min，其中，超聲波頻率為35khz，大麥若葉干粉與蒸餾水的料液比為1g:15ml；在超聲波處理后的液體中加入2.5倍體積的無水乙醇，而后進行微波處理，微波功率為600w，微波時間為5min；將微波處理后的液體放置2.5h，進行離心，獲取上清液，對該上清液進行真空干燥，獲得大麥若葉提取物。

本實施例制備的大麥若葉提取物可對自由基進行清除，由于其為純天然物質(zhì)，對人體無副作用。

實施例2

大麥若葉提取物的制備方法包括以下步驟：將大麥若葉進行干燥，并粉碎至70目，獲得大麥若葉干粉；取大麥若葉干粉，加入蒸餾水，混合均勻，將混合后的液體置于超聲波細胞粉碎機中超聲波處理2.5min，其中，超聲波頻率為30khz，大麥若葉干粉與蒸餾水的料液比為1g:15ml；在超聲波處理后的液體中加入2倍體積的無水乙醇，而后進行微波處理，微波功率為550w，微波時間為4.5min；將微波處理后的液體放置2.5h，進行離心，獲取上清液，對該上清液進行真空干燥，獲得大麥若葉提取物。

本實施例制備的大麥若葉提取物可對自由基進行清除，由于其為純天然物質(zhì)，對人體無副作用。

實施例3

在實施例1的基礎(chǔ)上，利用蒸餾水對獲得的大麥若葉提取物進行溶解，而后上大孔吸附樹脂柱，以蒸餾水洗至流出液無色后，再以80%的乙醇洗脫，洗脫液的洗脫量為3.5bv，收集洗脫液，對洗脫液進行干燥，獲得純化的大麥若葉提取物。

實施例4

在實施例2的基礎(chǔ)上，利用蒸餾水對獲得的大麥若葉提取物進行溶解，而后上大孔吸附樹脂柱，以蒸餾水洗至流出液無色后，再以80%的乙醇洗脫，洗脫液的洗脫量為3.5bv，收集洗脫液，對洗脫液進行干燥，獲得純化的大麥若葉提取物。

實施例5

大麥若葉提取物片劑的制備：將實施例1或?qū)嵤├?制備的大麥若葉提取物用單沖壓片機打成直徑為7mm，重量為350mg的片，即得大麥若葉提取物片劑。

實施例6

大麥若葉提取物膠囊劑的制備：將實施例1或?qū)嵤├?制備的大麥若葉提取物以350mg填充入1號腸溶膠囊，即得大麥若葉提取物膠囊劑。

實施例7

大麥若葉提取物顆粒劑的制備：將實施例1或?qū)嵤├?制備的大麥若葉提取物加水制成軟材，過15目篩進行造粒，干燥后即得大麥若葉提取物顆粒劑。

實施例8

大麥若葉提取物散劑的制備：將實施例1或?qū)嵤├?制備的大麥若葉提取物過250目篩，即得大麥若葉提取物散劑。

下面通過實驗說明本發(fā)明大麥若葉提取物的自由基清除效果。

稱取dpph（1,1-二苯基-2-三硝基苯肼），利用乙醇進行溶解，使其濃度為0.1mmol/l；稱取實施例1制備的大麥若葉提取物、實施例2制備的大麥若葉提取物，利用雙蒸水進行溶解，分別制成10個濃度梯度的溶液，濃度梯度具體為：0.2mg/ml、0.4mg/ml、0.6mg/ml、0.8mg/ml、1.0mg/ml、1.2mg/ml、1.4mg/ml、1.6mg/ml、1.8mg/ml、2.0mg/ml；取體積為v1的dpph溶液，加入等體積的無水乙醇，混勻，室溫，避光放置20min，在517nm處測吸光度a0。

在實施例1制備的大麥若葉提取物制成的10個溶液中分別加入體積為v1的dpph溶液和無水乙醇，按照上述方法，測吸光度a1，其中，加入的無水乙醇和提取物溶液的體積之和為v1；在各提取物溶液中，加入無水乙醇，其中，加入的無水乙醇和提取物溶液的體積均為v1，按照上述方法，測吸光度a2；根據(jù)吸光度計算清除率：清除率=[a0-（a1-a2）]/a0×100%。

在實施例2制備的大麥若葉提取物制成的10個溶液中分別加入體積為v1的dpph溶液和無水乙醇，按照上述方法，測吸光度a1，其中，加入的無水乙醇和提取物溶液的體積之和為v1；在各提取物溶液中，加入無水乙醇，其中，加入的無水乙醇和提取物溶液的體積均為v1，按照上述方法，測吸光度a2；根據(jù)吸光度計算清除率：清除率=[a0-（a1-a2）]/a0×100%。

以大麥若葉提取物濃度為橫坐標、清除率為縱坐標繪制曲線，根據(jù)曲線的線性回歸方程，計算清除自由基的半抑制濃度（ic50）。

實驗結(jié)果：實施例1制備的大麥若葉提取物對自由基的清除能力的ic50為1.50mg/ml，實施例2制備的大麥若葉提取物對自由基的清除能力的ic50為1.52mg/ml。根據(jù)實驗結(jié)果可以看出，實施例1和實施例2制備的大麥若葉提取物表現(xiàn)出強的自由基清除能力，具有良好的抗氧化活性。

利用上述實驗方法計算大麥若葉總黃酮對自由基清除能力的ic50，通過計算，ic50值為3.16mg/ml。根據(jù)計算結(jié)果，可以看出實施例1或?qū)嵤├?制備的大麥若葉提取物較大麥若葉總黃酮具有更好的自由基清除能力。

利用上述實驗方法計算實施例3、實施例4制備的大麥若葉提取物對自由基清除能力的ic50，實施例3制備的大麥若葉提取物對自由基的清除能力的ic50為1.47mg/ml，實施例4制備的大麥若葉提取物對自由基的清除能力的ic50為1.48mg/ml。根據(jù)實驗結(jié)果可以看出，實施例3、實施例4制備的大麥若葉提取物較實施例1、實施例2制備的大麥若葉提取物具有更好的自由基清除能力。

綜上所述，本發(fā)明的大麥若葉提取物可對自由基進行清除，且其為純天然物質(zhì)，對人體無副作用。

以上所述僅為本發(fā)明的實施例，并非因此限制本發(fā)明的專利范圍，凡是利用本發(fā)明說明書內(nèi)容所作的等效變換，或直接或間接運用在其他相關(guān)的技術(shù)領(lǐng)域，均同理包括在本發(fā)明的專利保護范圍內(nèi)。