本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。更具體地，涉及維生素c和奧沙利鉑聯(lián)用在抗腫瘤中的作用。

背景技術(shù)：

聯(lián)合用藥（concomitantdrugs）是指為了達(dá)到治療目的或更好的治療目的而采用的兩種或兩種以上藥物同時或先后應(yīng)用。但是，藥物品種偏多，不同藥物之間的相互作用也是各不相同的，配合不好甚至可能影響藥物療效或毒性增加。因此，聯(lián)合用藥藥物的篩選研究具有重要的意義。

奧沙利鉑是一類新的鉑類抗癌藥，在多種腫瘤模型系統(tǒng)，包括在人胃癌模型中，都表現(xiàn)出廣譜的體外細(xì)胞毒性及體內(nèi)抗腫瘤活性作用。體內(nèi)、體外試驗也證實在順鉑耐藥的腫瘤模型中，它仍然有效。維生素c主要存在于水果和蔬菜中，是一種抗氧化劑，在臨床上可以用于治療急性病毒性肝炎，大劑量維生素c還具有抗腫瘤作用。有學(xué)者認(rèn)為，生理狀態(tài)下維生素c可以在胃液中停留相對較長的一段時間，且保護(hù)其不受破壞。同時維生素c可以清除胃液局部的活性氧代謝產(chǎn)物。但當(dāng)胃受幽門螺桿菌感染或有殘胃、慢性萎縮性胃炎、腸上皮化生等癌前病變或疾病時，胃液中的維生素c水平明顯下降，并失去其抗氧化作用。但是在其他腫瘤包括結(jié)直腸癌和胰腺癌中，維生素c卻可以升高細(xì)胞內(nèi)活性氧水平從而發(fā)揮抗腫瘤作用。

因此，目前維生素c對胃癌的作用及確切作用機(jī)制仍不明確，限制了其在抗腫瘤方面的應(yīng)用。而且尚未有維生素c與奧沙利鉑聯(lián)合用藥實現(xiàn)更好的抗腫瘤作用的相關(guān)研究和報道。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是克服上述現(xiàn)有技術(shù)的缺陷和不足，提供維生素c在提高胃癌細(xì)胞對奧沙利鉑敏感性方面的應(yīng)用。本發(fā)明研究顯示維生素c可以顯著抑制胃癌細(xì)胞的生長和增殖，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，同時還能顯著抑制裸鼠皮下模型以及病人來源的移植瘤模型中腫瘤的生長和體積增大。同時維生素c可以提高胃癌細(xì)胞對奧沙利鉑敏感性，發(fā)揮協(xié)同抗腫瘤作用。

本發(fā)明的目的是提供維生素c在制備能夠提高奧沙利鉑抗腫瘤效果的藥物方面的應(yīng)用，以及維生素c和奧沙利鉑聯(lián)用在制備抗腫瘤藥物方面的應(yīng)用。

本發(fā)明另一目的是提供維生素c在制備抗胃癌藥物方面的應(yīng)用，以及glut1基因表達(dá)水平檢測在制備能夠提高維生素c對胃癌治療效果的藥物方面的應(yīng)用。

本發(fā)明上述目的通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)：

本發(fā)明提供了維生素c在制備能夠提高奧沙利鉑抗腫瘤效果的藥物方面的應(yīng)用。

因此，維生素c在制備抗腫瘤藥物方面的應(yīng)用，維生素c和奧沙利鉑聯(lián)用在制備抗腫瘤藥物方面的應(yīng)用，以及一種同時含有維生素c和奧沙利鉑的抗腫瘤藥物，都在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。

優(yōu)選地，所述腫瘤為消化道腫瘤。

更優(yōu)選地，所述消化道腫瘤為胃癌。

更優(yōu)選地，所述胃癌為人胃癌細(xì)胞ags、sgc7901或mgc803。

另外，優(yōu)選地，所述維生素c和奧沙利鉑的用量比例為300-500：1。

更優(yōu)選地，所述維生素c和奧沙利鉑的用量比例為400：1。

另外，本發(fā)明研究發(fā)現(xiàn)，下調(diào)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1（glut1）的表達(dá)，胃癌細(xì)胞ags，sgc7901和mgc803經(jīng)過維生素c處理之后的凋亡細(xì)胞比例顯著下調(diào)；升高glut1的表達(dá)，胃癌細(xì)胞對維生素c更加敏感；表明glut1的表達(dá)可以影響胃癌細(xì)胞對維生素c處理的敏感性。

