本發(fā)明屬于藥物制劑領域，具體而言，涉及一種切向流系統(tǒng)在硫酸銨梯度法制備脂質(zhì)體中的應用方法。
背景技術：
在臺灣東洋藥品工業(yè)股份有限公司的授權發(fā)明專利“多柔比星脂質(zhì)體及其制備方法和用途(專利號：zl200410097044.7)”中，對脂質(zhì)體的制備進行了較為詳盡的描述。該發(fā)明專利中公開了采用硫酸銨梯度法制備脂質(zhì)體，擠出后的樣品通過切向流系統(tǒng)，采用中空纖維柱以5％～15％的蔗糖溶液對脂質(zhì)體樣品進行透析。
在石藥集團中奇制藥技術(石家莊)有限公司的在審專利“一種水溶性藥物脂質(zhì)體制備方法(公開號：cn103536533a)”中也指出，可采用超濾裝置移去空白脂質(zhì)體外的硫酸銨，置換成蔗糖溶液。
由此可見，超濾設備--切向流系統(tǒng)已被應用于脂質(zhì)體工業(yè)化生產(chǎn)中，然而其具體操作，如透析液的選擇和工藝條件卻未見報道。
技術實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種切向流系統(tǒng)在硫酸銨梯度法制備脂質(zhì)體中的應用方法，該方法能夠快速除去脂質(zhì)體混懸液中的小分子有機溶劑及外相硫酸銨，有效地造成內(nèi)外相硫酸銨梯度，制備出高質(zhì)量的空白脂質(zhì)體，以實現(xiàn)高效的藥物包載。
為實現(xiàn)上述技術目的，達到上述技術效果，本發(fā)明通過以下技術方案實現(xiàn)：
一種切向流系統(tǒng)在硫酸銨梯度法制備脂質(zhì)體中的應用方法，包括以下步驟：
步驟1)采用硫酸銨梯度法制備脂質(zhì)體混懸液；
先將磷脂溶于小分子醇中，預熱后與預熱好的硫酸銨溶液進行混合水化，將水化后的樣品進行擠出，得到脂質(zhì)體混懸液；
步驟2)采用切向流系統(tǒng)對脂質(zhì)體混懸液進行透析；
(1)將切向流系統(tǒng)的流速調(diào)節(jié)至150～230ml/min；
(2)以硫酸銨作為第一透析液，消耗2～10倍樣品重量的硫酸銨，以除去脂質(zhì)體混懸液中的小分子有機物；
(3)再以等滲蔗糖溶液作為第二透析液，消耗2～10倍樣品重量的蔗糖溶液，以除去外相硫酸銨。
進一步的，所述硫酸銨的物質(zhì)的量為0.10～0.25m，ph為4.5～6.5；所述等滲蔗糖溶液的濃度為5～15％，ph為4.5～6.5。
優(yōu)選的，所述硫酸銨的物質(zhì)的量為0.25m，ph為5.5；所述等滲蔗糖溶液的濃度為10％，ph為5.5。
在選擇透析溶液的時，應考慮到透析過程中透析液對脂質(zhì)體的影響，即對如脂質(zhì)體內(nèi)相離子、分子的流失，其他離子、分子的進入，內(nèi)相酸堿環(huán)境的變化，滲透壓的變化，以及脂質(zhì)體的穩(wěn)定性的影響。基于離子、分子透過脂雙層的能力以及脂雙層的致密程度，對內(nèi)相變化有了掌握。脂質(zhì)體混懸液中，磷脂的溶劑如小分子醇類(甲醇、乙醇)的存在，將導致脂質(zhì)體致密性下降，增加內(nèi)外相的交換頻率及概率，增加了內(nèi)相變化風險。離子透過脂雙層膜的透過系數(shù)不同，(nh4)2so4＜so42-＜nh4+＜＜h+＜＜＜nh3能迅速的從脂質(zhì)體內(nèi)相轉(zhuǎn)移至外相，導致內(nèi)相h+濃度升高，由于脂質(zhì)體內(nèi)相體積較小且無緩沖環(huán)境，h+濃度升高導致內(nèi)相ph的顯著變化。本專利就是利用此原理來快速制備高質(zhì)量的空白脂質(zhì)體，實現(xiàn)高效的藥物包載。