因此，實際臨床用藥時，可以檢測glut1基因的表達(dá)水平指導(dǎo)用藥。當(dāng)患者的癌組織中g(shù)lut1基因的表達(dá)水平較高時，表明該患者胃癌細(xì)胞對維生素c處理較敏感，更加適用于維生素c和和奧沙利鉑聯(lián)合用藥的方案。

因此，glut1基因在指導(dǎo)維生素c抗胃癌用藥方案方面的應(yīng)用，以及glut1基因表達(dá)水平檢測試劑在制備能夠指導(dǎo)維生素c抗胃癌用藥方案的制劑方面的應(yīng)用，glut1基因表達(dá)水平檢測試劑在制備能夠指導(dǎo)維生素c和奧沙利鉑聯(lián)用的抗胃癌用藥方案的制劑方面的應(yīng)用，也都應(yīng)在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。

本發(fā)明具有以下有益效果：

本發(fā)明首次公開了維生素c在提高胃癌細(xì)胞對奧沙利鉑敏感性方面的作用，可以實現(xiàn)協(xié)同增效的作用，實現(xiàn)抗腫瘤效果的顯著提高，對維生素c和奧沙利鉑聯(lián)合用藥抗腫瘤的應(yīng)用具有顯著的意義。

同時，本發(fā)明明確了維生素c可以顯著抑制胃癌細(xì)胞的生長和增殖，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，同時還能顯著抑制裸鼠皮下模型以及病人來源的移植瘤模型中腫瘤的生長和體積增大；以及相關(guān)的作用機(jī)制，為維生素c的抗胃癌應(yīng)用提供了更有利的證據(jù)和支持。

本發(fā)明還明確了glut1的表達(dá)可以影響胃癌細(xì)胞對維生素c處理的敏感性，對胃癌的防治和臨床用藥指導(dǎo)具有重要的意義。

附圖說明

圖1為維生素c對胃癌細(xì)胞凋亡的影響。

圖2為維生素c對成瘤的影響。

圖3為蛋白印跡及實時定量pcr檢測glut1在胃癌細(xì)胞中的表達(dá)情況。

圖4為sirna下調(diào)glut1表達(dá)對胃癌細(xì)胞對維生素c的敏感性的影響。

圖5為體內(nèi)動物模型研究下調(diào)glut1表達(dá)對胃癌細(xì)胞對維生素c的敏感性的影響。

圖6為流式細(xì)胞術(shù)檢測維生素c對胃癌細(xì)胞凋亡的影響。

圖7為細(xì)胞活性試劑盒檢測維生素c對胃癌細(xì)胞活性的影響。

圖8為維生素c和奧沙利鉑聯(lián)用對胃癌細(xì)胞成瘤的影響。

圖9為流式細(xì)胞術(shù)檢測維生素c對胃癌細(xì)胞活性氧的影響。

圖10為流式細(xì)胞術(shù)檢測谷胱甘肽前體nac對維生素c抗腫瘤作用的影響。

圖11為維生素c聯(lián)合奧沙利鉑在病人來源的移植瘤模型中的治療作用。

具體實施方式

以下結(jié)合說明書附圖和具體實施例來進(jìn)一步說明本發(fā)明，但實施例并不對本發(fā)明做任何形式的限定。除非特別說明，本發(fā)明采用的試劑、方法和設(shè)備為本技術(shù)領(lǐng)域常規(guī)試劑、方法和設(shè)備。

除非特別說明，以下實施例所用試劑和材料均為市購。

實施例1維生素c對胃癌細(xì)胞及成瘤的影響

1、實驗材料

（1）藥物：維生素c。

（2）胃癌細(xì)胞：人胃癌細(xì)胞ags，sgc7901和mgc803。

（3）凋亡試劑盒。

（4）雌性裸鼠，4-5周。

2、實驗分組

（1）對照組：空白對照，即胃癌細(xì)胞不經(jīng)過任何藥物處理。

（2）實驗組：使用維生素c處理胃癌細(xì)胞：維生素c處理組：（vit.(4g/kg)）以及對照組。

3、流式細(xì)胞術(shù)檢測維生素c對胃癌細(xì)胞凋亡的影響

（1）我們在六孔板中鋪好胃癌細(xì)胞，待其貼壁后，加入2mm和4mm的維生素c處理細(xì)胞24h，然后通過流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡情況。