由于透析液在透析過程中對脂質(zhì)體存在上述一系列影響，因此考慮到透析的目的、脂質(zhì)體內(nèi)相及脂質(zhì)體的穩(wěn)定性，本發(fā)明在選擇透析液時，選擇與水化介質(zhì)(硫酸銨溶液)相近或者一致的透析液更利于脂質(zhì)體內(nèi)相穩(wěn)態(tài)，選擇離子強度低的透析液利于脂質(zhì)體外相穩(wěn)定及其貯存。
例如，采用硫酸銨梯度法制備脂質(zhì)體時，先將磷脂溶于小分子醇(乙醇)中，預熱后與預熱好的硫酸銨溶液進行混合水化，水化后的樣品進行擠出再透析。透析時，先采用水化介質(zhì)即硫酸銨溶液對脂質(zhì)體樣品進行透析，其優(yōu)勢在于內(nèi)外相(ph、滲透壓、硫酸銨濃度)基本一致。初始透析時，由于乙醇含量仍相對較高，脂雙層致密性下降，透析時內(nèi)外相交換相對頻率高，采用水化介質(zhì)(硫酸銨溶液)透析，可以將對內(nèi)相的影響降至最低。該透析的主要目的是快速有效的除去小分子醇。當醇含量降低至幾乎不影響脂雙層致密性后，再用等滲的蔗糖溶液進行透析，除去外相的硫酸銨，以保持脂質(zhì)體內(nèi)相硫酸銨濃度及ph環(huán)境。相對0.9％氯化鈉溶液，蔗糖溶液離子強度相對較低，有利于脂質(zhì)體這類對離子敏感的載藥體系的穩(wěn)定性。
本發(fā)明的有益效果是：
本發(fā)明采用超濾設備--切向流系統(tǒng)對水化(硫酸銨梯度法)擠出后所得脂質(zhì)體混懸液進行透析，首先通過選擇與水化介質(zhì)(硫酸銨溶液)相近或者一致的透析液，這樣能輕易除去脂質(zhì)體混懸液中的小分子有機溶劑，然后通過選擇不含硫酸銨且離子強度低的透析液，這樣能輕易除去外相硫酸銨。
選擇與水化介質(zhì)(硫酸銨溶液)相近或者一致的透析液，更利于脂質(zhì)體內(nèi)相穩(wěn)態(tài)，選擇不含硫酸銨且離子強度低的透析液，則更利于脂質(zhì)體外相穩(wěn)定及其貯存。
本發(fā)明的方法能夠快速除去脂質(zhì)體混懸液中的小分子溶劑及外相硫酸銨，并有效地造成內(nèi)外相硫酸銨梯度，制備出了高質(zhì)量的空白脂質(zhì)體，提高了藥物包封率，保證了脂質(zhì)體載藥量及其穩(wěn)定性。
上述說明僅是本發(fā)明技術方案的概述，為了能夠更清楚了解本發(fā)明的技術手段，并可依照說明書的內(nèi)容予以實施，以下以本發(fā)明的較佳實施例詳細說明如后。本發(fā)明的具體實施方式由以下實施例詳細給出。
具體實施方式
下面將結(jié)合實施例，來詳細說明本發(fā)明。
一種切向流系統(tǒng)在硫酸銨梯度法制備脂質(zhì)體中的應用方法，包括以下步驟：
步驟1)采用硫酸銨梯度法制備脂質(zhì)體混懸液；
(1)先將磷脂hspc、mpeg-2000-dspe、膽固醇以一定質(zhì)量比例，如3:1:1溶于10～20倍于磷脂總重的乙醇中，60～70℃預熱；
(2)預熱后與同條件下預熱好的0.10～0.25mph5.5硫酸銨溶液以體積比1:10～20進行混合，水化1h；
(3)水化后，混合液經(jīng)0.05～0.20μm濾膜擠出，控制粒徑約100nm，擠出后得到脂質(zhì)體混懸液；
步驟2)采用切向流系統(tǒng)對脂質(zhì)體混懸液進行透析；
(1)將切向流系統(tǒng)的流速調(diào)節(jié)至150～230ml/min；
(2)以0.10～0.25mph4.5～6.5硫酸銨作為第一透析液，消耗2～10倍樣品重量的硫酸銨，以除去脂質(zhì)體混懸液中的小分子有機物；