具體方法如下：

1）對數(shù)生長期的ags，sgc7901和mgc803細(xì)胞用胰酶消化后，取4×10⁵細(xì)胞均勻鋪到六孔板中。

2）12h后細(xì)胞貼壁，更換成含有2mm和4mm維生素c的培養(yǎng)基。

3）消化細(xì)胞之后，根據(jù)凋亡檢測試劑盒的方法處理細(xì)胞，annexinv和pi染色完成之后通過流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡情況。

（2）實驗結(jié)果

結(jié)果如圖1所示，圖1中顯示的annexinv和pi雙陰性（即存活細(xì)胞）比例，使用維生素c（4mm）處理后，胃癌細(xì)胞的死亡數(shù)接近一半，其中ags細(xì)胞比sgc7901和mgc803細(xì)胞對維生素c更敏感。表明維生素c能夠誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞凋亡。

4、維生素c對成瘤的影響

（1）在體內(nèi)動物模型中，我們給裸鼠皮下注射胃癌細(xì)胞（1×10⁷/只），待腫瘤體積達(dá)到100mm³后，給予維生素c（4g/kg，每天兩次，腹腔注射）治療，觀察腫瘤的變化情況。

具體方法如下：

1）培養(yǎng)對數(shù)生長期的胃癌ags細(xì)胞，胰酶消化后，計數(shù)成1×10⁸/ml濃度，用pbs重懸之后通過冰盒運(yùn)輸至動物實驗室。

2）選取4-5周齡的裸鼠，在每只裸鼠的皮下接種100μl上述細(xì)胞懸液。

3）觀察裸鼠成瘤情況，并測量其最長徑（l）和最短徑（s），待腫瘤體積（v=l×s²/2）達(dá)到100mm³后，隨機(jī)分為兩組，分別給于注射用水，維生素c（4g/kg，每天兩次，腹腔注射）治療腹腔注射。

4）每三天測量一次裸鼠腫瘤體積，3周后處死動物，統(tǒng)計結(jié)果。

（2）實驗結(jié)果

結(jié)果如附圖2所示，治療組（n=6）腫瘤體積比對照組明顯縮小，表明維生素c能夠顯著的抑制胃癌的生長和體積增大，對胃癌具有顯著的療效。同時裸鼠體重未見明顯下降，表明維生素c無明顯副作用。

實施例2glut1表達(dá)高低可以影響胃癌細(xì)胞對維生素c的敏感性

1、實驗材料

（1）藥物：維生素c。

（2）胃癌細(xì)胞：人胃癌細(xì)胞ags，hgc27，sgc7901和mgc803以及胃黏膜上皮細(xì)胞ges1。

（3）凋亡試劑盒，lipofectamine2000轉(zhuǎn)染試劑，針對glut1的sirna，glut1抗體及引物，實時定量pcr試劑盒，rna逆轉(zhuǎn)錄試劑盒。

2、實驗分組

（1）對照組：陰性對照，轉(zhuǎn)染了陰性對照sirna的胃癌細(xì)胞。

（2）實驗組：轉(zhuǎn)染了針對glut1的sirna的胃癌細(xì)胞。

3、蛋白印跡及實時定量pcr檢測glut1在胃癌細(xì)胞中的表達(dá)情況

（1）具體方法如下：

1）收取對數(shù)生長期的ags，sgc7901和mgc803細(xì)胞

2）分別通過ripa裂解液和trizol試劑提取細(xì)胞總蛋白和總rna，再通過逆轉(zhuǎn)錄試劑盒獲得cdna。

3）通過glut1抗體和引物分別檢測胃癌細(xì)胞中g(shù)lut1的表達(dá)情況

（2）實驗結(jié)果：

結(jié)果如圖3所示，ags細(xì)胞中g(shù)lut1表達(dá)顯著高于sgc7901和mgc803細(xì)胞，而圖1顯示ags比sgc7901和mgc803細(xì)胞對維生素更敏感。

4、通過sirna敲降glut1表達(dá)后檢測胃癌細(xì)胞對維生素c敏感性

（1）我們在六孔板中鋪好胃癌細(xì)胞，待其貼壁后，加入10nm針對glut1的sirna或者陰性對照sirna，28h后加入4mm的維生素c處理細(xì)胞24h，然后通過流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡情況。

具體方法如下：

1）對數(shù)生長期的ags，sgc7901和mgc803細(xì)胞用胰酶消化后，取1×10⁵細(xì)胞均勻鋪到六孔板中。

2）12h后細(xì)胞貼壁，根據(jù)操作手冊利用lipofectamine2000轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)入10nm針對glut1的sirna或者陰性對照sirna

3）48h后更換成含有4mm維生素c的培養(yǎng)基。

4）維生素c處理細(xì)胞24h后，消化細(xì)胞，根據(jù)凋亡檢測試劑盒的方法處理細(xì)胞，annexinv和pi染色完成之后通過流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡情況。

（2）實驗結(jié)果：

結(jié)果如圖4所示，sirna可以顯著下調(diào)glut1表達(dá)。轉(zhuǎn)染glut1的sirna后，ags，sgc7901和mgc803細(xì)胞經(jīng)過維生素c處理之后的凋亡細(xì)胞比例顯著下調(diào)，表明glut1的表達(dá)可以影響胃癌細(xì)胞對維生素c處理的敏感性。

5、glut1表達(dá)對維生素c治療效果的影響

（1）在體內(nèi)動物模型中，我們首先通過慢病毒方法構(gòu)建glut1穩(wěn)定敲降的ags細(xì)胞系，然后給裸鼠皮下分別注射對照及敲降胃癌細(xì)胞（1×10⁷/只），待腫瘤體積達(dá)到100mm³后，給予維生素c（4g/kg，每天兩次，腹腔注射）治療，觀察腫瘤的變化情況。

具體方法如下：

1）培養(yǎng)對數(shù)生長期的胃癌ags對照及敲降細(xì)胞，胰酶消化后，計數(shù)成1×10⁸/ml濃度，用pbs重懸之后通過冰盒運(yùn)輸至動物實驗室。

2）選取4-5周齡的裸鼠，在每只裸鼠的皮下接種100μl上述細(xì)胞懸液。

3）觀察裸鼠成瘤情況，并測量其最長徑（l）和最短徑（s），待腫瘤體積（v=l×s²/2）達(dá)到100mm³后，隨機(jī)分組，分別給于注射用水，維生素c（4g/kg，每天兩次，腹腔注射）治療腹腔注射。

4）每三天測量一次裸鼠腫瘤體積，3周后處死動物，統(tǒng)計結(jié)果。

（2）實驗結(jié)果

結(jié)果如附圖5所示，下調(diào)glut1表達(dá)水平后，胃癌細(xì)胞對維生素c處理的敏感性顯著降低。即在對照細(xì)胞成瘤裸鼠中，維生素c可以顯著抑制腫瘤生長，而在glut1敲降細(xì)胞成瘤裸鼠中，維生素c未見明顯抑制腫瘤生長作用。

實施例3維生素c可以提高胃癌細(xì)胞對奧沙利鉑的敏感性

1、實驗材料

（1）藥物：維生素c，奧沙利鉑。

（2）胃癌細(xì)胞：人胃癌細(xì)胞ags，sgc7901和mgc803。

（3）凋亡試劑盒，細(xì)胞活性檢測試劑盒。

（4）雌性裸鼠，4-5周。

2、實驗分組

（1）對照組：空白對照，即胃癌細(xì)胞不經(jīng)過任何藥物處理。

（2）實驗組：分別使用維生素c、奧沙利鉑或兩者合用處理胃癌細(xì)胞。

3、流式細(xì)胞術(shù)檢測維生素c對胃癌細(xì)胞凋亡的影響

（1）我們在六孔板中鋪好胃癌細(xì)胞，待其貼壁后，加入2mm的維生素c，50μm奧沙利鉑，或者兩者聯(lián)合使用處理細(xì)胞24h，然后通過流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡情況。

具體方法如下：

1）對數(shù)生長期的ags和sgc7901細(xì)胞用胰酶消化后，取4×10⁵細(xì)胞均勻鋪到六孔板中。

2）12h后細(xì)胞貼壁，更換成新鮮培養(yǎng)基，分別加入2mm的維生素c，50μm奧沙利鉑，或者兩者聯(lián)合使用。

3）消化細(xì)胞之后，根據(jù)凋亡檢測試劑盒的方法處理細(xì)胞，annexinv和pi染色完成之后通過流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡情況。