(3)再以濃度5～15％ph4.5～6.5等滲蔗糖溶液作為第二透析液，消耗2～10倍樣品重量的蔗糖溶液，以除去外相硫酸銨。
在選擇透析溶液的時，應考慮到透析過程中透析液對脂質(zhì)體的影響，即對如脂質(zhì)體內(nèi)相離子、分子的流失，其他離子、分子的進入，內(nèi)相酸堿環(huán)境的變化，滲透壓的變化，以及脂質(zhì)體的穩(wěn)定性的影響?；陔x子、分子透過脂雙層的能力以及脂雙層的致密程度，對內(nèi)相變化有了掌握。脂質(zhì)體混懸液中，磷脂的溶劑如小分子醇類(甲醇、乙醇)的存在，將導致脂質(zhì)體致密性下降，增加內(nèi)外相的交換頻率及概率，增加了內(nèi)相變化風險。離子透過脂雙層膜的透過系數(shù)不同，(nh4)2so4＜so42-＜nh4+＜＜h+＜＜＜nh3能迅速的從脂質(zhì)體內(nèi)相轉(zhuǎn)移至外相，導致內(nèi)相h+濃度升高，由于脂質(zhì)體內(nèi)相體積較小且無緩沖環(huán)境，h+濃度升高導致內(nèi)相ph的顯著變化。本專利就是利用此原理來快速制備高質(zhì)量的空白脂質(zhì)體，實現(xiàn)高效的藥物包載。
由于透析液在透析過程中對脂質(zhì)體存在上述一系列影響，因此考慮到透析的目的、脂質(zhì)體內(nèi)相及脂質(zhì)體的穩(wěn)定性，本發(fā)明在選擇透析液時，選擇與水化介質(zhì)(硫酸銨溶液)相近或者一致的透析液更利于脂質(zhì)體內(nèi)相穩(wěn)態(tài)，選擇離子強度低的透析液利于脂質(zhì)體外相穩(wěn)定及其貯存。
例如，采用硫酸銨梯度法制備脂質(zhì)體時，先將磷脂溶于小分子醇(乙醇)中，預熱后與預熱好的硫酸銨溶液進行混合水化，水化后的樣品進行擠出再透析。透析時，先采用水化介質(zhì)即硫酸銨溶液對脂質(zhì)體樣品進行透析，其優(yōu)勢在于內(nèi)外相(ph、滲透壓、硫酸銨濃度)基本一致。初始透析時，由于乙醇含量仍相對較高，脂雙層致密性下降，透析時內(nèi)外相交換相對頻率高，采用水化介質(zhì)(硫酸銨溶液)透析，可以將對內(nèi)相的影響降至最低。該透析的主要目的是快速有效的除去小分子醇。當醇含量降低至幾乎不影響脂雙層致密性后，再用等滲的蔗糖溶液進行透析，除去外相的硫酸銨，以保持脂質(zhì)體內(nèi)相硫酸銨濃度及ph環(huán)境。相對0.9％氯化鈉溶液，蔗糖溶液離子強度相對較低，有利于脂質(zhì)體這類對離子敏感的載藥體系的穩(wěn)定性。
優(yōu)選的，當硫酸銨的物質(zhì)的量為0.25m，ph＝5.5；等滲蔗糖溶液的濃度為10％，ph＝5.5時，為本發(fā)明的最佳實施例。以該實施例進行透析后，脂質(zhì)體樣品中的乙醇濃度及內(nèi)外相硫酸銨濃度見下表：
實施以上案例，透析液的消耗速度為4.5～5.0g/min，以脂質(zhì)體樣品100g計算，透析6倍耗時約不超過2h，透析8倍耗時不超過3h，透析10倍耗時不超過4h，透析12倍耗時不超過4.5h。相比靜態(tài)透析法(至少6h)，透析速度快，效率更高。
以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實施例而已，并不用于限制本發(fā)明，對于本領域的技術人員來說，本發(fā)明可以有各種更改和變化。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。