（2）實驗結(jié)果

結(jié)果如圖6所示，圖6中顯示的annexinv和pi雙陰性（即存活細(xì)胞）比例，使用維生素c（2mm）或者奧沙利鉑（50μm）單藥處理后，胃癌細(xì)胞有所死亡，但是兩者聯(lián)合使用之后凋亡細(xì)胞比例明顯增加，表明維生素c可以增強(qiáng)奧沙利鉑的抗胃癌作用。

4、細(xì)胞活性試劑盒檢測維生素c對胃癌細(xì)胞活性的影響

（1）我們在96孔板中鋪好胃癌細(xì)胞，待其貼壁后，加入不同濃度的奧沙利鉑（0-20μm），加或不加維生素c（0.1mm）處理細(xì)胞72h，然后檢測細(xì)胞活性。

具體方法如下：

1）對數(shù)生長期的ags和sgc7901細(xì)胞用胰酶消化后，取2×10³細(xì)胞均勻鋪到96孔板中。

2）12h后細(xì)胞貼壁，更換成新鮮培養(yǎng)基，分別加入不同濃度的奧沙利鉑（0-20μm），加或不加維生素c（0.1mm）處理細(xì)胞72h

3）加入細(xì)胞活性檢測試劑后，通過酶標(biāo)儀檢測每個孔在490nm波長的吸光值。

4）通過calcusyn軟件計算維生素c和奧沙利鉑的相互作用。

（2）實驗結(jié)果

結(jié)果如圖7所示，圖7中顯示聯(lián)用維生素c之后，細(xì)胞活性明顯低于未加維生素c組。軟件計算出兩者的聯(lián)合指數(shù)均小于1，表明維生素c和奧沙利鉑具有協(xié)同作用。

5、維生素c和奧沙利鉑對胃癌細(xì)胞成瘤的影響

（1）在體內(nèi)動物模型中，我們給裸鼠皮下注射胃癌細(xì)胞（1×10⁷/只），待腫瘤體積達(dá)到100mm³后，給予維生素c（4g/kg，每天兩次，腹腔注射），奧沙利鉑（10mg/kg，每周一次，腹腔注射），或者兩者聯(lián)合使用治療，觀察腫瘤的變化情況。

具體方法如下：

1）培養(yǎng)對數(shù)生長期的胃癌ags細(xì)胞，胰酶消化后，計數(shù)成1×10⁸/ml濃度，用pbs重懸之后通過冰盒運(yùn)輸至動物實驗室。

2）選取4-5周齡的裸鼠，在每只裸鼠的皮下接種100μl上述細(xì)胞懸液。

3）觀察裸鼠成瘤情況，并測量其最長徑（l）和最短徑（s），待腫瘤體積（v=l×s²/2）達(dá)到100mm³后，隨機(jī)分為三組，分別給于注射用水，維生素c（4g/kg，每天兩次，腹腔注射），奧沙利鉑（10mg/kg，每周一次，腹腔注射），或者兩者聯(lián)合使用治療。

4）每三天測量一次裸鼠腫瘤體積，3周后處死動物，統(tǒng)計結(jié)果。

（2）實驗結(jié)果

結(jié)果如附圖8所示，與對照組相比，維生素c組和奧沙利鉑組腫瘤體積均縮小，但是兩者聯(lián)用之后腫瘤體積縮小更明顯，表明維生素c能夠顯著提高胃癌細(xì)胞對奧沙利鉑敏感性，可以發(fā)揮協(xié)同抗腫瘤作用。

實施例4維生素c通過升高胃癌細(xì)胞內(nèi)的活性氧發(fā)揮抗腫瘤作用

1、實驗材料

（1）藥物：維生素c，活性氧探針dcfda，谷胱甘肽前體nac。

（2）胃癌細(xì)胞：人胃癌細(xì)胞ags，sgc7901和mgc803。

（3）凋亡試劑盒。

2、實驗分組

（1）對照組：空白對照，即胃癌細(xì)胞不經(jīng)過任何藥物處理。

（2）實驗組：使用維生素c處理胃癌細(xì)胞。

3、流式細(xì)胞術(shù)檢測維生素c對胃癌細(xì)胞活性氧的影響

（1）我們在六孔板中鋪好胃癌細(xì)胞，待其貼壁后，加入1mm或2mm的維生素c處理細(xì)胞24h，然后通過流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡情況。

具體方法如下：

1）對數(shù)生長期的ags，sgc7901和mgc803細(xì)胞用胰酶消化后，取4×10⁵細(xì)胞均勻鋪到六孔板中。

2）12h后細(xì)胞貼壁，更換成新鮮培養(yǎng)基，分別加入1mm，2mm的維生素c。

3）藥物處理24h后，加入dcfda探針，37℃孵育30min后，消化細(xì)胞通過流式細(xì)胞儀檢測胞內(nèi)活性氧含量。

（2）實驗結(jié)果

結(jié)果如圖9所示，圖9中顯示經(jīng)過維生素c處理之后，ags，sgc7901和mgc803細(xì)胞內(nèi)活性氧水平顯著增高。

4、流式細(xì)胞術(shù)檢測谷胱甘肽前體nac對維生素c抗腫瘤作用的影響

（1）我們在六孔板中鋪好胃癌細(xì)胞，待其貼壁后，在加入4mm的維生素c處理細(xì)胞24h之前，加或不加nac（3mm）孵育2h，然后通過流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡情況。

具體方法如下：

1）對數(shù)生長期的ags，sgc7901和mgc803細(xì)胞用胰酶消化后，取4×10⁵細(xì)胞均勻鋪到六孔板中。

2）12h后細(xì)胞貼壁，更換成新鮮培養(yǎng)基，在加入4mm的維生素c之前，加或不加nac（3mm）孵育2h。

3）藥物處理24h后，消化細(xì)胞，根據(jù)凋亡檢測試劑盒的方法處理細(xì)胞，annexinv和pi染色完成之后通過流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡情況。

（2）實驗結(jié)果

結(jié)果如圖10所示，圖10中顯示經(jīng)過nac預(yù)處理之后，維生素c誘導(dǎo)的凋亡細(xì)胞比例顯著下調(diào)。表明細(xì)胞內(nèi)活性氧參與介導(dǎo)了維生素c的抗腫瘤作用。

實施例5維生素c聯(lián)合奧沙利鉑在病人來源的移植瘤模型中的治療作用

1、實驗材料

（1）藥物：維生素c，奧沙利鉑。

（2）病人來源的移植瘤模型。

（4）雌性裸鼠，4-5周。

2、實驗分組

（1）對照組：空白對照，即給予注射用水治療。

（2）實驗組：分別使用維生素c，奧沙利鉑或者兩者聯(lián)合治療。

3、實驗方法

我們選取胃癌病人的新鮮手術(shù)標(biāo)本，接種到裸鼠皮下，觀察腫瘤生長，并在裸鼠模型中進(jìn)行穩(wěn)定傳代。在p2代中，待腫瘤體積達(dá)到100mm³后，給予維生素c（4g/kg，每天兩次，腹腔注射），奧沙利鉑（10mg/kg，每周一次，腹腔注射），或者兩者聯(lián)合使用治療，觀察腫瘤的變化情況。

具體方法如下：

（1）取得新鮮標(biāo)本后，置于冰凍培養(yǎng)基中轉(zhuǎn)運(yùn)到動物房。將組織分割成約2mm的小粒。

（2）選取4-5周齡的裸鼠，異氟烷麻醉后利用接種針將組織片接種到裸鼠雙側(cè)腋下。

（3）觀察裸鼠成瘤情況，并測量其最長徑（l）和最短徑（s），待腫瘤體積（v=l×s²/2）達(dá)到100mm³后，隨機(jī)分為三組，分別給于注射用水，維生素c（4g/kg，每天兩次，腹腔注射），奧沙利鉑（10mg/kg，每周一次，腹腔注射），或者兩者聯(lián)合使用治療。

（4）每三天測量一次裸鼠腫瘤體積，3周后處死動物，統(tǒng)計結(jié)果。

4、實驗結(jié)果

結(jié)果如附圖11所示，與對照組相比，維生素c組和奧沙利鉑組腫瘤體積均縮小，但是兩者聯(lián)用之后腫瘤體積縮小更明顯，表明維生素c聯(lián)合奧沙利鉑能夠顯著可以在病人來源的移植瘤模型中發(fā)揮協(xié)同抗腫瘤作用。同時裸鼠體重未見明顯下降，提示維生素c治療無顯著副作用。